阅读说明：本技术 一种甜菊糖甙rb的提纯方法 (Purification method of stevioside RB ) 是由 郑越 于 2019-09-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种甜菊糖甙RB的提纯方法,具体涉及植物提纯技术领域,包括以下步骤：步骤一,取甜菊糖甙母液,将母液倒入至坩埚内,并向坩埚内添加氧化钙粉末后搅拌均匀,静置1-3小时,然后再向坩埚内添加2mol·L<Sup>-1</Sup>的FeSO4溶液,搅拌均匀后,将其加热并浓缩至原质量的40%,获取A相溶液；步骤二,将蒸馏水浸泡好的阴离子交换树脂和阳离子交换树脂分别装入离子交换柱中,并按先阴离子后阳离子的顺序连接好装置。本发明提供的提纯方法,能够制得RB含量45%以上的甜菊糖甙,提供了以RB为主的甜菊糖甙产品,满足了消费者的不同需求,能够适应多样化的市场需求,备要求低,可操作性强,具有良好的社会推广应用。(The invention discloses a method for purifying stevioside RB, which particularly relates to the technical field of plant purification and comprises the following steps: step one, taking stevioside mother liquor, pouring the mother liquor into a crucible, adding calcium oxide powder into the crucible, uniformly stirring, standing for 1-3 hours, and then adding 2 mol. L into the crucible ‑1 Uniformly stirring the FeSO4 solution, heating and concentrating the solution to 40% of the original mass to obtain an A phase solution; and step two, respectively filling the anion exchange resin and the cation exchange resin soaked in the distilled water into an ion exchange column, and connecting the devices according to the sequence of anion and cation. The purification method provided by the invention can prepare the stevioside with the RB content of more than 45 percent, provides the stevioside product mainly containing RB, meets different requirements of consumers, can adapt to diversified market requirements, and is ready for useThe method has the advantages of low requirement, strong operability and good social popularization and application.)

一种甜菊糖甙RB的提纯方法

技术领域

本发明涉及植物提纯技术领域，更具体地说，本发明涉及一种甜菊糖甙RB的提纯方法。

背景技术

甜叶菊（学名：Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsl.）是菊科、甜叶菊属多年生草本植物。 株高1-1.3米。根梢肥大，50-60条，长可达25厘米。茎直立，基部梢木质化，上部柔嫩，密生短茸毛，花冠基部浅***或白色，上部白色。瘦果线形，稍扁，褐色，具冠毛。花期7-9月，果期9-11月。原产于南美巴拉圭和巴西交界的高山草地。自1977年以来中国北京、河北、陕西、江苏、安徽、福建、湖南、云南等地均有引种栽培。该种喜在温暖湿润的环境中生长，对光敏感。叶含菊糖苷6-12%，精品为白色粉末状，是一种低热量、高甜度的天然甜味剂，是食品及药品工业的原料之一。

甜叶菊经提炼后广泛地应用于食品、饮料、制酒、医药、化妆品等领域。近年来，甜叶菊的提取物甜菊糖甙更被应用为甜味剂。它的卡路里热能非常低，不会对牙病及糖尿病患者造成不良反应，成为优秀的甜味剂，有着广阔的市场前景。甜菊糖甙是甜叶菊的提取物的统称，目前美国FDA官方的方法中，关于甜菊糖甙主要涉及到如下的9个组分：Stevioside(甜菊甙)、Rebaudioside A(莱包迪甙A)、Rubusoside(甜茶甙)、Dulcoside A(杜尔可甙A)、RebaudiosideC(莱包迪甙C)、Rebaudioside F(莱包迪甙F)、Rebaudioside D(莱包迪甙D)、Steviolbioside(甜菊双糖甙)、Rebaudioside B(莱包迪甙B)，甜菊糖甙RB就是其中一个组分Rebaudioside B。这些不同的组分的口味均不同，能够面对不同的消费人群，例如：美加地区的消费人群对RA比较喜爱，而日本、韩国的消费人群则对STV比较青睐。

目前市面上的甜菊糖苷产品主要为RA、STV为主，还没有以RB为主的产品，因此甜菊糖甙的提取方法也主要集中RA、STV的提纯、精制，还没有比较好的RB的提纯方法。因此，提供一种甜菊糖甙RB的提纯方法适应消费者的多样化需求成为市场需要。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的实施例提供一种甜菊糖甙RB的提纯方法，通过将甜菊糖甙结晶体与去离子水混合后，在高压环境下完成水分的蒸发，并使溶液浓缩，使用筒状容器，并将吸附树脂柱***至容器内部，利用吸附树脂柱对溶液中不同组分的极性进行区分吸附，完成对RB的析出，然后完成对洗脱液的重结晶，并精确控制温度，获取RB含量的甜菊糖甙，整个过程中耗能低，无废水产生，更加环保，能够制得RB含量45%以上的甜菊糖甙，提供了以RB为主的甜菊糖甙产品，满足了消费者的不同需求，能够适应多样化的市场需求，备要求低，可操作性强，具有良好的社会推广应用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种甜菊糖甙RB的提纯方法，包括以下步骤：

步骤一，取甜菊糖甙母液，将母液倒入至坩埚内，并向坩埚内添加氧化钙粉末后搅拌均匀，静置1-3小时，然后再向坩埚内添加2mol·L^-1的FeSO4溶液，搅拌均匀后，将其加热并浓缩至原质量的40%，获取A相溶液；

步骤二，将蒸馏水浸泡好的阴离子交换树脂和阳离子交换树脂分别装入离子交换柱中，并按先阴离子后阳离子的顺序连接好装置，然后将A相溶液加入到阴离子交换柱中，利用体积分数95%的乙醇冲洗，并收集乙醇溶液至坩埚内，加热坩埚浓缩乙醇溶液，获取浸膏；

步骤三，将浸膏使用体积分数5%的甲醇溶液进行重结晶，获取甜菊糖甙结晶体，将甜菊糖甙结晶体添加至广口烧杯内，倒入与结晶体质量比为5:1的去离子水，并加热烧杯使去离子水升温至60-80摄氏度且甜菊糖甙结晶体融化后，保温3-5小时，获取C相溶液；

步骤四，将C相溶液倒入至容器内部，置于高压环境下加热至110摄氏度并使溶液沸腾，使溶液中的水分开始蒸发，待溶液浓缩至初始质量的50%后停止加热，溶液冷却至常温状态后，将溶液倒入至筒状容器内；

步骤五，将直径小于筒状容器内径的大孔径吸附树脂柱***至筒状容器内，使溶液浸没整个吸附树脂柱，利用吸附树脂柱对溶液中不同组分的极性进行区分吸附，浸泡10-15小时后，取出吸附树脂柱，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，并收集洗脱液，使用液相法测量洗脱液中RB的含量。

在一个优选地实施方式中，其中，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，然后收集洗脱液，在60摄氏度的条件下浓缩，将浓缩后的固体含量控制在50%，将得到的固体和液体分别进行干燥，得到甜菊糖甙，并利用液相法进行RB检测，测到甜菊糖甙RB含量在47.64%。

在一个优选地实施方式中，其中，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，然后收集洗脱液，在70摄氏度的条件下浓缩，将浓缩后的固体含量控制在50%，将得到的固体和液体分别进行干燥，得到甜菊糖甙，并利用液相法进行RB检测，测到甜菊糖甙RB含量在49.37%。

在一个优选地实施方式中，其中，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，然后收集洗脱液，在80摄氏度的条件下浓缩，将浓缩后的固体含量控制在50%，将得到的固体和液体分别进行干燥，得到甜菊糖甙，并利用液相法进行RB检测，测到甜菊糖甙RB含量在53.81%。

在一个优选地实施方式中，所述步骤一中，氧化钙粉末的颗粒目数为300-500目。

在一个优选地实施方式中，所述步骤四中，高压具体为1.42个标准大气压。

本发明的技术效果和优点：

1、本发明提供的提纯方法，能够制得RB含量45%以上的甜菊糖甙，提供了以RB为主的甜菊糖甙产品，满足了消费者的不同需求，能够适应多样化的市场需求，备要求低，可操作性强，具有良好的社会推广应用；

2、通过将甜菊糖甙结晶体与去离子水混合后，在高压环境下完成水分的蒸发，并使溶液浓缩，使用筒状容器，并将吸附树脂柱***至容器内部，利用吸附树脂柱对溶液中不同组分的极性进行区分吸附，完成对RB的析出，然后完成对洗脱液的重结晶，并精确控制温度，获取RB含量的甜菊糖甙，整个过程中耗能低，无废水产生，更加环保。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

一种甜菊糖甙RB的提纯方法，包括以下步骤：

步骤一，取甜菊糖甙母液，将母液倒入至坩埚内，并向坩埚内添加颗粒目数为300目的氧化钙粉末后搅拌均匀，静置1小时，然后再向坩埚内添加2mol·L^-1的FeSO₄溶液，搅拌均匀后，将其加热并浓缩至原质量的40%，获取A相溶液；

步骤二，将蒸馏水浸泡好的阴离子交换树脂和阳离子交换树脂分别装入离子交换柱中，并按先阴离子后阳离子的顺序连接好装置，然后将A相溶液加入到阴离子交换柱中，利用体积分数95%的乙醇冲洗，并收集乙醇溶液至坩埚内，加热坩埚浓缩乙醇溶液，获取浸膏；

步骤三，将浸膏使用体积分数5%的甲醇溶液进行重结晶，获取甜菊糖甙结晶体，将甜菊糖甙结晶体添加至广口烧杯内，倒入与结晶体质量比为5:1的去离子水，并加热烧杯使去离子水升温至60摄氏度且甜菊糖甙结晶体融化后，保温3小时，获取C相溶液；

步骤四，将C相溶液倒入至容器内部，置于1.42个标准大气压的高压环境下加热至110摄氏度并使溶液沸腾，使溶液中的水分开始蒸发，待溶液浓缩至初始质量的50%后停止加热，溶液冷却至常温状态后，将溶液倒入至筒状容器内；

步骤五，将直径小于筒状容器内径的大孔径吸附树脂柱***至筒状容器内，使溶液浸没整个吸附树脂柱，利用吸附树脂柱对溶液中不同组分的极性进行区分吸附，浸泡10小时后，取出吸附树脂柱，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，并收集洗脱液，使用液相法测量洗脱液中RB的含量。

实施例2：

一种甜菊糖甙RB的提纯方法，包括以下步骤：

步骤一，取甜菊糖甙母液，将母液倒入至坩埚内，并向坩埚内添加颗粒目数为500目的氧化钙粉末后搅拌均匀，静置3小时，然后再向坩埚内添加2mol·L^-1的FeSO₄溶液，搅拌均匀后，将其加热并浓缩至原质量的40%，获取A相溶液；

步骤二，将蒸馏水浸泡好的阴离子交换树脂和阳离子交换树脂分别装入离子交换柱中，并按先阴离子后阳离子的顺序连接好装置，然后将A相溶液加入到阴离子交换柱中，利用体积分数95%的乙醇冲洗，并收集乙醇溶液至坩埚内，加热坩埚浓缩乙醇溶液，获取浸膏；

步骤三，将浸膏使用体积分数5%的甲醇溶液进行重结晶，获取甜菊糖甙结晶体，将甜菊糖甙结晶体添加至广口烧杯内，倒入与结晶体质量比为5:1的去离子水，并加热烧杯使去离子水升温至80摄氏度且甜菊糖甙结晶体融化后，保温5小时，获取C相溶液；

步骤四，将C相溶液倒入至容器内部，置于1.42个标准大气压的高压环境下加热至110摄氏度并使溶液沸腾，使溶液中的水分开始蒸发，待溶液浓缩至初始质量的50%后停止加热，溶液冷却至常温状态后，将溶液倒入至筒状容器内；

步骤五，将直径小于筒状容器内径的大孔径吸附树脂柱***至筒状容器内，使溶液浸没整个吸附树脂柱，利用吸附树脂柱对溶液中不同组分的极性进行区分吸附，浸泡15小时后，取出吸附树脂柱，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，并收集洗脱液，使用液相法测量洗脱液中RB的含量。

实施例3：

一种甜菊糖甙RB的提纯方法，包括以下步骤：

步骤一，取甜菊糖甙母液，将母液倒入至坩埚内，并向坩埚内添加颗粒目数为400目的氧化钙粉末后搅拌均匀，静置2小时，然后再向坩埚内添加2mol·L^-1的FeSO₄溶液，搅拌均匀后，将其加热并浓缩至原质量的40%，获取A相溶液；

步骤二，将蒸馏水浸泡好的阴离子交换树脂和阳离子交换树脂分别装入离子交换柱中，并按先阴离子后阳离子的顺序连接好装置，然后将A相溶液加入到阴离子交换柱中，利用体积分数95%的乙醇冲洗，并收集乙醇溶液至坩埚内，加热坩埚浓缩乙醇溶液，获取浸膏；

步骤三，将浸膏使用体积分数5%的甲醇溶液进行重结晶，获取甜菊糖甙结晶体，将甜菊糖甙结晶体添加至广口烧杯内，倒入与结晶体质量比为5:1的去离子水，并加热烧杯使去离子水升温至70摄氏度且甜菊糖甙结晶体融化后，保温4小时，获取C相溶液；

步骤四，将C相溶液倒入至容器内部，置于1.42个标准大气压的高压环境下加热至110摄氏度并使溶液沸腾，使溶液中的水分开始蒸发，待溶液浓缩至初始质量的50%后停止加热，溶液冷却至常温状态后，将溶液倒入至筒状容器内；

步骤五，将直径小于筒状容器内径的大孔径吸附树脂柱***至筒状容器内，使溶液浸没整个吸附树脂柱，利用吸附树脂柱对溶液中不同组分的极性进行区分吸附，浸泡13小时后，取出吸附树脂柱，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，并收集洗脱液，使用液相法测量洗脱液中RB的含量。

实施例4

在不同的温度条件下，用1200L的75%乙醇解析吸附在树脂柱上的甜菊糖甙，然后收集洗脱液，进行浓缩，将浓缩后的固体含量控制在50%，将得到的固体和液体分别进行干燥，得到甜菊糖甙，并利用液相法进行RB检测，获取如下数据：

温度（℃）	STV（%）	RC（%）	RB（%）	RB含量提高率（%）
					60	12.45	19.53	47.64	27.39
70	11.29	16.74	49.37	29.93
					80	10.82	14.59	53.81	35.71
母液各项数据	14.24	7.46	34.59	-----

在上述数据中，能明显看出，相较于母液中RB的含量，本发明浓缩后的甜菊糖甙中RB的含量得到了大幅度的提高，纯度明显提高，能够制得RB含量45%以上的甜菊糖甙，提供了以RB为主的甜菊糖甙产品，满足了消费者的不同需求，能够适应多样化的市场需求，备要求低，可操作性强，具有良好的社会推广应用；

通过将甜菊糖甙结晶体与去离子水混合后，在高压环境下完成水分的蒸发，并使溶液浓缩，使用筒状容器，并将吸附树脂柱***至容器内部，利用吸附树脂柱对溶液中不同组分的极性进行区分吸附，完成对RB的析出，然后完成对洗脱液的重结晶，并精确控制温度，获取RB含量的甜菊糖甙，整个过程中耗能低，无废水产生，更加环保。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。