一种4-(苯并噻唑-2-基)-n-取代苯胺化合物及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种4-(苯并噻唑-2-基)-n-取代苯胺化合物及其制备方法和应用 (4- (benzothiazole-2-yl) -N-substituted aniline compound and preparation method and application thereof ) 是由 左建平 汤杰 唐炜 杨帆 胡玟奇 童贤崑 周宇 林颖 何佩岚 张颖 朱峰华 于 于 2020-05-06 设计创作，主要内容包括：本发明提供了4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物及其制备方法,所述方法为：取代4-(苯并噻唑-2-基)苯胺与卤代物发生反应,生成4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物,或者与卤代酰氯反应,再经亲核取代、还原和亲核取代反应生成系列4-(苯并噻唑-2-基)-N-杂环烷基取代苯胺化合物。本发明还提供了所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物在抗中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)和新冠病毒(SARS-CoV-2)中的应用,其在抑制冠状病毒新药发现领域具有应用前景。(The invention provides a 4- (benzothiazole-2-yl) -N-substituted aniline compound and a preparation method thereof, wherein the method comprises the following steps: substituted 4- (benzothiazole-2-group) aniline reacts with halide to generate 4- (benzothiazole-2-group) -N-substituted aniline compound, or reacts with halogenated acyl chloride to generate a series of 4- (benzothiazole-2-group) -N-heterocyclic alkyl substituted aniline compounds through nucleophilic substitution, reduction and nucleophilic substitution. The invention also provides application of the 4- (benzothiazole-2-yl) -N-substituted aniline compound in resisting middle east respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) and new coronavirus (SARS-CoV-2), and the application has application prospects in the field of new drug discovery for inhibiting coronavirus.)
技术领域
本发明属于药物化学的技术领域，涉及一类4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺 化合物及其制备方法和应用。
背景技术
中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)是一种中东地区的新型人畜共患病 毒病原体。由此种冠状病毒感染引起的病毒性传染疾病被称为中东呼吸综合征 (Middle Eastrespiratory syndrome，MERS)。
2012年9月，在一名60岁的患有急性肺炎同时患有急性肾功能衰竭的沙特 男子体内发现此种新型冠状病毒。截止到2019年5月31日，全球至少有27个 国家报告了有人感染MERS-CoV，已有2442人感染该病毒，其中842人死亡， 致死率高达35％。MERS病毒通过动物传染给人类，随后在人与人之间传播。感 染该病毒后，可引起严重的呼吸道疾病，其症状包括发烧、咳嗽及呼吸急促，并 伴有较高比率的急性肾衰竭或死亡。
目前，尚未批准任何用于预防或治疗MERS-CoV感染的特效药物或疫苗， 有关抗MERS-CoV药物的许多基础和临床研究正在进行中。
MERS病毒是一种包膜单链RNA病毒，属β类冠状病毒C谱系。它主要通过 刺突蛋白(S蛋白)介导进入细胞。S蛋白包括含有受体结合结构域(RBD)的 S1亚基，含有融合肽(FP)、长七肽重复1结构域(HR1)和短七肽重复2结 构域(HR2)的S2亚基。MER-CoV通过刺突蛋白中的RBD将病毒颗粒与宿主 细胞表面上的细胞受体二肽基肽酶-4(DPP4)结合。随后，S2改变其构象并将 其FP插入质膜或内体膜。HR2与HR1结合形成六螺旋束(6-HB)融合核心， 使病毒和细胞膜紧密结合以进行融合，从而进入宿主细胞，进行自身的复制。从 致病机理上看，MERS病毒S蛋白与细胞膜的识别结合这一过程对病毒的繁殖尤 为重要，因此病毒S蛋白是抗MERS-CoV药物研发的重要靶点。
发明内容
本发明提供了一种4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物及其制备方法和用途。
本发明4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物具有如下结构通式(I)：
R1为氢、卤素、烷氧基；
R2为氢、烷基；
R3为环烷基、五元芳杂环、取代苄基、芳杂环亚甲基、 n为1-3；X为O、CH2、N；当X为N时，G为氢、甲基、
优选地，
R1为氢、卤素、C1-C10烷氧基；
R2为氢、C1-C10烷基；
R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、
进一步优选地，
R1为氢、卤素、甲氧基；
R2为氢、甲基、乙基；
R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、
当式(I)中的R2为氢时，4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的结构如 式(I-1)所示：
其中，R1、R3的定义同式(I)。
当式(I)中的R3为时，4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺 化合物的结构如式(I-2)和(I-4)所示：
其中，R1、R2、n、X、G的定义同式(I)。
本发明还提出了如式(I-1)所示的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物 的制备方法，在溶剂中，在碱的作用下，取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺和卤代物 发生亲核取代生成目标产物I-1，所述反应过程如反应式(a)所示：
其中，
R1为氢、卤素、烷氧基；
R3为环烷基、五元芳杂环、取代苄基、芳杂环亚甲基；其中，所述环烷基 为环戊基、环己基；所述五元芳杂环为噻吩、吡咯、呋喃；所述取代苄基为 所述芳杂环亚甲基为
Y为卤素。
其中，所述溶剂为DMF、乙腈等中的一种或几种；优选地，为DMF。
其中，所述碱为氢化钠、碳酸钾或叔丁醇钠、叔丁醇钾等中的一种或几种； 优选地，为氢化钠、碳酸钾或叔丁醇钠。
其中，所述碱与取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为2:1～10:1； 优选地，为5：1。
其中，所述卤代物与取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为 1:1～2:1；优选地，为1.2：1。
其中，所述反应的温度为室温～130℃；优选地，为80℃。
其中，所述反应的时间为5～16小时；优选地，为14小时。
本发明还提出了如式(I-4)所示的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物 的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)在溶剂中，取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺与卤代酰氯发生反应，形成 中间体氯代物ii。
(2)在溶剂中，在碱的作用下，中间体氯代物ii与含氮杂环发生亲核取代 反应，得到酰胺产物I-2。
(3)在溶剂中，酰胺产物I-2与氢化铝锂发生还原反应，得到还原产物I-3。
(4)在溶剂中，在碱的作用下，还原产物I-3与卤代烷发生亲核取代反应， 得到目标产物I-4，所述反应过程如反应式(b)所示：
R1为氢、卤素、烷氧基；
R2为氢、烷基；
n为1-3；
X为O、CH2、N；
当X为N时，G为氢、甲基、
步骤(1)中，所述溶剂优选为丙酮。
步骤(1)中，所述卤代酰氯为氯乙酰氯或氯丙酰氯等中的一种或几种；优 选地，为氯乙酰氯或氯丙酰氯。
步骤(1)中，所述酰氯与4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为1:1～1.05:1；优选地，为1：1。
步骤(1)中，所述反应的温度为室温～70℃；优选地，为70℃。
步骤(1)中，所述反应的时间为0.2～2小时；优选地，为1小时。
步骤(2)中，所述溶剂为DMF、乙腈等中的一种或几种；优选地，为DMF。
步骤(2)中，所述碱为碳酸钾、叔丁醇钾、叔丁醇钠等中的一种或几种； 优选地，为碳酸钾。
步骤(2)中，所述碱与氯代物ii的摩尔用量之比为1.8:1～2.2:1；优选地， 为2：1。
步骤(2)中，所述含氮杂环与氯代物ii的摩尔用量之比为1:1～1.5:1；优选 地，为1.1：1。
步骤(2)中，所述反应的温度为60℃～130℃；优选地，为80℃。
步骤(2)中，所述反应的时间为3-6小时；优选地，为4小时。
步骤(3)中，所述溶剂为无水四氢呋喃、无水1,4-二氧六环等中的一种或几 种；优选地，为无水四氢呋喃。
步骤(3)中，所述氢化铝锂与酰胺产物I-2的摩尔用量之比为2:1～4:1；优 选地，为4：1。
步骤(3)中，所述反应的温度为70℃。
步骤(3)中，所述反应的时间为10～16小时；优选地，为14小时。
步骤(4)中，所述溶剂为DMF、乙腈等中的一种或几种；优选地，为DMF。
步骤(4)中，所述碱为碳酸钾、叔丁醇钾、叔丁醇钠、氢化钠等中的一种 或几种；优选地，为碳酸钾。
步骤(4)中，所述碱与还原产物I-3的摩尔用量之比为1.8:1～2.2:1；优选地， 为2：1。
步骤(4)中，所述卤代烷与还原产物I-3的摩尔用量之比为1:1～1.5:1；优 选地，为1.1：1。
步骤(4)中，所述反应的温度为室温～130℃；优选地，为130℃。
步骤(4)中，所述反应的时间为6～18小时；优选地，为14小时。
在一个
具体实施方式
中，所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的制备 方法，包括以下步骤：
(1)以取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺为原料，以氢化钠、碳酸钾或叔丁醇 钠为碱，与卤代烷在DMF中发生亲核取代生成产物I-1’(其中R2为氢；R3为环 烷基、五元芳杂环、取代苄基、芳杂环亚甲基)。
(2)以取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺为原料，与氯乙酰氯或氯丙酰氯在丙 酮中形成氯代物中间体ii。
(3)中间体氯代物ii在DMF中以碳酸钾为碱，与含氮杂环发生亲核取代得 到酰胺产物I-2’(其中R2为氢；R3为 )。
(4)酰胺产物I-2’在无水四氢呋喃中以氢化铝锂还原得到还原产物I-3’(其 中R2为氢；R3为 )。
(5)还原产物I-3’在DMF中以碳酸钾为碱，与卤代烷发生亲核取代得到 N-烷基化产物I-4’(其中R2为甲基、乙基；R3为 )。
本发明制备方法的反应路线，如下式(c)所示：
本发明还提供了所述式(I)、式(I-1)、式(I-4)所示的含苯并噻唑基团 N-取代苯胺化合物在制备抗病毒药物中的应用。
所述式(I)、式(I-1)、式(I-4)所示的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺 化合物用于抑制病毒的生长、转移、增殖；促进病毒的凋亡。
所述病毒为MERS-CoV、SARS-CoV-2、SARS-CoV等。
本发明中，所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物以病毒S蛋白为靶点， 抑制病毒进入宿主细胞，从而达到治疗效果。
本发明的有益效果在于，本发明制备的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物结构新颖，其抗病毒效果显著，尤其在抗中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV) 和新冠病毒(SARS-CoV-2)上效果显著，其在抑制冠状病毒新药发现领域具有 应用前景，可用于发展新型抗冠状病毒药物。
具体实施方式
结合以下具体实施例，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、 条件、实施方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知 尝试，本发明没有特别限制内容。
实施例1：化合物Ia(R1＝H，R2＝H，R3＝环己基)的合成
将4-(苯并噻唑-2-基)苯胺(100mg，0.44mmol)溶于DMF(3mL)中，加入 氢化钠(105mg，4.4mmol)和溴代环己烷(80mg，0.49mmol)，60℃下反应5h。 降温至室温，加入水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，分液，无水硫酸钠干燥， 过滤，除去溶剂。所得粗品经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30:1)得 30mg白色固体产物Ia。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.89 (d,J＝8.8Hz,2H),7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m,1H), 6.62(d,J＝8.9Hz,2H),3.98(d,J＝6.5Hz,1H),3.37–3.34(m,1H),1.45–1.41(m, 2H),1.81–1.76(m,2H),1.72–1.66(m,1H),1.46–1.35(m,2H),1.29–1.16(m,3H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.75,153.34,148.72,133.46,128.14, 124.92,123.14,121.24,121.00,120.30,111.51,50.35,32.21,24.76,23.87.
实施例2：化合物Ib(R1＝H，R2＝H，R3＝ )的合成
将实施例1中原料溴代环己烷替换为2-(溴甲基)-6-甲氧基苯酚，参照实施例 1的方法得到黄色固体化合物Ib。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H), 8.00(d,J＝7.4Hz,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.46– 7.43(m,1H),7.35–7.31(m,1H),6.88–6.84(m,2H),6.82–6.80(m,1H),6.73– 6.68(m,3H),4.30(d,J＝5.9Hz,2H),3.80(s,3H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ 168.00,153.86,151.61,147.29,143.82,133.68,128.60,126.17,125.51,124.26, 121.82,121.70,120.04,120.02,118.62,111.93,110.39,55.78,40.78.
实施例3：化合物Ic(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例1中原料溴代环己烷替换为3-溴甲基噻吩，参照实施例1的实验方 法得到白色固体化合物Ic。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(d,J＝8.1Hz,1H), 7.92(d,J＝8.5Hz,2H),7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.46–7.42(m,1H),7.36–7.28(m, 2H),7.21(s,1H),7.09(d,J＝4.8Hz,1H),6.70(d,J＝8.5Hz,2H),4.41(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.60,154.34,150.26,139.54,134.57,129.14,126.99, 126.49,126.03,124.33,123.06,122.40,122.03,121.39,112.60,43.31.
实施例4：化合物Id(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例1中原料溴代环己烷替换为3-溴噻吩，参照实施例1的实验方法得 到绿色固体化合物Id。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(d,J＝8.1Hz,1H),7.96 (d,J＝8.6Hz,2H),7.86(d,J＝7.9Hz,1H),7.47–7.44(m,1H),7.36–7.30(m,2H), 7.02–6.97(m,3H),6.89(s,1H),6.01(s,1H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.14, 153.24,146.32,138.72,133.62,128.05,125.10,124.56,123.79,123.52,122.30, 121.54,120.41,113.59,108.62.
实施例5：化合物Ie(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将4-(苯并噻唑-2-基)苯胺(1g，4.42mmol)溶于丙酮(20mL)中，缓慢 滴加溶有氯乙酰氯(500mg，4.42mmol)的丙酮(10mL)溶液，回流反应2h。 降温至室温，过滤得黄色固体氯代物1.5g；
将氯代物(300mg，0.99mmol)溶于DMF(4mL)中，加入哌啶(94mg， 1.09mmol)和碳酸钾(276mg，1.98mmol)，60℃反应4h。加入水，二氯甲烷 萃取，饱和食盐水洗涤，分液，无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂。粗品经硅胶 柱层析(洗脱剂：二氯甲烷)，得到225mg白色固体化合物Ie。1HNMR(400MHz, CDCl3)δ9.49(s,1H),8.08–8.04(m,3H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.7 Hz,2H),7.50–7.46(m,1H),7.38–7.35(m,1H),3.10(s,2H),2.59–2.53(m,4H), 1.69–1.65(m,4H),1.55–1.43(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ169.31, 167.56,154.15,140.22,134.92,129.20,128.46,126.31,125.04,122.98,121.59, 119.37,62.83,54.97,26.33,23.60.
实施例6：化合物If(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为哌嗪，参照实施例5的实验方法得到白色固 体化合物If。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.35(s,1H),8.08–8.04(m,3H),7.89(d, J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,2H),7.50–7.46(m,1H),7.39–7.35(m,1H), 3.15(s,2H),2.99–2.97(m,4H),2.65–2.57(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ 168.66,167.47,154.15,140.04,134.92,129.36,128.48,126.33,125.06,123.01, 121.59,119.41,62.68,54.79,46.33.
实施例7：化合物Ig(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为N-甲基哌嗪，参照实施例5的实验方法得 到白色固体化合物Ig。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.31(s,1H),8.08–8.04(m, 3H),7.89(d,J＝7.9Hz,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.50–7.46(m,1H),7.39–7.35(m,1H),3.17(s,2H),2.71–2.65(m,4H),2.58–2.50(m,4H),2.34(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ167.55,166.43,153.13,139.03,133.91,128.36,127.45, 125.29,124.04,121.98,120.55,118.38,60.88,54.21,52.43,44.95.
实施例8：化合物Ih(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料氯乙酰氯替换为氯丙酰氯，原料哌啶替换为1-(2-羟乙 基)哌嗪，参照实施例5的实验方法得到淡蓝色固体化合物Ih。1HNMR(400MHz, CDCl3)δ11.21(s,1H),8.06–8.02(m,3H),7.88(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(d,J＝8.7 Hz,2H),7.50–7.44(m,1H),7.39–7.33(m,1H),3.67(t,J＝5.3Hz,2H),2.89– 2.40(m,15H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ169.63,166.56,153.14,140.25,133.86, 127.82,127.43,125.25,123.96,121.93,120.53,118.47,58.23,56.83,52.50,52.10, 51.33,31.53.
实施例9：化合物Ii(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将化合物Ie(200mg，0.57mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，冰水浴 冷却，加入氢化铝锂(75mg，2mmol)，氮气保护下回流16h。降温至室温，加 入饱和碳酸氢钠溶液，采用二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤、分液、无水硫酸钠 干燥、过滤、除去溶剂。粗品经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100:1)， 得到180mg淡黄色固体化合物Ii。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.1Hz, 1H),7.91(d,J＝8.6Hz,2H),7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32– 7.28(m,1H),6.67(d,J＝8.6Hz,2H),4.93(m,1H),3.26–3.21(m,2H),2.63(t,J＝ 6.0Hz,2H),2.47–2.41(m,4H),1.64–1.59(m,4H),1.49–1.45(m,2H).13CNMR (101MHz,CDCl3)δ167.79,153.30,149.81,133.45,128.04,124.94,123.17,121.25, 121.23,120.32,111.40,55.91,53.21,38.65,24.78,23.26.
实施例10：化合物Ij(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为吗啉，参照实施例5与实施例9的实验方法 得到黄色固体化合物Ij。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.1Hz,1H),7.92 (d,J＝8.7Hz,2H),7.84(d,J＝7.7Hz,1H),7.46–7.41(m,1H),7.33–7.29(m,1H), 6.67(d,J＝8.7Hz,2H),4.76(t,J＝4.8Hz,1H),3.74(t,J＝4.6Hz,4H),3.27–3.21 (m,2H),2.66(t,J＝6.2Hz,2H),2.49(t,J＝4.6Hz,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3) δ167.68,153.29,149.63,133.47,128.07,124.98,123.24,121.53,121.28,120.33, 111.43,65.93,55.75,52.24,38.29.
实施例11：化合物Ik(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为哌嗪，参照实施例5与实施例9的实验方法 得到黄色固体化合物Ik。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.3Hz,1H), 7.92(d,J＝8.2Hz,2H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m, 1H),6.67(d,J＝8.3Hz,2H),4.80–4.76(m,1H),3.25–3.21(m,2H),2.93–2.91 (m,4H),2.66–2.63(m,2H),2.49–2.45(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ 167.64,153.29,149.50,133.49,128.09,124.99,123.27,121.66,121.31,120.34, 111.46,55.54,51.05,43.94,38.46.
实施例12：化合物Il(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为N-甲基哌嗪，参照实施例5与实施例9的 实验方法得到淡黄色固体化合物Il。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.1 Hz,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,2H),7.83(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.33 –7.31(m,1H),6.66(d,J＝8.5Hz,2H),4.78(t,J＝4.8Hz,1H),3.24–3.20(m,2H), 2.80–2.37(m,10H),2.35(s,3H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ168.75,154.32, 150.69,134.49,129.10,126.03,124.28,122.46,122.30,121.39,112.45,56.14,54.87, 52.32,45.75,39.59.
实施例13：化合物Im(R1＝7-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(7-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Im。1HNMR(400 MHz,CDCl3)δ7.92(d,J＝8.4Hz,2H),7.77(d,J＝8.1Hz,1H),7.41–7.36(m,1H), 7.05–7.01(m,1H),6.68(d,J＝8.4Hz,2H),4.82–4.80(t,J＝4.8Hz,1H),3.76– 3.73(m,4H),3.25(q,J＝5.5Hz,2H),2.69–2.66(m,2H),2.51–2.49(m,4H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.65(d,J＝1.6Hz),156.23(d,J＝2.7Hz),156.06(d,J ＝249.3Hz),149.93,128.24,125.81(d,J＝7.4Hz),120.84,120.40(d,J＝16.6Hz), 117.05(d,J＝3.5Hz),111.42,108.76(d,J＝18.8Hz),65.92,55.69,52.23,38.21.
实施例14：化合物In(R1＝6-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(6-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到褐色固体化合物In。1HNMR(400MHz, CDCl3)δ7.91–7.86(m,3H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.18–7.14(m,1H),6.67(d,J ＝8.2Hz,2H),4.78–4.76(m,1H),3.76–3.72(m,4H),3.26–3.22(m,2H),2.67(d, J＝6.2Hz,2H),2.51–2.47(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.42(d,J＝3.0 Hz),158.93(d,J＝244.2Hz),149.91,149.66,134.41(d,J＝11.1Hz),127.95,121.99 (d,J＝9.3Hz),121.24,113.35(d,J＝24.5Hz),111.44,106.64(d,J＝26.8Hz), 65.91,55.74,52.24,38.28.
实施例15：化合物Io(R1＝5-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(5-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到白色固体化合物Io。1HNMR(400MHz, CDCl3)δ7.89(d,J＝8.6Hz,2H),7.74(dd,J＝8.7,5.2Hz,1H),7.65(dd,J＝9.7, 2.5Hz,1H),7.09–7.04(m,1H),6.66(d,J＝8.7Hz,2H),4.80(t,J＝4.8Hz,1H), 3.74–3.72(m,4H),3.23(q,J＝5.4Hz,2H),2.67–2.64(m,2H),2.49–2.47(m, 4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ170.15,160.82(d,J＝242.2Hz),154.23(d,J＝ 12.1Hz),149.84,128.78(d,J＝1.9Hz),128.09,121.16,120.85(d,J＝9.9Hz), 111.61(d,J＝24.9Hz),111.39,107.46(d,J＝23.7Hz),65.90,55.68,52.21,38.20.
实施例16：化合物Ip(R1＝4-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(7-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Ip。1HNMR(400MHz, CDCl3)δ7.95(d,J＝8.3Hz,2H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.25–7.22(m,1H), 7.16–7.11(m,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,2H),4.81–4.77(m,1H),3.75–3.73(m, 4H),3.27–3.22(m,2H),2.67(d,J＝6.0Hz,2H),2.51–2.47(m,4H).13CNMR (101MHz,CDCl3)δ168.22,154.40(d,J＝255.1Hz),149.87,142.06(d,J＝13.3Hz), 136.15(d,J＝4.0Hz),128.37,123.78(d,J＝7.0Hz),121.09,116.01(d,J＝4.3Hz), 111.36,110.75(d,J＝18.2Hz),65.93,55.74,52.25,38.26.
实施例17：化合物Iq(R1＝6-OCH3，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(6-甲氧基苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Iq。1HNMR (400MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝8.9Hz,1H),7.74(d,J＝7.8Hz,2H),7.60(s, 1H),7.05(d,J＝8.9Hz,1H),6.69(d,J＝7.8Hz,2H),6.24(t,J＝5.9Hz,1H),3.82 (s,3H),3.61–3.58(m,4H),3.24–3.19(m,2H),2.54–2.52(m,2H),2.44–2.41(m, 4H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.51,156.67,151.10,148.25,135.07, 128.25,122.23,120.34,115.05,111.83,104.87,66.14,56.92,55.63,53.37,39.65.
实施例18：化合物Ir(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料氯乙酰氯替换为氯丙酰氯，参照实施例5与实施例9 的实验方法得到黄色固体化合物Ir。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.1 Hz,1H),7.91(d,J＝8.7Hz,2H),7.84(d,J＝7.7Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32 –7.28(m,1H),6.63(d,J＝8.7Hz,2H),5.28(t,J＝4.8Hz,1H),3.76(t,J＝4.6Hz, 4H),3.30–3.26(m,2H),2.56–2.41(m,6H),1.86–1.79(m,2H).13CNMR(101 MHz,CDCl3)δ167.75,153.29,149.96,133.44,128.09,124.95,123.18,121.23, 121.18,120.32,111.13,66.07,56.61,52.73,42.04,23.98.
实施例19：化合物Is(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料氯乙酰氯替换为氯丙酰氯，原料哌啶替换为1-(2-羟乙 基)哌嗪，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Is。1HNMR (400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.90(d,J＝8.7Hz,2H),7.84(d,J＝7.8 Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m,1H),6.63(d,J＝8.7Hz,2H),5.41– 5.37(m,1H),3.64(t,J＝5.4Hz,2H),3.28(t,J＝6.3Hz,2H),2.71–2.39(m,12H), 1.87–1.79(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.78,153.33,150.05,133.46, 128.10,124.95,123.18,121.24,121.15,120.31,111.14,58.20,56.68,56.19,52.22, 51.97,42.18,24.23.
实施例20：化合物It(R1＝H，R2＝CH3，R3＝)的合成
将化合物Ij(200mg，0.59mmol)溶于DMF(4mL)中，加入碳酸钾(160mg， 1.18mmol)和碘甲烷(92mg，0.65mmol)，常温搅拌6h。加水，用乙酸乙酯萃 取，饱和食盐水洗涤、分液、无水硫酸钠干燥、过滤、除去溶剂，所得粗品经硅 胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到180mg白色固体产物It。1HNMR (400MHz,CDCl3)δ7.99–7.95(m,3H),7.83(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m, 1H),7.31–7.27(m,1H),6.72(d,J＝8.5Hz,2H),3.71(t,J＝4.6Hz,4H),3.53(t,J ＝7.3Hz,2H),3.02(s,3H),2.54(t,J＝7.3Hz,2H),2.49(t,J＝4.6Hz,4H).13CNMR (101MHz,CDCl3)δ167.59,153.35,149.87,133.46,127.95,124.94,123.15,121.21, 120.31,120.27,110.41,65.92,54.19,53.01,48.81,37.66.
实施例21：抗MERS-CoV假病毒侵入活性筛选(假病毒-细胞水平模型)
材料：本发明所述部分化合物
1.1测试原理：以Huh7细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测试样品阻 断MERS-CoV膜蛋白修饰HIV假病毒感染细胞的活性，该活性可反应样品干预 MERS-CoV感染关键靶点的抗病毒活性。检测指标为假病毒基因组上报告基因 活性水平。
1.3测试方法：Huh7细胞提前一天接种于96孔培养板，分别设活性板和细 胞毒性板，置37℃，5％CO2培养。活性测定板和细胞毒性测定板按同样加样方 式，加入不同稀释浓度的样品和MERS-CoV假病毒悬液，设病毒对照、细胞对 照和样品对照。继续培养3天后，细胞毒性板采用MTT法测定细胞存活率。活 性板吸去培养液后加入100μL每孔细胞裂解液，震荡裂解5分钟后，每孔再加 入100μL的Luciferase反应检测液，震荡孵育5分钟后测定化学发光值。
1.4评价方法：细胞毒性(MTT法)：通过比较病毒对照、细胞对照和样品 对照的OD值，计算细胞的存活率，并进一步计算样品的细胞毒作用。假病毒感 染率：以细胞对照组读值为本底，将病毒对照和样品对照的化学发光值扣除本底 后，计算相对病毒对照孔的相对感染率，进而计算样品对病毒感染细胞的保护活 性。
本发明提供结构通式(I)化合物对MERS-CoV假病毒IC50测试以及Huh7 细胞CC50测试(见表1)。
实施例22：对新冠病毒(SARS-CoV-2)病毒刺突蛋白抑制活性筛选(假病 毒-细胞水平模型)
2.1材料：本发明所述部分化合物
2.2测试原理：以Huh7细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测试样品阻 断SARS-CoV-2病毒的刺突蛋白(S蛋白)修饰HIV假病毒感染Huh7细胞的活 性，该抑制活性可反应样品干预SARS-CoV-2病毒感染关键靶点的活性。检测指 标为报告基因萤火虫荧光素酶Luciferase活性水平。
2.3测试方法：Huh7细胞提前一天铺种于96孔培养板，分别设活性测定板 和细胞毒性测定板，置于37℃培养箱，5％CO2培养。活性测定板和细胞毒性测 定板按同样加样方式，加入不同稀释浓度的样品和SARS-CoV-2病毒S蛋白修饰 假病毒悬液，设病毒对照、细胞对照和样品对照。继续培养3天后，细胞毒性测 定板采用MTT法测定细胞存活率。活性测定板吸去细胞培养液后每孔加入100 μL细胞裂解液，震荡裂解5分钟后，每孔再加入100μL的Luciferase反应检测 液，震荡孵育5分钟后测定化学发光值。
2.4评价方法：细胞毒性(MTT法)：通过比较病毒对照、细胞对照和样品 对照的OD值，计算细胞的存活率，并进一步计算样品的细胞毒作用。假病毒 感染率：以细胞对照组读值为本底，将病毒对照和样品对照的化学发光值扣除本 底后，计算相对病毒对照孔的相对感染率，进而计算样品对病毒感染细胞的保护 活性。
本发明提供所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物Ii、Ij、Ik、Il、Ir对MERS-CoV假病毒IC50测试以及Huh7细胞CC50测试(见表2)。
本发明提供的系列化合物对MERS-CoV抑制活性如表1所示
表1
本发明的化合物对MERS-CoV表现出很好的抑制活性，其中Ik、Il化合物 对MERS-CoV抑制活性IC50达到了0.01μM，表现出优异的抗MERS-CoV活性。
本发明提供的系列化合物对新冠病毒(SARS-CoV-2)抑制活性数据如表2 所示。
表2
化合物
IC<sub>50</sub>:μM
CC<sub>50</sub>:μM
化合物
IC<sub>50</sub>:μM
CC<sub>50</sub>:μM
Ii
<0.41
11.7
Ij
<0.41
34.4
Ik
<0.41
4.5
Il
<0.41
5.2
Ir
<0.41
>100
本发明的部分化合物对SARS-CoV-2也表现出优异的抑制活性。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围 下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的 权利要求书为保护范围。
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