阅读说明：本技术 一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法 (Method for improving survival rate of microalgae by adding low-temperature resistance agent ) 是由 邓敏丽 于 2018-06-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了微藻保种技术邻域内的一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法,其先将藻种和实验材料在无菌操作下下在培养皿里,培养数天,离心收藻种备用,然后称取适量低温抗性剂,倒入藻种中,混合均匀,移入冻干管中,平衡一定时间,将冻干管放入低温浴槽中,以一定降温速率降至从0<Sup>o</Sup>C降温到-30<Sup>o</Sup>C～-40<Sup>o</Sup>C,预冻一段时间,然后又投入液氮(-196℃)中,保种,最后定时取样进行复活试验,室温下培养10天,先目测,后镜检,以判断藻种是否存活以及藻种的存活率；本发明的备方法简单,操作简单,不易污染,保种时间较长。(The invention provides a method for improving the survival rate of microalgae in the neighborhood of microalgae seed preservation technology by adding a low-temperature resistance agent, which comprises the steps of culturing algae seeds and experimental materials in a culture dish under aseptic operation for several days, centrifugally collecting the algae seeds for later use, weighing a proper amount of the low-temperature resistance agent, pouring the low-temperature resistance agent into the algae seeds, uniformly mixing, transferring the mixture into a freeze-drying tube, balancing for a certain time, putting the freeze-drying tube into a low-temperature bath tank, and reducing the temperature to 0 o C cooling to-30 o C～‑40 o Pre-freezing for a period of time, then putting into liquid nitrogen (-196 ℃), preserving the seeds, finally sampling at regular time for carrying out a revival test, culturing for 10 days at room temperature, firstly carrying out visual inspection and then carrying out microscopic inspection to judge whether the algae seeds survive and the survival rate of the algae seeds; the preparation method is simple, the operation is simple, the pollution is not easy to happen, and the seed preservation time is shortIs longer.)

一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法

技术邻域

本发明涉及一种保种技术，特别涉及一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法。

背景技术

微藻的营养丰富，在人们的生活和生产实践中具有很广援的应用，在微藻的培养和应用中，保种技术十分重要，大规模微藻产业仅仅靠培养微藻是不够的，必须将藻种保存起来备用，才能满足需要，但微藻在保种过程中出现藻种单细胞纯种随环境变化发生变异，丧失自身的生理活性和遗传特性，使藻种复苏时部分藻种失活，藻种存活率较低。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于克服上述现有技术中的不足之处，提供一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法，制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法，所述制备方法包括以下步骤：

（A1）藻种培养：藻种和实验材料在无菌操作下培养数天，离心收藻，4^oC冰箱备用；

（A2）加入低温抗性剂：称取适量低温抗性剂，加入藻种中，混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间；

（A3）梯度降温保种：将上述冻干管放入KF-4型低温浴槽中，以一定降温速率降至从0^oC降温到-30^oC～-40^oC，预冻一段时间，然后又投入液氮(-196℃ )中，保种；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活。

本发明首先将藻种和实验材料在无菌操作下下在培养皿里，培养数天，然后离心收藻种，4^oC冰箱备用，然后精密天平称取适量低温抗性剂，倒入藻种中，诱导藻种对低温的抗性，玻璃棒搅拌混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间，将冻干管放入KF-4型低温浴槽中，以一定降温速率降至从0^oC降温到-30^oC～-40^oC，预冻一段时间，然后又投入液氮(-196℃ )中，保种，最后定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断藻种是否存活以及藻种的存活率；与现有技术相比，本发明的有益效果在于：该方法制备方法简单，操作简单，保种时间较长，藻种存活率较高。

作为本发明的进一步改进，所述低温抗性剂包括脱落酸ABA或水杨酸的一种。

作为本发明的进一步改进，所述降温速率为0.5～1^oC/min。

具体实施方式

实施例1

一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）藻种培养：藻种和实验材料在无菌操作下培养数天，离心收藻，4^oC冰箱备用；

（A2）加入低温抗性剂：精密天平称取适量低温抗性剂脱落酸，倒入藻种中，诱导藻种对低温的抗性，玻璃棒搅拌混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间，4^oC冰箱备用；

（A3）梯度降温保种：将上述冻干管放入KF-4型低温浴槽中，以1^oC/min降温速率降至从0^oC降温到-30^oC～-40^oC，预冻1h，然后又投入液氮(-196℃ )中，保种；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活以及藻种的存活率。

实施例2

一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）藻种培养：藻种和实验材料在无菌操作下培养数天，离心收藻，4^oC冰箱备用；

（A2）加入低温抗性剂：精密天平称取适量低温抗性剂脱落酸，倒入藻种中，诱导藻种对低温的抗性，玻璃棒搅拌混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间，4^oC冰箱备用；

（A3）梯度降温保种：将上述冻干管放入KF-4型低温浴槽中，以0.5^oC/min降温速率降至从0^oC降温到-30^oC～-40^oC，预冻2h，然后又投入液氮(-196℃ )中，保种；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活以及藻种的存活率。

实施例3

一种添加低温抗性剂提高微藻保存成活率的方法，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）藻种培养：藻种和实验材料在无菌操作下培养数天，离心收藻，4^oC冰箱备用；

（A2）加入低温抗性剂：精密天平称取适量低温抗性剂水杨酸，倒入藻种中，诱导藻种对低温的抗性，玻璃棒搅拌混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间，4^oC冰箱备用；

（A3）梯度降温保种：将上述冻干管放入KF-4型低温浴槽中，以0.7^oC/min降温速率降至从0^oC降温到-30^oC～-40^oC，预冻1h，然后又投入液氮(-196℃ )中，保种；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活以及藻种的存活率。

本发明并不局限于上述实施例，在本发明公开的技术方案的基础上，本邻域的技术人员根据所公开的技术内容，不需要创造性的劳动就可以对其中的一些技术特征作出一些替换和变形，这些替换和变形均在本发明保护范围内。