降解有机磷农药残留的牛奶加工方法及其应用
阅读说明：本技术 降解有机磷农药残留的牛奶加工方法及其应用 (Method for processing milk capable of degrading organophosphorus pesticide residues and application thereof ) 是由 姚卫蓉 袁少锋 谢云飞 于航 郭亚辉 杨方威 于 2021-08-23 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种降解有机磷农药残留的牛奶加工方法及其应用,属于食品安全领域。本发明的方法包括：乳酸菌菌种活化、乳酸菌接种、前发酵、中间超声辅助处理、后发酵。本发明采用特定的乳酸菌发酵协同超声波处理方式,不仅能提高体系中乳酸菌的含量,还有利于有机磷农药进入乳酸菌细胞,从而促进乳酸菌对有机磷农药的降解。本发明对牛奶中毒死蜱降解率最高可达到96.35％,丙溴磷的降解率最高可达到97.10％,杀螟硫磷的降解率最高可达到98.08％。同时降解时间比未超声处理缩短了10h。本发明方法采用的超声波处理能提高酸奶的硬度和持水力、增加酸奶的风味,具有操作容易、能耗小、成本低、清洁、安全等优点,适用于工业化生产。(The invention discloses a milk processing method for degrading organophosphorus pesticide residues and application thereof, belonging to the field of food safety. The method of the invention comprises the following steps: lactobacillus strain activation, lactobacillus inoculation, pre-fermentation, intermediate ultrasonic auxiliary treatment and post-fermentation. According to the invention, a specific lactobacillus fermentation and ultrasonic treatment mode is adopted, so that the content of lactobacillus in the system can be increased, and organophosphorus pesticide can enter lactobacillus cells, thereby promoting the degradation of the organophosphorus pesticide by the lactobacillus. The highest rate of degradation of chlorpyrifos in milk can reach 96.35%, the highest rate of degradation of profenofos can reach 97.10%, and the highest rate of degradation of fenitrothion can reach 98.08%. Meanwhile, the degradation time is shortened by 10 hours compared with that of the non-ultrasonic treatment. The method of the invention adopts ultrasonic treatment, can improve the hardness and water holding capacity of the yoghourt and increase the flavor of the yoghourt, has the advantages of easy operation, low energy consumption, low cost, cleanness, safety and the like, and is suitable for industrial production.)
技术领域
本发明涉及食品安全与质量控制领域，具体涉及一种降解有机磷农药残留的牛奶加工方法及其应用。
背景技术
近年来，食品中的农药残留问题已经对食品安全构成了长期的风险，不仅降低了食品质量，还严重威胁着人类的生命健康。有机磷农药是一类杀虫剂，因其低毒高效而在全世界范围内被广泛使用。然而只有极少数的有机磷农药作用在靶标生物上，大部分农药残留在农作物及环境中，并很有可能通过生物链的富集而最终进入人体内。有机磷农药能够与乙酰胆碱酯酶结合，从而抑制酶活性，导致一系列中毒反应，甚至对于儿童神经发育造成不良影响。
牛奶及其加工产品是一种重要的营养食品，是膳食中蛋白质、脂肪和主要矿物质的良好来源，在人类饮食尤其是青少年饮食中扮演着非常重要的角色。然而，随着杀虫剂在农业生产中的广泛生产和使用，牛奶往往会被其残留物污染。有机磷农药作为主要的杀虫剂可能以直接或间接的方式进入到牛奶及乳制品中，如受污染的牧草、饮用水，以及为防止奶牛身上的真菌、细菌和线虫等而使用的含有机磷药物。因此，如何降低牛奶中的有机磷农药残留成为一个重要的研究课题。
传统的食品加工方法，如洗涤、去皮、干燥、蒸煮等，都可以在一定程度上降低有机磷农药的残留水平。然而，这些处理工艺的去除效果并不完全令人满意。一些极端的加工条件可能会影响食品的感官质量或导致营养成分的流失。近年来，使用益生菌进行生物修复被认为是一种更安全、更有效的策略，很多益生菌被筛选出来具备降解有机磷农药的能力。
现有技术中益生菌降解有机磷农药的性能试验通常是将益生菌的培养基中直接添加有机磷农药的。对于牛奶中有机磷农药残留去除方法不仅需要考虑降解效果，还需要考虑食品安全性、风味等因素，尚有诸多不确定因素，相关研究具有重大意义。
超声辐照是当代提高生化过程动力学/产率的技术之一，超声的主要物理效应是系统中的强微湍流，化学效应是通过空化气泡中的水或其他分子的热分解形成活性自由基。目前食品工业多采用超声与发酵过程结合来达到增产的目的，但没有关于通过超声和发酵的相互作用效应降解牛奶中有机磷农药的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过超声波刺激促进乳酸菌降解牛奶中有机磷农药残留的方法。该方法中采用的超声波技术具有装置易配备、更清洁、更安全、适用于工业化生产等优点，同时有助于牛奶发酵后风味、质构等感官品质的改善。
为了实现以上目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明的第一目的在于提供一种降解有机磷农药残留的牛奶加工方法，包括以下步骤：
(1)乳酸菌活化，得到浓度为106-108CFU/mL的活化乳酸菌液；其中所述乳酸菌包括植物乳杆菌植物亚种Lactobacillus plantarum subsp.Plantarum(保藏于中国工业微生物菌株保藏管理中心，保藏编号为CICC 20261)、嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus(保藏于中国工业微生物菌株保藏管理中心，保藏编号为CICC 20244)、短乳杆菌Lactobacillus brevis(保藏于中国工业微生物菌株保藏管理中心，保藏编号为CICC20014)、罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri(保藏于中国工业微生物菌株保藏管理中心，保藏编号为CICC 23151)、干酪乳杆菌Lactobacillus casei(保藏于中国工业微生物菌株保藏管理中心，保藏编号为CICC 23184)、鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus(保藏于中国工业微生物菌株保藏管理中心，保藏编号为CICC 20257)、瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC1.791)和德氏乳杆菌Lactobacillus delbrueckii(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 1.189)中的至少一种；
(2)乳酸菌接种：将步骤(1)所得的所述活化乳酸菌液按体积比为2％-25％的比例接种到含有机磷农药的牛奶中；
(3)前发酵：将步骤(2)所得的接种活化乳酸菌液后的牛奶恒温发酵；
(4)中间超声辅助处理：步骤(3)之后，对发酵体系进行超声处理，超声强度为0.25-1.0W/cm2；优选为0.5W/cm2；
(5)后发酵：步骤(4)之后，将发酵体系继续发酵，直至得到凝固酸奶，所述凝固酸奶较单独乳酸菌处理的硬度和持水力明显提高且酸奶的风味物质明显增加。
作为本发明的一种
具体实施方式
，所述步骤(2)的含有机磷农药的牛奶中的有机磷农药的含量为10-200mg/kg。
作为本发明的一种具体实施方式，所述有机磷农药包括毒死蜱、丙溴磷和杀螟硫磷中的至少一种。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(1)具体为：将冷冻乳酸菌解冻，先接种在MRS琼脂平板上37℃恒温培养24h，然后将长出的菌落转接到MRS培养液中37℃恒温培养12-24h，得到浓度为106-108CFU/mL的活化乳酸菌。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(3)前发酵的发酵温度为30℃-42℃。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(3)的前发酵时间为0.5-6h。优选地，前发酵时间为5h。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(4)中超声处理采用超声脉冲循环模式；每个超声循环的条件：超声开启时长为5-60s，暂停时长为5-80s；所述步骤(4)的超声处理的总耗时为10-60min。优选地，超声处理的总耗时(包括超声开启时长和暂停时长在内)为30min，超声开启时长为30s，暂停时长为10s(即超声脉冲模式为为30s开10s关)。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(5)的后发酵时间为12-24h。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(3)和步骤(5)的发酵装置是恒温培养箱。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(5)之后还包括：(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于冰箱。
作为本发明的一种具体实施方式，所述步骤(6)中的冷藏温度为-1℃-10℃。
作为本发明的一种具体实施方式，包括以下步骤：
(1)乳酸菌活化：将冷冻乳酸菌解冻，接种在MRS琼脂平板上，37℃恒温培养24h，将长出的菌落转接到MRS培养液，37℃恒温培养24h，得到活化乳酸菌液；
(2)乳酸菌接种：将活化乳酸菌液按2％-25％(v/v)比例加入到含10-200mg/kg有机磷农药的牛奶中；
(3)前发酵：将接种活化乳酸菌液后的牛奶置于30℃-42℃恒温培养箱中发酵0.5-6h；
(4)中间超声辅助处理：对步骤(3)所得的发酵体系进行低场强超声处理，超声强度为0.25-1.0W/cm2，超声脉冲模式为5-60s开和5-80s关，超声总时间为10-60min；
(5)后发酵：超声处理后，继续发酵12-24h，直至凝固，得到凝固酸奶；
(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于-1℃-10℃冰箱。
本发明的第二目的在于提供由前述加工方法得到的凝固酸奶，所述凝固酸奶中毒死蜱降解率最高可达到96.35％，丙溴磷降解率最高可达到97.10％，杀螟硫磷降解率最高可达到98.08％，所述凝固酸奶的硬度为15-24g，持水力为52％-76％，风味物质的种类为42-56种。
本发明的第三目的在于提供前述的加工方法在乳制品降解有机磷农药残留中的应用。
有益效果：
(1)本发明采用的超声技术可以增加细胞膜的通透性，促进乳酸菌的生长代谢，这有利于有机磷农药进入乳酸菌细胞然后被降解，从而提高乳酸菌对有机磷农药的降解效率。本发明对牛奶中毒死蜱降解率最高可达到96.35％，丙溴磷的降解率最高可达到97.10％，杀螟硫磷的降解率最高可达到98.08％。
(2)本发明对牛奶中有机磷农药降解率达到90％的时间比单独乳酸菌处理(未超声处理)缩短10h以上。
(3)本发明的加工方法相较于单独乳酸菌处理(未超声处理)，可以提高酸奶的硬度和持水力、增加发酵乳的风味物质。具体地，本发明的方法所得的凝固酸奶的硬度为15-24g，持水力为52％-76％，风味物质的种类为42-56种。
(4)本发明采用的超声波联合乳酸菌发酵的食品加工方式，具有操作简单、能耗小、成本低等优点，很适用于工业化规模生产。
附图说明
图1为本发明的实验装置示意图，其中1是超声发生器，2是发酵瓶，3是恒温水浴，4是超声换能器。
图2为实施例1的乳酸菌处于不同生长阶段时超声处理对毒死蜱降解的影响。
图3为实施例2的不同超声功率(超声强度)对毒死蜱降解的影响。
图4为实施例3的不同超声脉冲模式对毒死蜱降解的影响。
图5为实施例4的不同超声总时间对毒死蜱降解的影响。
图6为对比例2的对照(超声)、对比例1的乳酸菌发酵和实施例4的超声+乳酸菌发酵对毒死蜱的降解动力学曲线(其中有超声处理的超声条件：超声强度0.5W/cm2，脉冲模式30s开10s关，超声处理总时间30min)。
图7为实施例5的对照组(超声)、乳酸菌发酵和超声+乳酸菌发酵对丙溴磷的降解动力学曲线(其中有超声处理的超声条件：超声强度0.5W/cm2，脉冲模式30s开10s关，超声处理总时间30min)。
图8为实施例5的对照组(超声)、乳酸菌发酵和超声+乳酸菌发酵对杀螟硫磷的降解动力学曲线(其中有超声处理的超声条件：超声强度0.5W/cm2，脉冲模式30s开10s关，超声处理总时间30min)。
具体实施方式
为了更好理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明要求保护的范围并不仅仅局限于实施例表述的范围。
本发明实施例的生物材料信息：
乳酸菌的来源：植物乳杆菌植物亚种Lactobacillus plantarumsubsp.Plantarum(保藏编号为CICC 20261)、嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus(保藏编号为CICC 20244)、短乳杆菌Lactobacillus brevis(保藏编号为CICC 20014)、罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri(保藏编号为CICC 23151)、干酪乳杆菌Lactobacilluscasei(保藏编号为CICC 23184)、鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus(保藏编号为CICC 20257)购买于中国工业微生物菌株保藏管理中心，瑞士乳杆菌Lactobacillushelveticus(保藏编号为GDMCC 1.791)和德氏乳杆菌Lactobacillus delbrueckii(保藏编号为GDMCC 1.189)购买于广东省微生物菌种保藏中心。所有菌株保存于-80℃冰箱待用。其中，本发明实施例1～8的乳酸菌以植物乳杆菌植物亚种Lactobacillus plantarumsubsp.Plantarum(保藏编号为CICC 20261)为例展开研究。本领域技术人员能够理解，前述列举的其他乳酸菌理论上也能实现本发明。
MRS琼脂平板的来源及组成：MRS琼脂购买于青岛海博生物科技有限公司，组成成分为蛋白胨10.0g，牛肉膏8.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，吐温80 1.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，琼脂14.0g，蒸馏水1.0L。
MRS培养液的来源及组成：MRS培养基购买于青岛海博生物科技有限公司，组成成分为蛋白胨10.0g，牛肉膏8.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，吐温80 1.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，蒸馏水1.0L。
测试方法：
酸奶的硬度测试：使用BROOKFIELD CT3质构仪(布鲁克菲尔德，美国)测试酸奶的硬度，测试条件为触发点负载为5g，形变量的目标值为20％，测试速度为2.0mm/s，返回速度为2.0mm/s，循环次数为2次，探头进入距离为20mm，压缩之间停留时间为5s。
酸奶的持水力测试：用离心管称取约10g酸奶样品，4℃，1 000×g离心10min，除去上清液，称量沉淀物的质量，持水力＝(沉淀物质量/酸奶质量)×100％。
酸奶的风味物质含量测试：使用顶空固相微萃取结合GC-MS测定酸奶的风味物质，测试条件为载气为氦气，在15psi的柱压下，流速为1.9mL/min。注射器温度为250℃。注射1min后，吹扫流量升至100mL/min。温度程序为：初始温度35℃，保持3min，然后以6℃/min的速度由35℃线性升高至200℃，提高升温速率至30℃/min，使得温度由200℃提高到250℃，保持5min。气相色谱柱直接连接到MS检测器，用于鉴别挥发性化合物。通过与软件中MS库的比较，对所有挥发性化合物进行了鉴定。
实施例1超声处理的时机优化
一种降解有机磷农药残留的牛奶加工方法，包括以下步骤：
(1)乳酸菌活化：解冻冷冻乳酸菌，以一定接种量接种在MRS琼脂平板上，37℃恒温培养24h，将长出的菌落转接到MRS培养液，37℃恒温培养12h，得到浓度为106CFU/mL的活化乳酸菌液；
(2)乳酸菌接种：将活化乳酸菌液按10％(v/v)比例加入到含50mg/kg毒死蜱的牛奶中；
(3)前发酵：取5份接种活化乳酸菌液后的牛奶置于37℃恒温培养箱中发酵；分别控制前发酵时长为2、5、7、9或12h。
(4)中间超声辅助处理：对步骤(3)得到的发酵体系进行低场强超声处理，超声强度为1.0W/cm2，超声脉冲模式为30s开和10s关，超声总时间为30min；实验装置参见图1。
(5)后发酵：超声处理后，继续发酵10h，得到凝固酸奶；
(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于4℃冰箱备用。
(7)农残检测：参照国家标准GB 23200.91的方法对牛奶中的农药残留进行检测。
超声处理的时机(乳酸菌的不同生长期)对毒死蜱降解效果的影响如图2所示。结果表明，与对照组(单独乳酸菌发酵，不辅助超声处理)相比，当发酵时间为2h和5h时，超声波处理显著提高了牛奶中毒死蜱的降解率(P<0.05)；但当发酵时间超过7h时，牛奶中毒死蜱降解率显著低于对照组(P<0.05)，这可能是由于乳酸菌处于对数生长期，对外界条件敏感，超声波抑制了乳酸菌的正常生长。因此，确定超声处理的最佳时机，即前发酵时间为5h。
实施例2不同超声强度的选择
一种降解有机磷农药残留的牛奶加工方法，包括以下步骤：
(1)乳酸菌活化：解冻冷冻乳酸菌，以一定接种量接种在MRS琼脂平板上，37℃恒温培养24h，将长出的菌落转接到MRS培养液，37℃恒温培养24h，得到浓度为108CFU/mL的活化乳酸菌液；
(2)乳酸菌接种：将活化乳酸菌液按10％(v/v)比例加入到含50mg/kg毒死蜱的牛奶中；
(3)前发酵：将接种活化乳酸菌液后的牛奶置于37℃恒温培养箱中发酵5h；
(4)中间超声辅助处理：对步骤(3)所得的发酵体系进行低场强超声处理，超声强度分别设定为0.25、0.5、0.75、1.0和1.25W/cm2，超声脉冲模式为30s开和10s关，超声总时间为30min；
(5)后发酵：超声处理后，继续发酵10h，得到凝固酸奶；
(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于4℃冰箱备用。
(7)农残检测：参照国家标准GB 23200.91的方法对牛奶中的农药残留进行检测。
不同超声场强对毒死蜱降的影响如图3所示。结果表明，毒死蜱的降解率在0.25-0.50W/cm2的超声强度内增加，但在0.75-1.25W/cm2范围内降低，最高降解率在0.50W/cm2时获得。在此本实施例条件下牛奶中毒死蜱降解率可达到96.35％。
实施例3不同超声脉冲模式的选择
(1)乳酸菌活化：解冻冷冻乳酸菌，以一定接种量接种在MRS琼脂平板上，37℃恒温培养24h，将长出的菌落转接到MRS培养液，37℃恒温培养24h，得到浓度为108CFU/mL的活化乳酸菌液；
(2)乳酸菌接种：将活化乳酸菌液按10％(v/v)比例加入到含50mg/kg毒死蜱的牛奶中；
(3)前发酵：将接种活化乳酸菌液后的牛奶置于37℃恒温培养箱中发酵5h；
(4)中间超声辅助处理：对步骤(3)所得的发酵体系进行低场强超声处理，超声脉冲模式分别设定为10s开10s关、20s开10s关、30s开10s关、40s开10s关和60s开10s关，超声强度为0.5W/cm2，超声总时间为50min；
(5)后发酵：超声处理后，继续发酵10h，得到凝固酸奶；
(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于4℃冰箱备用。
(7)农残检测：参照国家标准GB 23200.91的方法对牛奶中的农药残留进行检测。
不同超声脉冲模式对毒死蜱降的影响如图4所示。脉冲模式设置为30s开10s关时效果最好，在本实施例条件下牛奶中毒死蜱降解率可达到90.28％。
实施例4不同超声总时间的选择
(1)乳酸菌活化：解冻冷冻乳酸菌，以一定接种量接种在MRS琼脂平板上，37℃恒温培养24h，将长出的菌落转接到MRS培养液，37℃恒温培养16h，得到浓度为107CFU/mL的活化乳酸菌液；
(2)乳酸菌接种：将活化乳酸菌液按2％(v/v)比例加入到含50mg/kg毒死蜱的牛奶中；
(3)前发酵：将接种活化乳酸菌液后的牛奶置于37℃恒温培养箱中发酵5h；
(4)中间超声辅助处理：对步骤(3)所得发酵体系进行低场强超声处理，超声强度为0.5W/cm2，超声脉冲模式为30s开和10s关，超声总时间分别设定为10、20、30、40和60min；
(5)后发酵：超声处理后，继续发酵10h，得到凝固酸奶；
(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于4℃冰箱备用。
(7)农残检测：参照国家标准GB 23200.91的方法对牛奶中的农药残留进行检测。
不同超声总时间对毒死蜱降的影响如图5所示。超声处理总时间设置为30min时效果最好，在本实施例条件下牛奶中毒死蜱降解率可达到92.76％。
对比例1(单独乳酸菌处理)
省略实施例4中的超声操作，其他和实施例4保持不变，得到单独乳酸菌对毒死蜱的降解动力学曲线(记作乳酸菌发酵)。
对比例2(单独超声处理)
省略实施例4中的乳酸菌发酵过程，仅对含50mg/kg毒死蜱的牛奶进行低场强超声处理，超声条件和实施例4保持不变，控制超声处理总时间设置为30min，即最佳超声条件得到单独超声对毒死蜱的降解动力学曲线(记作对照)。
对比例2的对照(超声)、对比例1的乳酸菌发酵和实施例4的超声+乳酸菌发酵对毒死蜱的降解动力学曲线(其中有超声处理的超声条件：超声强度0.5W/cm2，脉冲模式30s开10s关，超声处理总时间30min)如图6所示。
结果发现，仅超声处理对毒死蜱没有影响，可能是超声场强太小，不足以对毒死蜱造成降解。单独乳酸菌发酵可以一定程度上降解牛奶中的毒死蜱，但降解速率常数为0.03，效率较低，发酵24h后毒死蜱的降解率为53.26％。当加以超声辅助后(超声+乳酸菌发酵)，乳酸菌降解毒死蜱的速率常数为0.29，发酵14h后毒死蜱的降解率就可以达到96.35％。本发明对牛奶中有机磷农药降解率达到90％的时间比单独乳酸菌发酵处理缩短10h以上。由此可见，超声处理促进了乳酸菌对毒死蜱的降解作用，超声与乳酸菌发酵对于降解牛奶中的毒死蜱具有协同作用。
实施例5不同有机磷农药的降解
将实施例4中的农药由毒死蜱分别替换为丙溴磷和杀螟硫磷，其他操作和实施例4保持不变，控制最佳超声总时间为30min，即得到最佳超声条件(前发酵时间为5h，超声强度为0.5W/cm2、脉冲模式设置为30s开10s关和超声处理总时间设置为30min)下丙溴磷和杀螟硫磷的乳酸菌降解动力学曲线(标记为超声+乳酸菌发酵)。
对照组(超声)、乳酸菌发酵和超声+乳酸菌发酵对丙溴磷和杀螟硫磷的乳酸菌降解动力学曲线的实验结果如图7和图8所示。
采用本发明的超声联合乳酸菌发酵的加工方式牛奶中丙溴磷和杀螟硫磷的降解速率常数分别为0.42和0.48，降解率分别可达到97.10％和98.08％。与单独乳酸菌发酵降解相比，本发明的超声处理后乳酸菌降解丙溴磷和杀螟硫磷的降解速率常数和降解率均明显提高。
基于本发明，本领域技术人员知晓，基于超声技术辅助乳酸菌对其他有机磷农药进行降解时，可参照该文所提出的操作流程进行。
实施例6酸奶风味、质构等感官品质的改善
省略实施例4中的超声操作，其他和实施例4保持不变，得到乳酸菌发酵的凝固酸奶；按照实施例4的操作，控制最佳超声总时间为30min，得到超声+乳酸菌发酵的凝固酸奶，参照测试方法给出的条件测试乳酸菌发酵的凝固酸奶和超声+乳酸菌发酵的凝固酸奶的硬度、持水力和风味物质含量。
表1给出了乳酸菌发酵的凝固酸奶和超声+乳酸菌发酵的凝固酸奶的硬度、持水力对比数据，可以发现本发明的超声处理后酸奶硬度和持水力明显提高(P<0.05)。
表1乳酸菌发酵的凝固酸奶和超声+乳酸菌发酵的凝固酸奶的硬度和持水力
注：1.不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)。
表2给出了乳酸菌发酵的凝固酸奶和超声+乳酸菌发酵的凝固酸奶的风味物质含量对比数据，可以发现本发明的超声处理后的酸奶含有六个大类的风味物质共56种，比乳酸菌发酵的酸奶多13种，而且大部分风味物质的百分含量明显提高(P<0.05)。
表2乳酸菌发酵的凝固酸奶和超声+乳酸菌发酵的凝固酸奶的风味成分
注：1.不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)。
2.符号“-”指挥发性化合物在产品中无法检测到。
实施例7不同的有机磷农药浓度
(1)乳酸菌活化：解冻冷冻乳酸菌，接种在MRS琼脂平板上，37℃恒温培养24h，将长出的菌落转接到MRS培养液，37℃恒温培养24h，得到浓度为108CFU/mL的活化乳酸菌液；
(2)乳酸菌接种：将活化乳酸菌液按10％(v/v)比例加入到含10mg/kg，50mg/kg，100mg/kg和200mg/kg毒死蜱的牛奶中；
(3)前发酵：将接种活化乳酸菌液后的牛奶置于37℃恒温培养箱中发酵5h；
(4)中间超声辅助处理：对步骤(3)所得的发酵体系进行低场强超声处理，超声强度设定为0.5W/cm2，超声脉冲模式为30s开和10s关，超声总时间为30min；
(5)后发酵：超声处理后，继续发酵10h，得到酸奶；
(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于4℃冰箱备用。
(7)农残检测：参照国家标准GB 23200.91的方法对牛奶中的农药残留进行检测。
本实施例条件下得到不同浓度毒死蜱降解的效果如表3所示，浓度为10-200mg/kg的毒死蜱经本发明处理后均能够被降解，其中当毒死蜱浓度为50mg/kg时，降解率最高，达到96.35％。
表3不同浓度毒死蜱的降解效果
实施例8本发明的加工方法在乳制品降解有机磷农药残留中的应用
(1)乳酸菌活化：解冻冷冻乳酸菌，接种在MRS琼脂平板上，37℃恒温培养24h，将长出的菌落转接到MRS培养液，37℃恒温培养24h，得到浓度为108CFU/mL的活化乳酸菌液；
(2)乳酸菌接种：将活化乳酸菌液按25％(v/v)比例加入到含50mg/kg毒死蜱、50mg/kg丙溴磷、50mg/kg杀螟硫磷混合农药的牛奶中；
(3)前发酵：将接种活化乳酸菌液后的牛奶置于37℃恒温培养箱中发酵5h；
(4)中间超声辅助处理：对步骤(3)所得的发酵体系进行低场强超声处理，超声强度设定为0.5W/cm2，超声脉冲模式为30s开和10s关，超声总时间为30min；
(5)后发酵：超声处理后，继续发酵10h，得到酸奶；
(6)冷藏：将凝固酸奶冷藏于4℃冰箱备用。
(7)农残检测：参照国家标准GB 23200.91的方法对牛奶中的农药残留进行检测。
本实施例条件下得到的凝固酸奶中毒死蜱降解率为93.62％，丙溴磷降解率位94.85％，杀螟硫磷降解率位96.03％，酸奶的硬度为23.22g，持水力为76％，风味物质的种类为56种。
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