具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

如图1所示的一实施方式的北苍术种子的保存方法，包括如下步骤：

S10、将北苍术种子浸泡到装载液中。

将北苍术种子浸泡到装载液中，提高北苍术种子降温过程中的耐受力。

一般来说，应当选取饱满的北苍术种子进行保存。

本实施方式中，北苍术种子的湿度为8％～12％。

本实施方式中，装载液含有甘油和蔗糖的MS液体培养基。

优选的，装载液中，甘油的摩尔浓度为1mol/L～4mol/L，蔗糖的摩尔浓度为0.2mol/L～1mol/L。

更优选的，装载液中，甘油的摩尔浓度为2mol/L，蔗糖的摩尔浓度为0.4mol/L。

本实施方式中，将北苍术种子浸泡到装载液中的操作中，温度为室温，时间为15min～45min(优选为25min)。

S20、将北苍术种子从装载液中取出后转移到装有玻璃化保护剂的冻存管中，并且将冻存管置于0℃～8℃的环境下预冻存15min～120min。

对北苍术种子进行预冻存处理，可以让北苍术种子逐渐适应低温环境，避免因迅速降温对种子的伤害。

本实施方式中，玻璃化保护剂为含有甘油、乙二醇、二甲亚砜和蔗糖的MS液体培养基。

优选的，玻璃化保护剂中，甘油的质量浓度为25％～35％，乙二醇的质量浓度为10％～20％，二甲亚砜的质量浓度为10％～20％，蔗糖的摩尔浓度为0.2mol/L～1mol/L。

更优选的，甘油的质量浓度为28％～32％，乙二醇的质量浓度为12％～18％，二甲亚砜的质量浓度为12％～18％，蔗糖的摩尔浓度为0.3mol/L～0.6mol/L。

特别优选的，甘油的质量浓度为30％，乙二醇的质量浓度为15％，二甲亚砜的质量浓度为15％，蔗糖的摩尔浓度为0.4mol/L。

优选的，将冻存管置于0℃～8℃的环境下预冻存15min～120min的操作为：将冻存管置于2℃～6℃的环境下预冻存30min～60min。

S30、将预冻存后的冻存管取出，更换新鲜且预冷过的玻璃化保护剂后，将冻存管投入液氮保存。

预冷过的玻璃化保护剂的温度与预冻存的温度相同。

优选的，还包括在将冻存管投入液氮保存的操作之后，在播种之前，进行的如下操作：

将冻存管自液氮中取出后置于34℃～50℃下水浴解冻，解冻后将冻存管内的北苍术种子取出后依次用洗涤液和无菌水清洗干净。

将冻存管自液氮中取出后置于34℃～50℃下水浴解冻，可以使得北苍术种子的温度迅速回升，从而水浴处理可以使北苍术种子迅速回温，从而避免环境变化对种子生活力的影响，保证种子发芽率。

更优选的，水浴的温度为40℃，水浴的时间为5min。

将解冻后将冻存管内的北苍术种子取出后用洗涤液清洗，可以保证种子的清洁度，降低化学物质在种子萌发过程中的影响，

本实施方式中，洗涤液为含有蔗糖的MS液体培养基。

优选的，洗涤液中，蔗糖的摩尔浓度为0.8mol/L～2mol/L。

更优选的，洗涤液中，蔗糖的摩尔浓度为1.2mol/L。

本实施方式中，解冻后将冻存管内的北苍术种子取出后依次用洗涤液和无菌水清洗干净的操作中，洗涤液清洗北苍术种子至少两次(每次清洗时间为10min)，无菌水清洗北苍术种子至少三次(每次清洗时间为10min)。

清洗完成后，还需要用滤纸将北苍术种子上的水分吸干。

这种北苍术种子的保存方法通过对北苍术种子进行预冻存处理，极大的提高了北苍术种子的保存时间和发芽率，结合实施例部分的数据，这种北苍术种子的保存方法处理过的北苍术种子在保存6个月、12个月和24个月的发芽率，均高于未经过预冻存的北苍术种子。

以下为具体实施例。

实施例中，装载液为含2mol/L甘油和0.4mol/L蔗糖的MS液体培养基，玻璃化保护剂为含30wt％甘油、15wt％的乙二醇、15wt％的二甲亚砜和0.4mol/L蔗糖的MS液体培养基，洗涤液为含有1.2mol/L蔗糖的MS培养液。

实施例1

选取饱满且湿度在8％～12％的北苍术种子，将装载液置入装有北苍术种子的冻存管中，室温放置25min后，倒出装载液后换入玻璃化保护剂，于4℃冰箱中放置40min，随后更换新鲜4℃预冷过的玻璃化保护剂，封紧冻存管迅速投入液氮保存。

实施例2

选取饱满且湿度在8％～12％的北苍术种子，将装载液置入装有北苍术种子的冻存管中，室温放置25min后，倒出装载液后换入玻璃化保护剂，于2℃冰箱中放置30min，随后更换新鲜2℃预冷过的玻璃化保护剂，封紧冻存管迅速投入液氮保存。

实施例3

选取饱满且湿度在8％～12％的北苍术种子，将装载液置入装有北苍术种子的冻存管中，室温放置25min后，倒出装载液后换入玻璃化保护剂，于6℃冰箱中放置60min，随后更换新鲜6℃预冷过的玻璃化保护剂，封紧冻存管迅速投入液氮保存。

对比例

选取饱满且湿度在8％～12％的北苍术种子，将装载液置入装有北苍术种子的冻存管中，室温放置25min后，倒出装载液后换入玻璃化保护剂，封紧冻存管迅速投入液氮保存。

测试例1

分别取液氮保存6个月的实施例1、2、3和对比例得到的北苍术种子各100梨，将北苍术种子进行40℃水浴5min解冻，解冻后用洗涤液清洗2次，每次10min，接着用无菌水清洗3次，每次10min，清洗干净后的北苍术种子用滤纸吸干水分，接着进行发芽试验。

发芽试验具体操作如下：将上述四组种子分别置于湿润的培养皿内，培养皿内垫有滤纸，将培养皿放入25℃～28℃的培养箱中培养3天，数发芽数，得到下表1。

表1：液氮保存6个月后的发芽率对比表

测试例2

分别取液氮保存12个月的实施例1、2、3和对比例得到的北苍术种子各100梨，将北苍术种子进行40℃水浴5min解冻，解冻后用洗涤液清洗2次，每次10min，接着用无菌水清洗3次，每次10min，清洗干净后的北苍术种子用滤纸吸干水分，接着进行发芽试验。

发芽试验具体操作如下：将上述四组种子分别置于湿润的培养皿内，培养皿内垫有滤纸，将培养皿放入25℃～28℃的培养箱中培养3天，数发芽数，得到下表1。

表2：液氮保存12个月后的发芽率对比表

测试例3

分别取液氮保存24个月的实施例1、2、3和对比例得到的北苍术种子各100梨，将北苍术种子进行40℃水浴5min解冻，解冻后用洗涤液清洗2次，每次10min，接着用无菌水清洗3次，每次10min，清洗干净后的北苍术种子用滤纸吸干水分，接着进行发芽试验。

发芽试验具体操作如下：将上述四组种子分别置于湿润的培养皿内，培养皿内垫有滤纸，将培养皿放入25℃～28℃的培养箱中培养3天，数发芽数，得到下表1。

表3：液氮保存24个月后的发芽率对比表

结合上述表1、表2和表3，可以看出，实施例1、2和3的方法保存得到的北苍术种子的发芽率，高于对比例得到的方法保存得到的北苍术种子。

并且随着保存时间的增长，实施例1、2和3的方法保存得到的北苍术种子的发芽率，显著高于对比例得到的方法保存得到的北苍术种子。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。