香连丸及其提取物、药物组合物与香连丸产物的新用途
阅读说明：本技术 香连丸及其提取物、药物组合物与香连丸产物的新用途 (New application of rhizoma coptidis pill, extract and pharmaceutical composition thereof and rhizoma coptidis pill product ) 是由 李学刚 叶小利 于 2020-05-28 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种香连丸及其提取物、药物组合物与香连丸产物的新用途,具有降血糖和预防糖尿病并发症的作用,在糖尿病肾病模型中,本发明香连丸产物能降低血糖和UACR,加快神经传输速度,表明有明显的治疗糖尿病及其并发症的作用；此外,本发明香连丸产物还能降低血脂、体重、肝脏脂肪含量,具有降血脂、减肥以及预防脂肪肝的作用。(The invention provides a xianglian pill and an extract thereof, a pharmaceutical composition and a new application of a xianglian pill product, which have the effects of reducing blood sugar and preventing diabetic complications; in addition, the product of the xianglian pill can reduce the blood fat, the body weight and the fat content of the liver, and has the functions of reducing the blood fat, losing weight and preventing fatty liver.)
技术领域
本发明涉及传统复方中药制剂应用领域，尤其涉及一种香连丸及其提取物、 药物组合物与香连丸产物的新用途。
背景技术
香连丸出自《政和本草》卷七引《李绛兵部手集方》，由黄连和木香组成。 经过演变，目前中国药典收载的“香连丸”由4份萸黄连和1份木香组成。具有清 热化湿、行气止痛的功能，用于大肠湿热所致的痢疾，症见大便脓血、里急后 重、发热腹痛，肠炎、细菌性痢疾见上述症候者。
香连丸由于含有大量的黄连，其口感很差(苦)，而且体积很大，不利于口 服。因此，企业将其开发为“浓缩香连丸”，主要工艺包括：木香粉碎成细粉；将 萸黄连粉碎成粗粉或最粗粉，以45％乙醇溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，至渗 漉液无色，收集渗漉液，回收乙醇缩至适量，与上述细粉混匀，加适量淀粉或 微晶纤维素制丸，制成1000丸，干燥，打光，即得(《中国药典》2015版)。浓 缩香连丸的体积比香连丸减少60％。此工艺将木香直接粉碎入药，导致浓缩香 连丸的体积还是偏大，而且丸剂口感还是较差。
后来，企业在“浓缩香连丸”的基础上，开发了“香连胶囊”，主要工艺包括： 木香用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，备用；提取挥发油后的水溶液 滤过，滤液浓缩至适量，干燥，粉碎成细粉；黄连用70％乙醇于75-80℃回流提 取三次，第一次2小时，第二、三次每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回 收乙醇并浓缩至适量，干燥，粉碎成细粉，加入上述细粉及适量的辅料，混匀， 制颗粒，干燥，喷加木香挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。香连 胶囊的体积为香连丸的25％。香连胶囊不仅体积明显减小，而且只作为胶囊剂，口感也有显著的改善。但是，香连胶囊工艺复杂，先提挥发油，再提水溶性浸 膏；而且浸膏“粘稠”，不容易装胶囊，被迫要添加“淀粉”；添加淀粉也影响胶囊 剂的体积。
此外，香连丸是一个经典的名方，其治疗作用一直限于“用于大肠湿热所致 的痢疾，症见大便脓血、里急后重、发热腹痛，肠炎、细菌性痢疾见上述症候 者”，新的治疗作用并未开发。
糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一种常见的具有遗传倾向的葡萄糖代谢异 常和内分泌障碍性疾病，是由绝对性或相对性胰岛素分泌不足所引起。2015年， 全世界有4.15亿糖尿病患者，预计到2040年，糖尿病患病人数将达到6.42亿。 糖尿病是严重危害人类健康的重大疾病之一。
糖尿病的主要表现为糖代谢异常以及脂肪、蛋白质等物质的代谢紊乱，而 长期的高血糖状态会导致严重的糖尿病并发症，包括微血管并发症、糖尿病肾 病、糖尿病心肌病、糖尿病神经系统病变、糖尿病皮肤病变和糖尿病合并感染 等。
糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病最常见的微血管并发症之一，是导致终末期肾病的重要原因，至疾病终末期严重影响患者生活质量。 现代医学对于DKD防治多以降低血糖、控制血压、减少蛋白尿为主，但仍未使 疾病进展得到有效控制。糖尿病肾脏疾病广义上属于“消渴病”的范畴，根据其临 床症状可归属于“肾消”“膏淋”“虚劳”“水肿”“关格”等疾病。目前对于糖尿病肾病 病机尚未形成统一看法，其临床研究大多是各医家的临床试验，多采用自拟的 经验方进行干预，不利于后续进行药物作用机制的研究及临床推广运用。
发明内容
本发明提供针对现有香连丸治疗作用一直限于“用于大肠湿热所致的痢疾， 症见大便脓血、里急后重、发热腹痛，肠炎、细菌性痢疾见上述症候者”，新的 治疗作用并未开发的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供一种香连丸提取物，其中香连丸由4份 萸黄连和1份木香构成，所述香连丸提取物的黄连总生物碱的含量为38％～ 38.4％；所述黄连总生物碱包含小檗碱22.3％～22.5％，巴马汀6.1％～6.2％，黄 连碱6.4％～6.5％，表小檗碱3.1％～3.2％。
所述香连丸提取物按照方法制得：称取4份萸黄连、1份木香混合；样品粉 碎；用5倍量30％～80％乙醇回流提取1～3次；合并提取液，回收溶剂，得到 提取物浸膏，干燥即得。
本发明还提供一种香连丸，包含如上任一项所述的香连丸提取物。
本发明还提供一种药物组合物，包含如上任一项所述的香连丸提取物。
进一步的，所述药物组合物为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或合剂。
本发明还提供一种香连丸产物在预防或治疗糖尿病或糖尿病并发症药物中 的新用途；所述香连丸产物包括香连丸、浓缩香连丸、香连胶囊、香连丸提取 物、香连丸药物组合物、新香连胶囊中的至少一种；所述新香连胶囊为如上所 述的胶囊剂型的药物组合物。
进一步的，其中糖尿病并发症包含糖尿病肾病。
本发明还提供一种香连丸产物在预防或治疗高血脂药物中的新用途；所述 香连丸产物包括香连丸、浓缩香连丸、香连胶囊、新香连胶囊中的至少一种； 所述新香连胶囊为如上所述的胶囊剂型的药物组合物。
本发明还提供一种香连丸产物在预防或治疗脂肪肝药物中的新用途；所述 香连丸产物包括香连丸、浓缩香连丸、香连胶囊、新香连胶囊中的至少一种； 所述新香连胶囊为如上所述的胶囊剂型的药物组合物。
本发明还提供一种香连丸产物在预防或治疗肥胖症药物中的新用途；所述 香连丸产物包括香连丸、浓缩香连丸、香连胶囊、新香连胶囊中的至少一种； 所述新香连胶囊为如上所述的胶囊剂型的药物组合物。
除特殊说明外，本发明所述份数为重量份，所述百分比均为质量百分比。
本发明的有益效果是：
本发明公开了一种香连丸及其提取物、药物组合物与香连丸产物的新用途， 具有降血糖和预防糖尿病并发症(如糖尿病肾病)的作用，在糖尿病肾病模型 中，本发明香连丸提取物能降低血糖和UACR，加快神经传输速度，表明有明 显的治疗糖尿病及其并发症的作用；此外，本发明香连丸提取物还能降低血脂、 体重、肝脏脂肪含量，具有降血脂、减肥以及预防脂肪肝的作用。
再者，按照香连丸提取物制备方法，可使制得的药物组合物体积更小，更 容易造粒，口服更方便；
最后，将香连丸产物药物活性成分(香连丸提取物浸膏)制成的片剂、胶 囊剂、丸剂、颗粒剂等适合临床使用的药物制剂，有效提高了临床适应性。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面通过具体实施 方式对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用 以解释本发明，并不用于限定本发明。另外，除非另有特别说明，本发明中用 到的各种原材料、试剂、仪器和设备均可通过市场购买获得或现有方法制备得 到。
实施例1：
称取80g黄连片，20g吴茱萸，用5倍量30％的乙醇回流提取3次，合并提 取液，过滤回收溶剂，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，装胶囊，得到新香连胶囊。 HPLC(高效液相色谱法，HighPerformance Liquid Chromatography)含量分析， 新香连胶囊含小檗碱22.5％，巴马汀6.2％，黄连碱6.5％，表小檗碱3.2％。
实施例2：
称取80g黄连片，20g吴茱萸，用5倍量80％的乙醇回流提取1次，合并提 取液，过滤回收溶剂，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，装胶囊，得到新香连胶囊。 HPLC含量分析，新香连胶囊含小檗碱22.3％，巴马汀6.1％，黄连碱6.5％，表 小檗碱3.1％。
实施例3：
称取80g黄连片，20g吴茱萸，用5倍量50％的乙醇回流提取2次，合并提 取液，过滤回收溶剂，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，装胶囊，得到新香连胶囊。 HPLC含量分析，新香连胶囊含小檗碱22.4％，巴马汀6.2％，黄连碱6.4％，表 小檗碱3.1％。
实施例4治疗糖尿病及其并发症效果实验
对照药物1(小檗碱)：称取小檗碱单体1kg，加入淀粉，制备成胶囊剂， 控制小檗碱含量为38％。
对照药物2(黄连总生物碱)：称取黄连总生物碱，加入淀粉制备成胶囊剂， 控制黄连总生物碱为38％(小檗碱22.4％，巴马汀6.0％，黄连碱6.4％，表小檗 碱3.2％)。
对照药物3(香连丸)：4份萸黄连，1份木香。粉碎，混合均匀，水泛丸(《中 国药典》2015版)。HPLC分析总生物碱的含量为7.52％(小檗碱4.4％，巴马汀 1.2％，黄连碱1.28％，表小檗碱0.64％)。
对照药物4(浓缩香连丸)：4份萸黄连，1份木香。按照《中国药典》2015 版中加工“浓缩香连丸”的工艺生产浓缩香连丸。HPLC分析总生物碱的含量为 14.04％(小檗碱8.8％，巴马汀2.4％，黄连碱1.56％，表小檗碱1.28％)。
对照药物5(香连胶囊)：4份萸黄连，1份木香。按照部颁标准 (WS3-146(Z-136)-2004(Z))加工“香连胶囊”：木香用水蒸气蒸馏法提取挥发油， 收集挥发油，备用；提取挥发油后的水溶液滤过，滤液浓缩至适量，干燥，粉 碎成细粉；黄连用70％乙醇于75-80℃回流提取三次，第一次2小时，第二、三 次每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，干燥，粉碎 成细粉，加入上述细粉及适量的辅料，混匀，制颗粒，干燥，喷加木香挥发油， 混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。HPLC分析总生物碱的含量为28.08％(小 檗碱17.6％，巴马汀4.8％，黄连碱3.12％，表小檗碱2.56％)。
对照药物6：木香，粉碎以后，直接灌胃。
新香连胶囊：按照实施例3制备。HPLC分析总生物碱的含量为38.1％(小 檗碱22.4％，巴马汀6.2％，黄连碱6.4％，表小檗碱3.1％)。
治疗糖尿病及并发症实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则” 进行：将雄性db/m小鼠设为正常组，将雄性db/db小鼠(糖尿病肾病模型)分 为模型组、药物对照组，每组各10只。各药物组总生物碱(小檗碱、巴马汀、 黄连碱、表小檗碱之和)剂量为100mg/kg，木香组剂量为1329mg/kg；药物浓 度为10mg/mL(本浓度指总生物碱的浓度)，正常组和模型组分别给予同体积 的生理盐水，连续给药8周，实验结束后，用代谢笼收集其24h尿量，用ELISA 试剂盒测定其尿中尿微量白蛋白的含量(糖尿病肾病检测指标)；宰杀小鼠，取 下坐骨神经检测器神经传输速度(糖尿病神经病变检测指标)；最后，分别测定 其血肌酐等，计算24h尿微量白蛋白与尿肌酐的比值UACR(尿微量白蛋白除 以肌酐)。具体结果见表1。
表1药物治疗糖尿病及其并发症效果比较
组别
空腹血糖(mmol/L)
UACR(μg/mg)
神经传输速度(m/s)
空白组
4.32±1.68
58.29±5.83
71.2±4.5
模型组
29.78±2.72<sup>##</sup>
528.35±68.65<sup>##</sup>
32.1±2.5
对照药物1组(100mg/kg)
20.54±2.35<sup>**</sup>
310.45±30.14<sup>**</sup>
52.9±3.2<sup>*</sup>
对照药物2组(100mg/kg)
18.45±2.47<sup>**</sup>
302.84±31.93<sup>**</sup>
55.6±3.6<sup>**</sup>
对照药物3组(100mg/kg)
14.31±2.45<sup>**Δ</sup>
238.33±27.93<sup>**Δ</sup>
63.7±4.1<sup>**Δ</sup>
对照药物4组(100mg/kg)
14.11±2.46<sup>**Δ</sup>
235.66±22.41<sup>**Δ</sup>
64.3±3.7<sup>**Δ</sup>
对照药物5组(100mg/kg)
13.91±2.42<sup>**Δ</sup>
233.05±31.33<sup>**Δ</sup>
64.8±4.1<sup>**Δ</sup>
对照药物6组(1329mg/kg)
29.56±2.98
525.45±33.43
32.4±4.6
新香连胶囊组(100mg/kg)
13.11±2.18<sup>**Δ</sup>
228.05±21.35<sup>**Δ</sup>
66.8±4.3<sup>**Δ</sup>
注：与正常组相比:#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比:*P<0.05，**P<0.01；与总碱组相比：ΔP<0.05。
从表1中可以看到，与正常组相比，模型组血糖升高、UACR显著上升、 神经传输速度显著下降，表明造模成功(#P<0.05)。与模型组比较，各药物组 血糖显著下降，UACR显著降低，神经传输速度显著加快，表明有明显的治疗 糖尿病及其并发症的作用(*P<0.05)；总生物碱的效果优于小檗碱；香连丸系 列的效果优于黄连总生物碱(ΔP<0.05)。与总生物碱组相比，香连丸系列血糖 下降，UACR降低，神经传输速度加快；且均达到显著变化水平(P<0.05)， 表明香连丸、浓缩香连丸、香连胶囊、新香连胶囊降糖和预防糖尿病并发症效 果显著优于黄连总生物碱。实验还发现，木香并无降血糖和预防糖尿病的效果 (对照药物6)，但是，木香与黄连复配以后，却可以显著提高黄连的降糖效果， 表明黄连与木香具有降糖和治疗糖尿病并发症的协同作用。
实施例5降血脂、减肥和预防脂肪肝实验
对照药物1(小檗碱)：称取小檗碱单体1kg，加入淀粉，制备成胶囊剂， 控制小檗碱含量为38％。
对照药物2(黄连总生物碱)：称取黄连总生物碱，加入淀粉制备成胶囊剂， 控制黄连总生物碱为38％(小檗碱22.4％，巴马汀6.0％，黄连碱6.4％，表小檗 碱3.2％)。
对照药物3(香连丸)：4份萸黄连，1份木香。粉碎，混合均匀，水泛丸(《中 国药典》2015版)。HPLC分析总生物碱的含量为7.52％(小檗碱4.4％，巴马汀 1.2％，黄连碱1.28％，表小檗碱0.64％)。
对照药物4(浓缩香连丸)：4份萸黄连，1份木香。按照《中国药典》2015 版中加工“浓缩香连丸”的工艺生产浓缩香连丸。HPLC分析总生物碱的含量为 14.04％(小檗碱8.8％，巴马汀2.4％，黄连碱1.56％，表小檗碱1.28％)。
对照药物5(香连胶囊)：4份萸黄连，1份木香。按照部颁标准 (WS3-146(Z-136)-2004(Z))加工“香连胶囊”：木香用水蒸气蒸馏法提取挥发油， 收集挥发油，备用；提取挥发油后的水溶液滤过，滤液浓缩至适量，干燥，粉 碎成细粉；黄连用70％乙醇于75-80℃回流提取三次，第一次2小时，第二、三 次每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，干燥，粉碎 成细粉，加入上述细粉及适量的辅料，混匀，制颗粒，干燥，喷加木香挥发油， 混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。HPLC分析总生物碱的含量为28.08％(小 檗碱17.6％，巴马汀4.8％，黄连碱3.12％，表小檗碱2.56％)。
对照药物6：木香，粉碎以后，直接灌胃。
新香连胶囊：按照实施例3制备。HPLC分析总生物碱的含量为38.1％(小 檗碱22.4％，巴马汀6.2％，黄连碱6.4％，表小檗碱3.1％)。
降血脂实验方法参照“天然药物(中药)新药研究指导原则”进行：将金黄地 鼠分为7组，空白组(10只)给予正常饲料，高脂组(60只)给予高脂饲料； 4周后，检测血脂指标，再将高脂组造模成功的金黄地鼠分为6组(每组8～10 只)；各高脂组继续给与高脂饲料；小檗碱组剂量为100mg/kg，其余药物组总生 物碱(小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱之和)剂量为100mg/kg，木香组剂 量为1329mg/kg；正常组(空白组)和模型组分别给予同体积的生理盐水；连续 灌喂4周。然后采空腹血检测血脂指标，总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、体 重和肝脏脂肪，具体结果见表2。
表2降血脂和减肥效果比较
注：与正常组相比:#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比:*P<0.05，**P<0.01；与总碱组相比：ΔP<0.05。
从表2中可以看到，与正常组相比，模型组的血脂、体重和肝脏脂肪含量 明显升高，表明造模成功(#P<0.05)。与模型组相比，各药物组的血脂、体重、 肝脏脂肪含量均有明显下降，且达到显著水平，表明降血脂、减肥和预防脂肪 肝效果明显(*P<0.05)；总生物碱的降血脂、减肥和控制脂肪肝的效果优于黄连 素；与总生物碱组相比，香连丸系列产品的降血脂、减肥和预防脂肪肝的效果 优于黄连总生物碱，且达到显著水平，表明香连丸、浓缩香连丸、香连胶囊、 新香连胶囊的降血脂、减肥和预防脂肪肝效果明显(Δp<0.05)。实验还发现， 木香几乎没有降血脂、减肥和预防脂肪肝的效果(对照药物6)，但是，木香与 黄连复配以后，却可以显著提高黄连的降血脂、减肥和预防脂肪肝效果，表明 黄连与木香具有降血脂、减肥和预防脂肪肝的协同作用。
实施例6：药物安全性实验
实验方法为：将70只4周龄Km小鼠，屏障隔离系统平衡3～5天，无菌饲 料和水充足。将小鼠随机分为7组，每组10只；将本发明新香连胶囊和各药物 对照组分别配制为20％的溶液，除空白对照组外，各药物实验组分别灌胃0.6mL， 8小时灌胃一次，连续灌胃三次(总剂量18g/kg)。然后，让小鼠自由采食，3 天以后检测体重，15天以后，统计每组死亡率，结果见表3。
对照药物1(小檗碱)：称取小檗碱单体1kg，加入淀粉，制备成胶囊剂， 控制小檗碱含量为38％。
对照药物2(黄连总生物碱)：称取黄连总生物碱，加入淀粉制备成胶囊剂， 控制黄连总生物碱为38％(小檗碱22.4％，巴马汀6.0％，黄连碱6.4％，表小檗 碱3.2％)。
对照药物3(香连丸)：4份萸黄连，1份木香。粉碎，混合均匀，水泛丸(《中 国药典》2015版)。HPLC分析总生物碱的含量为7.52％(小檗碱4.4％，巴马汀 1.2％，黄连碱1.28％，表小檗碱0.64％)。
对照药物4(浓缩香连丸)：4份萸黄连，1份木香。按照《中国药典》2015 版中加工“浓缩香连丸”的工艺生产浓缩香连丸。HPLC分析总生物碱的含量为 14.04％(小檗碱8.8％，巴马汀2.4％，黄连碱1.56％，表小檗碱1.28％)。
对照药物5(香连胶囊)：4份萸黄连，1份木香。按照部颁标准 (WS3-146(Z-136)-2004(Z))加工“香连胶囊”：木香用水蒸气蒸馏法提取挥发油， 收集挥发油，备用；提取挥发油后的水溶液滤过，滤液浓缩至适量，干燥，粉 碎成细粉；黄连用70％乙醇于75-80℃回流提取三次，第一次2小时，第二、三 次每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，干燥，粉碎 成细粉，加入上述细粉及适量的辅料，混匀，制颗粒，干燥，喷加木香挥发油， 混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。HPLC分析总生物碱的含量为28.08％(小 檗碱17.6％，巴马汀4.8％，黄连碱3.12％，表小檗碱2.56％)。
新香连胶囊：按照实施例3制备。HPLC分析总生物碱的含量为38.1％(小 檗碱22.4％，巴马汀6.2％，黄连碱6.4％，表小檗碱3.1％)。
试验方法：将药物配制为20％的溶液，每只小鼠灌胃1mL溶液，然后观察 小鼠的体重变化和统计15天内的死亡情况。结果见下表3。
表3安全性评价实验结果
从表3中可以看到，直接给小鼠口服大剂量药物，小鼠体重有些下降；香 连丸组还有一只小鼠死亡。观察3天体重的变化可以发现，直接给小鼠口服“香 连丸”(对照药物3)，小鼠体重下降比较严重(*P<0.05)，随着药物“浓缩程度提 高”，小鼠体重增加，表明药物的安全性增加；这可能与原料药含有较多的杂质， 安全性下降有关。
以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认 定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换， 都应当视为属于本发明的保护范围。
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