阅读说明：本技术 一种金枪鱼蛋白水解物和芍药苷的协同抗氧化组合物及其应用 (Synergistic antioxidant composition of tuna protein hydrolysate and paeoniflorin and application thereof ) 是由 黄雅钦 杜博玮 邓桂雅 李雪娟 于 2019-08-29 设计创作，主要内容包括：一种金枪鱼蛋白水解物和芍药苷的协同抗氧化组合物及其应用,涉及生物技术领域。含有金枪鱼蛋白水解物和芍药苷,其中金枪鱼蛋白水解物与芍药苷质量比范围为1：7-7：1。金枪鱼蛋白水解物与芍药苷不同比例混合后具有协同作用,有效地提高金枪鱼蛋白水解物的抗氧化活性,可以制备用于预防和治疗与氧化应激有关的疾病,如银屑病的药物。(A synergistic antioxidant composition of tuna protein hydrolysate and paeoniflorin and application thereof relate to the technical field of biology. Contains tuna protein hydrolysate and paeoniflorin, wherein the mass ratio of the tuna protein hydrolysate to the paeoniflorin is 1: 7-7: 1. the tuna protein hydrolysate and paeoniflorin in different proportions have synergistic effect, effectively improve antioxidant activity of the tuna protein hydrolysate, and can be used for preparing medicines for preventing and treating diseases related to oxidative stress, such as psoriasis.)

一种金枪鱼蛋白水解物和芍药苷的协同抗氧化组合物及其 应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种金枪鱼蛋白水解物和芍药苷的协同抗氧化组合物及其应用。

背景技术

活性氧是由各种酶反应和化学过程产生的，除了在人体中起辅助信使的作用外，这些都是许多生理功能所必需的，但当它们在人体中过度积累时，可能会对神经元功能造成损害。许多神经退行性疾病，包括阿尔茨海默氏症、帕金森氏症和亨廷顿氏症，其特征是严重或长时间的氧化应激。氧化应激的主要结果是活性氧对大分子的不可逆损伤。因此，从理论上讲，抗氧化剂治疗可以延缓神经元损伤的蔓延，并改善神经预后。

芍药是一种著名的中药，广泛用于治疗某些神经退行性疾病、创伤性损伤和炎症的中药方剂。芍药苷是从芍药中提取的一种主要活性成分，具有神经保护、抗缺血、抗氧化、抗炎和抗癌作用。芍药苷的神经保护潜力已在各种神经疾病的动物模型中得到证实。然而，芍药苷的成本很高，通过测试，我们还发现芍药苷的体外抗氧化性还有待提高，需要找到一种成本低、生物相容性好、安全、抗氧化性高且能与其发生协同抗氧化作用的复配物。

金枪鱼是最重要的商业鱼类之一。渔业加工金枪鱼会产生大量的副产品，如骨骼、鳞片、内脏和皮肤。众所周知，这些副产品中含有大量的胶原蛋白。另一方面，商业上可用的胶原蛋白大多来自猪和牛。然而，由于宗教的问题，金枪鱼胶原蛋白便成为了一个很好的选择。已有研究表明，金枪鱼源蛋白水解物具有抗氧化活性，因此金枪鱼蛋白水解物有可能成为神经保护、抗高血压、抗肿瘤、抗炎肽的潜在来源。若金枪鱼蛋白水解物可以与芍药苷产生协同抗氧化的效果，则可以极大程度的增强组合物的治疗和保健效果。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种含金枪鱼蛋白水解物和芍药苷的具有高抗氧化组合物及其应用，金枪鱼蛋白水解物与芍药苷不同比例混合后具有协同作用，有效地提高金枪鱼蛋白水解物的抗氧化活性，可以制备用于预防和治疗与氧化应激有关的疾病，如银屑病的药物。

本发明的技术方案是：

一种含金枪鱼蛋白水解物和芍药苷的抗氧化组合物，其特征在于，含有金枪鱼蛋白水解物和芍药苷，其中金枪鱼蛋白水解物与芍药苷质量比范围为1：7-7：1，优选1-7：1。

在本发明的优选的实施方式中，以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝1：1。

在本发明的优选的实施方式中，以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝2：1。

在本发明的优选的实施方式中，以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝3：1。

在本发明的优选的实施方式中，以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝5：1。

在本发明的优选的实施方式中，以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝7：1。

按照配比将金枪鱼蛋白水解物与芍药苷进行混合，制备所述抗氧化组合物，金枪鱼蛋白水解物采用酶解条件为同时加入胰蛋白酶0.5％(g/g)和糜蛋白酶0.1％(g/g)，pH＝8，40℃，水解2小时。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明所述的金枪鱼蛋白水解物与芍药苷的组合物有很强的抗氧化能力，可以有效的清除ABTS自由基。本发明的制备方法所获得的组合物产品，金枪鱼蛋白水解物与芍药苷不同比例混合后，通过实验证明，金枪鱼蛋白水解物与芍药苷之间存在协同抗氧化作用，提高了金枪鱼蛋白水解物的抗氧化活性，因此本发明可以制备用于预防和治疗由自由基引发的疾病以及与氧化应激有关的疾病的药物。

附图说明

图1为协同作用随抑制率变化曲线。

具体实施方式

下面通过非限制性实施例，进一步阐述本发明，理解本发明。

本发明中通过测定单独金枪鱼蛋白水解物、单独芍药苷和不同比例的组合物对ABTS自由基的清除能力评价样品的抗氧化活性和协同效果。各个样品配制成梯度浓度溶液，测定对ABTS自由基的清除率，进而计算IC₅₀值。通过对CI值的计算来表征协同情况。

ABTS自由基清除率的测定方法：将ABTS与过硫酸钾按照体积比1：1的比例进行混合，避光12-14小时，从而激发ABTS自由基。用PBS溶液稀释ABTS自由基直至吸光值为0.7±0.02制成ABTS工作液。将样品配制成不同浓度的溶液，取不同浓度溶液各0.09mL，加入0.11mLABTS工作液，混合均匀，避光37℃反应10min，于734nm处测定吸光值A_i；分别取上述各浓度溶液0.09mL，加入0.11mLPBS，反应后测得吸光值A_j；以0.11mLABTS工作液和0.09mL去离子水反应测得吸光值A₀作为参比。清除率计算公式为：

EABTS＝[1-(A_i-A_j)/A₀]×100

式中：EABTS为对ABTS自由基的清除率，％；A_i为0.09mL样品溶液加入0.11mL的ABTS溶液的吸光值；A_j为0.09mL样品溶液加入0.11mLPBS的吸光值；A₀为0.11mL的ABTS溶液加入0.09mL去离子水的吸光值。

IC₅₀的计算：IC₅₀是各个样品对ABTS清除率达到50％时的浓度。首先把样品稀释成一系列浓度，测定各浓度样品对ABTS的清除率，绘制清除率和浓度的关系曲线，在曲线上查出样品的IC₅₀值。

联合指数(CI)用于组合受试物的协同程度的数据分析，公式如下：

(D)₁和(D)₂是受试物1和受试物2联合作用且作用效果为X时的样品浓度，(Dx)₁和(Dx)₂是受试物1和受试物2单独应用作用效果为X时的样品浓度。CI<1、CI＝1和CI>1分别表示为协同作用、加和作用或拮抗作用。

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述。本发明以下实施例的金枪鱼蛋白水解物采用酶解条件为:同时加入胰蛋白酶0.5％(g/g，为占金枪鱼蛋白的质量，以下同)和糜蛋白酶0.1％(g/g)，pH＝8，40℃，水解2小时所得。

实施例1

配置以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝1：1的水溶液，总浓度为3、1.5、0.75、0.38、0.19、0.09、0.05mg/mL。测试其清除ABTS自由基的能力并计算IC₅₀值与CI值。

实施例2

配置以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝2：1的溶液，总浓度为3、1.5、0.75、0.38、0.19、0.09、0.05mg/mL。测试其清除ABTS自由基的能力并计算IC₅₀值与CI值。

实施例3

配置以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝3：1的溶液，总浓度为3、1.5、0.75、0.38、0.19、0.09、0.05mg/mL。测试其清除ABTS自由基的能力并计算IC₅₀值与CI值。

实施例4

配置以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝5：1的溶液，总浓度为3、1.5、0.75、0.38、0.19、0.09、0.05mg/mL。测试其清除ABTS自由基的能力并计算IC₅₀值与CI值。

实施例5

配置以质量计，金枪鱼蛋白水解物：芍药苷＝7：1的溶液，总浓度为3、1.5、0.75、0.38、0.19、0.09、0.05mg/mL。测试其清除ABTS自由基的能力并计算IC₅₀值与CI值。

对比例1

金枪鱼蛋白水解物的抗氧化活性

配制浓度为0.1、0.25、0.5、1、2、3、4、5mg/mL的金枪鱼蛋白水解物溶液，测试其清除ABTS自由基的能力并计算IC₅₀值。

对比例2

芍药苷的抗氧化活性

配制浓度为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10mg/mL的金枪鱼蛋白水解物溶液，测试其清除ABTS自由基的能力并计算IC₅₀值。

表1实施例与对照试验的清除ABTS自由基的IC₅₀值比较

对金枪鱼蛋白水解物和芍药苷组合物的实验数据进行分析，实验数据表明，金枪鱼蛋白水解物和芍药苷在ABTS抗氧化体系中表现出了协同作用，并且在3:1时协同作用最强，抑制率为50％时联合指数CI为0.63。值得注意的是，ABTS抗氧化体系中，当金枪鱼蛋白水解物所占的比例增加时，二者的协同作用先增强后减弱，说明金枪鱼蛋白水解物在协同作用中起到了主导作用。上述CI值为抑制率为50％的值，协同作用随抑制率变化曲线见图1，随着抑制率的增加，协同效果也不断增强。

以上实施例显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，而不是以任何方式限制本发明的范围，在不脱离本发明范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的范围内。