一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法
阅读说明：本技术 一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法 (Preparation method of toad feeding particles for lung cancer ) 是由 赵荣华 谢春祥 蒋震 谢永鑫 于 2021-09-17 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法,通过以下步骤制备：称取灵芝、露蜂房、白僵蚕、食馋虫、生黄芪、炒白术、茯苓、灯芯草,混合粉碎,然后将粉碎的药材加入到提取器中,通过压力泵多次加入溶剂,回流提取,最后经减压过滤,将滤液浓缩干燥制备成食蟾虫颗粒。所得食蟾虫颗粒联合长春瑞滨从多种途径抑制非小细胞肺癌细胞的生长增殖以及转移,抑制效果提高；副作用低,有效改善单独使用长春瑞滨所带来的便秘等副作用；利用本发明的提取器可使所用药材提取充分、提取率高,操作简便。(The invention discloses a preparation method of toad feeding particles for lung cancer, which comprises the following steps: weighing Ganoderma, nidus Vespae, Bombyx Batryticatus, greedy worm, radix astragali, parched Atractylodis rhizoma, Poria and medulla Junci, mixing, pulverizing, adding the pulverized medicinal materials into an extractor, adding solvent multiple times by pressure pump, reflux extracting, filtering under reduced pressure, concentrating the filtrate, and drying to obtain Bufonis worm granule. The obtained toad feeding particles and vinorelbine can inhibit the growth, proliferation and transfer of non-small cell lung cancer cells in various ways, and the inhibition effect is improved; the side effect is low, and the side effects of constipation and the like caused by singly using the vinorelbine are effectively improved; the extractor of the invention can be used to fully extract the used medicinal materials, has high extraction rate and simple and convenient operation.)
技术领域
本发明涉及食蟾虫加工领域，特别是涉及一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法。
背景技术
原发性支气管肺癌简称肺癌，为常见恶性肿瘤之一，占据世界癌症死亡原因的首位。肺癌发病主要受环境污染的恶化、吸烟人群的增加以及遗传效应、辐射放射、特定职业等因素的影响，正呈现逐年大幅度上升趋势。肺癌多原发于支气管或支气管的粘膜上皮细胞，占肺实质肿瘤的九成以上。非小细胞肺癌（NSCLC）占肺癌总数的85%以上，最近几十年来，尽管在诊断和治疗技术已经大大改善，NSCLC的不良预后仍然导致病人生存率低于5年。西医治疗非小细胞肺癌后产生细胞毒性或耐药性及其它不良反应等使肺癌患者最终的治疗预后仍不理想。因此，为了提高肺癌患者的生存率，新的治疗策略或者治疗药物的出现就显得尤为重要。
中药治疗是其中的一种治疗策略，然而，由于众多中草药中药物的活性成分的极性不同，传统的中药提取往往会提取不完全，造成药材资源的浪费。
发明内容
针对上述情况，本发明之目的在于提供一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法，通过将灵芝、露蜂房、白僵蚕、食馋虫、生黄芪、炒白术、茯苓、灯芯草药混合，利用压强差，改变溶剂极性将其中的活性成分充分释放，最终制得食蟾虫颗粒，所制备的食蟾虫颗粒联合西药长春瑞滨用于治疗非小细胞肺癌，效果显著，副作用低。
其解决的技术方案是：
一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法，由以下步骤制备：S1，按比例称取灵芝、露蜂房、白僵蚕、食馋虫、生黄芪、炒白术、茯苓、灯芯草药备用；S2，将S1中原料混合粉碎，加入到提取器中，然后打开压力泵加入溶剂浸泡1-2h，得药材浸泡液；S3，将药材浸泡液回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣；S4，按照压入溶剂，回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣的步骤操作多次，利用压强差溶剂的极性将S1中所述的草药中不同极性的活性成分充分释放；S5将步骤S3和S4得到的滤液收集，浓缩，喷雾干燥，过80-100目筛，得到药物提取粉末；S6，将步骤S5得到的药物提取粉末加入糊精，混合均匀后制粒，滴入乙醇润湿剂，混匀后得到湿颗粒，干燥，得食蟾虫颗粒。
进一步的，所述S1中灵芝:露蜂房:白僵蚕:食蟾虫:向日葵多糖:生黄芪:炒白术:茯苓:灯芯草的比例为：6-10份:9-12份:8-10份:23-35份:0.05-0.1份:15-25份:10-15份:10-23份:8-13份。
进一步的，步骤S2和S3中压入溶剂提取的具体操作为：压入溶剂的量为原料药总质量的6-10倍，每次回流提取时间为60-90min。
进一步的，步骤S5中浓缩至一半体积时加入向日葵多糖。
进一步的，步骤S6中药物提取粉末与糊精的质量比为1:2，乙醇润湿剂中乙醇浓度为60%。
进一步的，所述的向日葵多糖由以下方法提取：（1）取向日葵茎芯，于45℃下干燥除水，粉碎后过80目筛，得向日葵粉末；（2）加入20倍的95%的乙醇回流提取3-4次后，再次用80%的乙醇回流提取3-4次，除去残留的乙醇和水，得向日葵渣；（3）加入20倍的超纯水，90℃下浸提两次，每次浸提4h，过滤，收集滤液，浓缩至100mL，再加入80%乙醇400mL，静置24h，5000rpm离心20min，将沉淀烘干去除水分，得向日葵粗多糖；（4）加入15倍的超纯水将向日葵粗多糖溶解，加入20%体积的Sevag试剂（正丁醇∶三氯甲烷=1∶４），匀速振摇30min，静置5min，取上清液，反复多次，直到不再析出乳白色的变性蛋白质，得向日葵多糖。
进一步的，所述的食蟾虫由以下方法获得：（1）用清水清洗活体蟾蜍，然后将蟾蜍放入混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，50-60℃干躁10-14h除去水份，得食蟾虫；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水25-30千克，水温保持在26-28℃。
进一步的，所述的提取器包括物料桶，物料桶顶部设有进料口，物料桶顶部覆盖有回流装置，物料桶底部设有搅拌装置和控温加热装置，物料桶底部下方设有集液箱，物料桶与集液箱通过固液过滤器连接，固液过滤器上设有止通阀，集液箱底部设有出液口，集液箱的顶部设有出气口，出气口连接减压装置，物料桶的进料口处设有导管，导管一端伸入进料口，导管的另一端连接有溶剂箱，导管上设有压力泵，溶剂箱内设有第一溶剂箱和第二溶剂箱，第一溶剂箱和第二溶剂箱高度相同，第二溶剂箱体积是第一溶剂箱的2倍，导管伸入第一溶剂箱下部，第一溶剂箱的顶部方连通第二溶剂箱底部，第二溶剂箱顶部设有进液口。
进一步的，提取器工作前，第一溶剂箱内的溶剂为去离子水，第二溶剂箱内的溶剂为乙醇。
进一步的，所述的食蟾虫颗粒联合长春瑞滨共同使用对抵抗非小细胞肺癌细胞具有协同增强的作用。
蟾蜍味辛性凉，有小毒，能够攻毒杀虫，定痛，消水肿，破癥瘕，对癌细胞增殖具有抑制功效；五谷虫味咸性寒，归脾、胃经，清热解毒，消积滞，毒性微小，以蟾蜍为食物养殖五谷虫所得的食蟾虫既具有蟾蜍和五谷虫的双重功效，又可以减少蟾蜍本身所带来的毒副作用。
灵芝味甘苦，性凉，具有清热解毒，理气止痛，止咳平喘的功效；白僵蚕味辛咸，性平，归肝、肺经，能够祛风解痉，息风止痛，化痰散结；露蜂房性平味甘，归胃经，具有杀虫、攻毒、消肿止痛的功效；生黄芪性甘温，归肺、脾经，具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效；白术味甘辛性温，入心、脾、胃、肾、三焦之经，能够除湿消食，益气强阴，尤利腰脐之气；茯苓味甘淡性平，归心、肺、脾、肾经，具有利水渗湿，健脾，宁心的功效，灯芯草可以清心降火、利尿通淋。本申请以灵芝、白僵蚕、露蜂房、食蟾虫联合补气养阴，脾为后天之本，气血生化之源，且脾土生肺金，肺气充沛与否，赖于脾之运化水谷精微功能是否正常，以黄芪、白术、茯苓、灯芯草补益肺脾，可有效缓解肺癌引起的一系列脾肺劳损。
从现代中药理论上，本申请采用灵芝、白僵蚕、露蜂房、食蟾虫通过干扰糖酵解反应过程中的关键酶与蛋白的基因、蛋白表达的活性使A549的产能方式受到影响，进而A549的增殖受到阻碍，促使细胞发生凋亡，改善肺癌瘤体生长；向日葵中含有黄酮类化合物、萜类化合物、酚类化合物有机化合物、多糖等组分，通过抑制TNF-α的含量，发挥抗炎作用，间接的抑制了肺癌肿瘤细胞的增殖，同时减少肺癌肿瘤细胞的迁移；同时以黄芪、白术、茯苓、灯芯草促进的免疫功能的增强，提高抗肿瘤活性。联合长春瑞滨，对治疗非小细胞肺癌的效果相对于单独使用长春瑞滨大大提高，二者联用，从多种途径抑制非小细胞肺癌细胞的生长增殖以及转移，同时可有效降低单独使用长春瑞滨所带来的便秘等副作用。
由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
1.本发明的一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法，利用压强差改变乙醇和水混合溶剂的极性将灵芝、露蜂房、白僵蚕、食馋虫、生黄芪、炒白术、茯苓、灯芯草药中不同极性的活性成分充分释放，提取效率好，操作简便；
2.通过本发明的一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法制备的食蟾虫颗粒与长春瑞滨联合使用从多种途径抑制非小细胞肺癌细胞的生长增殖以及转移，抑制效果提高；
3.通过本发明的一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法所制备的食蟾虫颗粒与长春瑞滨联合使用，整体副作用低，同时有效改善单独使用长春瑞滨所带来的便秘等副作用。
附图说明
图1为本发明提取器结构图。
具体实施方式
有关本发明的前述及其他技术内容、特点与功效，在以下配合参考附图1对实施例的详细说明中，将可清楚的呈现。以下实施例中所提到的结构内容，均是以说明书附图为参考。
实施例1
一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法，由以下步骤制备：S1，按比例称取灵芝、露蜂房、白僵蚕、食馋虫、生黄芪、炒白术、茯苓、灯芯草备用；S2，将S1中原料药混合粉碎，加入到提取器的物料桶中，然后打开压力泵加入溶剂浸泡1h，得药材浸泡液；S3，将药材浸泡液回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣；S4，按照压入溶剂，回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣的步骤操作3次，利用压强差溶剂的极性将S1中所述的草药中不同极性的活性成分充分释放；S5将步骤S3和S4得到的滤液收集，浓缩，喷雾干燥，过80目筛，得到药物提取粉末；S6，将步骤S5得到的药物提取粉末加入糊精，混合均匀后制粒，滴入乙醇润湿剂，混匀后得到湿颗粒，干燥，得一种食蟾虫颗粒。
所述S1中灵芝6份、露蜂房9份、白僵蚕8份、食蟾虫23份、向日葵多糖0.05份、生黄芪15份、炒白术10份、茯苓10份、灯芯草8份。
步骤S2和S3中压入溶剂提取的具体操作为：压入溶剂的量为原料药总质量的6倍，每次回流提取时间为60min。
步骤S5中浓缩至一半体积时加入向日葵多糖。
步骤S6中药物提取粉末与糊精的质量比为1:2，乙醇润湿剂中乙醇浓度为60%。
所述的向日葵多糖由以下方法提取：（1）取向日葵茎芯1kg，于45℃下干燥除水，粉碎后过80目筛，得向日葵粉末；（2）加入20倍的95%的乙醇回流提取3次后，再次用80%的乙醇回流提取3次，除去残留的乙醇和水，得向日葵渣；（3）加入20倍的超纯水，90℃下浸提两次，每次浸提4h，过滤，收集滤液，浓缩至100mL，再加入80%乙醇400mL，静置24h，5000rpm离心20min，将沉淀烘干去除水分，得向日葵粗多糖；（4）加入15倍的超纯水将向日葵粗多糖溶解，加入20%体积的Sevag试剂（正丁醇∶三氯甲烷=1∶４），匀速振摇30min，静置5min，取上清液，反复多次，直到不再析出乳白色的变性蛋白质，得向日葵多糖。
所述的食蟾虫由以下方法获得：（1）用清水清洗活体蟾蜍1kg，然后将蟾蜍放入10倍的混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，50℃干躁10h除去水份，得食蟾虫；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水25千克，水温保持在26℃。
如图1所示，所述的提取器包括物料桶1，物料桶1顶部设有进料口3，物料桶1顶部覆盖有回流装置2，物料桶1底部设有搅拌装置4和控温加热装置5，物料桶1底部下方设有集液箱7，物料桶1与集液箱7通过固液过滤器4连接，固液过滤器4上设有止通阀6，集液箱7底部设有出液口9，集液箱7的顶部设有出气口8，出气口8连接减压装置，物料桶1的进料口3处设有导管10，导管10一端伸入进料口3，导管10的另一端连接有溶剂箱，导管上设有压力泵11，溶剂箱内设有第一溶剂箱12和第二溶剂箱13，第一溶剂箱12和第二溶剂箱13高度相同，第二溶剂箱13体积是第一溶剂箱12的2倍，导管10伸入第一溶剂箱12下部，第一溶剂箱12的顶部方连通第二溶剂箱13底部，第二溶剂箱12顶部设有进液口14。
提取器工作前，第一溶剂箱12内的溶剂为去离子水，第二溶剂箱13内的溶剂为乙醇。
实施例2
一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法，由以下骤制备：S1，按比例称取灵芝、露蜂房、白僵蚕、食馋虫、生黄芪、炒白术、茯苓、灯芯草备用；S2，将S1中原料药混合粉碎，加入到提取器的物料桶中，然后打开压力泵加入溶剂浸泡1.5h，得药材浸泡液；S3，将药材浸泡液回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣；S4，按照压入溶剂，回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣的步骤操作4次，利用压强差溶剂的极性将S1中所述的草药中不同极性的活性成分充分释放；S5将步骤S3和S4得到的滤液收集，浓缩，喷雾干燥，过80目筛，得到药物提取粉末；S6，将步骤S5得到的药物提取粉末加入糊精，混合均匀后制粒，滴入乙醇润湿剂，混匀后得到湿颗粒，干燥，得一种食蟾虫颗粒。
所述S1中灵芝8份、露蜂房10份、白僵蚕9份、食蟾虫24份、向日葵多糖0.08份、生黄芪20份、炒白术12份、茯苓16份、灯芯草10份。
步骤S2和S3中压入溶剂提取的具体操作为：压入溶剂的量为原料药总质量的8倍，每次回流提取时间为75min。
步骤S5中浓缩至一半体积时加入向日葵多糖。
步骤S6中药物提取粉末与糊精的质量比为1:2，乙醇润湿剂中乙醇浓度为60%。
所述的向日葵多糖由以下方法提取：（1）取向日葵茎芯1.2kg，于45℃下干燥除水，粉碎后过80目筛，得向日葵粉末；（2）加入20倍的95%的乙醇回流提取3次后，再次用80%的乙醇回流提取3次，除去残留的乙醇和水，得向日葵渣；（3）加入20倍的超纯水，90℃下浸提两次，每次浸提4h，过滤，收集滤液，浓缩至100mL，再加入80%乙醇400mL，静置24h，5000rpm离心20min，将沉淀烘干去除水分，得向日葵粗多糖；（4）加入15倍的超纯水将向日葵粗多糖溶解，加入20%体积的Sevag试剂（正丁醇∶三氯甲烷=1∶４），匀速振摇30min，静置5min，取上清液，反复多次，直到不再析出乳白色的变性蛋白质，得向日葵多糖。
所述的食蟾虫由以下方法获得：（1）用清水清洗活体蟾蜍1.2kg，然后将蟾蜍放入10倍的混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，55℃干躁12h除去水份，得食蟾虫；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水28千克，水温保持在27℃
提取器工作前，第一溶剂箱内的溶剂为去离子水，第二溶剂箱内的溶剂为乙醇。
实施例3
一种涉及肺癌的食蟾虫颗粒的制备方法，由以下步骤制备：S1，按比例称取灵芝、露蜂房、白僵蚕、食馋虫、生黄芪、炒白术、茯苓、灯芯草备用；S2，将S1中原料药混合粉碎，加入到提取器的物料桶中，然后打开压力泵加入溶剂浸泡2h，得药材浸泡液；S3，将药材浸泡液回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣；S4，按照压入溶剂，回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣的步骤操作5次，利用压强差溶剂的极性将S1中所述的草药中不同极性的活性成分充分释放；S5将步骤S3和S4得到的滤液收集，浓缩，喷雾干燥，过100目筛，得到药物提取粉末；S6，将步骤S5得到的药物提取粉末加入糊精，混合均匀后制粒，滴入乙醇润湿剂，混匀后得到湿颗粒，干燥，得一种食蟾虫颗粒。
所述S1中灵芝10份、露蜂房12份、白僵蚕10份、食蟾虫35份、向日葵多糖0.1份、生黄芪25份、炒白术15份、茯苓23份、灯芯草13份。
步骤S2和S3中压入溶剂提取的具体操作为：压入溶剂的量为原料药总质量的10倍，每次回流提取时间为90min。
步骤S5中浓缩至一半体积时加入向日葵多糖。
步骤S6中药物提取粉末与糊精的质量比为1:2，乙醇润湿剂中乙醇浓度为60%。
所述的向日葵多糖由以下方法提取：（1）取向日葵茎芯1.3kg，于45℃下干燥除水，粉碎后过80目筛，得向日葵粉末；（2）加入20倍的95%的乙醇回流提取4次后，再次用80%的乙醇回流提取4次，除去残留的乙醇和水，得向日葵渣；（3）加入20倍的超纯水，90℃下浸提两次，每次浸提4h，过滤，收集滤液，浓缩至100mL，再加入80%乙醇400mL，静置24h，5000rpm离心20min，将沉淀烘干去除水分，得向日葵粗多糖；（4）加入15倍的超纯水将向日葵粗多糖溶解，加入20%体积的Sevag试剂（正丁醇∶三氯甲烷=1∶４），匀速振摇30min，静置5min，取上清液，反复多次，直到不再析出乳白色的变性蛋白质，得向日葵多糖。
所述的食蟾虫由以下方法获得：（1）用清水清洗活体蟾蜍1.3kg，然后将蟾蜍放入10倍的混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，60℃干躁14h除去水份，得食蟾虫；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水30千克，水温保持在28℃。
提取器工作前，第一溶剂箱内的溶剂为去离子水，第二溶剂箱内的溶剂为乙醇。
对比例1
S1，称取灵芝30份，干蟾皮30份，露蜂房15份，白僵蚕15份备用；S2，将灵芝、露蜂房、白僵蚕、干蟾皮混合粉碎加入到提取器中，然后打开压力泵加入溶剂浸泡1h，得药材浸泡液；S3，将药材浸泡液回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣；S4，按照压入溶剂，回流提取，减压过滤，得滤液和滤渣的步骤操作3次；S5将步骤S3和S4得到的滤液收集，浓缩，喷雾干燥，过80目筛，得到药物提取粉末；S6，将步骤S5得到的药物提取粉末加入糊精，混合均匀后制粒，滴入乙醇润湿剂，混匀后得到湿颗粒，干燥，得中药颗粒。
对比例2
将实施例1中提取器的第二溶剂箱内的溶剂由乙醇替换成去离子水，其余步骤不变，得中药颗粒。
对比例3
将实施例1中所述的食蟾虫颗粒的制备过程中添加向日葵多糖的操作去掉，得中药颗粒。
试验例1
对A549细胞株的增殖抑制效果：
(1)人肺癌细胞(A549)的培养和处理：人肺癌细胞(A549)培养于含10％胎牛血清和1％双抗(100U/mL青霉素、100mg/L链霉素)的DMEM培养液中，37℃，5％CO2培养箱中传代培养。每周传代2次，0.25％胰蛋白酶消化贴壁细胞，实验用细胞均为对数生长期细胞。(2)MTT法检测不同药物对A549细胞增殖的影响：取对数生长期的人肺癌细胞(A549)，用10％胎牛血清的DMEM培养液调整细胞数为3-5×105个/mL，接种于96孔细胞培养板，每孔200μL，待细胞贴壁70-80％时，吸弃旧培养液。空白组、对照组各组每孔加200μL培养液，药物组每孔分别加入6mg/mL的实施例1制得的食蟾虫颗粒培养液200μL、6mg/mL的对比例1制备的中药颗粒培养液200μL、6mg/mL的对比例2制备的中药颗粒培养液200μL、6mg/mL的对比例3制备的中药颗粒培养液200μL、4mg/mL的实施例1制得的食蟾虫颗粒培养液200μL+2mg/mL的长春瑞滨培养液200μL，每组设5个重复。同样的方法培养48h后，每孔加入20μL MTT(5mg/mL)，继续培养4h，吸弃旧培养液，每孔加入DMSO150μL，37℃低速振荡15min，在490nm处测定吸光度(A值)。细胞生长抑制率按如下公式计算：抑制率＝1-(药物组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)×100％。实验结果如表1：
由表1的实验结果可以看出，相比于对比例1的中药颗粒，本申请制备的食蟾虫颗粒对人肺癌A549细胞的体外增殖有显著抑制作用，从对比例2可以看出，采用本申请的提取器提取的药材对增殖抑制作用显著增强；向日葵多糖的加入有助于将提升对 A549细胞增殖的抑制率；将食蟾虫颗粒与长春瑞滨联合使用，达到协同增效的抑制作用，抑制率高达95%。
试验例2
对抑制A549细胞裸鼠移植瘤增长的影响：
A549细胞裸鼠移植瘤的接种：饲养BALB/c裸小鼠，鼠龄5-6周，雄性，体重20g左右。采用培养细胞皮下接种移植法。取对数生长期A549 细胞，PBS液冲洗培养瓶2次，加入 0.25％胰酶消化，离心弃上清，加入不含胎牛血清的DMEM培养液10mL，吸管吹打混匀，离弃上清，重复 1次，再加入无血清的DMEM培养液，重悬细胞，调整细胞至约3×107个/mL，按每只200μL接种于裸鼠右前肢腋下皮下。药物对裸鼠肺癌移植瘤的抑制作用：接种2周后肿瘤长出，待肿瘤生长至100-150mm3后，将裸鼠随机分为4组，每组10只：模型对照组 (每2天注射1次生理盐水)、实施例1组(每2天尾静脉给药1次，4mg/kg 实施例1的食蟾虫颗粒)、长春瑞滨组(每2天尾静
脉给药1次，4mg/kg对比例1的中药颗粒)、联合用药组(每2天尾静脉给药1次，2mg/kg实施例1的食蟾虫颗粒+2mg/kg长春瑞滨)，共给药6次。观察给药前后小鼠的排泄情况，每次给药前用游标卡尺测量移植瘤最长径a和最短径 b。实验结束时以脱臼法处死所有裸鼠，取移植瘤用游标卡尺测量肿瘤最长径a和最短径b，并称瘤重。其中，肿瘤体积V＝1/2×a×b2；抑瘤率＝(模型对照组瘤重-用药组瘤重)/模型对照组瘤重×100％，实验结果如表2所示：
由表2的实验结果可以看出，随着时间推移，模型对照组的移植瘤进 行性增大明显，而用药组的移植瘤体积增长相对较慢。12d给药结束后，模型对照组的平均肿瘤体积为(1238.5±114.6)mm3，实施例1组为 (624.3±77.4)mm3，长春瑞滨组为(585.4±54.2)mm3，与此相对，联合用药组仅为(364.1±38.6)mm3。此外，实施例1组、长春瑞滨组和联合用药组的肿瘤抑制率分别为51.9％、40.3％和69.3％，可见联合用药组的肿瘤抑制 率显著高于单药组，这说明食蟾虫颗粒和长春瑞滨的联合用药在抑制人肺癌 A549细胞的增殖方面具有协同增效作用，此外，还观察到联合用药组相比于长春瑞滨单独用药组便秘情况有所改善。
以上所述是结合具体实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明具体实施仅局限于此；对于本发明所属及相关技术领域的技术人员来说，在基于本发明技术方案思路前提下，所作的拓展以及操作方法、数据的替换，都应当落在本发明保护范围之内。
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