一种富硒猴头菇的培育方法
阅读说明：本技术 一种富硒猴头菇的培育方法 (Cultivation method of selenium-rich hericium erinaceus ) 是由 刘寿峰 于 2021-08-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种富硒猴头菇的培育方法,设计在猴头菇培育基质中添加抑菌成分,抑制杂菌,特别是芽孢杆菌类的生长,实现对猴头菇培育基质中杂菌的抑制效果,有助于液态菌液的应用和推广；同时为避免抑菌成分影响猴头菇菌种的生长,利用含有抑菌成分的培养基对猴头菇菌种进行梯度浓度的抗性驯化,以获得的具有抗性的猴头菌菌种进行培育,猴头菇菌丝体生长快,出菇早,产量高,培育出来的猴头菇中富硒含量高、质量高。(The invention discloses a cultivation method of selenium-rich hericium erinaceus, which is characterized in that antibacterial components are added into a hericium erinaceus cultivation matrix to inhibit the growth of mixed bacteria, particularly bacillus, so that the effect of inhibiting the mixed bacteria in the hericium erinaceus cultivation matrix is realized, and the application and popularization of liquid-state bacteria liquid are facilitated; meanwhile, in order to avoid the influence of the antibacterial components on the growth of the hericium erinaceus strains, the hericium erinaceus strains are subjected to resistance domestication with gradient concentration by using a culture medium containing the antibacterial components, so that the obtained hericium erinaceus strains with resistance are cultured, the hericium erinaceus mycelia grow fast, grow early and are high in yield, and the cultured hericium erinaceus are high in selenium content and quality.)
技术领域
本发明涉及猴头菇的栽培技术领域，具体涉及一种富硒猴头菇的培育方法。
背景技术
硒是人体生命活动中必需的微量元素，有“生命的火种”之美称，在人体中含量虽微，但它对人体生理机能的调控和维持人体最佳营养状态起很大作用。硒具有清除自由基、抗衰老、提高免疫力等功能。人体对硒的吸收主要从食物中获取，而食物中的硒含量决定了补硒的效果，自然界中，有些生物具有富硒功能，可以提高食物的硒含量。
猴头菇是富硒菌类之一(参见《湖北农业科学》2005年第4期发表的何冬兰的论文“亚硒酸钠等猴头菇菌丝生长的影响”，1999年第3期《食用菌学报》发表的尚德静的论文“四种食用菌富硒能力的比较”)。
猴头菇是我国著名的食药兼用真菌，素称“蘑菇之王”，它与熊掌、燕窝、鱼翅并列为四大名菜，自古以来被誉为“山珍”。猴头菇属于木腐菌，野生猴头菇一般生长在枯树上，人工栽培猴头菇主要以木屑、棉籽壳、玉米芯等固体原料作为培育基质，将培育基质灭菌处理后接种猴头菇菌种进行培育。
猴头菇菌种的生产方式主要有2种，一种是传统的固体菌种，另一种是液体菌种，与固体菌种相比，液体菌种具有很多优越性，比如液体菌种没有级别之分，既可以作为母种接种到原种培养基中，也可以作为栽培种直接接种到栽培袋中，既简化了生产工艺，又降低生产成本。但目前，液体菌种在接种环节容易感染杂菌，造成培育基质中杂菌生长，影响猴头菇的菌丝的生成，造成液态菌种在猴头菇栽培过程中的应用和推广受限。
发明内容
为解决上述技术背景中的问题，本发明提供了一种富硒猴头菇的培育方法，设计在猴头菇培育基质中添加抑菌成分，抑制杂菌，特别是芽孢杆菌类的生长，同时为避免抑菌成分抑制猴头菇菌丝体的生长，对猴头菇菌种进行抗性驯化，再具有抗性的菌种基础上进行猴头菇的培育。
为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：
一种富硒猴头菇的培育方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
(一)猴头菇菌丝的培养：
从猴头菇中取菌丝组织，并转接到灭菌后的PDA试管中，放置于20-23℃条件下，进行无光照培养8-14d，菌丝长满试管，并进行转管纯化，得到纯菌丝，保存，备用；
(二)菌种抗性驯化：
A、将抑菌成分按照0.1-1.5％的比例添加到菌种培养基中，按照抑菌成分浓度递增的方式，配置多级菌种培养基；
B、将猴头菇菌丝依次经过抑菌成分浓度递增的菌种培养基进行培育，通过多代耐性处理，得到具有抗性的猴头菇菌种；
C、对具有抗性的猴头菇菌种进行扩大培养；
(三)配制富硒菌液：
首先配置富含无机硒的液态培养基，并将所述步骤(二)中得到的部分猴头菇菌种接种至液态培养基中进行培养，得到有机硒猴头菇菌液；
(四)富硒培育基质的制备：
将包括碳源、氮源、磷肥的猴头菇栽培基质中添加抑菌成分，使得整个培养基质中抑菌成分的含量保持在1.0-1.5％，混合均匀后，加入部分所述步骤(三) 中得到的有机硒猴头菇菌液，进行混合浸泡一段时间，然后晾干，得到富硒培育基质；
(五)接种培育：
将步骤(四)中制备的富硒培育基质进行灭菌，冷却后接种步骤(二)中余下的猴头菇菌种并进行培养，菌丝成熟后继续猴头菇的培育。
进一步地，所述抑菌成分为抑菌浓缩液，所述抑菌浓缩液是将具有抑菌效果的植物进行提取获得的浓缩液。
更进一步地，所述具有抑菌效果的植物包括大蒜、柿皮、布渣叶、金银花中的一种或多种，在40-60℃条件下进行提取。
更进一步地，所述抑菌浓缩液的提取步骤如下：将植物粉碎研磨过60-80 目筛，采用75％的乙醇溶液加热至40-55℃进行恒温提取，提取2-3次，每次提取1-2h，合并滤液，弃残渣，用旋转蒸发仪在40-55℃挥去乙醇、浓缩，得到抑菌浓缩液。
进一步地，所述抑菌成分为乳酸链球菌素，其有效抑菌浓度在 0.05-1％mg/ml。
进一步地，步骤(二)菌种抗性驯化中，驯化后猴头菇菌种对抑菌成分的抗性浓度为：12％-1.5％，采用的菌种培养基为PDA培养基。
进一步地，步骤(三)中液态培养基的无机硒为亚硒酸钠、硒酸钠中的一种或者两种的组合，硒盐的浓度为0.1-2g/L。
进一步地，培育获得成熟的富硒猴头菇：所述的富硒猴头菇的硒含量为 50-1000mg/kg(干重)。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明中设计在猴头菇培育基质中添加抑菌成分，抑制杂菌，特别是芽孢杆菌的生长，同时为避免抑菌成分抑制猴头菇菌丝体的生长，对猴头菇菌种进行抗性驯化，再具有抗性的菌种基础上进行猴头菇的培育，猴头菇菌丝体生长快，出菇早，产量高，培育出来的猴头菇中富硒含量高、质量高。
在富硒菌液的制备过程中，难以做到无菌环境，受接种场所的空气环境影响，其接种环节容易感染杂菌，而比较容易感染的杂菌多是芽孢杆菌。针对此，本发明中大蒜、柿皮、布渣叶、金银花等的提取浓缩液含有抑菌芽孢杆菌的有效成分，比如柿皮、布渣叶、金银花等中含有的黄酮类、三萜类成分可以达到抑制芽孢杆菌生长的效果，实现对猴头菇培育基质中杂菌的抑制效果，有助于液态菌液的应用和推广。
附图说明
图1为抑菌成分对芽孢杆菌的抑菌圈图示；
其中，图(a)为蜡样芽孢杆菌WR1，图(b)枯草芽孢杆菌WR2，图(c) 阿耶波多氏芽孢杆菌WR3，图(d)贝莱斯芽孢杆菌WR4；
图中药敏纸片编号1-5中添加的抑菌成分稀释液分别对应乳酸链球菌素、布渣叶、金银花、大蒜、柿皮。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
具体实施方式
一种富硒猴头菇的培育方法，包括以下具体步骤：
(一)猴头菇菌丝的培养：
从猴头菇中取菌丝组织，并转接到灭菌后的PDA试管中，放置于22℃条件下，进行无光照培养10d，菌丝长满试管，并进行转管纯化，得到纯菌丝，保存，备用；
(二)菌种抗性驯化：
A、将抑菌成分按照0.1-1.5％的比例添加到PDA菌种培养基中，按照抑菌成分浓度递增的方式，配置多级菌种培养基；
其中，PDA菌种培养基中抑菌成分的浓度梯度为：0.1-0.3％、0.3-0.5％、 0.5-0.8％、0.8-1.1％、1.1-1.5％。
培养条件：PDA菌种培养基的培养温度为21±1℃，培养时间为10d。
PDA培养基的制备：取马铃薯100g加入1000mL的水煮熟，然后过滤，得到滤液，往滤液依次加入10g葡萄糖、10g琼脂、0.2g硫酸镁、0.5g磷酸氢二钾、 3g豆粕粉、2g蛋白胨和1g酵母粉，加热至溶解，并补水至1000mL，将得到的培养液在121℃温度下灭菌40min，然后冷却至20℃后即得到PDA培养基。
B、将猴头菇菌丝依次经过抑菌成分浓度递增的PDA菌种培养基进行多代培育，通过多代耐性处理，得到具有抗性的猴头菇菌种；
C、对具有抗性的猴头菇菌种进行扩大培养；
(三)配制富硒菌液：
首先配置富含无机硒的液态培养基，将所述步骤(二)中得到的部分猴头菇菌种接种至液态培养基中进行培养，得到有机硒猴头菇菌液；
培养条件：液态培养基的培养温度为20℃，培养时间为12d左右。
液态培养基的制备：每1000mL无机硒培养基的原料包括：1g豆箔粉、20g 白糖、0.5g蛋白胨、0.5g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁和180mg无机硒。
其中，无机硒为亚硒酸钠，硒盐的浓度为1g/L。
(四)富硒培育基质的制备：
将包括碳源、氮源、磷肥的猴头菇栽培基质中添加抑菌成分，使得整个培养基质中抑菌成分的含量保持在1.0-1.5％，混合均匀后，加入部分所述步骤(三) 中得到的有机硒猴头菇菌液，进行混合浸泡一段时间，然后晾干，得到富硒培育基质；
所述猴头菇栽培基质：78％木屑，20％麸皮，1％蔗糖，1％石膏粉，含水量 60％左右，pH自然。
(五)接种培育：
将步骤(四)中制备的富硒培育基质进行灭菌，冷却后接种步骤(二)中余下的猴头菇菌种并进行培养，菌丝成熟后继续猴头菇的培育。
实施例1
在本实施例中步骤(二)中抑菌成分为抑菌浓缩液，所述抑菌浓缩液是将具有抑菌效果的植物进行提取获得的浓缩液；具有抑菌效果的植物包括大蒜、柿皮、布渣叶、金银花中的一种或多种；
所述抑菌浓缩液的提取步骤如下：将植物粉碎研磨过80目筛，采用75％的乙醇溶液加热至50℃进行恒温提取，提取3次，每次提取1h，合并滤液，弃残渣，用旋转蒸发仪在55℃挥去乙醇、浓缩，得到抑菌浓缩液。
(1)抑菌浓缩液、乳酸链球菌素对芽孢杆菌抑菌效果的验证实验：
在超净工作台的无菌环境下，在4个固体培养基平板上分别接种4种芽孢杆菌，接种后静置15min使平板上的水分被琼脂完全吸收后，将分别含有大蒜、柿皮、布渣叶、金银花提取浓缩液以及乳酸链球菌素稀释液的药敏纸片贴在固体培养基平板上。
另外在平板中心处贴一张空白的药敏纸片作为对照组，纸片等间距分布，两纸片之间距离不小于24mm，纸片距平板边缘不小于15mm，以免得到的抑菌圈交叉或者不完整。
所述4种芽孢杆菌分别为：蜡样芽孢杆菌WR1、枯草芽孢杆菌WR2、阿耶波多氏芽孢杆菌WR3、贝莱斯芽孢杆菌WR4。
所述药敏纸片：纸片选用直径6.00mm，吸水量为20ul的专用药敏纸片。
药敏纸片上添加的是大蒜、柿皮、布渣叶、金银花提取浓缩液与乳酸链球菌素的稀释液，稀释后的浓度在1.5-2％。
验证结果见图1。由图1抑菌圈可知，大蒜、柿皮、布渣叶、金银花的提取液对蜡样芽孢杆菌WR1、枯草芽孢杆菌WR2、阿耶波多氏芽孢杆菌WR3、贝莱斯芽孢杆菌WR4均具有抑菌效果。
实施例2
按照具体实施方式中富硒猴头菇的培育方法进行猴头菇的培育，作为实验组，对不同时期的猴头菇(菌丝体、子实体)进行检测，并与常规培育方法制备猴头菇作为对照组进行检测，同时对菌丝体时期的培育基质中的杂菌进行检测。
表1.不同时期猴头菇的检测结果
本发明中设计在猴头菇培育基质中添加抑菌成分，抑制杂菌，特别是芽孢杆菌的生长，同时为避免抑菌成分抑制猴头菇菌丝体的生长，对猴头菇菌种进行抗性驯化，再具有抗性的菌种基础上进行猴头菇的培育，猴头菇菌丝体生长快，出菇早，产量高，培育出来的猴头菇中富硒含量高、质量高。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种羊肚菌废弃营养袋栽培竹荪的方法