一种基于菁染料的化合物及其制备方法和用途
阅读说明:本技术 一种基于菁染料的化合物及其制备方法和用途 (Compound based on cyanine dye and preparation method and application thereof ) 是由 王飞翼 杨桂春 曾繁明 陈祖兴 马超 卢翠芬 聂俊琦 李峥 于 2020-05-05 设计创作,主要内容包括:本发明涉及一种基于菁染料的新化合物、制备方法及其用途。本发明所述新化合物(Cy-O-DP)由菁染料衍生物(Cy-OH)和二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)通过丙烯酰氯连接而合成制得,并可用于对亮氨酸氨基肽酶(LAP)进行检测。所述新化合物Cy-O-DP的结构通式如下:其中R1、R2、R3、R4为引入的取代基,可以调节新化合物(Cy-O-DP)的电子效应、发光性能和化合物的水溶性。本发明提供的新化合物(Cy-O-DP)是一种全新的有机化合物。其由花菁染料衍生物(Cy-OH)和二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)通过丙烯酰氯连接而合成制得,同时,该新化合物能够特异性与生物酶LAP进行相互作用,并引起化合物荧光信号变化,可用于对LAP进行检测。(The invention relates to a new compound based on cyanine dye, a preparation method and application thereof. The novel compound (Cy-O-DP) is synthesized by connecting a cyanine dye derivative (Cy-OH) and a dipeptide (cysteine leucine: Cys-Leu) through acryloyl chloride, and can be used for detecting Leucine Aminopeptidase (LAP). The novel compound Cy-O-DP has the following structural general formula: wherein R1, R2, R3 and R4 are introduced substituent groups, and can adjust the electronic effect, the luminous performance and the water solubility of the novel compound (Cy-O-DP). The novel compound (Cy-O-DP) provided by the invention is a brand new organic compound. Derived from cyanine dyesThe novel compound is prepared by synthesizing a biological compound (Cy-OH) and a dipeptide (cysteine leucine: Cys-Leu) through acryloyl chloride connection, can specifically interact with a biological enzyme LAP and cause the change of a compound fluorescence signal, and can be used for detecting the LAP.)
技术领域
本发明属于有机化学领域,具体为设计合成了一种基于菁染料的新化合物:Cy-O-DP,该化合物由菁染料衍生物(Cy-OH)和二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)通过丙烯酰氯连接而合成制得,并可用于对亮氨酸氨基肽酶(LAP)进行检测。
背景技术
花菁染料分子一般是由多个亚甲基(甲川基)组成的共轭链,共轭链两端或中间可连接杂化芳环,如喹啉、吲哚等。菁染料一般都具有荧光量子产率高、摩尔消光系数大、发射波长在近红外区、生物相容性较好和可修饰位点多等优点,广泛应用于感光材料、荧光标记等方面,受到科研工作者们的高度关注。通过在菁染料分子上引入不同的修饰基团,可设计合成不同的染料分子,也可构建基于菁染料的荧光探针,这些新的染料化合物的合成与应用在有机化学、感光材料、生物化工和医学分析等领域都有非常重要的作用。因而,开发新型的基于菁染料的新化合物仍具有非常重要的现实意义。
发明内容
本发明第一个目的是提供一种基于菁染料的新化合物(Cy-O-DP)。
本发明第二个目的是提供一种基于菁染料的新化合物(Cy-O-DP)的制备方法。
本发明第三个目的是提供一种基于菁染料的新化合物(Cy-O-DP)用于对亮氨酸氨基肽酶(LAP)进行检测。
本发明提供的技术方案为,一种化合物Cy-O-DP,其结构通式如下:
其中R1、R2、R3和R4为引入的取代基,可以调节化合物Cy-O-DP的电子效应、发光性能和水溶性。
优选地,R1=R2=R3=H,R4为甲基。
本发明还提供了上述化合物Cy-O-DP的制备方法,所述新化合物经以下两步有机合成反应制得:
(1)以菁染料衍生物CY-OH为原料,通过与丙烯酰氯进行亲核取代反应得到CY-O-A,所述化合物CY-OH和CY-O-A具有以下所示的结构:
其中R1、R2、R3、R4为引入的取代基,可以调节化合物的电子效应、发光性能和化合物的水溶性。
(2)上述所制备的化合物CY-O-A通过与二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)进行加成反应,制备出新化合物:Cy-O-DP。
根据本发明所述一种新化合物:Cy-O-DP,可特异性与生物酶亮氨酸氨基肽酶(LAP)进行相互作用,并引起化合物荧光信号变化,可用于对LAP进行检测。因此本发明进而提出了所述化合物Cy-O-DP在对亮氨酸氨基肽酶进行检测中的应用。
更进一步地,本发明所述化合物Cy-O-DP在制备用于检测亮氨酸氨肽酶的荧光探针中的应用。
本发明提供的新化合物(Cy-O-DP)详细合成方法如下:
根据所述新化合物(Cy-O-DP),优选R1、R2、R3为氢,R4为甲基为例进行说明。
(1)以CY-OH1为原料,通过与丙烯酰氯进行亲核取代反应得到CY-O-A1:
在氩气保护下,将CY-OH1(200 mg,0.52 mmol)溶解在干燥的二氯甲烷(10ml)溶液中,并降温至0 ℃,然后分别向其中缓慢加入干燥的三乙胺(143 μL,1.03 mmol)和丙烯酰氯(85 μL,1.05 mmol),恢复至室温,然后搅拌16小时。反应结束后,减压蒸馏除去溶剂,柱层析提纯,得到紫色固体产物:CY-O-A1。
(2)化合物CY-O-A1与二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)进行加成反应,制备出新化合物:CY-O-DP1:
在氩气保护下,将化合物CY-O-A1(60 mg, 0.137 mmol)和二肽(Cys-Leu)(100 mg,0.427mmol)溶解在CH3CN-HEPES (v/v, 1:1)的缓冲溶液中,在35 ℃下反应5小时。反应结束后,减压蒸馏除去溶剂,柱层析分离提纯,得到紫色固体产物:CY-O-DP1。
本发明的独创性在于将菁染料的衍生物(Cy-OH)与二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)进行有机结合,设计合成出基于菁染料的新型化合物:CY-O-DP,该化合物利用LAP能够特异性剪切亮氨酸残基的特点,实现了与LAP的相互作用,并最终引起化合物荧光信号变化,使其具有检测LAP的用途。
术语:
Absorption为吸收值。
Fluoresence (FL) intensity为荧光强度。
有益技术效果:
本发明提供一种基于菁染料的新化合物:Cy-O-DP。菁染料是一种具有摩尔消光系数大、荧光量子产率高、发射波长在近红外区和可修饰位点多等优点的荧光染料,广泛应用于生物化工、感光材料、荧光标记等方面,具有非常重要的应用价值。然而,由于其合成难度较高,大规模生产仍然受到限制,并且基于菁染料的新化合物也相对有限。通过对花菁染料母体进行改造和不同的修饰,可设计合成具有不同光学性能的染料分子,可用于构建新型荧光探针、制备新型荧光材料、感光材料等,而且新染料化合物的合成与应用在有机化学、材料学、生物化工和医学等领域也都将具有非常重要的意义。
本发明基于以上需求,提供了一种基于菁染料的新化合物:Cy-O-DP,该化合物由菁染料衍生物(Cy-OH)和二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)通过丙烯酰氯连接而合成制得。Cy-O-DP不仅是一种全新的基于菁染料的新化合物,而且在相关性能测试中发现,该化合物还可用于对亮氨酸氨基肽酶(LAP)进行检测。
附图说明
图1是本发明新化合物(CY-O-DP)在PBS 缓冲溶液(pH=7.4)中与LAP作用前后的(a)紫外吸收光谱图(b)荧光发射光谱图;
图2是本发明新化合物(CY-O-DP)在PBS 缓冲溶液(pH=7.4)中与各种分析物反应前后荧光强度变化示意图。其中:a.空白;b. KCl;c.氯化钙;d.溴化锌.;e. CYS.;f. HCY;g.GSH;h.葡萄糖;i.亚硫酸氢钠;j.胰蛋白酶;k. α-淀粉酶;l.脂肪酶;m. GGT;n.硫氢化钠;o.纤维素酶;p.抑肽酶;q. LAP。
图3是本发明新化合物(CY-O-DP)的核磁共振氢谱图,氘代试剂为d 6-CD3OD。
图4是本发明新化合物(CY-O-DP)的核磁共振碳谱图,氘代试剂为d 6-CD3OD。
具体实施方式
为了更好地理解本发明,下面结合实施例进一步阐明本发明的内容,但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
新化合物Cy-O-DP1的合成:
在氩气保护下,将CY-OH1(200 mg,0.52 mmol)溶解在干燥的二氯甲烷(10ml)溶液中,并降温至0 ℃,然后分别向其中缓慢加入干燥的三乙胺(143 μL,1.03 mmol)和丙烯酰氯(85 μL,1.05 mmol),恢复至室温,然后搅拌16小时。反应结束后,减压蒸馏除去溶剂,柱层析提纯,得到紫色固体产物:CY-O-A1。
在氩气保护下,将化合物CY-O-A1(60 mg, 0.137 mmol)和二肽(Cys-Leu)(100mg, 0.427mmol)溶解在CH3CN-HEPES (v/v, 1:1)的缓冲溶液中,在35 ℃下反应5小时。反应结束后,减压蒸馏除去溶剂,柱层析分离提纯,得到紫色固体产物:CY-O-DP1。
化合物CY-O-DP1的氢谱(如图3),氘代试剂为d 6-CD3OD。
1H NMR (400 MHz, d 6-CD3OD):δ 8.72 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J =7.4 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 6.3, 1.1 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 7.41(s, 1H), 6.82-6.85 (m, 2H), 6.42 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.57 (s, 1H), 3.81 (s,3H), 3.67 (s, 2H), 2.80 – 2.76 (m, 2H), 2.72 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.26 – 2.16(m, 1H), 2.12 – 1.99 (m, 2H), 1.99 – 1.87 (m, 3H), 1.81 (s, 6H), 1.40 (s,2H), 1.28 (s, 9H), 0.90 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
化合物CY-O-DP1的碳谱(如图4),氘代试剂为d 6-CD3OD。
13C NMR (101 MHz, d 6-CD3OD):δ179.44,170.48,159.76,153.01,146.20,142.34,130.97,129.87,129.46,128.87,128.48,128.02,127.68,122.36,119.75,118.94,114.51,112.94,109.37,105.52,65.26,51.02,35.15,34.40,31.69,29.38,29.10,26.73,26.51,24.03,22.36,21.80,20.71,18.87,13.07,7.80.
化合物CY-O-DP1的高分辨率质谱HRMS (m/z): Calcd for C38H46N3O6S+: 672.31,Found: 672.30 [M]+.
效果例:
参考图1是新化合物(CY-O-DP)在PBS缓冲溶液(0.01 mol/L, pH=7.4)中与LAP作用前后的(a)紫外吸收光谱图:新化合物CY-O-DP在386nm处有最大的紫外吸收峰,在加入LAP酶共同孵育之后,吸收峰红移至483nm处;(b)荧光发射光谱图:在360 nm的光的激发下,新化合物CY-O-DP荧光几乎忽略不计,而在与LAP酶作用后,在704 nm处显示出极大的荧光增强。因而,新化合物(CY-O-DP)具有检测LAP的用途。
参考图2:新化合物(CY-O-DP)在PBS 缓冲溶液(pH=7.4)中与各种分析物反应前后荧光强度变化示意图,结果显示CY-O-DP表现出对LAP优异的选择性,抗干扰能力强。其中:a.空白;b. KCl;c.氯化钙;d.溴化锌.;e. CYS.;f. HCY;g. GSH;h.葡萄糖;i.亚硫酸氢钠;j.胰蛋白酶;k. α-淀粉酶;l.脂肪酶;m. GGT;n.硫氢化钠;o.纤维素酶;p.抑肽酶;q. LAP。
本发明提供一种基于菁染料的新化合物:Cy-O-DP。该化合物由菁染料衍生物(Cy-OH)和二肽(半胱氨酸亮氨酸:Cys-Leu)通过丙烯酰氯连接而合成制得。Cy-O-DP不仅是一种全新的基于菁染料的新化合物,而且在相关性能测试中发现,该化合物还可用于对亮氨酸氨基肽酶(LAP)进行检测。
以上显示描述了本发明的基本内容和用途。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。