阅读说明：本技术 一种黑果腺肋花楸多酚提取工艺 (A kind of Black Box Tracing polyphenol extraction technology ) 是由 王让成 韩泽民 刘红卫 贾慧 朱日超 于 2019-08-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种黑果腺肋花楸多酚提取工艺,其包括以下提取步骤：S1：对黑果腺肋花楸果渣进行预处理,制得含有黑果腺肋花楸多酚的原料液；S2：采用双水相萃取原料液的活性成分,并采用微波辅助提取法,制得黑果腺肋花楸多酚粗提液；微波功率300-500W、提取时间5-10min；S3：将黑果腺肋花楸多酚粗提液旋蒸除醇后,制得A混合物；S4：在A混合物中加入稳定剂,搅拌均匀后,制得黑果腺肋花楸多酚提取液；S5：将黑果腺肋花楸多酚提取液冷冻干燥处理得到黑果腺肋花楸多酚提取物。通过选用黑果腺肋花楸果渣作为原料,对其进行预处理,便于之后的活性物质提取,且减少资源的浪费,提高资源的利用率。(The present invention relates to a kind of Black Box Tracing polyphenol extraction technologies comprising following extraction step: S1: pre-processing Black Box Tracing pomace, and the material liquid containing Black Box Tracing polyphenol is made；S2: using the active constituent of aqueous two-phase extraction material liquid, and microwave―assisted extraction is used, Black Box Tracing polyphenolic extract is made；Microwave power 300-500W, extraction time 5-10min；S3: after Black Box Tracing polyphenolic extract revolving is removed alcohol, A mixture is made；S4: being added stabilizer in A mixture, after mixing evenly, Black Box Tracing polyphenol extracting solution is made；S5: Black Box Tracing polyphenol extracting solution freeze-drying process is obtained into Black Box Tracing polyphenol extract.By selecting Black Box Tracing pomace as raw material, it is pre-processed, is extracted convenient for active material later, and reduces the waste of resource, improves the utilization rate of resource.)

一种黑果腺肋花楸多酚提取工艺

技术领域

本发明涉及天然植物多酚提取的技术领域，尤其是涉及一种黑果腺肋花楸多酚提取工艺。

背景技术

黑果腺肋花楸是一种具有很高营养价值和药用价值的小浆果树种，其果实中富含的多酚物质更是具有抗心血管病、抗肿瘤、抗氧化等生理活性，具有很高的开发价值。

由于其极高的营养价值，近几年来极受人们的喜爱，其副产物果酱、果汁和加工酒更是广受欢迎。

在加工过程中，黑果腺肋花楸产生的果渣由于不好处理，一般都作为肥料直接填埋与泥土中。但黑果腺肋花楸的果渣中其实依然存在有很多的营养成分，直接填埋会造成这部分的营养浪费。

发明内容

本发明的目的是提供一种黑果腺肋花楸多酚提取工艺，通过选用黑果腺肋花楸果渣作为原料，对其进行预处理，便于之后的活性物质提取，且减少资源的浪费，提高资源的利用率。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种黑果腺肋花楸多酚提取工艺，包括以下提取步骤：

S1：对黑果腺肋花楸果渣进行预处理，制得含有黑果腺肋花楸多酚的原料液；

S2：采用双水相萃取原料液的活性成分，并采用微波辅助提取法，制得黑果腺肋花楸多酚粗提液；微波功率300-500W、提取时间5-10min；

S3：将黑果腺肋花楸多酚粗提液旋蒸除醇后，制得A混合物；

S4：在A混合物中加入稳定剂，搅拌均匀后，制得黑果腺肋花楸多酚提取液；

S5：将黑果腺肋花楸多酚提取液冷冻干燥处理得到黑果腺肋花楸多酚提取物。

通过采用上述技术方案，S1中，通过对黑果腺肋花楸果渣进行预处理，便于之后的活性物质提取，提高黑果腺肋花楸多酚溶出率。

S2、S3中，用以提取黑果腺肋花楸多酚。

S4中，通过加入有稳定剂，提高黑果腺肋花楸多酚的稳定性，增长黑果腺肋花楸多酚的保存时间和使用效果。

本发明进一步设置为：所述S1预处理包括以下制备工艺：

1)将黑果腺肋花楸果渣和质量浓度为40-60％的乙醇，按料液比1：(20-30)g/mL混合后，加入酶助剂，搅拌均匀后，加热升温至50-60℃，保温反应40-60min，然后采用超声波辅助法，反应20-30min后，制得第一混合液；

2)在第一混合液中，加入丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷，搅拌30-50min后，在30-35℃下减压蒸馏，回收正己烷，剩余混合液即为第二混合液；

3)在第二混合液中，加入第一助剂，并升温至40-50℃，搅拌均匀后，采用减压过滤，得到的清液即为含有黑果腺肋花楸多酚的原料液；所述第一助剂与所述黑果腺肋花楸果渣的重量比为(1-3)：1。

通过采用上述技术方案，由于黑果腺肋花楸果渣中的黑果腺肋花楸多酚的含量已经很少了，残留在黑果腺肋花楸果渣中的黑果腺肋花楸多酚一般都在果皮中。由于果皮中细胞壁一般都较为坚固，不易通过常规手段将黑果腺肋花楸多酚提取出来。

在步骤1中，通过加入有酶助剂，用以对植物的细胞壁进行水解，从而使得细胞壁不在保护位于细胞内的残余黑果腺肋花楸多酚，使得残留在细胞中的黑果腺肋花楸多酚易于溶解在乙醇中，便于之后的黑果腺肋花楸多酚提取。

由于黑果腺肋花楸多酚一般都结合在蛋白质上，通过加大蛋白质在水中的溶解量，可提高黑果腺肋花楸多酚在水中的溶解量，从而提高黑果腺肋花楸多酚的提取量

步骤2中，通过加入有丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷，用以在A混合液中形成反胶团，用以萃取水溶液中的蛋白质和黑果腺肋花楸多酚，使得水溶液中的蛋白质和黑果腺肋花楸多酚含量减少，从而使得位于细胞中的蛋白质和黑果腺肋花楸多酚析出，提高黑果腺肋花楸多酚的含量。

步骤1中的乙醇可以在步骤2中作为助表面活性剂，提高生物催化反应的活性和稳定性。

由于正己烷的沸点在68℃，而黑果腺肋花楸多酚在较高温度下会分解，通过采用减压蒸馏，使得在实现分离正己烷的目的下，不会使得黑果腺肋花楸多酚分解。在30-35℃下减压蒸馏，提高减压蒸馏的速度，减少所需时间。

加入有第一助剂，打破反胶团萃取的平衡，使得位于反胶团内的蛋白质出来，便于之后提取黑果腺肋花楸多酚。

本发明进一步设置为：所述酶助剂与所述黑果腺肋花楸果渣的重量比为(0.03-0.07):1。

通过采用上述技术方案，防止酶助剂过量，从而使得在反胶团萃取蛋白质的过程中，过多的酶助剂进入到反胶团中，从而影响带有黑果腺肋花楸多酚蛋白质和黑果腺肋花楸多酚的萃取。酶助剂过少，会导致水解的细胞壁量减少，影响黑果腺肋花楸多酚的析出量。

本发明进一步设置为：所述酶助剂包括以下重量百分比计原料：纤维素酶20-40％、果胶酯酶10-30％、磷酸氢二钠1-5％、磷酸二氢钠3-7％，以及余量水。

通过采用上述技术方案，植物细胞壁主要为纤维素和果胶，用过加入有纤维素酶和果胶酯酶，用以水解植物细胞壁。

由于细胞内不仅含有黑果腺肋花楸多酚，还含有其余的营养物质，有些营养物质呈酸性或碱性，其会影响溶液的pH值，从而影响纤维素酶和果胶酯酶的活性，降低纤维素酶和果胶酯酶对植物细胞壁的水解速度。

通过加入有磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，用以调节溶液pH值，维持溶液的pH值趋于稳定状态，降低溶液pH值对纤维素酶和果胶酯酶的活性影响。

在反胶团萃取蛋白质时，溶液的pH值对蛋白质的萃取速度和萃取量有很大的影响，通过加入有磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的加入，可以自动调节反胶团萃取蛋白质时所需的pH值，便于工人操作，提高工人的可操作性。且提高反胶团萃取蛋白质的量，从而提高黑果腺肋花楸多酚的含量

本发明进一步设置为：所述丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠与所述黑果腺肋花楸果渣的重量比为(0.01-0.05)：1，所述正己烷与所述第一混合液的体积比为(0.8-1.2)：1。

通过采用上述技术方案，丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷的加入过量时，会影响黑果腺肋花楸多酚的稳定性，使黑果腺肋花楸多酚易于失效。

丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷的加入过少时，会降低黑果腺肋花楸多酚的提取量。

本发明进一步设置为：所述第一助剂包括以下重量百分比剂原料：赖氨酸10-14％、组氨酸16-20％、乙醇30-34％，以及余量水；所使用的乙醇浓度与所述步骤1中所用的乙醇浓度相同。

通过采用上述技术方案，通过加入有赖氨酸和组氨酸，用以调节溶液的pH值，使得溶液的pH值呈碱性，便于位于反胶团内的蛋白质析出，从而提高溶液中黑果腺肋花楸多酚的含量。

由于碱性环境易于影响黑果腺肋花楸多酚的稳定性，通过采用赖氨酸和组氨酸，由于两者皆是碱性氨基酸，都是人体和植物所必须的元素之一，是一种安全绿色的物质，对黑果腺肋花楸多酚的影响较小，提高黑果腺肋花楸多酚的稳定性。

且组氨酸既可作为质子供体，又可作为质子受体，从而使得溶液的pH值趋于平衡，防止溶液的溶液的pH值过高或过低，影响黑果腺肋花楸多酚的稳定性。

乙醇作为助表面活性剂，便于位于反胶团内的蛋白质析出，从而提高溶液中黑果腺肋花楸多酚的含量。采用同一浓度的乙醇，工人只需调配一种浓度乙醇溶液，便于工人操作，提高工人的工作效率，实现大范围的生产。

本发明进一步设置为：所述S2中双水相萃取包括以下工艺步骤：向原料液中加入乙醇和硫酸铵，持续搅拌，并加入pH调节剂，调节至pH值为2.5-3.5，搅拌均匀后静置，分层后取上相醇液即黑果腺肋花楸多酚粗提液。

本发明进一步设置为：所述S2中所使用的乙醇浓度与所述S1中所用的乙醇浓度相同，且所述乙醇和黑果腺肋花楸果渣的料液比为1：(30-50)g/mL；所述硫酸铵加入量与黑果腺肋花楸果渣的重量比为(0.04-0.08)：1。

通过采用上述技术方案，双水相萃取采用乙醇和硫酸铵为萃取剂，不会引入新的元素，提高黑果腺肋花楸多酚粗提液的纯净度。

采用双水相萃取料液时，乙醇和硫酸铵之间的量比很重要，过多或过少皆会影响所需物体的提取，且不同的提取物的所需乙醇和硫酸铵之间的量比皆不同，采用如此范围内的乙醇和硫酸铵量比对黑果腺肋花楸多酚的提取最为适合，提高黑果腺肋花楸多酚提取量的同时，不会使得黑果腺肋花楸多酚失效。

本发明进一步设置为：所述pH调节剂包括以下重量百分比计原料：冰醋酸30-40％、天冬氨酸16-20％、谷氨酸10-14％，以及余量水。

通过采用上述技术方案，冰醋酸和可以乙醇发生酯化反应，生成乙酸乙酯，乙酸乙酯可以提高黑果腺肋花楸多酚的稳定性和溶解度。

天冬氨酸和谷氨酸两者皆是酸性氨基酸，都是人体和植物所必须的元素之一，是一种安全绿色的物质，对黑果腺肋花楸多酚的影响较小，且可以提高黑果腺肋花楸多酚的稳定性和溶解量。

本发明进一步设置为：所述稳定剂与黑果腺肋花楸果渣的重量比为(0.02-0.06)：1；所述稳定剂包括以下重量百分比计原料：山梨酸钾0.6-1％、组氨酸8-12％、异亮氨酸6-10％、色氨酸10-14％、以及余量水。

通过采用上述技术方案，山梨酸钾作为防腐剂，防止黑果腺肋花楸多酚受到微生物的影响而分解，提高黑果腺肋花楸多酚使用效果和储藏时间。

组氨酸既可作为质子供体，又可作为质子受体，从而使得溶液的pH值趋于平衡，防止溶液的溶液的pH值过高或过低，影响黑果腺肋花楸多酚的稳定性。

异亮氨酸可以分解产生葡萄糖，使得溶液中水分活度逐渐降低，从而减少了黑果腺肋花楸多酚的降解。

色氨酸可以吸收紫外线，防止黑果腺肋花楸多酚受到光照后快速降解，影响其的使用效果和储藏时间。

组氨酸、异亮氨酸和色氨酸三者皆是中性氨基酸，人体和植物所必须的元素之一，是一种安全绿色的物质，对黑果腺肋花楸多酚的影响较小。且在食用时，不会影响人们的身体健康，还可以提高人体对黑果腺肋花楸多酚吸收。

综上所述，本发明的有益技术效果为：

1、通过选用黑果腺肋花楸果渣作为原料，对其进行预处理，便于之后的活性物质提取，且减少资源的浪费，提高资源的利用率；

2、通过加入有丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷，使用反胶团萃取蛋白质，从而提高黑果腺肋花楸多酚的溶出量；

3、通过加入有稳定剂，提高黑果腺肋花楸多酚的稳定性，增长黑果腺肋花楸多酚的保存时间和使用效果。

具体实施方式

实施例一

一种黑果腺肋花楸多酚提取工艺，包括以下提取步骤：

S1：对黑果腺肋花楸果渣进行预处理，制得含有黑果腺肋花楸多酚的原料液；

S1预处理包括以下制备工艺：

1)将黑果腺肋花楸果渣和质量浓度为50％的乙醇，按料液比1：25g/mL混合后，加入酶助剂，搅拌均匀后，加热升温至55℃，保温反应50min，然后采用超声波辅助法，反应25min后，制得第一混合液；超声波的功率为500W；

酶助剂与黑果腺肋花楸果渣的重量比为0.05：1；

配置酶助剂：将30％的纤维素酶、20％的果胶酯酶、3％的磷酸氢二钠、5％的磷酸二氢钠和58％的水混合均匀后，制得酶助剂；

2)在第一混合液中，加入丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷，搅拌40min后，在33℃下减压蒸馏，回收正己烷，剩余混合液即为第二混合液；

丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠与黑果腺肋花楸果渣的重量比为0.03：1，正己烷与第一混合液的体积比为1：1；

3)在第二混合液中，加入第一助剂，并升温至45℃，搅拌均匀后,采用减压过滤，得到的清液即为含有黑果腺肋花楸多酚的原料液；

第一助剂与黑果腺肋花楸果渣的重量比为2：1；

配置第一助剂：将12％的赖氨酸、18％的组氨酸、32％的乙醇和38％的水混合均匀后，制得第一助剂；所使用的乙醇浓度与步骤1中所用的乙醇浓度相同；

S2：采用双水相萃取原料液的活性成分，并采用微波辅助提取法，制得黑果腺肋花楸多酚粗提液；微波功率400W、提取时间8min；

S2中双水相萃取包括以下工艺步骤：向原料液中加入乙醇和硫酸铵，持续搅拌，并加入pH调节剂，调节至pH值为3，搅拌均匀后静置，分层后取上相醇液即黑果腺肋花楸多酚粗提液；

S2中所使用的乙醇浓度与S1中所用的乙醇浓度相同，且乙醇和黑果腺肋花楸果渣的料液比为1：40g/mL；硫酸铵加入量与黑果腺肋花楸果渣的重量比为0.06：1；

配置pH调节剂：将35％的冰醋酸、18％的天冬氨酸、12％的谷氨酸和35％的水混合均匀后，制得pH调节剂；

S3：将黑果腺肋花楸多酚粗提液旋蒸除醇后，制得A混合物；

S4：在A混合物中加入稳定剂，搅拌均匀后，制得黑果腺肋花楸多酚提取液；

稳定剂与黑果腺肋花楸果渣的重量比为0.04：1；

配置稳定剂：将0.8％的山梨酸钾、10％的组氨酸、8％的异亮氨酸、12％的色氨酸和30.8％的水混合均匀后，制得稳定剂；

S5：将黑果腺肋花楸多酚提取液冷冻干燥处理得到黑果腺肋花楸多酚提取物。

实施例2-5与实施例1的区别在于，S1中的乙醇的质量浓度如下表所示：

实施例	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
					乙醇的质量浓度	40％	45％	55％	60％

实施例6-9与实施例1的区别在于，S1中的黑果腺肋花楸果渣和乙醇的料液比如下表所示：

实施例	实施例6	实施例7	实施例8	实施例9
					料液比/(g/mL)	20	23	27	30

实施例10-13与实施例1的区别在于，S1中的加入酶助剂后的升温温度如下表所示：

实施例	实施例10	实施例11	实施例12	实施例13
					温度/℃	50	53	57	60

实施例14-17与实施例1的区别在于，S1中的加入酶助剂后的保温反应时间如下表所示：

实施例	实施例14	实施例15	实施例16	实施例17
					时间/min	40	45	55	60

实施例18-21与实施例1的区别在于，S1中的采用超声波辅助法后的反应时间如下表所示：

实施例	实施例18	实施例19	实施例20	实施例21
					时间/min	20	23	27	30

实施例22-25与实施例1的区别在于，S1中酶助剂与黑果腺肋花楸果渣的重量比如下表所示：

实施例	实施例22	实施例23	实施例24	实施例25
					重量比	0.03：1	0.04：1	0.06：1	0.07：1

实施例26-29与实施例1的区别在于，酶助剂包括以下重量百分比计原料：

实施例30-33与实施例1的区别在于，第一助剂包括以下重量百分比剂原料：

实施例34-37与实施例1的区别在于，pH调节剂包括以下重量百分比计原料：

实施例38-41与实施例1的区别在于，稳定剂包括以下重量百分比计原料：

实施例42-45与实施例1的区别在于，第一助剂与黑果腺肋花楸果渣的重量比如下表所示：

实施例	实施例42	实施例43	实施例44	实施例45
					重量比	1：1	1.5：1	2.5：1	3：1

实施例46-49与实施例1的区别在于，丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠与所述黑果腺肋花楸果渣的重量比如下表所示：

实施例	实施例46	实施例47	实施例48	实施例49
					重量比	0.01：1	0.02：1	0.04：1	0.05：1

实施例50-53与实施例1的区别在于，正己烷与所述第一混合液的体积比如下表所示：

实施例	实施例50	实施例51	实施例52	实施例53
					体积比	0.8：1	0.9：1	1.1：1	1.2：1

实施例54-57与实施例1的区别在于，S2中乙醇和黑果腺肋花楸果渣的料液比如下表所示：

实施例	实施例54	实施例55	实施例56	实施例57
					料液比/(g/mL)	30	35	45	50

实施例58-61与实施例1的区别在于，S2中硫酸铵加入量与黑果腺肋花楸果渣的重量比如下表所示：

实施例	实施例58	实施例59	实施例60	实施例61
					重量比	0.04：1	0.05：1	0.07：1	0.08：1

实施例62-65与实施例1的区别在于，S2中加入pH调节剂后的pH值如下表所示：

实施例	实施例62	实施例63	实施例64	实施例65
					pH值	2.5	2.7	3.3	3.5

实施例66-69与实施例1的区别在于，稳定剂与黑果腺肋花楸果渣的重量比如下表所示：

实施例	实施例66	实施例67	实施例68	实施例69
					重量比	0.02：1	0.03：1	0.05：1	0.06：1

对比例

对比例1与实施例1的区别在于，S1中不加入酶助剂；

对比例2与实施例1的区别在于，S1中不进行步骤2，且步骤3中不加入第一助剂；

对比例3与实施例1的区别在于，S1的步骤1中加入酶助剂后，加热升温至55℃，并采用超声波辅助法，反应75min后，制得第一混合液；

对比例4与实施例1的区别在于，S2中pH调节剂采用质量浓度为10％的盐酸，调节pH值为3；

对比例5与实施例1的区别在于，S4中不加入稳定剂。

将实施例1-3与对比例1-4提取的黑果腺肋花楸多酚进行多酚含量的测定，采用自由基DPP清除率表示。

检测项目	自由基清除率
		实施例1	87.8％
实施例2	87.3％
		实施例3	87.5％
对比例1	60.1％
		对比例2	65.4％
对比例3	70.1％
		对比例4	74.6％

由上表可知，通过实施例1-3和对比例1比较可知，加入有酶助剂，可提高黑果腺肋花楸多酚的提取率。通过实施例1-3和对比例2比较可知，加入有丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷，以及加入第一助剂与丁二酸-二-2-乙基己酯磺酸钠和正己烷配合使用，使用反胶团萃取蛋白质，可提高黑果腺肋花楸多酚的溶出量，从而提高黑果腺肋花楸多酚的提取率。

通过实施例1-3和对比例3比较可知，通过加入酶助剂反应40-60min后，在采用超声波辅助法，反应20-30min后，制得第一混合液，防止超声波影响酶的活性，造成酶助剂无法很好的水解细胞壁，从而影响黑果腺肋花楸多酚的提取率。先通过酶助剂水解掉细胞壁，然后通过超声波作用，破坏细胞膜，使得黑果腺肋花楸多酚易于溶出细胞膜。

通过实施例1-3和对比例4比较可知，通过加入本发明中所配置的pH调节剂，可提高黑果腺肋花楸多酚的提取率。

将实施例1-3与对比例5所提取的黑果腺肋花楸多酚放置在阳光下6h，然后对其进行多酚含量的测定，采用自由基DPP清除率表示。

检测项目	自由基清除率
		实施例1	82.3％
实施例2	81.4％
		实施例3	81.9％
对比例4	60.1％

由上表可知，加入有稳定剂后，黑果腺肋花楸多酚具有良好的抗紫外线、光照和温度的效果，说明，加入有稳定剂，可提高黑果腺肋花楸多酚的稳定性，从而提高黑果腺肋花楸多酚的保存时间和使用效果。

本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。