一种诱导脐带血中的timp2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法
阅读说明：本技术 一种诱导脐带血中的timp2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法 (Repair and regeneration method for inducing TIMP2 protease and cell lysate in umbilical cord blood ) 是由 孙长林 胡海涛 于 2021-08-23 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法,通过获取细胞裂解液,并将获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合复配,可很好地用于人体组织损伤修复再生,可很好地修复老化损伤的组织和细胞、提升真皮组织和细胞的再生能力；可以修复受损的组织和细胞；可以激活老化组织和细胞的再生能力；效果显著；且技术路线成熟,原料来源广泛、取材容易,成本较低,便于大规模工业化生产。(The invention discloses a method for repairing and regenerating TIMP2 protease in induced umbilical cord blood and cell lysate, which can be well used for repairing and regenerating human tissue damage, well repairing aged and damaged tissues and cells and improving the regeneration capacity of dermal tissues and cells by obtaining the cell lysate and mixing and compounding the obtained cell lysate with TIMP2 protease and NP-40 lysate in the induced umbilical cord blood; damaged tissues and cells can be repaired; can activate regeneration ability of aged tissue and cell; the effect is remarkable; and the technical route is mature, the raw materials are wide in source, the materials are easy to obtain, the cost is lower, and the large-scale industrial production is facilitated.)
技术领域
本发明涉及细胞工程技术领域，具体涉及一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法。
背景技术
随着人们物质生活水平的逐渐提高，吃饱穿暖对人们来说不再是难题，生活的富裕使得人们开始追求更高层面的生活。
细胞是我们人体的基本组成单位，人体衰老的原因就是体内细胞的衰老。随着年龄的增长，人体内细胞增殖和分化能力减弱，新生细胞补充不足，衰老细胞不能及时被替代。细胞的老化促使人体的各生理系统功能下降和衰变，从而导致各种疾病的发生，最终引起死亡。
修复这一概念包含一个前提和三个要素。前提是必须先有细胞或组织的“耗损”，所谓“耗”指的是组织细胞生理性的老化凋亡等消耗，而“损”指的是病理性损伤。三个要素是:
①机体通过免疫、炎症反应对耗损区内坏死、碎屑、异物和病原等进行吸收清除；
②如果损耗的实质细胞有再生能力和适宜条件，则通过邻近存留的同种实质细胞再生进行修补恢复，因为此种修复可完全恢复原有细胞、组织的结构和功能，故称此为再生性修复或完全性修复；
③在病理状态下，如果实质细胞不能再生或仅有部分能再生，组织缺损则全部或部分由新生的富于小血管的纤维结缔组织(肉芽组织)来修补充填缺损，并形成瘢痕，因为它只能恢复组织的完整性，不能完全恢复原有的结构和功能，故称此为瘢痕性修复或不完全性修复。
但是，目前修复再生方法还存在以下问题：
1、缺少用于人体组织损伤修复再生且效果好的药剂(细胞裂解液)等；
2、修复老化损伤的组织和细胞效果差、提升真皮组织和细胞的再生能力效果差；
3、技术不成熟，成本高。
基于上述情况，本发明提出了一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，可有效解决以上问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法。本发明的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法通过获取细胞裂解液，并将获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合复配，可很好地用于人体组织损伤修复再生，可很好地修复老化损伤的组织和细胞、提升真皮组织和细胞的再生能力；可以修复受损的组织和细胞；可以激活老化组织和细胞的再生能力；效果显著；且技术路线成熟，原料来源广泛、取材容易，成本较低，便于大规模工业化生产。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是：
一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，包括下列步骤：
(1)在无菌条件下采集获取动物细胞；
(2)将步骤(1)中获得的动物细胞所述进行传代培养；
(3)将步骤(2)步获得的传代细胞调整细胞浓度为2-4×106，溶解于生理盐水中，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为7：4，于-85℃冰箱中冷冻至完全冻结，后置于38℃温度条件下加热，完成冻融操作，离心获得细胞悬液X1和沉淀X1，收集细胞悬液X1，获得初步裂解物；
(4)向步骤(3)步获得的沉淀X1中加入含有体积浓度为0.15％的动物细胞裂解液的生理盐水，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量质量(g)的比例为7：4，于振幅为25％、5℃的超声条件下超声处理，离心获得细胞悬液X2和沉淀X2，收集细胞悬液X2，获得深度裂解物，弃去沉淀B；
(5)将步骤(3)步获得的细胞悬液X1和步骤(4)步获得的细胞悬液X2分别用生理盐水溶解并混合，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为1：1，获得细胞裂解液；
(6)将步骤(5)步获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合，得到混合裂解液；
(7)将步骤(6)获得的最终混合裂解液用于人体组织损伤修复再生。
本发明的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法通过获取细胞裂解液，并将获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合复配，可很好地用于人体组织损伤修复再生，可很好地修复老化损伤的组织和细胞、提升真皮组织和细胞的再生能力；可以修复受损的组织和细胞；可以激活老化组织和细胞的再生能力；效果显著；且技术路线成熟，原料来源广泛、取材容易，成本较低，便于大规模工业化生产。
优选的，步骤(1)中，所述动物细胞为自体细胞。
优选的，所述步骤(2)步中，将步骤(1)中获得的动物细胞传代培养至P3代细胞。
优选的，将所述步骤(3)步中的冻融操作重复3-5次。
优选的，所述步骤(3)步中的冻融操作的加热时间为18-24min。
优选的，所述步骤(3)步中的超声处理的时间为8-12min。
优选的，步骤(6)中，所述混合裂解液中诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶的浓度为0.004-0.008μg/mL。
优选的，步骤(6)中，所述混合裂解液中NP-40裂解液体积百分比浓度为2-6％。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
本发明的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法通过获取细胞裂解液，并将获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合复配，可很好地用于人体组织损伤修复再生，可很好地修复老化损伤的组织和细胞、提升真皮组织和细胞的再生能力；可以修复受损的组织和细胞；可以激活老化组织和细胞的再生能力；效果显著；且技术路线成熟，原料来源广泛、取材容易，成本较低，便于大规模工业化生产。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明的优选实施方案进行描述，但是不能理解为对本专利的限制。
实施例1：
一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，包括下列步骤：
(1)在无菌条件下采集获取动物细胞；
(2)将步骤(1)中获得的动物细胞所述进行传代培养；
(3)将步骤(2)步获得的传代细胞调整细胞浓度为2-4×106，溶解于生理盐水中，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为7：4，于-85℃冰箱中冷冻至完全冻结，后置于38℃温度条件下加热，完成冻融操作，离心获得细胞悬液X1和沉淀X1，收集细胞悬液X1，获得初步裂解物；
(4)向步骤(3)步获得的沉淀X1中加入含有体积浓度为0.15％的动物细胞裂解液的生理盐水，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量质量(g)的比例为7：4，于振幅为25％、5℃的超声条件下超声处理，离心获得细胞悬液X2和沉淀X2，收集细胞悬液X2，获得深度裂解物，弃去沉淀B；
(5)将步骤(3)步获得的细胞悬液X1和步骤(4)步获得的细胞悬液X2分别用生理盐水溶解并混合，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为1：1，获得细胞裂解液；
(6)将步骤(5)步获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合，得到混合裂解液；
(7)将步骤(6)获得的最终混合裂解液用于人体组织损伤修复再生。
优选的，步骤(1)中，所述动物细胞为自体细胞。
优选的，所述步骤(2)步中，将步骤(1)中获得的动物细胞传代培养至P3代细胞。
优选的，将所述步骤(3)步中的冻融操作重复3-5次。
优选的，所述步骤(3)步中的冻融操作的加热时间为18-24min。
优选的，所述步骤(3)步中的超声处理的时间为8-12min。
优选的，步骤(6)中，所述混合裂解液中诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶的浓度为0.004-0.008μg/mL。
优选的，步骤(6)中，所述混合裂解液中NP-40裂解液体积百分比浓度为2-6％。
实施例2：
一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，包括下列步骤：
(1)在无菌条件下采集获取动物细胞；
(2)将步骤(1)中获得的动物细胞所述进行传代培养；
(3)将步骤(2)步获得的传代细胞调整细胞浓度为2×106，溶解于生理盐水中，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为7：4，于-85℃冰箱中冷冻至完全冻结，后置于38℃温度条件下加热，完成冻融操作，离心获得细胞悬液X1和沉淀X1，收集细胞悬液X1，获得初步裂解物；
(4)向步骤(3)步获得的沉淀X1中加入含有体积浓度为0.15％的动物细胞裂解液的生理盐水，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量质量(g)的比例为7：4，于振幅为25％、5℃的超声条件下超声处理，离心获得细胞悬液X2和沉淀X2，收集细胞悬液X2，获得深度裂解物，弃去沉淀B；
(5)将步骤(3)步获得的细胞悬液X1和步骤(4)步获得的细胞悬液X2分别用生理盐水溶解并混合，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为1：1，获得细胞裂解液；
(6)将步骤(5)步获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合，得到混合裂解液；
(7)将步骤(6)获得的最终混合裂解液用于人体组织损伤修复再生。
步骤(1)中，所述动物细胞为自体细胞。
所述步骤(2)步中，将步骤(1)中获得的动物细胞传代培养至P3代细胞。
将所述步骤(3)步中的冻融操作重复3次。
所述步骤(3)步中的冻融操作的加热时间为18min。
所述步骤(3)步中的超声处理的时间为8min。
步骤(6)中，所述混合裂解液中诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶的浓度为0.004μg/mL。
步骤(6)中，所述混合裂解液中NP-40裂解液体积百分比浓度为2％。
实施例3：
一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，包括下列步骤：
(1)在无菌条件下采集获取动物细胞；
(2)将步骤(1)中获得的动物细胞所述进行传代培养；
(3)将步骤(2)步获得的传代细胞调整细胞浓度为4×106，溶解于生理盐水中，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为7：4，于-85℃冰箱中冷冻至完全冻结，后置于38℃温度条件下加热，完成冻融操作，离心获得细胞悬液X1和沉淀X1，收集细胞悬液X1，获得初步裂解物；
(4)向步骤(3)步获得的沉淀X1中加入含有体积浓度为0.15％的动物细胞裂解液的生理盐水，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量质量(g)的比例为7：4，于振幅为25％、5℃的超声条件下超声处理，离心获得细胞悬液X2和沉淀X2，收集细胞悬液X2，获得深度裂解物，弃去沉淀B；
(5)将步骤(3)步获得的细胞悬液X1和步骤(4)步获得的细胞悬液X2分别用生理盐水溶解并混合，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为1：1，获得细胞裂解液；
(6)将步骤(5)步获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合，得到混合裂解液；
(7)将步骤(6)获得的最终混合裂解液用于人体组织损伤修复再生。
步骤(1)中，所述动物细胞为自体细胞。
所述步骤(2)步中，将步骤(1)中获得的动物细胞传代培养至P3代细胞。
将所述步骤(3)步中的冻融操作重复5次。
所述步骤(3)步中的冻融操作的加热时间为24min。
所述步骤(3)步中的超声处理的时间为12min。
步骤(6)中，所述混合裂解液中诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶的浓度为0.008μg/mL。
步骤(6)中，所述混合裂解液中NP-40裂解液体积百分比浓度为6％。
实施例4：
一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，包括下列步骤：
(1)在无菌条件下采集获取动物细胞；
(2)将步骤(1)中获得的动物细胞所述进行传代培养；
(3)将步骤(2)步获得的传代细胞调整细胞浓度为3×106，溶解于生理盐水中，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为7：4，于-85℃冰箱中冷冻至完全冻结，后置于38℃温度条件下加热，完成冻融操作，离心获得细胞悬液X1和沉淀X1，收集细胞悬液X1，获得初步裂解物；
(4)向步骤(3)步获得的沉淀X1中加入含有体积浓度为0.15％的动物细胞裂解液的生理盐水，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量质量(g)的比例为7：4，于振幅为25％、5℃的超声条件下超声处理，离心获得细胞悬液X2和沉淀X2，收集细胞悬液X2，获得深度裂解物，弃去沉淀B；
(5)将步骤(3)步获得的细胞悬液X1和步骤(4)步获得的细胞悬液X2分别用生理盐水溶解并混合，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为1：1，获得细胞裂解液；
(6)将步骤(5)步获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合，得到混合裂解液；
(7)将步骤(6)获得的最终混合裂解液用于人体组织损伤修复再生。
步骤(1)中，所述动物细胞为自体细胞。
所述步骤(2)步中，将步骤(1)中获得的动物细胞传代培养至P3代细胞。
将所述步骤(3)步中的冻融操作重复4次。
所述步骤(3)步中的冻融操作的加热时间为20min。
所述步骤(3)步中的超声处理的时间为11min。
步骤(6)中，所述混合裂解液中诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶的浓度为0.006μg/mL。
步骤(6)中，所述混合裂解液中NP-40裂解液体积百分比浓度为4％。
本发明的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法通过获取细胞裂解液，并将获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合复配，可很好地用于人体组织损伤修复再生，可很好地修复老化损伤的组织和细胞、提升真皮组织和细胞的再生能力；可以修复受损的组织和细胞；可以激活老化组织和细胞的再生能力；效果显著；且技术路线成熟，原料来源广泛、取材容易，成本较低，便于大规模工业化生产。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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