一种化学发光免疫分析仪用底物液及其制备方法
阅读说明：本技术 一种化学发光免疫分析仪用底物液及其制备方法 (substrate solution for chemiluminescence immunoassay analyzer and preparation method thereof ) 是由 杨帆 许建成 任文波 李志凯 田永帅 杨锋斌 于 2019-09-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种化学发光免疫分析仪用底物液及其制备方法,本发明适用于雅培、康华等国内外全自动化学发光免疫分析仪,具有成本低廉,与雅培底物液对比上机实验,本技术方案信噪比更高、发光强度更大、测值重复性优于雅培底物液,可完全有效替代市场上广泛销售及价格昂贵的雅培底物液,从而有效解决国内医院及厂家过度依赖进口的问题。(The invention discloses a substrate liquid for a chemiluminescence immunoassay analyzer and a preparation method thereof, the substrate liquid is suitable for domestic and foreign full-automatic chemiluminescence immunoassay analyzers such as Yapeh, Kanghua and the like, has low cost, is compared with the Yapeh substrate liquid for on-machine experiments, has higher signal-to-noise ratio and higher luminous intensity, has measured value repeatability superior to that of the Yapeh substrate liquid, and can completely and effectively replace the Yapeh substrate liquid which is widely sold in the market and has high price, thereby effectively solving the problem that domestic hospitals and manufacturers excessively rely on import.)
技术领域
本发明涉及化学发光免疫分析技术领域。
具体地说，是涉及一种化学发光免疫分析仪用底物液及其制备方法。
背景技术
20世纪70年代，欧美发达国家医学界出现了用化学发光免疫分析方法检测人体疾病，该技术结合了化学发光方法与免疫反应，具有免疫反应的特异性，并且是非放射性标记，无放射性污染，是体外诊断行业的最新检测技术，广泛受国内外各大三甲医院检验科的青睐，应用于心脏标记物、肿瘤标记物、甲状腺功能、代谢、性激素等项目的检测，目前国外已经普及并发展成熟，国内还处于起步阶段，发展前景广阔，其中，吖啶酯标记的磁微粒化学发光又是该技术的翘楚。在碱性H2O2溶液中，吖啶酯分子受到过氧化氢离子进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮，当其回到基态时发出最大发射波长为430nm的光子。这类化合物从发光的机理来说特点是:①发光反应中在形成电子激发态中间体之前，联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来，即未发光部分与发光部分分离，因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。②吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂，在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光。因此应用于化学发光检测具有许多优越性。优点主要有:①背景发光低，信噪比高；②发光反应干扰因素少；③光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；④易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑤标记物稳定(在2-8℃下可保存数月之久)。因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一类非常有效、非常好的化学发光标记物。
目前，国内外厂家热衷于自主研发化学发光底物液并配套自有产品的使用。国外以雅培底物液为代表,国内如深圳菲鹏、苏州长光华医、深圳亚辉龙，威海威高、厦门万泰凯瑞、南京迪格诺斯等厂家均开发自主底物，但普遍信噪比及重复性不佳，雅培底物液为国际公认较好的产品，但价格昂贵。
发明内容
本发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种化学发光免疫分析仪用底物液及其制备方法，成本低廉，信噪比及重复性优异，满足医疗领域的要求。
本发明的目的是通过以下技术措施来达到的：
一种化学发光免疫分析仪用底物液，包括预激发液和激发液；
所述预激发液包括以下组分：
氟硼酸：0.05M-0.2M；
H202：0.05％-0.2％；
EDTA：5mM-10mM；
PC-300：0.05％-0.1％；
所述激发液包括以下组分：
NaOH：0.1M-0.35M；
NP-10：0.5％-2.5％；
DMF：0.1％-0.25％；
Krovin600：0.05％-1％。
所述预激发液中氟硼酸主要用于调整该体系的PH值，使其具有一定的酸性，H2O2具有强氧化性，作为氧化剂使用。所述预激发液的主要作用是将标记物从复合物上裂解下来，并提供一个酸性的环境，防止反应过早发生。
所述激发液中NaOH主要使溶液具有一定的离子强度，使其具有一定的碱性环境，激发化学发光反应。
作为一种改进：包括预激发液和激发液；
所述预激发液包括以下组分：
氟硼酸：0.05M；
H202：0.2％；
EDTA：5mM；
PC-300：0.1％；
所述激发液包括以下组分：
NaOH：0.1M；
NP-10：2.5％；
DMF：0.1％；
Krovin600：1％。
作为一种改进：包括预激发液和激发液；
所述预激发液包括以下组分：
氟硼酸：0.2M；
H202：0.05％；
EDTA：10mM；
PC-300：0.05％；
所述激发液包括以下组分：
NaOH：0.35M；
NP-10：0.5％；
DMF：0.25％；
Krovin600：0.05％。
作为一种改进：包括预激发液和激发液；
所述预激发液包括以下组分：
氟硼酸：0.125M；
H202：0.125％；
EDTA：7.5mM；
PC-300：0.075％；
所述激发液包括以下组分：
NaOH：0.225M；
NP-10：1.5％；
DMF：0.175％；
Krovin600：0.075％。
一种化学发光免疫分析仪用底物液的制备方法；
预激发液制备方法包括以下步骤：
A1、取纯水800ml；
A2、加入4.97ml-19.88ml氟硼酸；
A3、加入1.66ml-6.64mlH2O2；
A4、加入1.69g-3.38gEDTA；
A5、加入0.5ml-1mlPC-300；
A6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到1.50±0.2；
A7、用纯水定容至1L。
激发液制备方法：
B1、取纯水800ml；
B2、加入4g-14gNaOH；
B3、加入5ml-25mlNP-10；
B4、加入1ml-2.5mlDMF；
B5、加入0.5ml-1mlKrovin600；
B6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到pH12.50±0.2；
B7、用纯水定容至1L。
作为一种改进：
预激发液制备方法包括以下步骤：
A1、取纯水800ml；
A2、加入4.97ml氟硼酸；
A3、加入6.64mlH2O2；
A4、加入1.69gEDTA；
A5、加入0.5mlPC-300；
A6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到1.50±0.2；
A7、用纯水定容至1L。
激发液制备方法：
B1、取纯水800ml；
B2、加入4gNaOH；
B3、加入25mlNP-10；
B4、加入1mlmlDMF；
B5、加入1mlKrovin600；
B6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到pH12.50±0.2；
B7、用纯水定容至1L。
作为一种改进：
预激发液制备方法包括以下步骤：
A1、取纯水800ml；
A2、加入19.88ml氟硼酸；
A3、加入1.66mlH2O2；
A4、加入3.38gEDTA；
A5、加入0.5mlPC-300；
A6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到1.50±0.2；
A7、用纯水定容至1L。
激发液制备方法：
B1、取纯水800ml；
B2、加入14gNaOH；
B3、加入5mlNP-10；
B4、加入1mlmlDMF；
B5、加入0.5mlKrovin600；
B6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到pH12.50±0.2；
B7、用纯水定容至1L。
作为一种改进：
预激发液制备方法包括以下步骤：
A1、取纯水800ml；
A2、加入12.43ml氟硼酸；
A3、加入4.15mlH2O2；
A4、加入2.54gEDTA；
A5、加入0.75mlPC-300；
A6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到1.50±0.2；
A7、用纯水定容至1L。
激发液制备方法：
B1、取纯水800ml；
B2、加入9gNaOH；
B3、加入15mlNP-10；
B4、加入1.75mlDMF；
B5、加入0.75mlKrovin600；
B6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到pH12.50±0.2；
B7、用纯水定容至1L。
由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：
1、成本低廉，适用于雅培、康华等国内外全自动化学发光免疫分析仪。
2、通过与雅培底物液对比上机实验，本技术方案信噪比更高、发光强度更大、测值重复性优于雅培底物液，可完全有效替代市场上广泛销售及价格昂贵的雅培底物液，从而有效解决国内医院及厂家过度依赖进口的问题。
具体实施方式
实施例1：一种化学发光免疫分析仪用底物液，包括预激发液和激发液。
所述预激发液包括以下组分：
氟硼酸：0.05M；
H202：0.2％；
EDTA：5mM；
PC-300：0.1％；
所述激发液包括以下组分：
NaOH：0.1M；
NP-10：2.5％；
DMF：0.1％；
Krovin600：1％。
实施例2：一种化学发光免疫分析仪用底物液，包括预激发液和激发液。
所述预激发液包括以下组分：
氟硼酸：0.2M；
H202：0.05％；
EDTA：10mM；
PC-300：0.05％；
所述激发液包括以下组分：
NaOH：0.35M；
NP-10：0.5％；
DMF：0.25％；
Krovin600：0.05％。
实施例3：一种化学发光免疫分析仪用底物液，包括预激发液和激发液。
所述预激发液包括以下组分：
氟硼酸：0.125M；
H202：0.125％；
EDTA：7.5mM；
PC-300：0.075％；
所述激发液包括以下组分：
NaOH：0.225M；
NP-10：1.5％；
DMF：0.175％；
Krovin600：0.075％。
实施例4：如实施例1所述的一种化学发光免疫分析仪用底物液的制备方法。
预激发液制备方法包括以下步骤：
A1、用量筒量取纯水800ml，加入容器；
A2、用移液器量取4.97ml氟硼酸，加入容器；
A3、用移液器量取6.64mlH202，加入容器；
A4、用电子天平称量1.69gEDTA，加入容器；
A5、用移液器量取0.5mlPC-300，加入容器；
A6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到1.50±0.2；
A7、用纯水定容至1L。
激发液制备方法：
B1、用量筒量取纯水800ml，加入容器；
B2、用电子天平称量4gNaOH，加入容器；
B3、用移液器量取25mlNP-10，加入容器；
B4、用移液器量取1mlmlDMF，加入容器；
B5、用移液器量取1mlKrovin600，加入容器；
B6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到pH12.50±0.2；
B7、用纯水定容至1L。
实施例5：如实施例2所述的一种化学发光免疫分析仪用底物液的制备方法。
预激发液制备方法包括以下步骤：
A1、用量筒量取纯水800ml，加入容器；
A2、用移液器量取19.88ml氟硼酸，加入容器；
A3、用移液器量取1.66mlH202，加入容器；
A4、用电子天平称量3.38gEDTA，加入容器；
A5、用移液器量取0.5mlPC-300，加入容器；
A6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到1.50±0.2；
A7、用纯水定容至1L。
激发液制备方法：
B1、用量筒量取纯水800ml，加入容器；
B2、用电子天平称量14gNaOH，加入容器；
B3、用移液器量取5mlNP-10，加入容器；
B4、用移液器量取1mlmlDMF，加入容器；
B5、用移液器量取0.5mlKrovin600，加入容器；
B6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到pH12.50±0.2；
B7、用纯水定容至1L。
实施例6：如实施例3所述的一种化学发光免疫分析仪用底物液的制备方法。
预激发液制备方法包括以下步骤：
A1、用量筒量取纯水800ml，加入容器；
A2、用移液器量取12.43ml氟硼酸，加入容器；
A3、用移液器量取4.15mlH202，加入容器；
A4、用电子天平称量2.54gEDTA，加入容器；
A5、用移液器量取0.75mlPC-300，加入容器；
A6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到1.50±0.2；
A7、用纯水定容至1L。
激发液制备方法：
B1、用量筒量取纯水800ml，加入容器；
B2、用电子天平称量9gNaOH，加入容器；
B3、用移液器量取15mlNP-10，加入容器；
B4、用移液器量取1.75mlDMF，加入容器；
B5、用移液器量取0.75mlKrovin600，加入容器；
B6、充分搅拌混匀，使用1MNaOH/1MHCl调PH到pH12.50±0.2；
B7、用纯水定容至1L。
以实施例3为例进行上机实验，原始数据如下所示。
表一：清洗磁珠重复性及发光强度验证。
表二：TSH项目发光强度验证。
表三：TSH项目重复性验证。
表四：PGII项目发光强度验证
表五：PGII项目重复性验证。
数据对比如下所示。
表一：清洗磁珠验证(低、中、高3浓度)。
表二：TSH项目
表三：PGII项目
以上对本发明的数个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应归属于本发明的专利涵盖范围之内。