阅读说明：本技术 稳定的蛋白结合的***素组合物 (Stable protein-bound cannabinoid compositions ) 是由 什穆埃尔·科恩 威廉·Z·莱维内 希蒙·莱希特 于 2018-03-09 设计创作，主要内容包括：一种生产脂肪酸—大麻素—血浆蛋白(FCP)组合物的方法,所述方法包含：将血浆蛋白或其肽部分与包含至少一种脂肪酸的补充性脂肪酸组合物接触；以及,将血浆蛋白或其部分与包含至少一种大麻素的大麻素组合物接触,从而制备了结合组合物,所述结合组合物包含FCP复合物,在所述FCP复合物中所述至少一种脂肪酸和所述至少一种大麻素与所述血浆蛋白或其部分结合。(A method of producing a fatty acid-cannabinoid-plasma protein (FCP) composition, said method comprising: contacting a plasma protein or peptide portion thereof with a supplemental fatty acid composition comprising at least one fatty acid; and contacting the plasma protein or portion thereof with a cannabinoid composition comprising at least one cannabinoid, thereby preparing a binding composition comprising an FCP complex in which the at least one fatty acid and the at least one cannabinoid are bound to the plasma protein or portion thereof.)

稳定的蛋白结合的***素组合物

相关申请

本申请依据美国法典第35卷第119条(e)款，要求2017年3月9日提交的62/469,022号美国临时专利申请的优先权，其内容和披露全部通过引用并入本文。

背景技术

***素是对人体中***素受体和其他受体有活性的化合物。植物来源的***，也被称为植物***素，在***属植物中含量丰富。一种以较高浓度存在于***属中的已知***素为四氢***酚酸(THCA)或其脱羧产物四氢***酚(THC)。已发现四氢***酚具有精神活性作用、镇痛作用和抗氧化作用，以及增加食欲。

虽然已证明在某些适应证中吸食医用***属物质是有益的，但存在缺点。然而，被吸食的植物部分中活性成分的量可能因植物而异。因此，用医用***属物质治疗的患者可能缺乏对于适当地服用活性***素的控制。

吸食医用***属物质的另一个缺点是***烟中有些成分有负面影响。除了所需的***素，来自植物物质的烟雾可能还含有致癌物质，通过吸食而大量使用***与加速肺衰退有关。

水性的***素组合物将使得能够制备质量受控制的、精确给药的药物组合物，供人类施用和快速吸收。

发明内容

本发明的实施方式提供改善的组合物，其包含***素。还提供制备此类组合物的方法。特别地，本文下面所述的组合物在水性组合物中时是稳定的。可以通过观察组合物颜色的稳定性和/或***素降解的速率和/或生物活性的保持情况来确定组合物的稳定情况。

本文所使用的“水性”组合物是具有至少50％的水的液态介质的组合物。本文所使用的“水性”溶液是其中溶剂为至少50％的水的溶液。

根据本公开的一个方面，提供制备稳定的脂肪酸—***素—血浆蛋白组合物(“FCP”composition)的方法，该方法包含：将血浆蛋白与包含至少一种脂肪酸的补充性脂肪酸组合物接触；以及，将血浆蛋白与包含至少一种***素的***素组合物接触。任选地，补充性脂肪酸组合物中所包含的脂肪酸提供可以包含于***素组合物中或已与血浆蛋白复合的脂肪酸之外的脂肪酸。在本公开的实施方式中，根据以上方法所制备的FCP组合物中血浆蛋白的至少一部分、大部分或基本全部与脂肪酸和***素非共价结合，导致FCP复合物(FCP complex)的形成。任选地，非共价结合是蛋白—配体相互作用。任选地，非共价结合的特征在于非特异亲脂性和极性相互作用，例如与血浆蛋白中的疏水蛋白口袋的非特异亲脂性和极性相互作用。

在本公开的实施方式中，将血浆蛋白与补充性脂肪酸组合物接触包含将包含血浆蛋白的组合物与补充性酸组合物混合以及孵育混合物。任选地，孵育在25℃与40℃之间、约25℃、约30℃、约37℃或者约40℃下进行。任选地，孵育的持续时间为30分钟至2小时、约30分钟、约1小时或约2小时。任选地，孵育在水醇介质中进行，该水醇介质中混合物的初始醇浓度为2％至10％或者约5％。任选地，醇是乙醇。

在本公开的实施方式中，将血浆蛋白与***素组合物结合包含将包含血浆蛋白的组合物与***素组合物混合以及孵育混合物。任选地，孵育在25℃与40℃之间、约25℃、约30℃、约37℃或者约40℃下进行。任选地，孵育的持续时间为10至24小时和16至18小时。任选地，孵育在水醇介质中进行，该水醇介质中混合物的初始醇浓度为16％至30％或者约20％。任选地，醇是乙醇。

在本公开的实施方式中，该方法进一步包含从FCP组合物的过滤或筛分中保留血浆蛋白组分，其中所保留的血浆蛋白组分包含至少一种脂肪酸和至少一种***素。

在本公开的实施方式中，过滤或筛分之后，脂肪酸—***素—血浆蛋白组合物中所包含的至少80％、90％或基本全部为四氢***酚，或者脂肪酸—***素—血浆蛋白组合物中所包含的基本全部脂肪酸与血浆蛋白结合。

在本公开的实施方式中，提供呈包含水以及任选地水混溶性非水溶剂的溶液形式的FCP组合物。在本公开的实施方式中，FCP组合物是冻干或干燥的。

在本公开的实施方式中，补充性脂肪酸组合物包含至少一种脂肪酸、水混溶性非水溶剂以及任选水。任选地，非水溶剂是乙醇。任选地，脂肪酸组合物由至少一种脂肪酸组成。

在本公开的实施方式中，***素组合物包含***提取物。***提取物可以是缺少非***素提取物成分例如蛋白质、脂类或脂肪酸的，纯化***提取物。任选地，该纯化***提取物富含***素。在本公开的实施方式中，***素组合物是包含至少一种***素、水混溶性非水溶剂和任选水的溶液。

在本公开的实施方式中，水混溶性非水溶剂是乙醇。

脂肪酸是带有烃链的羧酸。在本公开的实施方式中，所述至少一种脂肪酸包含以下之一或者以下一种或两种的混合物：长链脂肪酸(13或更多碳)、短链脂肪酸(至多13碳)；甘油三酯；聚类异戊二烯，或者表面活性剂。在本公开的实施方式中，所述至少一种脂肪酸包含亚油酸。在另一个实施方式中，所述至少一种脂肪酸由亚油酸组成。

任选地，所述至少一种***素包含选自由以下组成的组中的***素中的一种或两种以上的组合：四氢***酚酸(THCA)或其脱羧产物四氢***酚(THC)、***二醇酸(CBDA)或其脱羧酸产物***二酚(CBD)、***二醇酸(CBDA)、***酚(CBN)、***萜酚(CBG)、四氢次***二酚(THCV)、***萜酚酸(CBGA)和***色烯(CBC)。可选地或附加地，该组可以包含合成的***素，诸如HU-210、WIN55,212-2和JWH-133。

如本文所使用的，血浆蛋白是指已知在血流中充当转运载体的蛋白质，例如充当各种疏水性化合物(包括脂肪酸)的转运载体。血浆蛋白可以来源于血浆或者纯化自血浆，或者是在植物、细菌、细胞系或其他微生物中生产的重组蛋白。血浆蛋白任选地选自：白蛋白、脂蛋白、糖蛋白、α、β和γ球蛋白，以及它们的混合物。血浆蛋白可以包含完整血浆蛋白或包含血浆蛋白一部分的肽。该血浆蛋白一部分可以包含吸附***素的部分。血浆蛋白可以是天然血浆蛋白的变体。

在本公开的实施方式中，FCP组合物包含至少一种脂肪酸，其量足以在至少1小时或至少24小时内基本防止稳定组合物的颜色改变。在更优选的实施方式中，该防止持续至少4个月。

在本公开的实施方式中，方法包含：(1)用补充性脂肪酸组合物预处理血浆蛋白来产生脂肪酸—血浆蛋白组合物；以及(2)将脂肪酸—血浆蛋白组合物与***素组合物混合产生FCP组合物。

可选地，方法包含：(1)用***素组合物预处理血浆蛋白来产生***素—血浆蛋白组合物；以及(2)将***素—血浆蛋白组合物与补充性脂肪酸组合物混合产生FCP组合物。

可选地，方法包含：(1)将补充性脂肪酸组合物与***素组合物混合来产生补充性脂肪酸—***素组合物；以及(2)将血浆蛋白与补充性脂肪酸—***素组合物接触来产生FCP组合物。

根据本公开的实施方式，所述至少一种***素不是来源于***植物。

根据本公开的实施方式，所述至少一种脂肪酸的至少一部分不是来源于***植物。

在讨论中，除非另有说明，修饰本发明实施方式的特征的条件或关系特性的形容词如“大体上”和“约”被理解为是指该条件或特性被限定为在预期用途的实施方式的操作可接受的公差范围内。除非另有说明，否则说明书和权利要求书中的“或”被视为是包含性“或”而不是排他性的“或”，并表示其所连接的要素中的至少一个或任何组合。

提供本发明内容部分是为了以简化的形式介绍将在下面的详细描述中进一步描述的思想。本发明内容部分无意于标识所要求保护的主题的关键特征或基本特征，亦无意于限制所要求保护的主题的范围。

附图说明

下面参照本段之后列出的附图描述本发明实施方式的非限制性示例。出现在多个附图中的相同结构、要素或部分在它们所出现的所有图形中用相同的附图标记。

图1示出了显示根据本公开实施方式制备稳定的***素组合物的流程图；

图2示出了显示根据本公开实施方式制备稳定的***素组合物的流程图；

图3A显示了根据被公开的实施方式所生产的由四氢***酚、白蛋白和亚油酸制备的FCP组合物(+L组合物)的色谱图；

图3B显示了由四氢***酚和白蛋白(无亚油酸)制备的作为对照的***素—血浆蛋白(-L组合物)的色谱图；

图4A显示了图3A中所示的+L组合物储存4个月后的色谱图；

图4B显示了图3B中所示的-L组合物储存4个月后的色谱图；

图5A示出了NF-κB荧光素酶报告基因测定法检测储存一周后的+L组合物和-L组合物中四氢***酚生物活性的结果；以及

图5B示出了NF-κB荧光素酶报告基因测定法检测储存一个月后的+L组合物和-L组合物中四氢***酚生物活性的结果。

具体实施方式

长期以来，人们认识到***烟和草本植物***作为***素来源在储存过程中失去效力，效力的丧失主要是由于***素(如四氢***酚)的丧失(通过降解或其他方式)。

已知血浆蛋白在血液中充当多种疏水化合物(包括脂肪酸)的转运载体。举例来说，人血清白蛋白(HSA)是用于将脂肪酸递送至组织的主要转运蛋白，具有许多脂肪酸结合位点。先前我们已经发现将***素与血浆蛋白结合可以提高***素在水性组合物中的稳定性。此外，当***素的来源是植物材料时，这种结合还有助于将***素与从植物材料携带到用于制备结合***素的提取物中的不良杂质分开。通常，结合过程包括在一定条件下在溶液中孵育***素和血浆蛋白，以生成***素—蛋白质复合物，然后浓缩***素—蛋白质复合物并洗涤该复合物以除去未与蛋白质结合的不良物质，从而形成富含***素—蛋白质复合物的水性组合物。

然而，已经发现这种水性组合物随时间其着色发生改变，表明组合物的不稳定性和降解。该降解可能与溶解***素的效力不期望地降低有关，类似于上述公认的四氢***酚效力损失，并且可能进一步与血浆蛋白降解有关。

我们惊奇地发现，当使用***提取物(例如***烟提取物或***蒸气提取物)而不是纯化***素来提供***素时，包含血浆蛋白和***素的水性组合物更稳定。最初假设***提取物中天然存在但通常在纯化的***素制剂中耗尽了的脂肪酸有助于提高稳定性。我们发现，如下文所述，在包含血浆蛋白和***素的FCP组合物的生产过程中添加脂肪酸，例如亚油酸，可以在储存于水性介质中时使所得组合物变得稳定并减少***素的降解。例如，通过减少***素的降解、减少***素降解产物的出现、减少沉淀和减少水性FCP组合物的絮凝证明了稳定性的改善。通过水性FCP组合物中***素受控制的生物活性程度降低也证明了稳定性的改善。稳定的制剂适用于例如药物制剂，例如但不限于肠胃外或鼻内输送的溶液。

图1概述了根据本公开的实施方式制备FCP组合物的方法100中的步骤。方法100包括：将至少一种血浆蛋白与至少一种脂肪酸混合以产生脂肪酸—血浆蛋白混合物(框110)；以及，将脂肪酸—血浆蛋白混合物与至少一种***素混合(框120)。

可选地，可以先将***素与血浆蛋白混合，然后再将***素—血浆蛋白混合物与脂肪酸混合。

图2概述了根据本公开的实施方式制备FCP组合物的方法200中的步骤。方法200包括：通过将脂肪酸添加到血浆蛋白溶液中来制备预处理的血浆蛋白溶液(框210)；以及，将预处理的血浆蛋白溶液与包含***素和非水溶剂的***素溶液混合(框220)。FCP组合物可以是水性组合物的形式，或者可以冷冻干燥或干燥成粉末或冻干的。在一些实施方式中，将干燥的FCP组合物悬浮于介质(诸如盐溶液)中用于注射或鼻内施用，例如用作镇痛药。

***素通常以***植物提取物的形式提供。此类提取物可含有不同量的脂肪酸，至少部分地取决于是否对提取物进行纯化或纯化多少以除去非***素化合物。然而，根据本公开的实施方式，除了已经包含在***提取物中的任何脂肪酸之外，添加补充性脂肪酸用于稳定脂肪酸—血浆蛋白—***素混合物。血浆蛋白制品还可以含有已经与其复合的不同量的脂肪酸，取决于是否对血浆蛋白进行纯化或纯化了多少以去除其他分子。然而，根据本公开的实施方式，除了可能已经与血浆蛋白复合的任何脂肪酸之外，添加补充性脂肪酸用于稳定***素—血浆蛋白复合物。此外，即使在对脂肪酸—血浆蛋白—***素混合物进行纯化以去除未与血浆蛋白结合的“松散”脂肪酸之后，补充性脂肪酸的稳定作用仍然持续。

实施例1：制备稳定的***素组合物

1.1用亚油酸预处理白蛋白

将纯亚油酸溶解于50％的乙醇至浓度为150mM。将1mL亚油酸溶液添加到10mL100mg/mL人血清白蛋白水溶液中。将乙醇浓度低于5％的亚油酸—人血清白蛋白溶液混合1分钟，然后在37℃、不搅拌的情况下孵育1小时。

1.2亚油酸—人血清白蛋白溶液与四氢***酚孵育

将步骤1.1中制备的亚油酸—人血清白蛋白溶液在水中稀释至原始浓度的十分之一，以使人血清白蛋白浓度降至10mg/mL，乙醇浓度降至约0.5％。

将纯度为94–95％的四氢***酚植物提取物在100％乙醇中稀释至四氢***酚浓度为0.16mg/mL。将25mL的0.16mg/mL的四氢***酚溶液缓慢添加到此步骤中制备的100mL稀释过的亚油酸—人血清白蛋白溶液中，在开放容器中于30℃孵育16–18小时以利于乙醇蒸发，避光。孵育后，四氢***酚—亚油酸—人血清白蛋白组合物的体积约为100mL，人血清白蛋白浓度约为10mg/mL，四氢***酚浓度约为0.4mg/mL。

在孵育过程中，溶液中乙醇的浓度逐渐降低，亚油酸—人血清白蛋白—四氢***酚组合物的体积从最初的约125ml减少到约100mL。

四氢***酚在孵育过程中逐渐与白蛋白结合。结果，孵育过程中，游离四氢***酚的浓度逐渐降低，乙醇的浓度能够相应降低，同时减轻了四氢***酚从溶液中析出并聚结到沉淀物或油中的危险。举例来说，给定初始四氢***酚浓度为0.32mg/mL，预孵育乙醇浓度高于16.7％有助于防止四氢***酚从溶液中析出。具有较高初始浓度的四氢***酚溶液可能需要较高的初始乙醇浓度才能使四氢***酚保留在溶液中。但是，乙醇的初始浓度应低于约30％，以防止白蛋白沉淀。在生产其他***素-白蛋白复合物(例如，CBD复合物)时可能需要进行类似的调整。

1.3纯化与四氢***酚和亚油酸结合的白蛋白

孵育后，使用孔径为10kD的Pellicon XL50盒(Ultracel)(Pellicon XL Ultrafiltration Module Ultracel 10kDa 0.005m²，目录号PXCO10c50)，在默克公司的Cogentμscale装置中通过由DI(去离子水)过滤的洗涤循环下的透析过滤除去未与人血清白蛋白结合的大部分四氢***酚和脂肪酸。随后，使用Cogent装置将亚油酸—四氢***酚—人血清白蛋白复合物从100mL浓缩至50mL。在浓缩的亚油酸—四氢***酚—人血清白蛋白复合物样品上进行三次300mL水洗，最后将洗涤后的样品浓缩至约20mL的体积。从若干个纯化阶段中采集样品，以监测***素和血浆蛋白的水平，确定三次洗涤足以提供足够量的紧密结合的复合物。

1.4制备对照品

按照上述步骤1.1至1.3，但没有步骤1.1中亚油酸的添加，制备不添加亚油酸的对照四氢***酚—人血清白蛋白组合物(“-L组合物”)。最终纯化和浓缩的四氢***酚—人血清白蛋白组合物含有浓度为66mg/mL的白蛋白和浓度为1790μg/mL的四氢***酚。

1.5亚油酸—四氢***酚—白蛋白(+L)组合物与四氢***酚-白蛋白(-L)组合物的比较

在4℃、黑暗下，将含有最终纯化和浓缩的对照四氢***酚—白蛋白复合物(“-L”，上述步骤1.4的产物)的小瓶，以及含有最终纯化和浓缩的亚油酸—四氢***酚—白蛋白复合物(“+L”，上述步骤1.3的产物)的小瓶在相同的条件下进行储存。

表1总结了随时间推移小瓶中四氢***酚—白蛋白组合物的外观。

表1

对+L和-L组合物分别进行处理以将***素与白蛋白解开。在制备时和4个月后，通过HPLC分析定量和定性测定未结合的***素，并分别检测白蛋白。图3A和图3B分别示出了0个月(制备时)和制备后4个月时-L组合物的色谱图。图4A和图4B分别示出了制备后0个月和4个月时+L组合物的色谱图。请注意，如所预期的，-L组合物(图3A)和+L组合物(图4A)在0个月时的色谱图基本上相同。相比之下，在4个月时，-L组合物(图3b)和+L组合物(图4b)的色谱图具有很大差异，–L色谱图显示出更多的峰，表示–L组合物中降解增加产生杂质。

表2总结了HPLC分析的定量结果。

表2

还比较了-L和+L组合物中四氢***酚的生物活性，以便评估各自组合物中四氢***酚的稳定性。用NF-κB荧光素酶报告基因构建体转导小鼠巨噬细胞细胞系RAW264.7(从美国典型培养物保藏中心获得)。使用脂多糖(LPS)诱导转导的RAW264.7细胞中的NF-κB荧光素酶报告基因，并添加测试组合物(-L和+L组合物)以测试其抑制脂多糖诱导的荧光素酶表达的能力。Calcein AM(钙黄绿素的乙酰甲氧基衍生物)用作荧光染料，来确定RAW264.7细胞数用于进行标准化。由于模型中的发光与NF-κB的激活相关，因此可以通过与发光的抑制相关来确定表达的抑制。

先前已使用RAW264.7 NF-κB荧光素酶报告基因检测方法证实，施用白蛋白结合的四氢***酚可抑制NF-κB荧光素酶报告基因的表达。

参考图5A。用两种测试组合物之一处理转导的RAW264.7细胞：在黑暗中于4℃密封储存1周后的+L组合物或-L组合物。对于每种测试组合物，将足够量的测试组合物添加到培养基中，使得如果在最初制备测试组合物时、储存之前将测试组合物添加到培养物中，细胞所暴露于的四氢***酚浓度为1μg/ml。对于两种测试组合物，将发光情况与不使用测试组合物的情况下用脂多糖诱导荧光素酶表达的阴性对照进行比较。已经发现，与阴性对照相比，施用储存了一周的-L组合物抑制了50％的脂多糖诱导的荧光素酶表达。相比之下，与阴性对照相比，+L组合物抑制了70.9％的荧光素酶表达，表明添加亚油酸提高了白蛋白结合的四氢***酚的稳定性，并延缓了四氢***酚在储存的这一周内的降解。

参考图5B。在相同条件下储存1个月后，对+L和-L组合物进行了相似的测试。发现，与阴性对照相比，施用储存了一个月的-L组合物抑制了36.4％的NF-κB荧光素酶报告基因的表达。相比之下，与阴性对照相比，+L组合物抑制了56.8％的萤光素酶表达，表明添加亚油酸可改善白蛋白结合的四氢***酚的稳定性，并延缓了四氢***酚在储存的这一个月内的降解。

如在实施例1的步骤1.2中作为示例所讨论的，在一些实施方式中，方法200进一步包括孵育稳定的***素组合物的步骤240。孵育包含允许稳定的***素组合物中非水溶剂的浓度随着时间逐渐降低。浓度降低可以足够缓慢以基本上最小化或防止***素从稳定的***素组合物中沉淀出来。

优选地，如在实施例1步骤1.1中的示例所描述的，制备预处理的血浆蛋白溶液的步骤210进一步包括将脂肪酸与血浆蛋白溶液一起孵育。优选地，使溶液尽可能少地移动以便对复合过程的干扰最小，这类似于在ELISA分析中将肽吸附到塑料容器上所遵循的过程。

如在实施例1的步骤1.3中作为示例所讨论的，该方法可以包括从稳定的***素组合物的过滤或筛分中保留血浆蛋白组分，以富集溶液中的FCP复合物，其中保留的血浆蛋白组分包括与血浆蛋白结合的***素和至少一种脂肪酸。

所述至少一种***素可以选自由以下组成的组：四氢***酚酸(THCA)或其脱羧产物四氢***酚(THC)以及***二醇酸(CBDA)或其脱羧酸产物***二酚(CBD)、***二醇酸(CBDA)、***酚(CBN)、***萜酚(CBG)、四氢次***二酚(THCV)、***萜酚酸(CBGA)和***色烯(CBC)，以及它们的组合。可选地或附加地，该组可以包含合成的***素，诸如HU-210、WIN55,212-2和JWH-133。在一些实施方式中，***素以植物提取物的形式提供。植物提取物中的一种或多种可包含萜烯和***素的混合物，产生一组***素萜烯和任选的其他化合物，它们可以与一种或多种白蛋白—亚油酸复合物结合在一起。所述至少一种血浆蛋白可包含人血清白蛋白(HSA)。

该至少一种脂肪酸可以包括亚油酸。但是，其他脂肪酸可能具有稳定四氢***酚—血浆蛋白的能力，或具有至少相似的能力。这些脂肪酸也被认为在本发明的方法和所制备的组合物的范围内。

如表1和表2所示，尽管制备时起组合物的颜色没有明显的变化，但在此期间组合物中的四氢***酚可能会有些降解。事实上，在诸如4个月的持续期内四氢***酚的量可能显著下降；可能优选更早地使用该组合物；然而，四氢***酚—白蛋白组合物中四氢***酚的稳定性由于与四氢***酚白蛋白复合物相关联的亚油酸的存在而大大提高。

在一些实施方式中，大多数所述至少一种脂肪酸不是来源于***素植物。一些***植物，尤其是这些植物的某些部分，例如果实或种子，可能含有相当数量的脂肪酸。然而，***素通常以包含至少或大于90％的***素的纯化提取物的形式提供。尽管纯化的***素提取物可能含有来自***素植物来源的痕量脂肪酸，但是添加补充性脂肪酸可以如上所述改善***素—血浆蛋白—脂肪酸组合物的稳定性。

然而，在一些其他实施方式中，大多数脂肪酸可以来自***素植物。在这种情况下，脂肪酸不仅是***素提取物中的少量化合物，而且是***素提取物的补充。目前，我们认为脂肪酸的特定来源对所观察到的稳定性影响不大。

根据本公开的实施方式，稳定的***素—血浆蛋白—脂肪酸组合物包含：用至少一种脂肪酸预处理的血浆蛋白和***素。

预处理可包括提供在水溶液中的血浆蛋白和在与水混溶的合适溶剂(例如乙醇)中的脂肪酸，并将两种溶液混合在一起。用于预处理的脂肪酸来源可以至少部分来自***素植物，但通常不是来自***素植物。组合物中的脂肪酸来源通常不是来自***素植物。

***素通常以提取物形式提供，特别是来自***素植物的***素提取物，其中溶剂是可与水混溶的非水溶剂，例如乙醇。提取物可能含有痕量的脂肪酸，但这些痕量脂肪酸并不用于进行预处理。在一些实施方式中，对组合物中至少一种脂肪酸的浓度进行选择以使稳定的***素—血浆蛋白—脂肪酸组合物具有与非稳定的***素组合物的颜色不同的颜色，此非稳定的***素组合物包含与稳定化组合物中相同浓度的***素以及与稳定化组合物中相同浓度的至少一种血浆蛋白，其中同时制备稳定的***素组合物和非稳定的***素组合物，并随后进行测定。在其他实施方式中，对组合物中至少一种脂肪酸的浓度进行选择以基本上延缓组合物中***素的降解，例如四氢***酚的降解，例如在稳定环境中(例如，在10℃、黑暗下)持续4个月后在组合物中保留至少50％的四氢***酚。

在本公开的某些实施方式中，相对于***素的浓度，脂肪酸的浓度为使得如果稳定的组合物存在任何颜色变化，肉眼察觉不到该颜色变化。可以通过制备组合物的新鲜样品并将新鲜样品的颜色与在与新鲜样品相同的条件和浓度下制备但为了稳定性测试而进行了储存的样品的颜色进行比较来测试颜色变化。

因此，在本公开的实施方式中，提供了一种生产脂肪酸—***素—血浆蛋白(FCP)组合物的方法，该方法包含：使血浆蛋白或其肽部分与包含至少一种脂肪酸的补充性脂肪酸组合物接触；以及，使血浆蛋白或其部分与包含至少一种***素的***素组合物接触，从而制备了结合组合物(combined composition)，其包含其中至少一种脂肪酸和至少一种***素与血浆蛋白或其部分结合的FCP复合物。任选地，至少一种脂肪酸包括亚油酸。任选地，至少一种脂肪酸由亚油酸组成。任选地，***素组合物基本上不含脂肪酸。

在本发明的实施方式中，该方法进一步包括：纯化结合组合物以保留血浆蛋白或其部分，并除去未结合血浆蛋白或其部分的脂肪酸或***素，以使结合组合物中至少80％的脂肪酸和至少80％的***素与血浆蛋白或其部分结合。任选地，结合组合物中基本上所有的脂肪酸和基本上所有的***素都与血浆蛋白或其部分结合。

在本公开的实施方式中，脂肪酸和/或***素与血浆蛋白或其部分的结合是非共价结合。任选地，非共价结合是蛋白质—配体相互作用。任选地，非共价结合的特征在于与血浆蛋白或其部分中的疏水蛋白口袋的非特异性亲脂和极性相互作用。

在本公开的实施方式中，将血浆蛋白或其部分与补充性脂肪酸组合物接触包括将包含血浆蛋白或其部分的组合物与补充性酸组合物混合并孵育此混合物。任选地，孵育在25℃与40℃之间的温度下进行。任选地，在水醇介质中进行孵育。任选地，在水醇介质中包含的醇是乙醇。任选地，水醇介质的初始醇浓度在2％至10％之间。

在本公开的实施方式中，将血浆蛋白或其部分与***素组合物接触包括将包含血浆蛋白或其部分的组合物与***素组合物混合以及孵育混合物。任选地，孵育在25℃与40℃之间的温度下进行。任选地，在水醇介质中进行孵育。任选地，在水醇介质中包含的醇是乙醇。任选地，水醇介质的初始醇浓度在16％至30％之间。

在本公开的实施方式中，在水性介质中提供结合组合物。任选地，水性介质由水或盐溶液组成。

在本公开的实施方式中，该方法进一步包括干燥或冻干结合组合物。

在本公开的实施方式中，至少一种***素是由以下组成的组中之一或者其中两种或更多种的组合：四氢***酚酸、四氢***酚、***二醇酸、***二酚、***酚、***萜酚、四氢次***二酚、***萜酚酸、***色烯、HU-210、WIN55,212-2和JWH-133。

在本公开的实施方式中，血浆蛋白或其部分选自于由：白蛋白、脂蛋白、糖蛋白，及α、β和γ球蛋白，以及其中一种或多种的混合物，所组成的组。任选地，血浆蛋白或其部分是重组的。

还提供了使用本公开的实施方式的方法生产的FPC组合物。

还提供了一种用于提高与血浆蛋白结合的***素的稳定性的方法，该方法包括使用本公开的实施方式的方法生产FCP组合物。

在本申请的说明书和权利要求书中，使用动词“包括”、“包含”和“具有”及其变型中的每一个时，该动词的一个或多个宾语不一定是该动词的一个或多个主语的组件、元件或部分的完整列举。

本申请中对本发明的实施例的描述是以示例的方式提供的，并不旨在限制本发明的范围。所描述的实施例包括不同的特征，并非在本发明的所有实施例中都需要全部这些特征。一些实施例仅利用一些特征或特征的可能组合。本领域技术人员将想到所描述的本发明的实施例的变型，以及包括所描述的实施例中提到的特征的不同组合的本发明的实施例。本发明的范围仅由权利要求限定。