阅读说明：本技术 舌岩白菜提取物的应用 (Application of bergenia mellifera extract ) 是由 姚期凤 姜丹 吴越 王越 蒋耀权 章漳 于 2018-05-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种舌岩白菜提取物的应用,具体为在制备抗皮肤衰老基因的表达上调剂中的应用。所述的抗皮肤衰老基因可为COL3A1基因、FBN1基因、SIRT1基因和NID1基因中的一种或多种。所述的抗皮肤衰老基因的表达上调剂可以增强和支持皮肤组织结构的稳固性,延缓皮肤衰老,可用于化妆品或者护肤品中。(the invention discloses an application of a bergenia purpurascens extract, in particular to an application in preparing an expression up-regulator of an anti-skin aging gene. The skin aging resistant gene can be one or more of COL3A1 gene, FBN1 gene, SIRT1 gene and NID1 gene. The expression up-regulator of the anti-skin aging gene can enhance and support the stability of the skin tissue structure and delay skin aging, and can be used in cosmetics or skin care products.)

舌岩白菜提取物的应用

技术领域

本发明涉及植物提取物领域及日化领域，具体涉及一种舌岩白菜提取物的应用。

背景技术

皮肤覆盖于人体表面，与外界环境直接接触，除了能够保护机体免受外界各种因素的伤害，同时作为一面镜子反应机体的健康状态。皮肤由表皮、真皮、皮下组织构成，并含有皮肤附属器、丰富的神经、血管、***及肌肉。真皮和表皮的连接的细胞外基质区域又称为基底膜(Basement membrane，BM)，不仅可以支撑表皮，而且具有多方面的功能，比如，真表皮连接处作为细胞的选择性通过屏障，通常可以阻止***细胞与基底膜的表皮细胞接触，但允许淋巴细胞、巨噬细胞和神经元突触穿越通过；此外，细胞的形态、细胞的极性、细胞代谢、质膜上蛋白质的分布、细胞存活、细胞的增殖分化、细胞迁移等许多生命现象，均与基底膜有着非常密切的关系。巢蛋白是基底膜的重要组成部分，对维持基底膜的结构和功能必不可少，而基底膜的完整和健康对维持皮肤正常更新是非常必要的。而真皮由细胞和细胞外基质共同构成，成纤维细胞是真皮的主要细胞，其正常的增殖、分化维系着皮肤真皮结构、组成正常的结构和生理功能；细胞外基质是由细胞合成并分泌，围绕细胞相互作用的一类大分子物质，细胞的增殖分化、细胞迁移等许多生命现象，均与细胞外基质有着非常密切的关系。细胞外基质主要由四大类分子组成：胶原、弹性蛋白、糖蛋白及蛋白多糖。细胞外基质通过其分子间不同的精细巧妙缠结交织，构成各种各样的精美三维立体结构，赋予肌肤弹性、抗张强度，使肌肤看起来饱满、充满活力。

NID1(Nidogen)基因编码的蛋白质为巢蛋白1，巢蛋白1是基底膜的重要蛋白，起着连接Ⅳ型胶原和层粘连蛋白5的作用，对基底膜的结构和功能是必不可少的。而基底膜结构和功能的正常与否，决定着皮肤能否正常更新和分化，巢蛋白表达降低，基底膜结构遭到破坏，影响表皮细胞的增殖分化，导致皮肤老化。

FBN1(Fibrillin 1)基因编码的原纤蛋白1是由真皮的成纤维细胞分泌到细胞外基质中的，可作为钙结合微原纤维的结构成分，为整个身体的弹性和非弹性***提供受力结构，同时介导一系列的细胞和基质的相互作用。是***中弹性纤维的重要成分，在弹性组织形成的过程中，原纤蛋白1为存放弹性蛋白原提供骨架，生长成熟弹性纤维的***，皮肤弹性的下降是皮肤衰老的重要特征，原纤蛋白1的表达量与皮肤弹性息息相关，原纤蛋白1表达量的下降也是造成皮肤老化的关键因素。

COL3A1(collagen typeⅢalpha 1chain)基因编码Ⅲ型胶原蛋白，该基因编码III型胶原的前α1链，这是一种纤维状胶原蛋白，通常与I型胶原蛋白结合，可以在可延伸的***如皮肤，肺，子宫，肠和血管系统中发现，Ⅲ型胶原蛋白的生成有助于增强和支持皮肤组织结构的稳固性，延缓皮肤衰老。

SIRT1(sirtuin 1)：著名的长寿基因之一。SIRT1是一类高度保守的蛋白去乙酰化酶，参与调节由能量限制引发的长寿作用，被称为“长寿基因”；SIRT1生理作用复杂，参与调节糖脂代谢、炎症、氧化应激、细胞衰老与凋亡等，与皮肤衰老密切相关。

因此，研究如何提高皮肤关键部位及功能相关的基因的表达，对于提高皮肤修复能力保持结构的稳定性，延缓皮肤衰老具有重要意义。

舌岩白菜(Bergenia pacumbis)(西藏植物志)岩七(云南临沧)图版9：1-4。生于海拔2700-4800m的杂木林内阴湿处或有岩石的草坡上或石缝中，分布于分布于四川、云南、西藏等地。虎耳草科，多年生草本，高约17厘米。根状茎粗壮，被鳞片和残存托叶鞘。叶均基生；叶片革质，圆形、阔卵形至阔倒卵形，长7-15厘米，宽6.6-13.2厘米，先端钝圆，近全缘或边缘具不明显圆齿，具硬睫毛，基部稍心形，两面无毛；叶柄长3-10厘米，于托叶鞘以上，其长可超过1厘米；托叶鞘边缘具硬睫毛。花葶无毛。聚伞花序圆锥状，长约7.5厘米；花梗长约5毫米，与花序分枝均疏生近无柄之腺毛；托杯外面下部疏生近无柄之腺毛；萼片在花期开展，革质，阔卵形，长3-3.3毫米，边缘先端有时具疏齿，以下全缘，无毛，多脉；花瓣白色或粉红色，近圆形，长约8.5毫米，宽约6毫米，先端钝圆，基部变狭成长约2毫米之爪，多脉；雄蕊长约5.5毫米；子房卵球形，长约4毫米，花柱2，长约4毫米，柱头盾状。染色体2n＝34。花期6-8月。

清朝的《植物名实图考》中提到舌岩白菜可治吐血，同时清朝的《分类草药性》：化痰止咳。治一切内伤吐血，气喘，淋症。现代医学研究技术发现，舌岩白菜含有岩白菜素(bergenin)和熊果酚甙(Arbutin)，故有抗菌、消炎作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种舌岩白菜提取物的应用，具体为在制备抗皮肤衰老基因的表达上调剂中的应用。所述的抗皮肤衰老基因的表达上调剂可以增强和支持皮肤组织结构的稳固性，延缓皮肤衰老，可用于化妆品或者护肤品中。

本发明提供一种舌岩白菜提取物在制备抗皮肤衰老基因的表达上调剂中的应用。

所述的抗皮肤衰老基因可为COL3A1基因、FBN1基因、SIRT1基因和NID1基因中的一种或多种。

所述的舌岩白菜提取物可为本领域常规的舌岩白菜提取物，还可为舌岩白菜醇提取物，又可为舌岩白菜C₁～C₅醇提取物，再可为舌岩白菜乙醇提取物；所述的乙醇可为70～95％乙醇。

所述的舌岩白菜提取物可为舌岩白菜根部的提取物。

所述的舌岩白菜提取物的制备方法可为本领域的常规方法，还可包括下列步骤：

(1)在舌岩白菜的粉末中加入乙醇进行提取，过滤，得滤液；

(2)滤液干燥后即可。

步骤(1)中，所述的舌岩白菜的粉末可为舌岩白菜根部的粉末。

步骤(1)中，所述的舌岩白菜的粉末的目数可为20～60目，还可为20目。

步骤(1)中，所述的乙醇可为70％～95％乙醇。

步骤(1)中，所述的乙醇的加入量可为所述舌岩白菜的粉末的体积的8-12倍，还可为10倍。

步骤(1)中，所述的提取的温度可为室温，所述的室温为20-30℃。

步骤(1)中，所述的提取可为超声提取。所述的超声的频率可为400-550W，还可为500W。所述的超声的时间可为25-40min，还可为30min。

步骤(1)中，所述的提取的次数可为1次以上，还可为2次。

步骤(1)中，所述的过滤的方法可为离心。所述的离心的速度可为6000-10000rpm，还可为8000rpm。所述的离心的时间可为8-12分钟，还可为10分钟。

所述的舌岩白菜提取物的制备还可包括下列步骤：

(1)在舌岩白菜根部的粉末中加入10倍于所述舌岩白菜根部的粉末的体积的70％乙醇，于20-30℃下进行500W超声提取2次，每次30min，离心过滤后将滤液合并；所述的离心的速度为8000rpm，所述的离心的时间为10分钟；

(2)滤液蒸发至干即可。

所述的舌岩白菜提取物在抗皮肤衰老基因的表达上调剂中的浓度可为8-120μg/mL，还可为10-100μg/mL。

所述的舌岩白菜提取物在针对FBN1基因和/或NID1基因的表达上调剂中的浓度可为8-120μg/mL，还可为10-100μg/mL。

所述的舌岩白菜提取物在针对COL3A1和/或SIRT1基因的表达上调剂中的浓度可为80-120μg/mL，还可为100μg/mL。

所述的抗皮肤衰老基因的表达上调剂可用于化妆品或者护肤品中。

所述的舌岩白菜提取物可用于化妆品或者护肤品中。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

在本发明中，室温指20-30℃。

本发明的积极进步效果在于：提供一种舌岩白菜提取物的应用，具体为在制备抗皮肤衰老基因的表达上调剂中的应用，所述的抗皮肤衰老基因的表达上调剂可以增强和支持皮肤组织结构的稳固性，延缓皮肤衰老，可用于化妆品或者护肤品中。

附图说明

图1是100μg/mL舌岩白菜提取物促进COL3A1基因表达结果示意图。

图2是10μg/mL舌岩白菜提取物促进FBN1基因表达结果示意图。

图3是100μg/mL舌岩白菜提取物促进FBN1基因表达结果示意图。

图4是100μg/mL舌岩白菜提取物促进SIRT1基因表达结果示意图。

图5是10μg/mL舌岩白菜提取物促进NID1基因表达结果示意图。

图6是100μg/mL舌岩白菜提取物促进NID1基因表达结果示意图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1舌岩白菜提取物的制备

取舌岩白菜根部20g，粉碎至20目左右，于室温下以10倍体积的70％乙醇500W超声提取2次，每次30min，离心(8000rpm，10min)滤液合并，滤液旋转蒸发至干，得到舌岩白菜提取物约7.7g。

实施例2皮肤模型的制备

从皮肤组织中分别提取人原代成纤维细胞(NHDF)及人原代角质细胞(NHEK)(提取方法参考文献：伍津津，朱堂友.皮肤组织工程[M].北京：人民军医出版社，2009：72－103)。将人原代成纤维细胞复苏，复苏过程为：将冷冻管从液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，离心机1000rpm/min离心10min。将复苏所得细胞使用DMEM培养基在37℃的二氧化碳培养箱中培养一周后，进行消化(将细胞从培养箱中取出，吸弃原培养基，加PBS15mL润洗细胞一次，加8mL 0.05％胰蛋白酶后，于37℃的二氧化碳培养箱中孵育8min，取出，超净台中加10mL含FBS的DMEM培养基，移液枪取出细胞于50mL离心管中，离心机中1000rpm，离心10min后弃上清，细胞待用)后与胶原混合进行真皮阶段培养，于37℃的二氧化碳培养箱中培养3～4天，然后将使用饲养层培养的人原代角质细胞，消化接种(5×10⁴个细胞)到真皮阶段的皮肤模型表面，依次经过表皮浸没培养及气液相培养阶段，培养至18天得到可用于检测的3D皮肤模型(制备皮肤模型的具体步骤详见ANNIE F.BLACK,Ph.D.CHARBEL BOUEZ,al.Optimization and Characterization of an Engineered Human SkinEquivalent.TISSUE ENGINEERING Volume 11,Number 5/6,2005.Mary Ann Liebert,Inc.)。

实施例3舌岩白菜提取物的效果测试

1.1皮肤模型的培养

在人原代角质细胞接种到真皮阶段的皮肤模型表面培养至形成3D皮肤模型的第3天至第18天的过程中，根据所使用培养基的不同进行分组，形成空白对照(NT)组、加入舌岩白菜提取物(100μg/mL)的阳性组和加入10μg/mL舌岩白菜提取物(10μg/mL)的阳性组。

其中，舌岩白菜提取物(100μg/mL)，指所得舌岩白菜提取物在单位体积(mL)培养基中的量为100μg，约0.01wt％。

舌岩白菜提取物(10μg/mL)，指所得舌岩白菜提取物在单位体积(mL)培养基中的量为10μg，约0.001wt％。

1.2RNA的提取

剪取3D皮肤模型组织约2*3mm，放入2mL EP管中；加入1mL Trizol，加入2颗钢珠，用组织破碎仪匀浆，50Hz超声5min后；9000rpm、4℃条件下离心1min，将上清液转移到新的1.5mL EP管中；加入200μL氯仿，轻轻颠倒数次混匀，室温放置5min；9000rpm、4℃条件下离心15min；移转上层水相(约400μL)于新1.5mL EP管中，加入等体积的异丙醇，混匀，室温静置10min；9000rpm、4℃条件下离心10min；弃上清液后，沉淀用预冷的70％无水乙醇洗1次，8000rpm、4℃条件下离心5min；弃上清液后，沉淀空气干燥5～10分钟后，溶于30μL DEPC(焦碳酸二乙酯)水中；分光光度计测定RNA浓度。

1.3基因表达分析

根据QuantiGene R 2.0Plex Assay试剂盒进行RNA的纯化和基因定量分析，使用luminex平台对基因表达进行分析，结果见图1至图6。

1.4结果判定

在基因表达分析的试验中，如果添加了舌岩白菜提取物的阳性组相对于空白对照组，基因的表达量明显升高，可推断舌岩白菜具有促进胞外基质合成、稳定基底膜结构完整、稳固皮肤结构、诱导细胞修复相关的及抗衰老相关的基因表达、提高皮肤结构的稳定性和延缓衰老的功效。

舌岩白菜提取物的效果总结如下所述。

1、舌岩白菜提取物能够提高胞外基质相关基因的表达

由图1可知，添加舌岩白菜提取物的阳性组(100μg/mL)，与胞外基质相关的III型胶原基因COL3A1基因表达上调1.55倍，较空白对照组提高55％。由上所述，舌岩白菜提取物可以促进真皮中III型胶原蛋白的生成，从而合成和装配细胞外基质，增强和支持皮肤组织结构的稳固性，延缓皮肤衰老。

由图2可知，添加舌岩白菜提取物的阳性组(10μg/mL)，与胞外基质相关的FBN1基因表达上调1.49倍，较空白对照组提高49％。FBN1基因编码合成的原纤蛋白1是***中弹性纤维的重要成分，在弹性组织形成的过程中，原纤蛋白1为存放弹性蛋白原提供骨架，生长成熟弹性纤维的***。由上所述，舌岩白菜提取物可以增强和支持皮肤组织结构的稳固性，提高皮肤弹性，达到延缓皮肤衰老的作用。

由图3可知，添加舌岩白菜提取物的阳性组(100μg/mL)，与胞外基质相关的FBN1基因表达上调1.70倍，较空白对照组提高70％。FBN1基因编码合成的原纤蛋白1，是***中弹性纤维的重要成分，在弹性组织形成的过程中，原纤蛋白1为存放弹性蛋白原提供骨架，生长成熟弹性纤维的***。由上所述，舌岩白菜提取物可以增强和支持皮肤组织结构的稳固性，提高皮肤弹性，达到延缓皮肤衰老的作用。

2、舌岩白菜提取物能够提高抗衰老相关基因的表达

由图4可知，添加舌岩白菜提取物的阳性组(100μg/mL)，在皮肤模型中与细胞抵御外界不良环境、提高修复力相关的SIRT1基因表达上调1.64倍，较空白对照组提高64％，说明舌岩白菜提取物有提高细胞修复能力促进创伤修复的作用，达到延缓皮肤衰老的作用。

3、舌岩白菜提取物能够提高基底膜相关基因表达

由图5可知，添加舌岩白菜提取物的阳性组(10μg/mL)，基底膜基因NID1基因表达上调1.51倍，较空白对照组提高51％。NID1基因编码合成的巢蛋白1起着连接Ⅳ型胶原和层粘连蛋白5、稳固基底膜结构的作用，促进着皮肤结构的完整性和正常更新。由上所述，舌岩白菜提取物可以促进皮肤结构的完整性和正常更新，达到延缓皮肤衰老的作用。

由图6可知，添加舌岩白菜提取物的阳性组(100μg/mL)，基底膜基因NID1基因表达上调2.49倍，较空白对照提高149％。NID1基因编码合成的巢蛋白1起着连接Ⅳ型胶原和层粘连蛋白5、稳固基底膜结构的作用，促进着皮肤结构的完整性和正常更新。由上所述，舌岩白菜提取物可以促进皮肤结构的完整性和正常更新，达到延缓皮肤衰老的作用。