阅读说明：本技术 一种适用于注射的药用乳糖及其制备方法 (Medicinal lactose suitable for injection and preparation method thereof ) 是由 庄贤韩 王瑞云 刘伦俊 于 2018-07-04 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药领域,具体涉及一种适用于注射的药用乳糖及其制备方法。本发明人经研究发现,采用活性炭吸附和钛棒过滤相结合方法,可去除乳糖中存在的残留微量蛋白和其他杂质,纯化所得的乳糖可用于注射剂产品。亦即,本发明制备方法获得的药用乳糖,杂质蛋白的含量小于或等于200ppm,较佳地,杂质蛋白含量小于或等于100ppm；所述乳糖中内毒素含量小于或等于5EU/g,较佳情况下,内毒素含量小于或等于0.5EU/g,可适用于注射。(The invention belongs to the field of medicines, and particularly relates to medicinal lactose suitable for injection and a preparation method thereof. The inventor finds that residual trace protein and other impurities in the lactose can be removed by adopting a method combining activated carbon adsorption and titanium rod filtration, and the lactose obtained by purification can be used for injection products. That is, the content of impurity protein in the medicinal lactose obtained by the preparation method of the invention is less than or equal to 200ppm, preferably, the content of impurity protein is less than or equal to 100 ppm; the content of endotoxin in the lactose is less than or equal to 5EU/g, preferably less than or equal to 0.5EU/g, and the lactose is suitable for injection.)

一种适用于注射的药用乳糖及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种适用于注射的药用乳糖及其制备方法。

背景技术

乳糖属于双糖，几乎无生理活性，是一种常用的药用辅料，主要作为口服固体制剂中的填充剂或稀释剂，也用于口服固体制剂的直接压片。在注射剂中应用较少，但在一些冻干制剂中应用较多。乳糖由于其较高的玻璃化转变温度在冻干过程中，并未结晶产生，而以无定型存在，对主要活性成分无破坏作用，因此在此类冻干制剂中，乳糖扮演了“冻干保护剂”的角色。

乳糖主要来源于动物乳品，是牛奶的附属产物，安全性问题成为其应用到医药产品中的最大的限制，这种安全性问题主要包括两方面:一是经胃肠道后所引起的乳糖不耐受症，二是乳糖中残留的过敏原(包括:蛋白杂质、其他杂质，例如内毒素)对人体所造成的过敏性。在注射给药时极易引起荨麻疹、发热、休克等一系列的不良反应，这大大限制了乳糖作为注射辅料的应用。因此探究一种新的纯化工艺，得到高纯度、可用于注射的乳糖是迫切需要的。

在乳糖的精制过程中，活性炭的应用是必不可少的，它孔隙结构发达、比表面积大，具有丰富的内部微孔结构，可以吸附色素、杂质、无机金属离子、部分有机物等，作为一种优质吸附剂，广泛应用于药剂脱色、提纯和精制过程。文献报道，活性炭可以吸附水中的蛋白，且蛋白浓度越大，吸附量越大。

传统工艺去除蛋白质和内毒素以及降低微生物指标，一般可以采用物理过滤如超滤膜或者用活性炭、树脂等吸附的方法，秉着尽量在生产过程中减少新的热原、新的杂质的带入，在达到工艺目的、质量标准的前提下，工艺步骤越简单、使用的生产用原辅料越少越好。

经过实验，采用药用辅料乳糖为原料，选择合适用水、活性炭，经过重结晶精制后得到注射用药用辅料乳糖。结晶中不添加使用ICH指定的一类、二类溶剂，较少三废污染。产品质量稳定，收率较高。

为了降低乳糖在注射剂中使用的风险，迫切需要采用新的乳糖提纯工艺，以制备一种安全性良好的乳糖，用于注射剂的药用乳糖。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种药用乳糖及其制备方法，所述药用乳糖的制备方法属于药用辅料的精制方法，具体的是属于一种供注射用药用辅料乳糖及其精制方法。本发明制备获得的药用乳糖，杂质蛋白含量低，内毒素含量小,安全有效，可用于注射。

为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种适用于注射的药用乳糖的制备方法，包括如下步骤：

(1)溶解：将乳糖原料投入到水中，溶解，至乳糖饱和；

(2)吸附：在步骤(1)获得的乳糖水溶液中加入活性炭，混合均匀，获得乳糖和活性炭的混合液；

(3)过滤：将步骤(2)获得的乳糖和活性炭的混合液进行过滤，收集澄清滤液，获得乳糖饱和水溶液；

(4)结晶：将步骤(3)获得的乳糖饱和水溶液，冷却结晶，获得乳糖晶体的混合液；

(5)脱水：将步骤(4)获得的乳糖晶体的混合液，进行脱水，获得乳糖湿糖；

(6)干燥：将步骤(5)获得的乳糖湿糖进行烘干，即得。

在一种实施方式中，步骤(1)中，将乳糖原料投入到已被加热至40-45℃的水中，继续加热获得的乳糖水溶液至95-100℃，至乳糖饱和。

在一种实施方式中，步骤(1)中，投料时，乳糖原料与水的重量比为(0.5～2.5)：1。

在一种实施方式中，步骤(1)中，投料时，乳糖原料与水的重量比为(0.5～1.5)：1。

在一种实施方式中，步骤(1)中，投料时，乳糖原料与水的重量比为(1.5～2.5)：1。

在一种实施方式中，步骤(1)中，投料时，乳糖原料与水的重量比为0.5、1.5或2.5。

在一种实施方式中，步骤(1)中，所述乳糖原料选自药用乳糖、分析纯乳糖或化学纯乳糖中的任一种或多种的组合。所述乳糖原料可通过市购途径获得。

在一种实施方式中，步骤(2)中，所述活性炭为药用活性炭。可通过市购途径获得。

在一种实施方式中，步骤(2)中，采用加热的方式使乳糖水溶液与活性炭混合均匀。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.1～1)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.3～1)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.5～1)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.8～1)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.1～0.8)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.1～0.5)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.1～0.3)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.3～0.8)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.3～0.5)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：(0.5～0.8)。

在一种实施方式中，步骤(2)中，乳糖水溶液与活性炭的重量比为100:0.1、100：0.3、100:0.5、100:0.8、100:1。

在一种实施方式中，步骤(3)中，将步骤(2)获得的乳糖和活性炭的混合液经过钛棒过滤。

在一种实施方式中，所述钛棒为微米钛棒。

在一种实施方式中，步骤(4)中，将步骤(3)获得的乳糖饱和水溶液，转入结晶缸，进行冷却结晶。

在一种实施方式中，步骤(4)中，冷却至30～60℃，进行冷却结晶。

在一种实施方式中，步骤(4)中，冷却至30～40℃，进行冷却结晶。

在一种实施方式中，步骤(4)中，冷却至40～60℃，进行冷却结晶。

在一种实施方式中，步骤(5)中，将步骤(4)获得的乳糖晶体的混合液转入离心机，进行脱水。

在一种实施方式中，步骤(6)中，将步骤(5)获得的乳糖湿糖转入沸腾干燥炉，烘干。从而获得一种杂质蛋白含量低，内毒素合格的适用于注射用的药用乳糖。

在一种实施方式中，所述沸腾干燥炉的热风温度为60～100℃。

本发明的第二方面，提供前述制备方法用于制备注射用药用乳糖的用途。

本发明的第三方面，提供一种由前述制备方法制备获得的适用于注射的药用乳糖。

在一种实施方式中，所述适用于注射的药用乳糖为一水乳糖、无水乳糖、或其组合。

在一种实施方式中，所述适用于注射的药用乳糖中所含杂质蛋白小于或等200ppm。较佳的，所含杂质蛋白小于或等于100ppm。所含杂质蛋白为乳糖生产过程过中所残留的杂质蛋白或所引入的蛋白杂质。

在一种实施方式中，所述适用于注射的药用乳糖中内毒素含量小于或等于5EU/g。较佳的，内毒素含量小于或等于0.5EU/g。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明人经研究发现，采用活性炭吸附和钛棒过滤相结合方法，可去除乳糖中存在的残留微量蛋白和其他杂质，纯化所得的乳糖可用于注射剂产品。亦即，本发明制备方法获得的药用乳糖，杂质蛋白的含量小于或等于200ppm，较佳地，杂质蛋白含量小于或等于100ppm；所述乳糖中内毒素含量小于或等于5EU/g，较佳情况下，内毒素含量小于或等于0.5EU/g，可适用于注射。

具体实施方式

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

实施例1

一、适用于注射的药用乳糖的制备

(1)、溶解：将乳糖原料投入到已被加热至约40-45℃的水中(投料时，乳糖原料与水的重量比为1.5：1)，继续加热获得的乳糖水溶液至95-100℃，至乳糖饱和；

(2)、吸附：在步骤(1)获得的乳糖水溶液中加入药用活性炭(乳糖水溶液与药用活性炭的重量比为100：0.1)，加热约30分钟，获得乳糖和活性炭的混合液；

(3)、过滤：将步骤(2)获得的乳糖和活性炭的混合液经过钛棒过滤，在确定滤液澄清后，收集滤液，获得乳糖饱和水溶液；

(4)、结晶：将步骤(3)获得的乳糖饱和水溶液，转入结晶缸，冷却至30～40℃，充分结晶后，获得乳糖晶体的混合液；

(5)脱水：将步骤(4)获得的乳糖晶体的混合液转入离心机，进行脱水，获得乳糖湿糖；

(6)干燥：将步骤(5)获得的乳糖湿糖转入沸腾干燥炉，烘干，所述沸腾干燥炉的热风温度为60～100℃。

二、对第一部分获得的产物进行蛋白含量测定

1)检测依据

《中国药典》2015年版四部0704“氮测定法第二法”

2)检测设备：

电子分析天平(型号：FA2204B)、干燥箱(型号：DGX-9073B-1)

3)检测方法：

检验步骤：取本品105℃干燥6小时，取出，置干燥器中放冷至室温，取约0.1g，精密称定，置凯氏定氮瓶中，依次加入硫酸钾10g和硫酸铜0.5g,沿瓶壁缓缓加硫酸20ml,在凯氏定氮瓶口放一小漏斗，用直火缓缓加热，俟溶液成澄明的绿色后，继续加热30分钟，放冷。转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取10ml,照氮测定法(《中国药典》2015年版四部0704第二法，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴)测定。馏出液用硫酸滴定液(0.005mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。

4)计算公式：

式中T为滴定度，mg；V1与V2分别为供试品与空白滴定时硫酸滴定液消耗的体积，ml；F为滴定液的F值；W为样品的重量，mg；蛋白含量为氮含量乘以6.25。

三、对第一部分获得的产物进行内毒素测定

1、检测依据：《中国药典》2015版四部。

2、检测用仪器：

电子分析天平(型号：FA2204B)、干燥箱(型号：DGX-9073B-1)、电热恒温水浴锅(型号：H.H.S-4)微升精密微量移液器。

3、检测方法：

(1)供试品溶液的配制：称取0.5g(ml)样品置10毫升烧杯中，加无热原水配制成0.1g(ml)/ml供试品。

然后：MVD＝(0.1×5)/0.125＝4倍成5Eu/g供试品；

MVD＝(0.1×10)/0.125＝8倍成10Eu/g供试品；

(2)开启8支鲎试剂(灵敏度λ＝0.125Eu),2支阴性对照、2支阳性对照、2支5Eu/g供试品检查管、2支10Eu/g供试品检查管。

(3)阴性对照管加入0.2ml检查用(无热原)水，其余各管加入0.1ml检查用(无热原)水；

(4)二组供试品检查管分别加入0.1ml5Eu/g限度和10Eu/g限度的供试品液；

(5)阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ的内毒素工作标准品溶液，封闭管口，轻轻振摇后，把试管架垂直放入(37±1)℃适宜水温的恒温水温箱中，保温(60±2)分钟，取出观察，按规范判断结果。

4、结果判断：

(1)将试管架从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为(+)；凝胶不能保持完整，并从管壁滑脱者为阴性，记录为(-)。阴性对照管应为(-)，且阳性对照管及供试品阳性对照管均应为(+)。阳性对照为(-)或供试品阳性对照为(-)或阴性对照为(+)均认为试验无效。

(2).供试品2管均为(-)应认为符合规定，如2管均为(+)应认为不符合规定。如两管中1管为(+)，1管为(-)按上述方法另取4支供试品管复试：4管中有1管为(+)即认为供试品不符合规定。

四、对第一部分获得的产物进行有关物质测定

1、检测依据：《中国药典》2015版四部。

2、检测用仪器：

高效液相色谱仪(型号：RID-10A LC-20A)电子分析天平(型号：FA2204B)。

3、检测方法：

取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml含100mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取1ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的方法试验，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中除溶剂峰以外，如显杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液峰面积的0.5倍(0.5％)。

4、计算公式：

有关物质＝A2/A1(注：对照溶液峰面积A1；供试品溶液各杂质峰面积的和A2)

本实施例的各项检测结果，详见表1。

实施例2

与实施例1的不同之处在于适用于注射的药用乳糖的制备步骤(2)中乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：0.3。

本实施例的各项检测结果，详见表1。

实施例3

与实施例1的不同之处在于适用于注射的药用乳糖的制备步骤(2)中乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：0.5。

本实施例的各项检测结果，详见表1。

实施例4

与实施例1的不同之处在于适用于注射的药用乳糖的制备步骤(2)中乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：0.8。

本实施例的各项检测结果，详见表1。

实施例5

与实施例1的不同之处在于适用于注射的药用乳糖的制备步骤(2)中乳糖水溶液与活性炭的重量比为100：1。

本实施例的各项检测结果，详见表1。

实施例6

与实施例1的不同之处在于适用于注射的药用乳糖的制备步骤(1)中投料时，乳糖原料与水的重量比为0.5：1。

本实施例的各项检测结果，详见表1。

实施例7

与实施例1的不同之处在于适用于注射的药用乳糖的制备步骤(4)中结晶时，冷却至60℃。

本实施例的各项检测结果，详见表1。

实施例8

上述实施例1-7的各项检测结果，如下表1所示：

表1

结果显示：采用活性炭和钛棒过滤，纯化得到的乳糖，残留杂蛋白量比较低，小于200ppm，较佳的低于100ppm。同时内毒素含量小于或等于5EU/g，较佳地，内毒素小于或等于0.5EU/g。测定的有关物质含量高于国家现有药典标准一个数量级。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。