阅读说明：本技术 获得莳萝的小rna富集水性提取物的方法 (Method for obtaining small RNA-enriched aqueous extract of dill ) 是由 E·奥热 J-M·博托 于 2018-04-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种从植物材料获得富集最大长度为150个核苷酸的小RNA的莳萝(Anethum graveolens)水性提取物的方法,所述方法包含以下步骤：a)将莳萝地上部分与水接触；b)在pH为10.5至11之间时加入乙二胺四乙酸(EDTA)四钠；c)然后将b)中获得的混合物的pH调节至6至8之间的值；d)将c)中获得的混合物纯化；并且e)检查pH并且如果需要,将其重新调节为6至8之间的值。本发明还涉及通过该方法获得的富集最大长度为150个核苷酸的小RNA的莳萝水性提取物。(The present invention relates to a method for obtaining an aqueous extract of dill (Anethum graveolens) enriched in small RNAs of maximum length 150 nucleotides from plant material, the method comprising the steps of: a) contacting the aerial parts of dill with water; b) adding tetrasodium ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) at a pH of between 10.5 and 11; c) then adjusting the pH of the mixture obtained in b) to a value between 6 and 8; d) purifying the mixture obtained in c); and e) checking the pH and, if necessary, readjusting it to a value between 6 and 8. The invention also relates to an aqueous dill extract enriched in small RNAs of maximum length 150 nucleotides obtained by this process.)

具体实施方式

本发明涉及一种方法，其从莳萝的干燥的或新鲜的地上部分获得富集了最大长度为150个核苷酸的小RNA的水性提取物。

术语“地上部分”是指莳萝的叶、茎和花。

在本发明的意义上，种子不包括在“地上部分”中。

在描述的过程中，术语“莳萝(dill)”和“Anethum gravolens”被同义使用，具有相同含义。

术语“小RNA”或“低分子量RNA”是指低分子量且最大长度为150个核苷酸的非编码RNA(核糖核酸)，诸如所有类型的非信使小RNA(单链和/或双链)，例如微小RNA、干扰RNA、内含子、小核RNA或任何RNA片段。

在根据本发明方法的第一步a)中，将莳萝植物材料或研磨的、干燥的地上部分与水接触，优选植物材料/水的比率为4至20％重量/重量，更优选比率为5到10％重量/重量、例如比率为5.7或10重量/重量。

所用的水是蒸馏的去矿质水或富含矿物质盐和/或寡元素的水，优选蒸馏水。

莳萝的地上部分优选地为干燥形式。

优选在步骤a)中在将植物材料与水接触之前将其进行研磨。研磨是一种机械作用，可以改善提取效果。机械研磨，然后在EDTA存在下进行碱裂解，促进了细胞膜特别是核膜的完全解构。

然后在步骤b)中将乙二胺四乙酸四钠加入到a)中获得的混合物中。在此步骤中pH为碱性，并且在必要时必须通过添加钠(NaOH)将其调节为10.5至11之间的值。在步骤b)期间，必须将碱性pH值保持在10.5至11之间。实际上，此pH值与EDTA的作用相结合会引起细胞膜(包括核膜)的解构，细胞的裂解和DNA的变性(双螺旋的2条链分离)。步骤b)中的pH检查表明它保持碱性并稳定在9至11之间。

乙二胺四乙酸四钠的浓度优选地在2至15mM之间，更优选地为10mM。

选择该浓度以优化最终提取物中低分子量RNA的提取产率。乙二胺四乙酸四钠将通过二价离子如钙离子(其在围绕纤维素微纤维的果胶分子之间形成离子桥)络合的螯合，而削弱和破坏植物细胞的果胶纤维素膜。其结果是在提取过程中促进细胞含有物的释放。EDTA处理的步骤对于提取物富集低分子量RNA至关重要。

EDTA处理的步骤优选在20至80℃之间的温度持续至少1小时。在该步骤期间，有利地将在a)中获得的混合物进行搅拌。

在步骤c)中，将b)中获得的混合物的pH调节至6至8之间的值。

例如，通过添加盐酸(HCl)或任何能够改变pH并与化妆用途相容的酸(诸如柠檬酸或乳酸)的溶液来调节pH。

这一酸化步骤导致DNA突然复性(双链的链重新配对)。然而，很长的染色体DNA不能完全重配对并形成不溶的缠结。相反，短得多的小RNA保留在溶液中。然后将DNA和小RNA分为两个独立的相：固相，其中除其他外包含染色体DNA，以及液相，其中除其他外包含小RNA。

在步骤d)中，纯化在c)中获得的混合物，以除去植物材料并回收粗制水性提取物。可以使用本领域技术人员已知的任何方法。优选将c)中获得的混合物低速离心，例如以4000g离心至少10分钟，以将残留的植物材料沉淀在沉淀物中，并在上清液中回收粗制水性提取物。

在步骤d)中检查pH并将其重新调节为6至8之间的值。优选将pH重新调节为6至6.5之间、甚至更优选6.5的值。通过添加盐酸(HCl)或钠(NaOH)溶液重新调节pH。

实际上，低于6的pH通常可以促使核酸沉淀，并因此可以促使最大长度为150个核苷酸的低分子量RNA沉淀。

在根据本发明方法的步骤d)中调节pH的步骤是最佳提取低分子量RNA所必不可少的步骤。

有利地，在步骤d)中重新调节pH之前，对在d)中获得的粗制水性提取物进行至少一次过滤。优选通过将过滤阈值由50至20μm降低到0.4、0.3、0.2或0.1μm来进行连续过滤。

本发明的第二个主题是通过上述方法获得的本发明的莳萝水性提取物，其富集最大长度为150个核苷酸的小RNA。

该提取物不含DNA(脱氧核糖核酸)。

这种富集最大长度为150个核苷酸的小RNA的水性提取物在稀释前包含：以相对于提取物总重量的重量计，10至30g/kg的干提取物，2至10g/kg的蛋白质片段，2至10g/kg的糖，0.2至3g/kg的氨基酸，100至2000mg/kg的酚化合物，以及10至100mg/kg的最大长度为150个核苷酸的低分子量RNA。由此获得的提取物被认为是浓缩的。然后可以将其在生理上可接受的溶剂中稀释以用于化妆品用途，从而将提取物的浓度调节至所需要的特定干燥提取物重量。

生理上可接受的溶剂的说明性和非限制性示例包括水、甘油、乙醇、丙二醇(衍生自玉米的天然形式称为)、丁二醇、二丙二醇、乙氧基化或丙氧基化的二甘醇、环状多元醇，或者这些溶剂的任意混合物。

通过本发明方法获得的提取物优选在诸如30％甘油和水的溶剂中稀释，并且以相对于提取物总重量的重量计包含。通过本发明方法获得的该提取物还包含5-15g/kg的干提取物，50到1000mg/kg的多酚，0.5-10g/kg的蛋白质片段，0.5-10g/kg的糖，0.1到1g/kg的氨基酸，以及10-100mg/kg的最大长度为150个核苷酸的小RNA。

在下文中将通过举例的方式描述根据本发明的方法的优选实施方案。

实施例1：制备伞形科的莳萝的富集小RNA的提取物

富集低分子量(最大长度为150个核苷酸)的RNA的水性提取物是从伞形科的莳萝获得的。

在第一步中，将粉末形式的干燥的莳萝地上部分的5％放入蒸馏水中，并加入10mM乙二胺四乙酸四钠，即在950g蒸馏水中有50g干燥莳萝粉末和3.8g乙二胺四乙酸四钠。在此步骤中，pH值应为碱性，且应在10.5至11之间，以使提取物具有低分子量RNA的最佳富集。

然后在搅拌下将混合物在55℃加热2h。

然后将混合物以4000g离心10分钟，以除去固体物质。

在该步骤结束时，在任何稀释之前检查pH值，以便在必要时将其调节到6至6.5之间，并保留提取物中的小RNA。

然后在孔隙率渐减的过滤器上进行顺序过滤，以提纯植物提取物，直至在0.2μm进行灭菌过滤。

实施例2：表征实施例1的莳萝提取物

通常，获得的是淡绿色莳萝水性提取物，含10到30g/kg的干重提取物、2至10g/kg的蛋白质片段、2至10g/kg的糖、0.1至3g/kg的氨基酸、300至750mg/kg的酚化合物，以及10至100mg/kg的最大长度为150个核苷酸的低分子量RNA。

但是，对于莳萝物种的地上部分，所获得的提取物可能会因诸如收获面积、收获年份、季节、气候条件等因素而有很大差异。

在实施例1的提取物中，获得了包含12g/kg干重提取物的水性提取物。

物理化学分析表明，该提取物具有浓度为2.55g/kg的蛋白质片段，3g/kg的糖，340g/kg的氨基酸，650mg/kg的酚化合物和50mg/kg的最大长度为150个核苷酸的低分子量RNA。然后将提取物用化妆品溶剂特别是用30％甘油或丁二醇或丙二醇稀释。稀释后，提取物的浓度为1.7g/kg的蛋白质片段，2g/kg的糖，240g/kg的氨基酸，455mg/kg的酚化合物和35mg/kg的最大长度为150个核苷酸的低分子量RNA。

测定莳萝提取物中不同化合物的量的分光光度法中使用的方法：

莳萝提取物中蛋白质的总含量通过洛瑞蛋白测定确定(Lowry等人，1951)。在分光光度计上于550nm读取样品的吸收率。蛋白质的含量借助于BSA标准曲线确定。

提取物中氨基酸的含量是根据Moore等人(1948)公布的方法确定的，游离氨基酸的含量通过将胺和羧基官能团分解后与茚三酮试剂形成有色复合物来评估。在分光光度计上于570nm读取样品的吸收率。相对于作为标准的氨基酸池确定氨基酸的总含量。

提取物中糖的总含量通过调整Dubois等人(1956)(Dubois等人，“Colorimetricmethod for determination of sugars and related substances”,Anal.Chem.,1956,28(3),

350-356)的描述的剂量来确定。该分析包括将第一材料溶于浓硫酸中，然后与苯酚反应形成有色复合物。在分光光度计上于490nm读取复合物的吸收率。糖类的含量借助于葡萄糖标准曲线确定。借助Folin-Ciocalteu分析法(Singleton等人，“Analysis of totalphenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent”,Methods Enzymol.1999,299:152)测定提取物中多酚的含量。样品中的多酚类化合物与Folin-Ciocalteu试剂反应；试剂的氧化产生蓝色。在分光光度计上于760nm读取样品的吸收率。借助于没食子酸标准曲线，以没食子酸的当量表示其含量。

低分子量RNA通过(Agilent)定量，这得益于专用于核酸分析(诸如低分子量RNA分析)的电子芯片，从而可以进行小型化电泳。这使得可以基于几微升确定提取物中所含的大小和浓度。结果以图的形式呈现，纵坐标(FU)是任意单位的荧光，横坐标(nt)是核苷酸数。将内部标记添加到每个分析中(图1中25nt的峰值)，并用作内部对照，以验证分析已良好执行。

实施例3：研究最终pH在制备莳萝提取物中的作用，以获得无小RNA的莳萝提取物

除了调节pH的最终步骤以外，在与实施例1相同的工作条件下进行提取过程，以使提取物富集低分子量RNA。

该提取过程是与乙二胺四乙酸四钠处理的步骤一起进行的，但最终提取物应调节至4至4.5的酸性pH而不是6至8的pH。

这导致了低分子量RNA的沉淀，这些结果通过的分析得到证实，该分析给出了低分子量RNA的浓度为零(如图2中所示)。

实施例4：提供通过浸渍莳萝获得的常规提取物。确定ETA处理步骤对实施小RNA提取方法的作用

为证明在低分子量RNA的提取过程中EDTA处理步骤的作用，还通过修改根据本发明的方法的某些重要步骤、防止提取物富集低分子量RNA来获得莳萝提取物。

在第一步中，将5％莳萝研磨，加水，即在950g蒸馏水中加入50g莳萝。

测量pH并使其为5.5；将混合物在55℃搅拌1小时。

然后将混合物以4000g离心10分钟，以除去固体物质。

先在50到20μm之间的孔隙率尺寸渐减的过滤器上，然后在从0.4到0.3μm的孔隙率的过滤器上进行顺序过滤。

然后获得一种浅绿色水性提取物，含13g/kg的干重提取物、3.3g/kg的蛋白质片段、2.2g/kg的糖、380mg/kg的氨基酸，以及410mg/kg的酚化合物。

然后仅通过添加水将提取物稀释至干重为8g/Kg。

物理化学分析表明，稀释后，植物提取物的蛋白质片段浓度为2.8g/kg，并且糖的浓度为1.7g/kg，氨基酸的浓度为240mg/kg，并且酚化合物的浓度为280mg/kg。在这些提取条件下(据说是常规提取条件(没有EDTA处理))，的分析揭示了该提取物的低分子量RNA浓度为零(如图3中所示)。该结果证实，通过在没有EDTA处理(在碱性pH下)的提取过程获得的提取物不含有低分子量RNA。EDTA处理步骤对于获得根据本发明的富集低分子量RNA的提取物至关重要。

根据本发明的另一方面，根据本发明获得的富集小RNA的水性提取物有利地用于制备化妆品组合物，其包含作为活性物质的根据本发明的这种小RNA的提取物，和生理上可接受的介质。

术语“有效量”是指根据本发明的提取物的最小量，该最小量对于获得提取物的活性、特别是美容活性、并且更特别地对于改善皮肤，对抗皮肤衰老迹象或对改善皮肤水化作用，而不会产生毒性是必需的。

有利地，以5至15g/kg的干重使用根据本发明的小RNA的提取物，优选地在化妆品溶剂中稀释。

本发明的小RNA的提取物有利地，以相对于组合物的总重量重量计，以0.1至5％的浓度存在于组合物中。

生理上可接受的介质表示适合于接触皮肤或粘膜外表面而没有毒性、刺激性、诱发过敏反应等或不耐受反应的载剂，并以合理优势/风险比进行配制。

根据本发明可用的组合物可以通过任何合适途径应用，特别是口服或局部外用，并且本领域技术人员可以调整组合物的配方。

本发明的组合物优选以适合局部应用的形式存在。因此，这些组合物必须包含生理上可接受的介质，即与皮肤和附属物相容的介质，并且在其应用时不存在不适风险，并且涵盖所有合适的化妆品形式。

局部应用是指在皮肤表面或粘膜上应用或散布根据本发明的富集小RNA的水性提取物，并且更具体地是包含其的组合物。

术语“皮肤”是指面部皮肤，特别是眼睛和嘴、鼻、前额、脖子、手的轮廓，以及整个机体的皮肤。

用于实施本发明的组合物可以特别地以水性、水-醇或油溶液、水包油乳液或油包水乳液的形式存在。它们也可以以悬浮液或甚至粉末的形式存在，适合应用于皮肤、粘膜、嘴唇和/或毛发。

这些组合物可以或多或少地为流体，并且还可以具有乳霜、洗剂、乳剂、浆液、润发油、凝胶、糊剂或泡沫的外观。它们也可以以固体形式(作为棒状)存在，或者可以以气雾剂形式应用于皮肤。

在设想的应用领域中常用的生理上可接受的介质的示例包括制剂所需的添加剂，诸如溶剂、增稠剂、稀释剂、抗氧化剂、着色剂、防晒剂、自黝黑剂、颜料、填充剂、防腐剂、香料、气味吸收剂、精油、维生素、必需脂肪酸、表面活性剂、成膜聚合物等。

在任何情况下，本领域技术人员将确保选择的这些添加剂及其比例不损害根据本发明的组合物寻求的有利性能。这些添加剂可以例如对应于组合物总重量的0.01至20％。当根据本发明的组合物是乳液时，以相对于组合物的总重量的重量计，脂肪相可以占5至80％，优选5至50％。组合物中使用的乳化剂和助乳化剂选自所述领域中常规使用的那些。例如，它们可以，以相对于组合物总重量的重量计，以0.3至30％的比例使用。

根据本发明的另一个有利的实施方案，可以将根据本发明的富集小RNA的水性提取物封装或包含在化妆品载体中，诸如在化妆品领域中使用的脂质体或任何其他纳米胶囊或微胶囊，或吸附在粉末状有机聚合物或矿物支持物上，诸如滑石和膨润土。

除了根据本发明的活性物质以外，本发明的组合物还可有利地包含至少一种其他活性物质，其具有与本发明的活性物质相似和/或互补的美容效果。根据本发明，该活性物质被定义为“另外的活性物质”。

例如，另外的活性物质可以选自：抗衰老、紧致、提亮、保湿、排水、促进微循环、去角质、脱皮、刺激细胞外基质、激活能量代谢、抗细菌、抗真菌、舒缓、抗自由基、抗紫外线、抗痤疮、消炎和麻醉物质，引起热感或新鲜感的物质，以及瘦身物质。

这些另外的活性物质可以选自包含以下的组中：

-维生素A，尤其是视黄酸、视黄醇、丙酸视黄醇、棕榈酸视黄醇；

-维生素B3，尤其是烟酰胺，生育酚烟酸酯；

-维生素B5、维生素B6、维生素B12、泛醇；

-维生素C，特别是抗坏血酸，抗坏血酸葡糖苷，抗坏血酸四棕榈酸酯，抗坏血酸磷酸镁和抗坏血酸磷酸钠；

-维生素E、F、H、K、PP、辅酶Q10；

-金属蛋白酶抑制剂或TIMP的激活剂；

-DHEA，其前体和衍生物；

-氨基酸，如精氨酸、鸟氨酸、羟脯氨酸、羟脯氨酸二棕榈酸酯、棕榈酰甘氨酸、羟赖氨酸、甲硫氨酸及其衍生物、N-酰基氨基酸化合物；

-天然或合成肽，包括二、三、四、五和六肽及它们的亲脂性和异构体衍生物，以及与其他种类(如金属离子，例如铜、锌、锰、镁和其他)复合的它们的衍生物。例子包括以商品名CHRONOGEN^TM、LAMINIXYL IS^TM、PEPTIDE Q10^TM、COLLAXYL^TM(专利FR2827170，)、PEPTIDE VINCI 01^TM(专利FR2837098，)、PEPTIDE VINCI 02^TM(专利FR2841781，)、ATPeptide^TM(专利FR2846883，)可商购的肽或者还有以名称为ATPeptide^TM由销售的序列为Arg-Gly-Ser-NH₂的合成肽；

-卤虫(Artemia salina)提取物，以GP4G^TM(FR2944526，)销售；

-植物肽提取物，诸如亚麻提取物(Lipigenine^TM，专利FR2956818，)，大豆、斯佩耳特小麦、葡萄、油菜、亚麻、稻、玉米、豌豆的提取物；

-酵母提取物，例如Dynagen^TM(专利FR2951946，)或Actopontine^TM(专利FR2944526，)；

-脱氢乙酸(DHA)；

-合成或天然来源的植物甾醇；

-水杨酸及其衍生物、α-和β-羟基酸、硅烷醇；

-氨基糖、葡糖胺、D-葡糖胺、N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基-D-葡糖胺、甘露糖胺、N-乙酰基甘露糖胺、半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺；

-多酚、异黄酮类、黄酮类的提取物，诸如葡萄提取物、松树提取物、橄榄提取物；

-脂质，诸如神经酰胺或磷脂；动物来源的油，诸如鲨烯或鲨烷；植物油，诸如甜杏仁油、椰子油、蓖麻油、霍霍巴油、橄榄油、菜籽油、花生油、葵花籽油、小麦胚芽油、玉米胚油、大豆油、棉籽油、苜蓿油、罂粟油、南瓜油、月见草油、小米油、大麦油、黑麦油、红花油、西番莲油、榛子油、棕榈油、杏仁油、鳄梨油、金盏花油；乙氧基化植物油、牛油树脂；

-所有的紫外线防晒剂和阳光防晒剂；

-环AMP及其衍生物，为腺苷酸环化酶激活物的物质和为磷酸二酯酶抑制剂的物质、积雪草(Centella asiatica)提取物、积雪草皂苷和积雪草酸、甲基黄嘌呤、茶素、咖啡因及其衍生物、茶碱、可可碱、毛喉素、七叶甙和七叶灵、ACE抑制剂、Val-Trp肽、神经肽Y抑制剂、脑啡肽、银杏(Ginkgo biloba)提取物、薯蓣提取物、芦丁、马黛茶提取物、瓜拉那提取物、寡糖、多糖、肉毒碱、常春藤提取物、岩藻提取物、夏枯草(Prunellavulgaris)水解提取物、鸡冠花(Celosia cristata)水解提取物、光滑果榆绿木(Anogeissusleiocarpus)提取物、木薯(Manihot utilissima)叶提取物、棕榈酰肉碱、肌肽、牛磺酸、接骨木提取物、海藻提取物，诸如掌叶树(Palmaria Palmata)提取物。

通过举例说明，以下将描述根据本发明获得的化妆品组合物的制剂实施例，其包含富集最大长度为150个核苷酸的小RNA的水性提取物：

实施例5：眼廓膏

制备过程：

1.将主容器中的A相均化，直到澄清；

2.在25℃，洒入B相中，均化10分钟至均匀；

3.在25℃，在单独的烧杯中制备C相，混合至均匀。洒入D相中并充分混合至均匀；

4.在25℃，将C+D相加入主容器中并混合至均匀；

5.在25℃，将E相添加到主容器中并混合至均匀；

6.在25℃，预混合F相，将其添加到主容器中，并混合至均匀；

7.在25℃停止。

因此，该组合物以珍珠紫霜凝胶的形式存在，pH在5.70至6.20之间，粘度(D0)为80000–130000cps(Brookfield RVT/Spindle C/5RPM/1分钟/25℃)。

实施例6：浓霜

制备过程：

1.在主容器中将A相均化并开始加热至75-80℃；

2.在30℃，洒入B相中，在加热同时均化；

3.在一个单独的烧杯中，准备C相，加热至75-80℃到均匀；

4.在75℃，将C相加入主容器中并均化10分钟；

5.冷却并在65℃添加D相。充分混合10分钟至均匀；

6.在加入主容器之前预混合E相；

7.在60℃添加E相。充分混合10分钟至均匀；

8.在35℃，在加入前将F相预混合，并充分混合；

9.在加入主容器之前预混合G相；

10.在35℃加入G相。充分混合至均匀；

11.在另一个烧杯中，准备H相：将NatrosolTM在环境温度下洒入水中并在加热至60℃的同时均化；

12.在30℃加入H相。充分混合至均匀；

13.在25℃停止。

因此，该组合物以粉红黄油状霜的形式存在，pH在4.90至5.40之间，粘度(D0)为160000–210000cps(Brookfield RVT/Spindle D/5RPM/1分钟/25℃)。

实施例7：面部精华液

制备过程：

1.在环境温度将A相的成分称入烧杯中并混合。将B相洒入并均化；

2.在环境温度，洒入C相中并继续将混合物均化；

3.在环境温度，将D相添加到ABC相中，并继续均化；

4.在环境温度，加入E相并均化；

4.在环境温度，加入F相并均化混合物；

6.在环境温度，加入G相并混合至均匀；

7.在25℃停止。

因此，该组合物以光滑、乳霜状、黄色、半透明凝胶的形式存在，pH在6.30至7.10之间，粘度(D0)为10000–15000cps(Brookfield RVT/Spindle B/5RPM/1分钟/25℃)。

实施例8：抗衰老面膜

制备过程：

1.在25℃，在主容器中将A相均化；

2.在25℃，洒入B相中并充分混合至均匀；

3.在25℃，添加C相并充分混合至均匀；

4.在单独的烧杯中预混合D相，并在25℃添加到主容器中；

5.在25℃，将E相加入主容器中并充分混合；

6.预混合F相并缓慢添加。充分混合均匀；

7.在单独的烧杯中预混合G相，并添加到主容器中至均匀；

8.在25℃停止。

因此，该组合物以闪绿效果的乳状凝胶的形式存在，pH在5.30至5.80之间，粘度(D0)为70000–100000cps(Brookfield RVT/Spindle C/5RPM/1分钟/25℃)。

实施例9：精华液

制备过程：

1.向主容器中加水，并使用高低螺旋桨叶开始混合；

2.依次添加其余成分，每次添加之间混合。

因此，该组合物以光滑的半透明精华液的形式存在，pH在5.75至6.25之间，粘度(D0)为1100-1400cps(Brookfield RVT/Spindle 3/20rpm/25℃/1分钟)。

上述化妆品组合物可用于改善皮肤外观，对抗皮肤衰老迹象或改善皮肤水化作用。

表述“改善皮肤外观”是指皮肤纹理看起来更光滑，皮肤的光度更强烈，肤色更均匀。

表述“皮肤衰老迹象”是指由衰老引起的皮肤外观的任何变化，诸如皱纹和细纹、裂缝、眼袋、阴影、下垂、丧失弹性、紧致度和/或肤色，以及皮肤自身内部的任何变化，这些变化不能通过外观变化系统地体现出来(诸如皮肤变薄)，或由于环境压力(诸如污染和紫外线)导致的皮肤内部退化。

术语“改善皮肤水化作用”是指对由于脱水引起的皮肤外观变化(例如干燥、紧致和不适)的任何改善。