一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA浓度检测方法
阅读说明：本技术 一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA浓度检测方法 (Gate electrode modification method, gate-controlled graphene transistor biosensor and miRNA concentration detection method ) 是由 何汉平 罗极 戈芷琪 曹磊 常钢 张修华 王升富 于 2021-08-17 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA浓度检测方法。该栅电极修饰方法,包括以下步骤：将壳聚糖加入至链霉亲和素溶液中,得到第一混合物；将第一混合物滴加至栅电极上,然后滴加HP-2核酸溶液培育后得到HP-2修饰栅电极；将目标物miRNA141和ST/HP-1杂交核酸混合后,再加入T7核酸外切酶处理后得到第二混合物；将第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极上。本发明的栅电极修饰方法,将第二混合物滴于HP-2修饰栅电极上,溶液中的单链被HP-2修饰电极捕获,形成第二混合物修饰电极。在酶切循环中,T7核酸外切酶(T7exo)可以实现对miRNA-141的替换与放大。(The invention provides a gate electrode modification method, a gate-controlled graphene transistor biosensor and a miRNA concentration detection method. The gate electrode modification method comprises the following steps: adding chitosan into a streptavidin solution to obtain a first mixture; dropwise adding the first mixture onto a gate electrode, and then dropwise adding an HP-2 nucleic acid solution for cultivation to obtain an HP-2 modified gate electrode; mixing target miRNA141 and ST/HP-1 hybrid nucleic acid, and then adding T7 exonuclease for treatment to obtain a second mixture; the second mixture was added dropwise onto the HP-2 modified gate electrode. The gate electrode modification method of the invention is characterized in that the second mixture is dripped on the HP-2 modified gate electrode, and the single chain in the solution is captured by the HP-2 modified electrode to form the second mixture modified electrode. In the enzyme cutting cycle, T7 exonuclease (T7exo) can realize the replacement and amplification of miRNA-141.)
技术领域
本发明涉及化学检测及生物传感技术领域，尤其涉及一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA-141浓度检测方法。
背景技术
高度稳定的血液循环微RNA(miRNA)成为最有希望和微创的癌症生物标记物，且广泛存在于动物、植物和微生物中。有如下两个特点：1)短的非编码内源性RNA分子(通常是19-22个核苷酸)；2)可以在转录后水平调控特定基因的表达(主要是通过互补结合抑制或降解信使RNA(mRNA)而在转录后水平上起调节子的作用)。并且它们的异常表达经常在帕金森氏病、重度抑郁、中风和各种癌症等疾病中观察到。包括miRNA-141，miRNA-200b和miRNA-375等在内的一系列miRNA已被认为是识别PCa患者的潜在生物标记物，所以开发出对miRNA的灵敏检测的传感器是科研工作者的重要目标。
用于检测miRNA的传统分析方法包括Northern杂交、基于微阵列的杂交技术和定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)等。然而，这些方法存在诸如高成本、繁琐的设计、耗时且费力的过程等限制。所以需要开发一种灵敏可靠的方法来对PCa进行早期诊断。由于晶体管自身具备放大功能，可通过晶体管来检测，目前溶液栅晶体管传感主要都是通过分析物与沟道的作用来进行检测，这样沟道修饰比较复杂，使得器件的稳定性不好。
基于此有必要对现有的检测miRNA的方法进行改进。
发明内容
有鉴于此，本发明提出了一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA-141浓度检测方法。
第一方面，本发明提供了一种栅电极修饰方法，包括以下步骤：
提供一栅电极；
将壳聚糖加入至链霉亲和素溶液中，得到第一混合物；
将第一混合物滴加至栅电极上，然后滴加HP-2核酸溶液培育后得到HP-2修饰栅电极；
配制ST/HP-1杂交核酸，然后将目标物miRNA141和ST/HP-1杂交核酸混合，再加入T7核酸外切酶，最后进行酶失活处理得到第二混合物；
将第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极上得到第二混合物修饰电极；
其中，HP-2核酸的基因序列如SEQ ID NO:1所示；
ST核酸的基因序列如SEQ ID NO:2所示；
HP-1核酸的基因序列如SEQ ID NO:3所示。
优选的是，所述的栅电极修饰方法，将第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极上之后还包括：
将环状DNA溶液和HP-3核酸溶液混合得到第三混合物，将第三混合物滴加至第二混合物修饰栅电极上培育，再置于滚环扩增混合液中进行滚环扩增，最后置于血红素溶液中浸泡；
其中，环状DNA的基因序列如SEQ ID NO:4所示；
HP-3核酸的基因序列如SEQ ID NO:5所示。
优选的是，所述的栅电极修饰方法，所述链霉亲和素溶液的浓度为0.1～0.2mg/mL，第一混合物中壳聚糖的质量浓度为1～3％；
所述栅电极为玻碳电极；
所述HP-2核酸溶液的浓度为4～6μM；
ST/HP-1杂交核酸具体为：将ST核酸溶液与HP-1核酸溶液混合，于90～100℃下退火3～7min，然后加入核酸外切酶I，于70～80℃下保持5～15min进行酶失活处理，ST核酸溶液与HP-1核酸溶液的浓度均为90～110nM。
优选的是，所述的栅电极修饰方法，所述滚环扩增混合液包括Phi29聚合酶、10xPhi29聚合酶缓冲液和dNTPs；
所述环状DNA溶液的浓度为1～2μM；
所述HP-3核酸溶液的浓度为4～6μmol/L；
所述血红素溶液的配制方法为：将血红素加入至二甲亚砜水溶液中，所述血红素的浓度为8～12μM。
第二方面，本发明还提供了一种栅控石墨烯晶体管生物传感器，包括所述的方法修饰得到的栅电极。
优选的是，所述的栅控石墨烯晶体管生物传感器，还包括基底，所述基底上设有源极和漏极，所述基底位于所述源极和所述漏极之间形成沟道，所述沟道上设有石墨烯。
优选的是，所述的栅控石墨烯晶体管生物传感器，所述源极和漏极的材料均为Cr/Au。
优选的是，所述的栅控石墨烯晶体管生物传感器，通过湿法转移法将石墨烯转移至沟通上。
优选的是，所述的栅控石墨烯晶体管生物传感器，所述基底为玻璃基底。
第三方面，本发明还提供了一种miRNA浓度检测方法，包括以下步骤：将权利要求5～9任一所述的栅控石墨烯晶体管生物传感浸入PBS溶液中，加入H2O2以及miRNA，在固定的源极和漏极之间的电压下，改变栅电极的电压，测量沟道电流。
本发明的一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA-141浓度检测方法相对于现有技术具有以下有益效果：
(1)本发明的栅电极修饰方法，将目标物miRNA141和ST/HP-1杂交核酸混合，再加入T7核酸外切酶，在该酶切循环中，T7核酸外切酶(T7 exo)可以实现对miRNA-141的替换与放大；
(2)本发明的栅电极修饰方法，在滚环扩增中，Phi 29聚合酶可以实现DNA的成倍扩增，在双重放大的辅助下，我们实现了对目标物miRNA-141的高灵敏度，宽线性范围(25fM至25nM)的检测；
(3)本发明的栅控石墨烯晶体管生物传感器，包括修饰的栅电极，其为miRNA等低浓度分析物的检测提供了一种可行性技术平台，在作为前列腺癌的床旁检测工具中有一定的潜力。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的栅控石墨烯晶体管生物传感器的结构示意图；
图2为本发明的栅电极在不同修饰下的转移曲线；
图3为本发明的栅控石墨烯晶体管生物传感器的IDS响应曲线；
图4为本发明的不同核酸的电泳图；
图5为本发明的栅控石墨烯晶体管生物传感器在不同miRNA-141浓度下的电流时间曲线图；
图6为ΔIDS与miRNA-141浓度的线性关系图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
本申请实施例提供了一种栅电极修饰方法，包括以下步骤：
S1、提供一栅电极；
S2、将壳聚糖加入至链霉亲和素溶液中，得到第一混合物；
S3、将第一混合物滴加至栅电极上，然后滴加HP-2核酸溶液培育后得到HP-2修饰栅电极；
S4、配制ST/HP-1杂交核酸，然后将目标物miRNA141和ST/HP-1杂交核酸混合，再加入T7核酸外切酶，最后进行酶失活处理得到第二混合物；
S5、将第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极上得到第二混合物修饰电极；
其中，HP-2核酸的基因序列如SEQ ID NO:1所示；
ST核酸的基因序列如SEQ ID NO:2所示；
HP-1核酸的基因序列如SEQ ID NO:3所示。
需要说明的是，本申请HP-2核酸的基因序列为5’-TTTTTACAGTGAGGTCTGT-3’(SEQID NO:1)；ST核酸的基因序列为5’-CATGACATGATATGATCGACAGACCTCACTGT-3’(SEQ ID NO:2)；HP-1核酸的基因序列为5’-CCATCTTTACCAGACAGTGAGGTCTGT-3’(SEQ ID NO:3)。在本申请实施例中，将目标物miRNA141和ST/HP-1杂交核酸混合，再加入T7核酸外切酶，在该酶切循环中，T7核酸外切酶(T7 exo)可以实现对miRNA-141的替换与放大。
在一些实施例中，将第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极上之后还包括：
将环状DNA溶液和HP-3核酸溶液混合得到第三混合物，将第三混合物滴加至第二混合物修饰栅电极上培育，再置于滚环扩增混合液中进行滚环扩增，最后置于血红素溶液中浸泡；
其中，环状DNA的基因序列如SEQ ID NO:4所示；
HP-3核酸的基因序列如SEQ ID NO:5所示。
具体的，环状DNA的基因序列为5’-GGGAGAAGGACAACGGCTGTAGAGTCTGAGTGTTGTCCTTCTCCCTCAAAAGCCCTTC-3’(SEQ ID NO:4)；HP-3核酸的基因序列为5’-CGATCATATCATGTCATGTTACACAGCTGAGGATAG-3’(SEQ ID NO:5)。
在滚环扩增中，Phi 29聚合酶可以实现DNA的成倍扩增。在双重放大的辅助下，我们实现了对目标物miRNA-141的高灵敏度，宽线性范围(25fM至25nM)的检测。该溶液栅晶体管生物传感的研究为miRNA等低浓度分析物的检测提供了一种可行性技术平台，在作为前列腺癌的床旁检测工具中有一定的潜力。
在一些实施例中，链霉亲和素溶液的浓度为0.1～0.2mg/mL，第一混合物中壳聚糖的质量浓度为1～3％；
栅电极为玻碳电极；
HP-2核酸溶液的浓度为4～6μM；
ST/HP-1杂交核酸的配制方法具体为：将ST核酸溶液与HP-1核酸溶液混合，于90～100℃下退火3～7min，然后加入5μL核酸外切酶I(5U/μL)，于70～80℃下保持5～15min进行酶失活处理放置于冰箱备用，其中ST核酸溶液与HP-1核酸溶液的浓度均为90～110nM。
具体的，在一些实施例中，第二混合物的配制方法具体为：取0.2μL ST/HP-1杂交核酸溶液，1μL RNase抑制剂(2U/μL)，1μL T7核酸外切酶(5U/μL)，1μL 10×T7核酸外切酶缓冲液，5μL不同浓度(25fM，250fM，2.5pM，25pM，250pM，2.5nM，25nM)的miRNA141，以及1.8μL的DEPC水配成10μL的溶液在培养箱(37℃)中培养1h，即为第二混合物。
在第二混合物中，miRNA141存在时，ST/HP-1杂交核酸中的HP-1与miRNA可以更好的杂交，所以ST被miRNA竞争了。而在T7核酸外切酶(T7 exo)存在时，miRNA141/HP-1会被T7核酸外切酶(T7 exo)剪切为miRNA141的单链，单链的miRNA141会再次与ST/HP-1杂交核酸进行竞争，从而进行miRNA141的置换与信号放大。
在一些实施例中，滚环扩增混合液的制备方法为：将2μL的Phi29聚合酶(10U/μL)，6μL的10×Phi29聚合酶缓冲液，5μL dNTPs(10mM)和47μL超纯水混合至60μL。
环状DNA溶液的浓度为1～2μM；
HP-3核酸溶液的浓度为4～6μmol/L；
血红素溶液的配制方法为：将血红素加入至二甲亚砜水溶液中，血红素的浓度为8～12μM，二甲亚砜水溶液的质量浓度为3％。
在本申请实施例中，在滚环扩增中，Phi 29聚合酶可以实现DNA的成倍扩增。在双重放大的辅助下，实现了对目标物miRNA141的高灵敏度，宽线性范围(25fM至25nM)的检测。
在本申请中，Phi 29聚合酶、T7核酸外切酶、核酸外切酶I购买自赛默飞世尔科技(中国)有限公司。dNTPs、RNase抑制剂、10×T7核酸外切酶缓冲液购买自生工生物工程(上海)股份有限公司。
基于同一发明构思，本申请实施例还提供了一种栅控石墨烯晶体管生物传感器，包括上述的方法修饰得到的栅电极4。
在一些实施例中，栅控石墨烯晶体管生物传感器，如图1所示，还包括基底1，基底上设有源极2和漏极3，基底1位于源极2和漏极3之间形成沟道，沟道上设有石墨烯11。
在一些实施例中，源极2和漏极3的材料均为Cr/Au，即本申请实施例中源极2和漏极3均为Cr以及层叠在Cr上的Au，Cr的主要作用是作为粘附层增强基底与金的作用力，增强器件的稳定性。
在一些实施例中，通过湿法转移法将石墨烯转移至沟通上。
在一些实施例中，基底1为玻璃基底。
本申请实施例还提供了上述栅控石墨烯晶体管生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
S1、将玻璃片基底置于乙醇和丙酮中分别进行超声处理，将玻璃片清洗干净，然后用N2吹干备用；
S2、将玻璃片基底放入掩膜板中进行蒸镀形成源极和漏极；
S3、取铜箔石墨烯(即石墨烯是通过CVD生长在铜箔上，购买自先丰纳米有限公司)，并在石墨烯表面旋涂聚甲基丙烯酸甲酯；
S4、将10g硫酸铜、50mL盐酸和50mL水配制成刻蚀液，将铜箔石墨烯置于刻蚀液中刻蚀，以除去铜箔，然后用湿法转移法将石墨烯转移至沟通上，然后除去聚甲基丙烯酸甲酯，即在玻璃片基底的沟道上制备石墨烯。
基于同一发明构思，本申请实施例提供了一种miRNA浓度检测方法，包括以下步骤：将上述的栅控石墨烯晶体管生物传感浸入PBS溶液中，加入H2O2，在固定的源极和漏极之间的电压下，改变栅电极的电压，测量沟道电流。
具体的，将上述修饰的栅电极和石墨烯沟道浸入PBS溶液中形成栅控石墨烯晶体管生物传感，加入H2O2在固定的源极和漏极之间的电压(VDS)和栅电压(VG)，测量沟道电流。需要说明的是，源极和漏极之间的电压为VDS为0.05V，栅电压VG为0.7V。
以下进一步说明本申请的栅电极修饰方法以及栅控石墨烯晶体管生物传感器的制备方法和检测miRNA浓度的方法。
实施例1
本申请实施例提供了一种栅控石墨烯晶体管生物传感器的制备方法包括以下步骤：
S1、提供玻璃基底，按照上述方法在玻璃基底上制备源极和漏极，以及石墨烯；
S2、取玻碳电极作为栅电极，对玻碳电极表面进行打磨，然后用去离子水清洗；
S3、将壳聚糖加入至0.1mg/mL的链霉亲和素溶液中，得到第一混合物，其中，第一混合物中壳聚糖的质量浓度为2％；
S4、取10μL的第一混合物滴加至S2中的玻碳电极表面，使玻碳电极表面自然成膜(即CHIT/SA薄膜，形成CHIT/SA修饰栅电极)，然后再滴加10μL、5μM的HP-2核酸溶液，培养1h后用PBS冲洗得到HP-2修饰栅电极；
S5、配制ST/HP-1杂交核酸，具体为：将ST核酸溶液与HP-1核酸溶液混合，于100℃下退火5min，然后加入5μL核酸外切酶I(5U/μL)，于75℃下保持10min进行酶失活处理放置于冰箱备用，其中ST核酸溶液与HP-1核酸溶液的浓度均为100nM；
S6、将0.2μL ST/HP-1杂交核酸溶液，1μL RNase抑制剂(2U/μL)，1μL T7核酸外切酶(5U/μL)，1μL 10×T7核酸外切酶缓冲液，5μL不同浓度的(具体为25fM，250fM，2.5pM，25pM，250pM，2.5nM，25nM)的miRNA141，以及1.8μL的DEPC水配成10μL的溶液在培养箱(37℃)中培养1h，即为第二混合物；
S7、取10μL第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极表面，于37℃下，培育1h，得到第二混合物修饰栅电极；
S8、将5μL的5μmol/L的HP-3核酸溶液与5μL的1μM的环状DNA溶液混合得到第三混合物，将第三混合物滴加至第二混合物修饰栅电极上，于37℃下培育1h，得到第三混合物修饰栅电极；
S9、将第三混合物修饰栅电极置于滚环扩增混合液中进行滚环扩增；最后浸入50μL、10μM血红素溶液中，于栅电极表面形成G-四链体(即滚环扩增后的修饰电极)；其中，滚环扩增混合液的制备方法为：将2μL的Phi29聚合酶(10U/μL)，6μL的10×Phi29聚合酶缓冲液，5μL dNTPs(10mM)和47μL超纯水混合至60μL。
性能测试
通过数字源表测试该晶体管转移曲线(沟道电流对栅电压曲线图)的方式来对实施例1中制备得到的栅控石墨烯晶体管生物传感器进行表征。
具体的，分别测试玻碳电极(表面没有修饰物，即裸电极)、CHIT/SA修饰电极(即玻碳电极修饰有CHIT/SA薄膜)、HP-2修饰栅电极、第二混合物修饰栅电极、第三混合物修饰栅电极、滚环扩增后的修饰电极的转移曲线。结果如图2所示。测试过程中，将不同修饰物的电极浸入PBS溶液中，加入H2O2；图2中，所用的miRNA141浓度为2.5pM。
图2中1表示玻碳电极(表面没有修饰物，即裸电极)、2表示CHIT/SA修饰电极、3表示HP-2修饰栅电极、4表示第二混合物修饰栅电极、5表示第三混合物修饰栅电极、6表示滚环扩增后的修饰电极。
由于石墨烯特殊的双极性曲线，在曲线的底部会出现狄拉克点(Dirac Point)，狄拉克点所对应的电压记为VCNP(最小电导处对应的栅电压)。当栅电极上有不同的修饰物质时，由于其带电性的不同，VCNP也会随之发生改变。固定沟道电压VDS＝0.05V，以0.05V s-1的扫描速率改变栅电极电压VG，栅电压VG扫描范围为0.1～0.7V。通过图2可以看到，当修饰了SA/CHIT薄膜后，转移曲线的VCNP出现了较大的左移由0.4V偏移至0.36V。接着进行DNA的组装过程中，由于DNA固有的负电荷会在栅电极表面偶极子，降低栅电极的功函数，栅电极与电解质界面的电容会变小，整体曲线会向右移动。HP-2修饰栅电极、第二混合物修饰栅电极、第三混合物修饰栅电极、滚环扩增后的修饰电极出现了持续的右移，分别为：40mV，20mV，15mV，80mV。
栅控石墨烯晶体管生物传感器对miRNA-141的检测
将实施例1中制备得到的生物传感器浸入1×PBS溶液(购买自生工生物工程(上海)股份有限公司)中，在搅拌的状态下加入H2O2。我们通过此装置研究了在不同浓度miRNA141存在时，栅电极的电化学性能的改变。通过半导体参数分析仪，可以得到器件的转移曲线(IDS与VG)和时间相关的沟道电流曲线(IDS与时间)。转移曲线通过以0.01V s-1的扫描速率改变栅极电压(VG＝0.1V-0.7V)在固定的源极-漏极电压(VDS＝0.05V)下工作。根据设备的传输曲线，在固定的VG和VDS(VG＝0.7V和VDS＝0.05V)下测量随时间变化的沟道电流。在随时间变化的沟道电流稳定之后，将H2O2(最终浓度为10-5M)快速添加到烧杯中。
通过组装好的栅电极来进行IDS响应曲线来监测实验的可行性。这里我们采用了两种不同方法组装的栅电极进行研究：1)不存在miRNA-14时的栅电极组装；2)存在miRNA-141时的栅电极组装。
具体的，不存在miRNA-14时的栅电极组装指的是：按照上述实施例1中的方法制备，仅在步骤S6中不加入miRNA141。
存在miRNA-141时的栅电极组装指的是，按照实施例1中的的方法制备，且在步骤S6中加入5μL浓度为2.5pM的miRNA141。
当存在miRNA-141时，滚环产生的大量G-四链体酶会催化H2O2，沟道的电流值也会随之增大。从图3可以看到，当加入10-5M H2O2后，曲线a(对应不存在miRNA-14时的栅电极组装)无明显的沟道电流的响应；而曲线b(对应存在miRNA-141时的栅电极组装)则表现出了明显的沟道电流的响应。实验结果是与我们的推测预想的相一致的。
同时，还采用PAGE胶来分析了酶切循环辅助放大的可行性，如图4所示。泳道a为DNA marker，泳道b至d为ST，HP-1，miRNA-141，从电泳图中可以看到RNA有部分降解。泳道e为ST与HP-1杂交，出现了一条新的泳带。泳道f显示：当目标物miRNA-141，T7核酸外切酶与ST/HP-1同时存在时会由目标物与酶同时作用产生两条新的泳带，其中一条泳带对应于ST单链的泳带，另外一条为新的HP-1/miRNA-141双链的泳带。泳道g显示；当只存在T7核酸外切酶与ST/HP-1时，ST/HP-1的位置不会发生改变。由此我们可以看出，T7 exo辅助的酶切循环是可以进行的。
将不同浓度的miRNA-141用于修饰栅电极，并监测IDS响应曲线，结果如图5所示。图5中a～g依次对应miRNA-141的浓度为25fM、250fM、2.5pM、25pM、250pM、2.5nM、25nM。
从图5中可以看出，由不同浓度的miRNA-141组装的栅电极在加入H2O2后，沟道的电流值均出现了不同程度的增大。
图6展示了ΔIDS(即加入H2O2前后的稳定电流值的)与不同浓度miRNA-141的关系曲线，并总结了不同浓度的miRNA-141多次的ΔIDS响应值。在25fM至25nM的浓度范围内，沟道电流变化高达90μA，这说明该器件具有极高的灵敏度，而且ΔIDS与miRNA-141浓度的对数呈现了良好的线性关系，线性方程为：ΔIDS＝10.4lgC+14.94，R2＝0.9979。
上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 湖北大学
<120> 一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA浓度检测方法
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tttttacagt gaggtctgt 19
<210> 2
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
catgacatga tatgatcgac agacctcact gt 32
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ccatctttac cagacagtga ggtctgt 27
<210> 4
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gggagaagga caacggctgt agagtctgag tgttgtcctt ctccctcaaa agcccttc 58
<210> 5
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cgatcatatc atgtcatgtt acacagctga ggatag 36
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种新型传染性疾病智能防控系统及方法