阅读说明：本技术 一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法 (Method for rapidly screening serositis paired vaccines ) 是由 孟照洁 翁立雪 许明清 刘丹 于 2019-10-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法,属于生物制品领域。包括疫苗筛选：选择浆膜炎疫苗；实验动物选择：选择雌兔,PCR检测大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里氏杆菌、绿脓杆菌、李氏杆菌和巴氏杆菌,确定检测均为阴性；免疫：免疫选好的兔,采用背部、颈部多点免疫法,共选取6个点,进行三次免疫后大量收集血清冻干储备；疫苗筛选：将分离的鸭疫里氏杆菌加入生理盐水,制成浑浊液,煮沸1-2小时,与每个制备好的血清做玻片凝集。该方法收集全国合法浆膜炎灭活疫苗,兔作为免疫对象,使用不同厂家的浆膜炎灭活疫苗对其免疫,产生高免血清,保存血清,将临床鸭疫里氏菌与血清做玻片凝集,达到快速配型,筛选对型疫苗的方法。(The invention relates to a method for rapidly screening serositis paired vaccines, belonging to the field of biological products. The method comprises the following steps of vaccine screening: selecting a serositis vaccine; selecting experimental animals: selecting female rabbits, detecting escherichia coli, salmonella, riemerella anatipestifer, pseudomonas aeruginosa, listeria and pasteurella by PCR, and determining that the detection is negative; immunization: immunizing selected rabbits by a back and neck multi-point immunization method, selecting 6 points in total, performing three times of immunization, and collecting a large amount of serum for freeze-drying and storage; and (3) vaccine screening: adding separated Riemerella anatipestifer into normal saline to prepare turbid liquid, boiling for 1-2 hours, and performing glass slide agglutination with each prepared serum. The method collects national legal serositis inactivated vaccines, rabbits are used as immune objects, serositis inactivated vaccines of different manufacturers are used for immunizing the rabbits to generate hyperimmune serum, the serum is stored, clinical riemerella anatipestifer and the serum are subjected to slide agglutination to achieve rapid matching, and the matched vaccines are screened.)

一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，尤其涉及一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法。

背景技术

鸭疫里氏杆菌又称鸭传染性浆膜炎，是一种接触性、急性或慢性、败血性传染病。主要特征为纤维素性心包炎、纤维素性肝周炎、纤维素性气囊炎、干酪性输卵管炎、关节炎及麻痹。

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里氏杆菌引起的侵害鸭/鹅的一种慢性或急性败血性传染病。主要感染鸭、鹅，鸡及某些野禽也可感染。表现为精神沉郁，厌食，流泪，软脚，粪便稀且呈黄白色或绿色，偏头扭颈、转圈，间歇性抽搐，直至死亡。解剖可见心包液增多或与心外膜粘连，肝脏肿大，或表面多有纤维素性分泌物。发病死亡率一般为5%-80%，常引起雏鸭/鹅大批死亡以及导致鸭/鹅发育迟缓。四季均可发病，秋冬季节尤甚。以往治疗鸭传染性浆膜炎都是以药物为主，严重威胁食品安全，又由于国家禁抗令的发布。这对鸭传染性浆膜炎防控不得不回归到疫苗预防。

目前筛选浆膜炎对型疫苗主要依靠免疫后攻毒的办法评估，操作比较繁琐，需要试验动物和专业人员操作，而且筛选周期至少需要1个月，针对发病很难做到快速防控的紧急免疫。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法，本发明通过将能采购的全国合法浆膜炎疫苗免疫家兔，制备出高免血清，将血清储备，一旦出现浆膜炎发病，可以将分离的鸭疫里氏菌株与储备的疫苗血清做玻片凝集，达到1分钟内筛选出对型疫苗的效果。本专利的好处主要是方便、快捷、简单，将筛选周期有1个月缩短至48小时，不需要专业的试验人员和动物，经济高效。

本发明是通过如下技术方案实现的，本发明一方面提供一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法，包括以下步骤：

1）疫苗筛选：选择所有合法批号浆膜炎疫苗；

2）实验动物选择：选择雌兔，PCR检测大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里氏杆菌、绿脓杆菌、李氏杆菌和巴氏杆菌，确定检测均为阴性，方可使用；

3）免疫：免疫选好的兔，采用背部、颈部多点免疫法，共选取6个点，进行三次免疫后大量收集血清冻干储备；

4）疫苗筛选：将分离的鸭疫里氏杆菌加入生理盐水，制成浑浊液，煮沸1-2小时，与每个制备好的血清做玻片凝集，如果出现凝集，则可以选用对应的疫苗免疫；如果均不发生凝集，说明目前的疫苗对该菌株均不能形成保护。

作为优选，步骤2）中，实验动物选择：选择2-3kg雌兔。

作为优选，步骤3）免疫中，第一次免疫：每个点免疫0.2ml，共免疫1.2ml，21d后进行第二次免疫。

作为优选，步骤3）免疫中，第二次免疫：每个点免疫0.3ml，共免疫1.8ml，21d后进行第三次免疫。

作为优选，步骤3）免疫中，第三次免疫：每个点免疫0.5ml，共免疫3ml，第三次免疫21d后大量收集血清后冻干储备。

本发明的有益效果为：

1）本发明通过将能采购的全国合法浆膜炎疫苗免疫家兔，制备出高免血清，将血清储备，一旦出现浆膜炎发病，可以将分离的鸭疫里氏菌株与储备的疫苗血清做玻片凝集，达到1分钟内筛选出对型疫苗的效果。

2）本专利的好处主要是方便、快捷、简单，将筛选周期有1个月缩短至48小时，不需要专业的试验人员和动物，经济高效。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

正如背景技术所介绍的，目前筛选浆膜炎对型疫苗主要依靠免疫后攻毒的办法评估，操作比较繁琐，需要试验动物和专业人员操作，而且筛选周期至少需要1个月，针对发病很难做到快速防控的紧急免疫。为了解决上述的问题本发明提供一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法。

实施例1，一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法，包括以下步骤：

1）疫苗筛选：选择所有合法批号浆膜炎疫苗；

2）实验动物选择：选择雌兔，PCR检测大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里氏杆菌、绿脓杆菌、李氏杆菌和巴氏杆菌，确定检测均为阴性，方可使用；

3）免疫：免疫选好的兔，采用背部、颈部多点免疫法，共选取6个点，进行三次免疫后大量收集血清冻干储备；

4）疫苗筛选：将分离的鸭疫里氏杆菌加入生理盐水，制成浑浊液，煮沸1小时，与每个制备好的血清做玻片凝集，如果出现凝集，则可以选用对应的疫苗免疫；如果均不发生凝集，说明目前的疫苗对该菌株均不能形成保护。

本实施例中，步骤2）中，实验动物选择：选择2-3kg雌兔。

本实施例中，步骤3）免疫中，第一次免疫：每个点免疫0.2ml，共免疫1.2ml，21d后进行第二次免疫。

本实施例中，步骤3）免疫中，第二次免疫：每个点免疫0.3ml，共免疫1.8ml，21d后进行第三次免疫。

本实施例中，步骤3）免疫中，第三次免疫：每个点免疫0.5ml，共免疫3ml，第三次免疫21d后大量收集血清后冻干储备。

实施例2，一种快速筛选浆膜炎对型疫苗的方法，包括以下步骤：

1）疫苗筛选：选择所有合法批号浆膜炎疫苗；

2）实验动物选择：选择雌兔，PCR检测大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里氏杆菌、绿脓杆菌、李氏杆菌和巴氏杆菌，确定检测均为阴性，方可使用；

3）免疫：免疫选好的兔，采用背部、颈部多点免疫法，共选取6个点，进行三次免疫后大量收集血清冻干储备；

4）疫苗筛选：将分离的鸭疫里氏杆菌加入生理盐水，制成浑浊液，煮沸2小时，与每个制备好的血清做玻片凝集，如果出现凝集，则可以选用对应的疫苗免疫；如果均不发生凝集，说明目前的疫苗对该菌株均不能形成保护。

本实施例中，步骤2）中，实验动物选择：选择3kg雌兔。

本实施例中，步骤3）免疫中，第一次免疫：每个点免疫0.2ml，共免疫1.2ml，21d后进行第二次免疫。

本实施例中，步骤3）免疫中，第二次免疫：每个点免疫0.3ml，共免疫1.8ml，21d后进行第三次免疫。

本实施例中，步骤3）免疫中，第三次免疫：每个点免疫0.5ml，共免疫3ml，第三次免疫21d后大量收集血清后冻干储备。

当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例仅用于说明本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。