阅读说明：本技术 一种异羟肟酸类衍生物及其制备方法和应用 (hydroxamic acid derivative and preparation method and application thereof ) 是由 王玉成 游学甫 王菊仙 杜潇楠 王明华 朱梅 张国宁 于 2019-09-19 设计创作，主要内容包括：本发明涉及酶抑制剂技术领域,尤其涉及一种异羟肟酸类衍生物及其制备方法和应用。本发明提供的异羟肟酸类衍生物中的异羟肟酸基团与LpxC酶活性区域中的活性锌离子螯合,且含有与LpxC酶中的疏水通道结合的疏水侧链,上述两个方面内容保证了异羟肟酸类衍生物对LpxC具有较好的杀菌活性和较低的毒性；本发明还提供了所述异羟肟酸类衍生物的制备方法,所述制备方法反应时间短,收率高。(The invention relates to the technical field of enzyme inhibitors, in particular to a hydroxamic acid derivative and a preparation method and application thereof. The hydroxamic acid group in the hydroxamic acid derivative is chelated with active zinc ions in an LpxC enzyme active area, and the hydroxamic acid derivative contains a hydrophobic side chain combined with a hydrophobic channel in the LpxC enzyme, so that the hydroxamic acid derivative has better bactericidal activity and lower toxicity to LpxC; the invention also provides a preparation method of the hydroxamic acid derivative, and the preparation method is short in reaction time and high in yield.)

一种异羟肟酸类衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及酶抑制剂技术领域，尤其涉及一种异羟肟酸类衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

超级细菌和人类之间相互博弈，不断斗争。从弗莱明发现青霉素的30年代开始，第一批抗生素诞生，但细菌同样开始演变和斗争。如今，细菌耐药日益严重，而新型抗生素开发相对滞后。全球每年大约有70万人死于耐药菌感染，23万新生儿因此夭折，如果不能开发出新型抗生素，来控制超级细菌的蔓延，预计在2050年，全球因细菌感染的死亡人数大约达到1000万左右，将是所有疾病的最高点。

UDP-3-O(R-羟基十四酰)-N-乙酰胺基葡糖脱乙酰基酶(LpxC)是催化合成革兰阴性菌外膜脂多糖的主要成分类脂A的关键酶，在革兰阴性菌中具有较高的同源性，与哺乳动物(包括人)的各种酶均没有共同序列，LpxC的缺失或过表达都会使某些革兰阴性菌死亡，这使其成为具有开发前景的抗革兰阴性菌药物的全新靶标。

在过去的20多年里，科学家们设计合成了多种类型的LpxC抑制剂，尽管许多报道的化合物具有很好的临床前数据，但仍然需要新的LpxC抑制剂，其不仅对革兰氏阴性菌具有杀菌活性，并且具有可接受的毒性或耐受性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种异羟肟酸类衍生物及其制备方法和应用，所述异羟肟酸类衍生物对LpxC具有较好的杀菌活性和较低的毒性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种异羟肟酸类衍生物，具有式Ⅰ所示结构：

式Ⅰ中，X为

Y为

Z为

其中，当Y和Z同时为时，X不包括

优选的，

所述X为

所述Y为

所述Z为

本发明还提供了上述技术方案所述的异羟肟酸类衍生物的制备方法，包括以下步骤：

将具有式Ⅱ所示结构的化合物、戴斯-马丁氧化剂和二氯甲烷混合，进行氧化反应，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三苯基膦、四溴化碳和二氯甲烷混合，进行Corey-Fuchs反应，得到具有式Ⅳ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅳ所示结构的化合物、Pd₂(dba)₃、具有式a所示结构的化合物、三乙胺和N,N-二甲基甲酰胺混合，进行Sonogashira偶联反应，得到具有式Ⅴ所示结构的化合物；

将具有式Ⅴ所示结构的化合物、四氢呋喃和氢氧化钠溶液混合，进行水解反应，得到具有式Ⅵ所示结构的化合物；

将具有式Ⅵ所示结构的化合物、(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯、二异丙基乙胺、2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐和N，N-二甲基甲酰胺混合，进行缩合反应，得到具有式Ⅶ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅶ所示结构的化合物、甲醇和氯化氢气体混合，进行脱Boc保护反应，得到具有式Ⅷ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅷ所示结构的化合物、羟胺水溶液和异丙醇混合，进行取代反应，得到具有式Ⅰ所示结构的化合物；

优选的，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物和戴斯-马丁氧化剂的摩尔比为1：(1.0～1.2)；

所述氧化反应的温度为室温，所述氧化反应的时间为2～8h。

优选的，所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三苯基膦和四溴化碳的摩尔比为1：(3.8～4.2)：(1.8～2.2)；

所述Corey-Fuchs反应的温度为-20～-78℃。

优选的，所述具有式Ⅳ所示结构的化合物、Pd₂(dba)₃、具有式a所示结构的化合物和三乙胺的摩尔比为1：(0.02～0.04)：(1.8～2.2)：(2.8～3.2)；

所述Sonogashira偶联反应的温度为75～85℃，所述Sonogashira偶联反应的时间为6～10h。

优选的，所述具有式Ⅴ所示结构的化合物和氢氧化钠溶液中的氢氧化钠的摩尔比为1：(8～12)；

所述水解反应的温度为室温，所述水解反应的时间为6～10h。

优选的，所述具有式Ⅵ所示结构的化合物、(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯、二异丙基乙胺和2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐的摩尔比为1：(1.1～1.3)：(3.8～4.2)：(1.1～1.3)；

所述缩合反应的温度为室温，所述缩合反应的时间为3～8h。

优选的，所述具有式Ⅷ所示结构的化合物和羟胺水溶液中的羟胺的摩尔比为1：(18～22)。

本发明还提供了上述技术方案所述的异羟肟酸类衍生物或由上述技术方案所述的制备方法制备得到的异羟肟酸类衍生物在抑制UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡糖脱乙酰基酶中的应用。

本发明提供了一种具有式Ⅰ所示结构的异羟肟酸类衍生物，本发明所述的异羟肟酸类衍生物中的异羟肟酸基团与LpxC酶活性区域中的活性锌离子螯合，且含有与LpxC酶中的疏水通道结合的疏水侧链，上述两个方面内容保证了异羟肟酸类衍生物对LpxC具有较好的杀菌活性和较低的毒性；

本发明还提供了所述异羟肟酸类衍生物的制备方法，所述制备方法反应时间短，收率高。

具体实施方式

本发明提供了一种异羟肟酸类衍生物，具有式Ⅰ所示结构：

式Ⅰ中，X为

Y为

Z为

其中，当Y和Z同时为时，X不包括在本发明中，所述X优选为所述Y优选为所述Z优选为

在本发明中，所述异羟肟酸类衍生物更优选为N-((S)-3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(((1R，2S)-2-甲氧基环戊基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰胺、(S)-N-(3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-((4-硝基苯基)丁-1,3-二炔-1-基)哌嗪-1-甲酰胺或(S)-N-(3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2-羟基-4-((4-(哌啶-1-基甲基)苯基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰胺。

本发明还提供了上述技术方案所述的异羟肟酸类衍生物的制备方法，包括以下步骤：

将具有式Ⅱ所示结构的化合物、戴斯-马丁氧化剂和二氯甲烷混合，进行氧化反应，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三苯基膦、四溴化碳和二氯甲烷混合，进行Corey-Fuchs反应，得到具有式Ⅳ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅳ所示结构的化合物、Pd₂(dba)₃、具有式a所示结构的化合物、三乙胺和N,N-二甲基甲酰胺混合，进行Sonogashira偶联反应，得到具有式Ⅴ所示结构的化合物；

将具有式Ⅴ所示结构的化合物、四氢呋喃和氢氧化钠溶液混合，进行水解反应，得到具有式Ⅵ所示结构的化合物；

将具有式Ⅵ所示结构的化合物、(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯、二异丙基乙胺、2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐和N，N-二甲基甲酰胺混合，进行缩合反应，得到具有式Ⅶ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅶ所示结构的化合物、甲醇和氯化氢气体混合，进行脱Boc保护反应，得到具有式Ⅷ所示结构的化合物；

将所述具有式Ⅷ所示结构的化合物、羟胺水溶液和异丙醇混合，进行取代反应，得到具有式Ⅰ所示结构的化合物；

在本发明中，若无特殊的说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品。

本发明将具有式Ⅱ所示结构的化合物、戴斯-马丁氧化剂和二氯甲烷混合，进行氧化反应，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物。

在本发明中，当X为Y为时，本发明优选通过制备得到所述具有式Ⅱ所示结构的化合物。

当X为Y为时，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物的具体制备流程优选如式1所示：

在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物的具体制备过程优选为：在氩气气氛中，室温条件下，将AAgOTf(12.8g，50mmol)、氟试剂Selectfluor(8.9g,25mmol)和氟化钾(3.9g,66mmol)的乙酸乙酯溶液(30mL)混合后，加入(6.5g，50mmol)和三氟甲基三甲基硅烷(7.1g，50mmol)，反应8h，过滤，浓缩得到粗品，使用硅胶柱色谱(PE:EA＝20:1～10:1)，得到(4.3g，43％)。

当X为Y为时，本发明优选通过制备得到所述具有式Ⅱ所示结构的化合物。

在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物的具体制备流程优选如式2所示：

在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物的具体制备过程优选为：

将乙酰胺(1.0g,17mmol),(7.3g,51mmol)和二氯(五甲基环戊二烯基)合铱(III)二聚体(0.3g，0.4mmol)混合并加入微波反应管中，在130℃下微波反应3h。冷却至室温，加入水(10mL)。用乙酸乙酯(所述乙酸乙酯与所述水的用量比优选为1：(1.0～1.5))萃取(次数优选为3次)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品。使用硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)纯化得化合物3(0.9g,30％)。

当X为Y为时，本发明优选通过制备得到具有式Ⅱ所示结构的化合物。

在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物的具体制备流程优选如式3所示：

在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物的具体制备过程优选为：

将吡咯烷(0.7g,10mmol)的甲苯(10mL)溶液中加入D-(+)-樟脑磺酸(0.9g,4mol),室温搅拌1分钟，加入(4.3g,25mmol)和钌-NHC配合物(0.1mmol)并在120℃下搅拌10h，冷却至室温，加入水(所述水与所述甲苯的用量比优选为1：(1.0～1.5))，用乙酸乙酯(所述乙酸乙酯的所述水的用量比优选为1：(1.0～1.5))萃取(次数优选为3次)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩得粗品，使用硅胶柱色谱(PE:EA＝20:1～10:1)纯化得化合物3(0.8g,37％)。

当所述具有式Ⅱ所示结构的化合物为上述三种情况以外的结构时，其来源优选为市售产品或按照现有技术公开的制备方法制备得到即可。

在本发明中，所述具有式Ⅱ所示结构的化合物和戴斯-马丁氧化剂的摩尔比优选为1：(1.0～1.5)，更优选为1：(1.2～1.3)；所述具有式Ⅱ所示结构的化合物与所述二氯甲烷的用量比优选为1g:(15～30)mL，更优选为1g：(18～28)mL，最优选为1g：(21～25)mL。

在本发明中，所述混合优选为：在-10℃的条件下，先将所述具有式Ⅱ所示结构的化合物和二氯甲烷混合，得到所述具有式Ⅱ所示结构的化合物的二氯甲烷溶液后，分批加入戴斯-马丁氧化剂(在加入过程中，由于会出现升温的现象，可通过控制加入速度保持反应体系的温度在-7～-10℃之间即可)。

在本发明中，所述氧化反应优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行搅拌即可；所述氧化反应的温度优选为室温，所述氧化反应的时间优选为2～8h，更优选为4～6h。

所述氧化反应完成后，本发明优选对反应后的产物体系进行后处理，所述后处理的过程优选为：将产物体系移至冰浴后，依次加入饱和硫代硫酸钠的水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液进行淬灭反应，过滤(除去固体)，静置分层，所得水相用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，将所得有机相用无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩后，用硅胶柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝20:1)分离纯化。

得到具有式Ⅲ所示结构的化合物后，本发明将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三苯基膦、四溴化碳和二氯甲烷混合，进行Corey-Fuchs反应，得到具有式Ⅳ所示结构的化合物；在本发明中，所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三苯基膦和四溴化碳的摩尔比优选为1：(3.8～4.2)：(1.8～2.2)，更优选为1：(3.9～4.1)：(1.9～2.1)；所述具有式Ⅲ所示结构的化合物与所述第一有机溶剂的用量比优选为1g：(25～45)mL，更优选为1g：(30～40)mL，最优选为1g：(34～36)mL。

在本发明中，所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、三苯基膦、四溴化碳和二氯甲烷的混合，优选包括以下步骤：

将所述具有式Ⅲ所示结构的化合物和第一部分第一有机溶剂混合，得到具有式Ⅲ所示结构的化合物的溶液；

将三苯基膦和第二部分第一有机溶剂混合，得到三苯基膦的溶液；

将所述四溴化碳和第三部分第一有机溶剂混合，得到四溴化碳的溶液；

将所述四溴化碳的溶液、所述三苯基膦的溶液和具有式Ⅲ所示结构的化合物的溶液混合。

本发明所述第一部分第一有机溶剂、第二部分第一有机溶剂和第三部分第一有机溶剂的配比没有任何特殊的限定，能够保证将各自对应的溶剂充分溶解即可。所述第一部分第一有机溶剂、第二部分第一有机溶剂和第三部分第一有机溶剂的用量之和为第一有机溶剂的用量。

在本发明中，所述四溴化碳的溶液、所述三苯基膦的溶液和具有式Ⅲ所示结构的化合物的溶液混合的具体过程优选为：在-20℃、氩气保护下，在所述四溴化碳的溶液中滴加三苯基膦的溶液后，搅拌反应30min，冷却至-78℃，继续滴加具有式Ⅲ所示结构的化合物的溶液完成后，搅拌反应30min。本发明对所述滴加没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的滴加过程进行即可；本发明对所述搅拌没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行搅拌即可。

在本发明中，所述三苯基膦的作用是在反应过程中进攻四溴化碳夺取一个溴离子，生成磷鎓离子和溴仿负离子；生成的磷鎓离子受到同时生成的溴仿负离子的亲核取代，形成二溴亚甲基磷叶立德，之后二溴亚甲基碳与醛羰基进行亲核加成，形成的两性中间体环化为氧磷杂环丁烷，进一步消除三苯基氧膦和二溴烯烃。

在本发明中，所述Corey-Fuchs反应优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行搅拌即可；所述Corey-Fuchs反应的温度优选为-20～-78℃，更优选为-60～-70℃；在本发明中，Corey-Fuchs反应的时间优选为20～40min，更优选为25～35min。在本发明中，所述Corey-Fuchs反应的时间为以完成具有式Ⅲ所示结构的化合物的溶液的滴加开始计。

所述Corey-Fuchs反应完成后，本发明优选对得到的产物体系进行后处理，所述后处理优选包括以下步骤：将所述产物体系升至室温，减压蒸馏去除溶剂后，溶于体积浓度为40％的乙醇溶液，加入正己烷并剧烈搅拌10min，静置分层，取正己烷层减压浓缩，无需纯化直接用于下一步反应。

得到具有式Ⅳ所示结构的化合物后，本发明将所述具有式Ⅳ所示结构的化合物、Pd₂(dba)₃、具有式a所示结构的化合物、三乙胺和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)混合，进行Sonogashira偶联反应，得到具有式Ⅴ所示结构的化合物；

在本发明中，所述具有式Ⅳ所示结构的化合物、Pd₂(dba)₃、具有式a所示结构的化合物和三乙胺的摩尔比优选为1：(0.02～0.04)：(1.8～2.2)：(2.8～3.2)，更优选为1：(0.025～0.035)：(1.9～2.1)：(2.96～3.1)；所述具有式Ⅳ所示结构的化合物与DMF的用量比优选为1g：(10～18)mL，更优选为1g：(12～16)mL，最优选为1g：(13～15)mL。

在本发明中，所述混合优选在氩气气氛下进行，本发明对所述混合没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的混合过程进行即可。

在本发明中，所述Sonogashira偶联反应优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行搅拌即可。在本发明中，所述Sonogashira偶联反应的温度优选为75～85℃，更优选为78～82℃；所述Sonogashira偶联反应的时间优选为6～10h，更优选为8～19h。

在本发明中，所述Pd₂(dba)₃的作用是催化剂，所述三乙胺的作用是缚酸剂，所述DMF的作用是溶剂。

所述Sonogashira偶联反应完成后，本发明优选对得到的产物体系进行后处理，所述后处理优选包括：在反应体系中加入乙酸乙酯，用水洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩和用硅胶柱色谱分离纯化(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯的体积比为80:1)。

得到具有式Ⅴ所示结构的化合物后，本发明将具有式Ⅴ所示结构的化合物、四氢呋喃和氢氧化钠溶液混合，进行水解反应，得到具有式Ⅵ所示结构的化合物；在本发明中，所述氢氧化钠溶液优选为氢氧化钠水溶液；所述氢氧化钠水溶液中氢氧化钠与水的用量比优选为(0.15～0.25)g：1mL，更优选为(0.18～0.22)g：1mL。

在本发明中，所述具有式Ⅴ所示结构的化合物、四氢呋喃和氢氧化钠溶液的混合，优选包括以下步骤：

将具有式Ⅴ所示结构的化合物与四氢呋喃混合，得到具有式Ⅴ所示结构的化合物的四氢呋喃溶液后，与氢氧化钠溶液混合。本发明对所述混合没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行混合即可。

在本发明中，所述具有式Ⅴ所示结构的化合物和氢氧化钠溶液中的氢氧化钠的摩尔比优选为1：(8～12)，更优选为1：(9～11)；所述具有式Ⅴ所示结构的化合物与四氢呋喃的用量比优选为1g：(15～40)mL，更优选为1g：(20～30)mL，最优选为1g：(35～37)mL。

在本发明中，所述水解反应优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行搅拌即可。在本发明中，所述水解反应的温度优选为室温，所述水解反应的时间优选为6～10h，更优选为8～9h。

所述水解反应完成后，本发明优选将得到的产物体系进行后处理，所述后处理优选为：将所述产物体系进行减压蒸除溶剂，加水，并用1mol/L的盐酸调至pH为2.0，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠进行干燥，过滤，减压浓缩，无需纯化直接用于下一步反应。

得到具有式Ⅵ所示结构的化合物后，本发明将具有式Ⅵ所示结构的化合物、(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯、二异丙基乙胺、2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐和N，N-二甲基甲酰胺混合，进行缩合反应，得到具有式Ⅶ所示结构的化合物。

在本发明中，所述具有式Ⅵ所示结构的化合物、(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯、二异丙基乙胺、2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐和N，N-二甲基甲酰胺的混合优选为包括以下步骤：

将具有式Ⅵ所示结构的化合物、2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)与DMF混合，得到混合溶液；本发明对所述混合没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行混合即可；

将(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯(Boc-S)和二异丙基乙胺加入至所述混合溶液中进行混合；本发明对所述加入的方式没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的加入方式即可。

在本发明中，所述具有式Ⅵ所示结构的化合物、Boc-S、二异丙基乙胺和HATU的摩尔比优选为1：(1.1～1.3)：(3.8～4.2)：(1.1～1.3)，更优选为1：(1.15～1.25)：(3.9～4.1)：(1.15～1.25)。在本发明中，所述具有式Ⅵ所示结构的化合物和DMF的用量比优选为1g：(15～30)mL，更优选为1g：(17～28)mL，最优选为1g：(20～25)mL。

在本发明中，所述缩合反应优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行搅拌即可；所述缩合反应的温度优选为室温，所述缩合反应的时间优选为3～8h，更优选为4～6h。

在本发明中，所述HATU的作用是活化羧基，所述二异丙基乙胺的作用是活化氨基。

所述缩合反应完成后，本发明优选对得到的产物体系进行后处理，所述后处理优选包括以下步骤：在反应体系中加入乙酸乙酯，用1.2mol/L的氯化锂水溶液洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩和用硅胶柱色谱(洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯的体积比为2:1)分离纯化。

得到具有式Ⅶ所示结构的化合物后，本发明将所述具有式Ⅶ所示结构的化合物、甲醇和氯化氢气体混合，进行脱Boc保护反应，得到具有式Ⅷ所示结构的化合物。

在本发明中所述具有式Ⅶ所示结构的化合物、甲醇和氯化氢气体的混合优选为将具有式Ⅶ所示结构的化合物与甲醇混合后，通入氯化氢气体。本发明对所述具有式Ⅶ所示结构的化合物与甲醇的混合没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行混合即可。在本发明中，所述氯化氢气体的通入速率优选为0.5mL/s，更优选为1mL/s；所述氯化氢气体的通入时间优选为15～25min，更优选为18～22min，最优选为20min。在本发明中，所述氯化氢的通入时间即为脱Boc保护反应的时间，所述脱Boc保护反应的温度优选为室温。

所述脱Boc保护反应完成后，本发明优选对得到的产物体系进行后处理，所述后处理优选为减压蒸除溶剂得到具有式Ⅷ所示结构的化合物粗品。所述具有式Ⅷ所示结构的化合物粗品不需要再进一步纯化直接用于下一步反应。

得到具有式Ⅷ所示结构的化合物后，本发明将所述具有式Ⅷ所示结构的化合物、羟胺水溶液和异丙醇混合，发生取代反应，得到具有式Ⅰ所示结构的化合物。在本发明中，所述羟胺水溶液的浓度优选为16～17mmol/mL，更优选为16.5～16.8mmol/mL。

在本发明中，所述具有式Ⅷ所示结构的化合物、羟胺水溶液和异丙醇的混合优选为将具有式Ⅷ所示结构的化合物和异丙醇混合后再与羟胺水溶液混合。本发明对所述混合没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行混合即可。

在本发明中，所述具有式Ⅷ所示结构的化合物和羟胺水溶液中的羟胺的摩尔比优选为1：(18～22)，更优选为1：(19～21)，最优选为1:20；所述具有式Ⅷ所示结构的化合物和异丙醇的用量比优选为1g：(20～30)mL，更优选为1g：(22～28)mL，最优选为1g：(24～26)mL。

在本发明中，所述取代反应优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌没有任何特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过程进行搅拌即可。所述取代反应的温度优选为室温，本发明优选通过LCMS监测所述取代反应的进程，以判断反应是否完成。

所述取代反应完成后，本发明优选对得到的产物体系进行后处理，所述后处理的步骤优选为将所述产物体系用反相HPLC(条件：色谱柱XDB-C18柱(21.2mm×250mm，7μm；流动相A：乙腈(含0.1％TFA)，B：水(含0.1％TFA)，梯度洗脱(0-40min:A 5％-30％)；柱温25℃；流速10mL/min；检测波长280nm)分离纯化，然后将所得产物冷冻干燥。

本发明还提供了上述技术方案所述的异羟肟酸类衍生物或由上述技术方案所述的制备方法制备得到的异羟肟酸类衍生物在抑制UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡糖脱乙酰基酶中的应用。

下面结合实施例对本发明提供的异羟肟酸类衍生物及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

N-((S)-3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(((1R，2S)-2-甲氧基环戊基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰胺的制备：(制备过程如式4所示)

(1S，2S)-2-甲氧基环戊烷-1-甲醛(Ⅲ-1)的制备：

在-10℃下，在Ⅱ-1(8.85g，68mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液中，分批加入戴斯马丁氧化剂(DMP)(30.96g,73mmol)，控制加入速度，使反应体系的温度保持在-7℃到-10℃之间，加毕，在室温条件下搅拌4h。反应结束后，移至冰浴，依次加入饱和硫代硫酸钠的水溶液(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)进行淬灭反应，过滤除去固体，静置分层，水层用二氯甲烷萃取三次(100mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用硅胶柱色谱分离纯化[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为20∶1]，得到Ⅲ-1(6.02g，69.13％)。MS-APCI(m/z):129.1[M+H]⁺；

(1R，2S)-1-(2,2-二溴乙烯基)-2-甲氧基环戊烷(Ⅳ-1)的制备：

在-20℃的氩气气氛中，将三苯基膦(39.09g，149mmol)的DCM(75mL)溶液滴加至四溴化碳(24.71g，75mmol)的DCM(60mL)溶液中，滴毕，在搅拌的条件下反应30min。冷却至-78、℃，滴加Ⅲ-1(4.75g，37mmol)的DCM(60mL)溶液，滴毕，在搅拌条件下反应30min，升至室温，减压蒸除溶剂，溶于40％乙醇溶液中得黄色液体，加入正己烷剧烈搅拌10min，静置分层，正己烷层减压浓缩，得Ⅳ-1粗品(9.2g，88.2％)，无需纯化直接用于下一步反应，取少量Ⅳ-1粗品，硅胶柱色谱分离纯化[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为150∶1]得黄色油状物以确定结构。MS-ESI(m/z):304.9[M+Na]⁺；

4-(((1R，2S)-2-甲氧基环戊基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酸甲酯(Ⅴ-1)的制备：

在氩气气氛中，将Ⅳ-1(6.00g，21mmol)、4-乙炔基苯甲酸甲酯(a-1)(6.89g，43mmol)、Pd₂(dba)₃(0.58g，0.63mmol)、(4-MeOPh)₃P(0.44g，1.26mmol)和三乙胺(6.37g，63mmol)加至DMF(100mL)中，80℃搅拌反应8h。加入乙酸乙酯(300L)，用水(150mL×3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品，用硅胶柱色谱分离纯化[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为80∶1]，得到Ⅴ-1(2.38g，40.16％)。MS-ESI(m/z):283.1[M+H]⁺；

4-(((1R，2S)-2-甲氧基环戊基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酸(Ⅵ-1)的制备：

将氢氧化钠(2.40g，60mmol)的水溶液(10mL)加至6(1.70g，6mmol)的THF(60mL)溶液中，室温搅拌反应8h，减压蒸除溶剂，向浓缩物中加入水(50mL)，用1mol/L盐酸调至约pH＝2.0，用乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到Ⅵ-1粗品(1.39g，86.1％)，不需纯化直接用于下步反应，取少量Ⅵ-1粗品分离纯化得淡黄色固体以确定结构。MS-ESI(m/z):267.1[M-H]^-；

(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((1R，2S)-2-甲氧基环戊基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰氨基)-3-基丁酸酯(Ⅶ-1)的制备：

将(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯(Boc-S)(5.81g，23.6mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA，10.18g，78.8mmol)加至7(5.30g，19.7mmol)和2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，9.21g，23.6mmol)的DMF(150mL)溶液中，室温搅拌反应5h。加入乙酸乙酯(300mL)，用1.2mol/L的氯化锂水溶液(100mL×3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品。用硅胶柱色谱[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为2∶1]分离纯化，得到Ⅶ-1(6.87g，70.3％)。MS-ESI(m/z):497.3[M+H]⁺；

(S)-3-氨基-2-(4-(((1R，2S)-2-甲氧基环戊基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰氨基)-3-甲基丁酸甲酯(Ⅷ-1)的制备：

将Ⅶ-1(6.70g，13.5mmol)溶解于甲醇(30mL)中并通干燥的氯化氢气体20min。减压蒸除溶剂，得到Ⅷ-1(4.96g，93.0％)，不需纯化直接用于下步反应。MS-ESI(m/z):396.5[M+H]⁺；

N-((S)-3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-(((1R，2S)-2-甲氧基环戊基)丁-1,3-diyn-1-基)苯甲酰胺(I-1)的制备：

将Ⅷ-1(4.15g，10.5mmol)溶于异丙醇(12mL)和16.85mol/L羟胺水溶液(12.5mL，210mmol)中，室温搅拌反应直到通过LCMS检测反应完成。用反相HPLC[HPLC条件：色谱柱XDB-C18柱(21.2mm×250mm，7μm；流动相A：乙腈(含0.1％TFA)，B：水(含0.1％TFA)，梯度洗脱(0-40min:A 5％-30％)；柱温25℃；流速10mL/min；检测波长280nm]分离纯化后，冷冻干燥，得到1-1(2.19g，52.5％)。MS-ESI(m/z):398.2[M+H]⁺。¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ9.10(d,J＝4.0Hz,1H),8.83(d,J＝4.0Hz,1H),8.45(d,J＝10.6Hz,1H),7.78–7.72(m,2H),7.57–7.54(m,2H),4.34(d,J＝10.6Hz,1H),3.80–3.73(m,1H),3.28(d,J＝1.4Hz,3H),2.95–2.88(m,1H),2.43(s,1H),1.87–1.79(m,1H),1.79–1.64(m,3H),1.23(s,2H),1.17(s,2H)。

实施例2

(S)-N-(3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-((4-硝基苯基)丁-1,3-二炔-1-基)哌嗪-1-甲酰胺(I-2)的制备：(制备过程如式5所示)

4-硝基苯甲醛(Ⅲ-2)

在-10℃下，在Ⅱ-2(11.50g，75mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液中，分批加入戴斯马丁氧化剂(DMP)(34.10g,80mmol)，控制加入速度，使反应体系的温度保持在-7℃到-10℃之间，加毕，在室温条件下搅拌4h。反应结束后，移至冰浴，依次加入饱和硫代硫酸钠的水溶液(120mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)进行淬灭反应。过滤除去固体，静置分层，水层用二氯甲烷萃取三次(120mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用硅胶柱色谱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯(30∶1)]，得到Ⅲ-2(7.4g，65.2％)。MS-APCI(m/z):152.0[M+H]⁺；

1-(2,2-二溴乙烯基)-4-硝基苯(Ⅳ-2)

在-20℃的氩气气氛中，将三苯基膦(43.0g，165mmol)的DCM(80mL)溶液滴加至四溴化碳(27.2g，83mmol)的DCM(70mL)溶液中，滴毕，在搅拌的条件下反应30min。冷却至-78℃，滴加Ⅲ-2(6.20g，41mmol)的DCM(60mL)溶液，滴毕，在搅拌条件下反应30min，升至室温，减压蒸除溶剂，溶于40％乙醇溶液中得黄色液体，加入正己烷剧烈搅拌10min，静置分层，正己烷层减压浓缩，得Ⅳ-2粗品(10.9g，86.9％)。无需纯化直接用于下一步反应。取少量Ⅳ-2粗品，硅胶柱色谱分离纯化[洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯(150∶1)]得黄色油状物以确定结构。MS-ESI(m/z):327.9[M+Na]⁺；

4-((4-硝基苯基)丁-1,3-二炔-1-基)哌嗪-1-羧酸甲酯(Ⅴ-2)

在氩气气氛中，将Ⅳ-2(7.0g，23mmol)、4-乙炔基哌嗪-1-羧酸甲酯(a-2)(7.7g，46mmol)、Pd₂(dba)₃(0.6g，0.7mmol)、(4-MeOPh)₃P(0.5g，1.4mmol)和三乙胺(7.0g，70mmol)加至DMF(120mL)中，80℃搅拌反应8h。加入乙酸乙酯(320L)，用水(200mL×3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品。用硅胶柱色谱分离纯化[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯体积比为80∶1]，得到Ⅴ-2(3.1g，42.7％)。MS-ESI(m/z):314.1[M+H]⁺；

4-((4-硝基苯基)丁-1,3-二炔-1-基)哌嗪-1-羧酸(Ⅵ-2)

将氢氧化钠(2.40g，70mmol)的水溶液(10mL)加至Ⅴ-2(2.2g，7mmol)的THF(80mL)溶液中，室温搅拌反应8h。减压蒸除溶剂，向浓缩物中加入水(60mL)，用1mol/L盐酸调至约pH＝2.0，用乙酸乙酯(60mL×4)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到Ⅵ-2粗品(1.8g，85.8％)，不需纯化直接用于下步反应。取少量Ⅵ-2粗品分离纯化以确定结构。MS-ESI(m/z):298.1[M-H]^-；

(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-(4-((4-硝基苯基)丁-1,3-二炔-1-基)哌嗪-1-甲酰胺基)丁酸甲酯(Ⅶ-2)

将(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯(Boc-S)(6.4g，26mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA，11.2g，86mmol)加至Ⅵ-2(6.6g，22mmol)和2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，10.1g，26mmol)的DMF(180mL)溶液中，室温搅拌反应5h。加入乙酸乙酯(350mL)，用1.2mol/L的氯化锂水溶液(120mL×3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品。用硅胶柱色谱[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为2∶1)]分离纯化，得到Ⅶ-2(8.0g，69.4％)。MS-ESI(m/z):528.3[M+H]⁺；

(S)-3-氨基-3-甲基-2-(4-((4-硝基苯基)丁-1,3-二炔-1-基)哌嗪-1-甲酰胺基)丁酸甲酯(Ⅷ-2)

将Ⅶ-2(7.9g，15mmol)溶解于甲醇(40mL)中并通干燥的氯化氢气体30min。减压蒸除溶剂，得到Ⅷ-2(6.0g，92.3％)，不需纯化直接用于下步反应。MS-ESI(m/z):428.2[M+H]⁺；

(S)-N-(3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-4-((4-硝基苯基)丁-1,3-二炔-1-基)哌嗪-1-甲酰胺(I-2)

将Ⅷ-2(5.6g，12mmol)溶于异丙醇(15mL)和16.85mol/L羟胺水溶液(13.8mL，230mmol)中，室温搅拌反应直到通过LCMS检测反应完成。用反相HPLC[HPLC条件：色谱柱XDB-C18柱(21.2mm×250mm，7μm；流动相A：乙腈(含0.1％TFA)，B：水(含0.1％TFA)，梯度洗脱(0—40min:A 5％—30％)；柱温25℃；流速10mL/min；检测波长280nm]分离纯化后，冷冻干燥，得到1-2(2.19g，53.2％)。MS-ESI(m/z):429.2[M+H]⁺。¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ9.23(d,J＝4.0Hz,1H),8.72(d,J＝4.2Hz,1H),8.20–8.13(m,2H),7.68(d,J＝10.4Hz,1H),7.75–7.72(m,2H),4.18(d,J＝10.6Hz,1H),3.50–3.42(m,4H),3.15–3.06(m,4H),2.47(s,1H),1.24(s,2H),1.18(s,2H)。

实施例3

(S)-N-(3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2-羟基-4-((4-(哌啶-1-基甲基)苯基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰胺(I-3)的制备：(制备过程如式6所示)

4-(哌啶-1-基甲基)苯甲醛(Ⅲ-3)

在-10℃下，在Ⅱ-3(19.5g，95mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液中，分批加入戴斯马丁氧化剂(DMP)(44.5g,105mmol)，控制加入速度，使反应体系的温度保持在-7℃到-10℃之间，加毕，在室温条件下搅拌4h。反应结束后，移至冰浴，依次加入饱和硫代硫酸钠的水溶液(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)进行淬灭反应。过滤除去固体，静置分层，水层用二氯甲烷萃取三次(150mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用硅胶柱色谱分离纯化(洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为20∶1]，得到Ⅲ-3(13.6g，70.6％)。MS-APCI(m/z):204.1[M+H]⁺；

1-(4-(2,2-二溴乙烯基)苄基)哌啶(Ⅳ-3)

在-20℃的氩气气氛中，将三苯基膦(45.1g，172mmol)的DCM(90mL)溶液滴加至四溴化碳(28.5g，86mmol)的DCM(80mL)溶液中，滴毕，在搅拌的条件下反应30min。冷却至-78℃，滴加Ⅲ-3(8.7g，43mmol)的DCM(60mL)溶液，滴毕，在搅拌条件下反应30min，升至室温，减压蒸除溶剂，溶于40％乙醇溶液中得黄色液体，加入正己烷剧烈搅拌10min，静置分层，正己烷层减压浓缩，得Ⅳ-3粗品(13.0g，84.7％)。无需纯化直接用于下一步反应。取少量Ⅳ-3粗品，硅胶柱色谱分离纯化[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为150∶1]得黄色油状物以确定结构。MS-ESI(m/z):380.1[M+Na]⁺；

2-羟基-4-((4-(哌啶-1-基甲基)苯基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酸甲酯(Ⅴ-3)

在氩气气氛中，将Ⅳ-3(10.7g，30mmol)、4-乙炔基-2-羟基苯甲酸甲酯(a-3)(10.6g，60mmol)、Pd₂(dba)₃(0.81g，0.9mmol)、(4-MeOPh)₃P(0.62g，1.8mmol)和三乙胺(8.92g，88mmol)加至DMF(120mL)中，80℃搅拌反应8h。加入乙酸乙酯(300L)，用水(150mL×3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品。用硅胶柱色谱分离纯化[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为80∶1]，得到Ⅴ-3(4.23g，37.8％)。MS-ESI(m/z):374.2[M+H]⁺；

2-羟基-4-((4-(哌啶-1-基甲基)苯基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酸(Ⅵ-3)

将氢氧化钠(3.6g，90mmol)的水溶液(20mL)加至Ⅴ-3(3.4g，9mmol)的THF(60mL)溶液中，室温搅拌反应8h。减压蒸除溶剂，向浓缩物中加入水(50mL)，用1mol/L盐酸调至约pH＝2.0，用乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到Ⅵ-3粗品(2.8g，86.6％)，不需纯化直接用于下步反应。取少量Ⅵ-3粗品分离纯化以确定结构。MS-ESI(m/z):358.2[M-H]^-；

(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2-羟基-4-((4-(哌啶-1-基甲基)苯基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰氨基)-3-甲基丁酸甲酯(Ⅶ-3)

将(S)-2-氨基-3-(叔丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸甲酯(Boc-S)(8.15g，33mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA，14.25g，110mmol)加至Ⅵ-3(9.7g，27mmol)和2-(7-氧化苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，12.90g，33mmol)的DMF(170mL)溶液中，室温搅拌反应5h。加入乙酸乙酯(320mL)，用1.2mol/L的氯化锂水溶液(120mL×3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得粗品。用硅胶柱色谱[洗脱剂：石油醚与乙酸乙酯的体积比为2∶1)]分离纯化，得到Ⅶ-3(11.2g，70.8％)。MS-ESI(m/z):588.3[M+H]⁺；

(S)-3-氨基-2-(2-羟基-4-((4-(哌啶-1-基甲基)苯基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰氨基)-3-甲基丁酸甲酯(Ⅷ-2)

将Ⅶ-2(11.2g，19mmol)溶解于甲醇(40mL)中并通干燥的氯化氢气体35min。减压蒸除溶剂，得到Ⅷ-3(8.6g，92.6％)，不需纯化直接用于下步反应。MS-ESI(m/z):488.5[M+H]⁺；

(S)-N-(3-氨基-1-(羟基氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-2-羟基-4-((4-(哌啶-1-基甲基)苯基)丁-1,3-二炔-1-基)苯甲酰胺(I-3)

将Ⅷ-3(7.3g，15mmol)溶于异丙醇(15mL)和16.85mol/L羟胺水溶液(17.5mL，295mmol)中，室温搅拌反应直到通过LCMS检测反应完成。用反相HPLC[HPLC条件：色谱柱XDB-C18柱(21.2mm×250mm，7μm；流动相A：乙腈(含0.1％TFA)，B：水(含0.1％TFA)，梯度洗脱(0—40min:A 5％—30％)；柱温25℃；流速10mL/min；检测波长280nm]分离纯化后，冷冻干燥，得到1-3(3.7g，50.8％)。MS-ESI(m/z):489.2[M+H]⁺。¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ9.18(d,J＝4.0Hz,1H),8.74(d,J＝4.0Hz,1H),8.53(d,J＝10.8Hz,1H),7.82–7.75(m,1H),7.50–7.43(m,2H),7.30–7.26(m,2H),7.20–7.15(m,2H),4.28(d,J＝10.8Hz,1H),3.55–3.48(m,2H),2.47–2.38(m,6H),1.60–1.46(m,4H),1.46–1.34(m,2H),1.18(s,2H),1.11(s,2H)。

测试例

参照CLSI标准，采用MH肉汤微稀释法进行药敏实验，试验菌用MH肉汤或脑心浸液增菌，药液用MH肉汤或脑心浸液二倍稀释成各种所需浓度于96孔板中，每孔100μL。各孔中药液的终浓度分别为：128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03μg/mL。依次接种试验菌(接种量为5×10⁵CFU/mL)后，在35℃下恒温培养18h，观察结果如表1所示，

表1左氧氟沙星、I-1、I-2和I-3的最低抑菌浓度(MICs/ug·mL^-1)

由表1可知：化合物I-1，I-2和I-3除对多种革兰阴性菌具有抗菌活性外，对肺炎克雷伯菌2146(产NDM-1)和铜绿假单胞菌ATCC 27853的抑菌活性优于临床上一线药物左氧氟沙星。

取18～22g健康的ICR小鼠，随机分组，每组3只，雌雄不要求。一次性尾静脉注射分别给予化合物D73-ACHN975、I-1、I-2和I-3，给表2所示体积的药物后立即观察动物反应情况，记录死亡数及死亡时间，得出死亡率。未死亡动物及正常动物(未给药)取尾部，经多聚甲醛固定，进行HE染色后观察尾部血管有无病变情况发生。结果如表2所示：

表2化合物D73-ACHN975、I-1、I-2和I-3对小白鼠的毒性试验结果

由表2可知：静脉注射给予对照化合物D73-ACHN975，其MTD≈75mg/kg；静脉注射给予化合物I-1,I-2和I-3，其MTD>100mg/kg。预估小鼠静脉给药，D73-ACHN975化合物LD₅₀值应低于化合物I-1,I-2和I-3的LD₅₀值，具体数值需进一步测定。初步判定小鼠静脉给药，化合物I-1,I-2和I-3急性毒性反应强度低于化合物D73-ACHN975。

由以上实施例可知，本发明提供的异羟肟酸类衍生物具有较好的杀菌活性和较低的毒性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。