一种利用化学诱变剂培育蔷薇变异新品种的方法
阅读说明：本技术 一种利用化学诱变剂培育蔷薇变异新品种的方法 (Method for cultivating new rose variant variety by using chemical mutagen ) 是由 李承秀 于永畅 程甜甜 孙忠奎 张�林 燕语 张安琪 任红剑 杜辉 仲凤维 鹿苹 于 2021-08-14 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种利用化学诱变剂培育蔷薇变异新品种的方法,具体为：将蔷薇种子经沙藏出芽后播种在穴盘内,将平阳霉素和磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液,将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；幼苗出土,待子叶展平真叶萌动时,将幼苗放入MS营养液中进行水培处理,采用平阳霉素溶液处理幼苗茎尖生长点,每天早、中、晚各处理一次,连续处理2～4天,处理完成后用清水冲洗幼苗茎尖生长点和根部,并转移到MS液体培养基中培养；处理一个月后,蔷薇的叶片逐渐出现变异,变异稳定后,将有变异性状的植株在温室内进行常规管理。该方法采用化学诱变剂处理植株茎尖生长点和根尖,操作简单,植株诱变率高,诱变效果好,植株的成活率高。(The invention discloses a method for cultivating a new rose variant variety by using a chemical mutagen, which comprises the following steps: sowing rose seeds in a plug tray after the rose seeds are subjected to sand storage and budding, mixing pingyangmycin and a phosphate buffer solution to prepare pingyangmycin solution, and mixing pingyangmycin and an MS liquid culture medium to prepare an MS nutrient solution; the method comprises the following steps of (1) enabling seedlings to emerge, placing the seedlings into MS nutrient solution for water culture treatment when cotyledons are flattened and true leaves germinate, treating stem tip growing points of the seedlings by using a pingyangmycin solution once in the morning, in the middle and at night every day, continuously treating for 2-4 days, flushing the stem tip growing points and roots of the seedlings by using clear water after the treatment is finished, and transferring the seedlings into an MS liquid culture medium for culture; after one month of treatment, the leaves of the rose gradually generate variation, and after the variation is stable, the plants with the variation characters are subjected to conventional management in a greenhouse. The method adopts chemical mutagen to treat the stem tip growing point and the root tip of the plant, and has the advantages of simple operation, high plant mutagenesis rate, good mutagenesis effect and high plant survival rate.)
技术领域
本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种利用化学诱变剂培育蔷薇变异新品种的方法。
背景技术
蔷薇是蔷薇属部分植物的通称，主要指蔓藤蔷薇的变种及园艺品种。大多是一类藤状爬篱笆的小花，茎刺较大且一般有钩；叶互生，奇数羽状复叶，小叶为5-9片，叶缘有齿，叶片平展但有柔毛；花常是6-7朵族生，为圆锥状伞房花序，生于枝条顶部，花径约3厘米，每年只开一次，是重要的园林观赏植物。蔷薇耐寒，可以药用，由其制成的蔷薇花粥有良好的营养价值。我国至今未曾对蔷薇树种资源开展系统研究，仍处于较低利用层次的常规育种阶段，人工诱导突变体是获得植物新种质的重要途径之一，但是目前人工诱导突变体来获得蔷薇树种资源的研究很少，常用的诱导方法蔷薇的变异较低，变异过程中植株死亡率较高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种利用化学诱变剂培育蔷薇变异新品种的方法，该方法采用化学诱变剂处理植株茎尖生长点和根尖，操作简单，植株诱变率高，诱变效果好，而且本发明还在育苗基质中加入了自制的功能填料，提高了育苗基质的保水保肥性能，有效提高了植株的成活率。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种利用化学诱变剂培育蔷薇变异新品种的方法，包括以下步骤：
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液，平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为55～65μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时采用上述制得的平阳霉素溶液处理蔷薇幼苗茎尖生长点，每天早、中、晚各处理一次，连续处理2～4天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，叶色开始变黄，到9月份变异稳定，叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒营养液补充营养。
作为上述技术方案的优选，步骤(1)中，所述育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4～6:3～5:2～4的比例混合而成。
作为上述技术方案的优选，所述功能填料的制备方法为：将纤维素纳米纤维悬浮液和尿素溶液混合搅拌处理，得到的悬浮液通过喷雾干燥的方法进行干燥得到纤维素纳米纤维包封的尿素材料；将淀粉、甘油和水混合搅拌均匀，然后干燥处理得到热塑性淀粉，将其与聚(3-羟基丁酸酯)、纤维素纳米纤维包封的尿素材料混合加入到转矩流变仪中160～170℃、15～25rpm下进行热处理5～15min，之后170～180℃、3～5MPa下热压处理6～8min，最后切粒，制得功能填料。
作为上述技术方案的优选，所述纤维素纳米纤维悬浮液、尿素溶液的浓度分别为1.5～2.5wt％、35～45wt％，二者体积比为1:1；喷雾干燥时，干燥温度为180℃。
作为上述技术方案的优选，所述淀粉、甘油、聚(3-羟基丁酸酯)、纤维素纳米纤维包封的尿素材料的质量比为70：(25～35)：80：(50～60)。
作为上述技术方案的优选，步骤(2)中，所述平阳霉素溶液、所述MS营养液中平阳霉素的浓度均为60μg/ml。
作为上述技术方案的优选，步骤(2)中，处理蔷薇幼苗茎尖生长点时是将蘸有平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗茎尖生长点上，每次处理时间为8～12min。
作为上述技术方案的优选，步骤(3)中，所述营养液为尿素和磷酸二氢钾的混合液，混合液中尿素、磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.45％～0.55％、0.15％～0.25％。
作为上述技术方案的优选，步骤(3)中，营养液的喷洒频率为每隔15天喷洒一次。
由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明将平阳霉素和磷酸盐缓冲液混合制得平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液，将出土的幼苗移入到MS营养液中同时将蘸有平阳霉素溶液的脱脂棉球放在幼苗的茎尖生长点上，同时对蔷薇幼苗的茎尖生长点和根尖进行处理，大大提高了蔷薇植株的变异率，且变异效果好。
本发明还在育苗基质中加入了功能填料，该功能填料是采用纤维素纳米纤维对尿素进行包封，然后再涂覆热塑性淀粉和聚(3-羟基丁酸酯)制得，具有良好的保水保肥性能；聚(3-羟基丁酸酯)在有氧和无氧环境中进行生物降解，不会形成有毒废物；本发明采用甘油作为增塑剂制得热塑性淀粉，其与聚(3-羟基丁酸酯)共混涂覆纤维素纳米纤维包封的尿素材料，制得的功能填料性能优异，可有效提供蔷薇幼苗在诱变期间所需的营养，植株的死亡率大大降低。本发明提供的诱变方法操作简单，植株诱变率高，诱变效果好，植株死亡率低。
具体实施方式
下面结合实施例进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
下述实施例以及对比例中的功能填料的制备方法为：
将100ml浓度为1.5～2.5wt％的纤维素纳米纤维悬浮液和100ml浓度为35～45wt％的尿素溶液混合搅拌处理，得到的悬浮液通过喷雾干燥的方法进行干燥得到纤维素纳米纤维包封的尿素材料；将70g淀粉、30g甘油和20g水混合搅拌均匀，然后干燥处理得到热塑性淀粉，将70g热塑性淀粉与70g聚(3-羟基丁酸酯)、50g纤维素纳米纤维包封的尿素材料混合加入到转矩流变仪中165℃、20rpm下进行热处理10min，之后175℃、5MPa MPa下热压处理7min，最后切粒，制得功能填料。
实施例1
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:3:2的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为60μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理2天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
实施例2
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为6:5:2的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为60μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
实施例3
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为6:4:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为60μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
实施例4
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为5:4:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为60μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理2天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
实施例5
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为60μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例1
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑以质量比为7:5的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为60μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例2
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的穴盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入MS液体培养基中进行水培处理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例3
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；MS营养液中平阳霉素的浓度为60μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例4
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为10μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例5
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为30μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例6
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为50μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例7
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为70μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例8
(1)将10月底至11月初收集的蔷薇种子，经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将平阳霉素和MS液体培养基混合制备MS营养液；平阳霉素溶液、MS营养液中平阳霉素的浓度均为80μg/ml；4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶显露时，将蔷薇幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时将蘸有上述平阳霉素溶液的脱脂棉球放在蔷薇幼苗的茎尖生长点上进行处理，每天早、中、晚各处理一次，每次处理10min，连续处理3天，处理完成后用清水冲洗蔷薇幼苗茎尖生长点和根部，然后转移到没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)处理一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
对比例9
(1)将平阳霉素和pH为7的磷酸盐缓冲液混合制备平阳霉素溶液，将10月底至11月初收集的蔷薇种子置于上述平阳霉素溶液中浸泡处理3天，取出后洗净经沙藏出芽后播种在装有育苗基质的育苗盘内，出苗后进行常规管理；育苗基质是由草炭土、木屑、功能填料以质量比为4:5:3的比例混合而成；
(2)4月上旬幼苗出土，待子叶展平待真叶萌动时，将蔷薇幼苗没有添加平阳霉素的MS液体培养基中培养；
(3)一个月后，蔷薇的叶片逐渐出现变异，到9月份变异稳定叶片变异明显，变异植株主要表现为叶片变小、变厚，叶色变黄或形成斑色叶，将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒尿素、磷酸二氢钾组成的营养液补充营养，每隔15天喷洒一次；营养液中尿素和磷酸二氢钾的质量浓度分别为0.2％、0.2％。
上述植株处理总数均为300株，植株变异稳定后对植株的死亡数、变异数进行统计，结果如表1所示。
表1
从上述结果来看，随着平阳霉素浓度的升高，植株变异率升高，平阳霉素升高到一定浓度再继续升高会降低植株的变异率，平阳霉素的浓度控制在60μg/ml，植株的变异率最高。相对于采用平阳霉素只处理植株根尖时，同时处理根尖以及茎尖生长点时，植株的变异率更高。此外，相对于采用平阳霉素溶液处理种子诱变时，对植株的茎尖生长点以及根尖诱变处理，植株的变异率更高。本发明在育苗基质中加入了一定的功能填料，在不影响植株变异率的前提下提高了植株的成活率。
此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
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