具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护范围。

实施例1

本发明实施方式提供一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂，包含活性孢子、0.01wt％分散剂、0.01wt％诱导剂、0.01wt％稳定剂、0.01wt％活性物质；所述活性物质为蔗糖。

优选的，所述活性孢子浓度为0.2×10⁸/ml。

优选的，所述分散剂包含萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐。

优选的，所述萘磺酸盐甲醛缩合物聚合度100。

优选的，所述烷基萘磺酸盐包含6碳原子烷基链。

优选的，所述稳定剂包含黄原胶、碳酸钠、乳酸钠和水杨酸，质量比为1：1.2：1.2：1.2。

一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂的应用，使用上述悬浮剂防治蝗虫。

优选的，所述蝗虫包括田地、滩涂、草原和山林的蝗虫。

优选的，所述悬浮剂的用量40mL/亩。

本发明实施方式还公开一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂制备方法，用于制备上述悬浮剂，包括以下步骤：

(1)定量称取所述活性物质，加入适量的水，搅拌至完全溶解得混合溶液一；

(2)将稳定剂溶于适量水加热溶解并冷却后得稳定剂溶液，向所述溶液一中加入所述分散剂和所述稳定剂溶液，混合均匀，得混合溶液二；

(3)定量称取微孢子虫孢子母液所述加入混合溶液二中，进一步定量加入水，混合均匀，得最终孢子水悬浮剂产物。

实施例2

本发明实施方式提供一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂，包含活性孢子、10wt％分散剂、5wt％诱导剂、5wt％稳定剂、4wt％活性物质；所述活性物质包含葡萄糖、蔗糖。

优选的，所述活性孢子浓度为0.4×10⁸/ml。

优选的，所述分散剂包含萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐。

优选的，所述萘磺酸盐甲醛缩合物聚合度3000。

优选的，所述烷基萘磺酸盐包含20碳原子烷基链。

优选的，所述稳定剂包含黄原胶、碳酸钠、乳酸钠和水杨酸，质量比为1：1.5：1.5：1.5。

一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂的应用，使用上述悬浮剂防治蝗虫。

优选的，所述蝗虫包括田地、滩涂、草原和山林的蝗虫。

优选的，所述悬浮剂的用量50ml/亩。

一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂制备方法，用于制备上述悬浮剂，包括以下步骤：

(1)定量称取所述活性物质，加入适量的水，搅拌至完全溶解得混合溶液一；

(2)将稳定剂溶于适量水加热溶解并冷却后得稳定剂溶液，向所述溶液一中加入所述分散剂和所述稳定剂溶液，混合均匀，得混合溶液二；

(3)定量称取微孢子虫孢子母液所述加入混合溶液二中，进一步定量加入水，混合均匀，得最终孢子水悬浮剂产物。

实施例3

本发明实施方式提供一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂，包含活性孢子、5wt％分散剂、2wt％诱导剂、2wt％稳定剂、2wt％活性物质；所述活性物质为葡萄糖、蔗糖、海藻糖的混合物。

优选的，所述活性孢子浓度为2×10⁸/ml。

优选的，所述分散剂包含萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐。

优选的，所述萘磺酸盐甲醛缩合物聚合度1000。

优选的，所述烷基萘磺酸盐包含10碳原子烷基链。

优选的，所述稳定剂包含黄原胶、碳酸钠、乳酸钠和水杨酸，质量比为1：1.8；1.8：1.8。

一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂的应用，使用上述悬浮剂防治蝗虫。

优选的，所述蝗虫包括田地、滩涂、草原和山林的蝗虫。

优选的，所述悬浮剂的用量80ml/亩。

一种蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂制备方法，用于制备上述悬浮剂，包括以下步骤：

(1)定量称取所述活性物质，加入适量的水，搅拌至完全溶解得混合溶液一；

(2)将稳定剂溶于适量水加热溶解并冷却后得稳定剂溶液，向所述溶液一中加入所述分散剂和所述稳定剂溶液，混合均匀，得混合溶液二；

(3)定量称取微孢子虫孢子母液所述加入混合溶液二中，进一步定量加入水，混合均匀，得最终孢子水悬浮剂产物。

一些可选的实施例，采用优化的分散剂体系，采用萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐组合物，疏水基团和孢子细胞膜结合，亲水萘磺酸基团改善了和水的亲和性，可以长期不分层保持静置稳定；

一些可选的实施例，萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐组合物在干燥环境中可以在微孢子虫表面形成保水层，在干燥情况下保持微孢子虫较长时间活性；

一些可选的实施例，采用添加活性物质，为了微孢子虫休眠期间提供必须的营养物质，进一步提高了微孢子虫孢子的储存存活率；

一些可选的实施例，采用优化的组合稳定剂，对微孢子虫噬菌体具有良好的抑制作用，进一步提高了微孢子虫孢子的储存存活率；

一些可选的实施例，活性物质同时作为蝗虫敏感的诱导剂，使得蝗虫被诱导集中取食，提高虫孢子摄入和杀虫效率，在较低使用量下即可取得良好的杀虫效果；

一些可选的实施例，杀虫孢子属于自然界物质是蝗虫得专性寄生物，只对蝗虫有效，且孢子水悬浮剂成分均为无毒无害物质，因此不易对环境和农产品不会造成污染，也不易使得害虫产生抗药性，对人畜无毒。

实验例1

蝗虫可依靠分布在其触角上的特殊嗅觉器官，获取外界散发信息气味，由于自然选择结果，蝗虫通过对营养丰富植物具有取食倾向，根本原因是对喜食植物部分信息素敏感，通过对植物内信息物质研究，提取具有可引诱蝗虫接近或者取食接触的物质。

进一步地研究发现，小分子糖类和淀粉物质主要对蝗虫进食倾向和进食量有影响，其原因是淀粉和小分子糖类是高效供能物质，便于生物体迅速补充能量；但由于其挥发性不强，不能直接对嗅觉感知的蝗虫造成影响。其意义在于在和杀虫孢子等搭配使用时，可以增加蝗虫取食倾向和对毒素摄入量进而增大灭杀率和灭杀效率。

具体试验方式如下：如图1所示，在一片宜蝗区随机放入20片0.5米*0.5米宽的PVC正方形白板，各白板距离相隔10米。随机取5片在白板上涂抹实施例1制备孢子悬浮剂，编号1-5，作为试验组一；随机另取5片在白板上涂抹孢子悬浮剂样品一，和实施例1制备样品相比将蔗糖换为葡萄糖，编号6-10，作为试验组二；随机另取5片在白板上涂抹孢子悬浮剂样品二，和实施例1制备样品相比将蔗糖换为海藻糖，编号11-15，作为试验组三；最后5片喷孢子悬浮剂样品三，和实施例1制备样品相比不含蔗糖，编号16-20作为对照组。分别在10片白板正中上方50米左右摆一个垂直向下的摄像头，从早8点-晚6点每隔3小时分别对白板进行拍照，记录照片中蝗虫个数，结果如表1所示：蔗糖、葡萄糖和海藻糖对蝗虫取食倾向诱导能力依次降低；且较未添加蔗糖、葡萄糖和海藻糖物质对照组显示有明显取食倾向诱导作用。

表1取食倾向测试

实验例2

内活性测定试验

1.试验目的

以东亚飞蝗3龄若虫(蝗蝻)为供试靶标，依照NY/T1154.2-2006夹毒叶片法，测定蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂的活性。

2.试验条件

供试靶标：以东亚飞蝗3龄若虫(蝗蝻)为供试靶标。

仪器设备：

电子天平(最小称量值0.1mg)

打孔器，毛细管点滴器

250ml透明塑料杯

直径为9cm的培养皿

烧杯

移液器

镊子

纱布、皮筋等

3.试验设计

试材准备：

东亚飞蝗

饲养温度为28±1℃，湿度为50±10％，24h光照，喂食玉米叶。

药剂：

试验药剂：蝗虫微孢子虫孢子母液(2×10¹⁰/ml)。

对照药剂：95％氟虫腈原药。

4.试验步骤

药剂配制：

用本发明蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂配方(实施例1)稀释蝗虫微孢子虫孢子母液，分别配制成2×10⁵、2×10⁶、2×10⁷、2×10⁸、2×10⁹/ml孢子水悬浮剂。

对照药剂：将95％氟虫腈原药用丙酮溶解，制成5mg/L溶液，备用。

空白对照：用没有蝗虫微孢子虫孢子的水悬浮剂做为CK。

试虫准备：

挑选龄期一致的3龄东亚飞蝗蝗蝻，饥饿8h，选取50头蝗蝻，用电子天平称重，计算每头平均质量。

夹毒叶片制作：

用直径为1cm的打孔器打取新鲜玉米叶片，用移液器从低浓度开始，滴加1ul的待测药液于叶片上，与另一片涂有淀粉糊的叶蝶对合制成夹毒叶蝶。制作完毕后，用插有硬三角片的大头针固定叶蝶，放置于透明塑料杯中，供蝗蝻取食。每个处理4个重复，每个重复试虫数为20只。对照药剂和空白对照也照此方法处理。

药剂处理：

每个透明塑料口杯放置1头蝗蝻，置于正常条件下培养。4h后，待试虫完全取食完叶蝶后，对试虫进行正常喂养(饲养温度为28±1℃，湿度为50±10％，24小时光照，喂食新鲜玉米叶)至调查。将未完全取食整张叶蝶的蝗蝻去除。

5.调查

根据蝗虫微孢子虫的作用特点，分别在处理后7d、14d、21d、30d进行调查，记录总虫数和死虫数。

6.数据统计与分析

计算方法：

根据NY/T1154.2-2006中5.1方法，计算各处理的试虫吞食药量和校正死亡率。

7.结果

以不同浓度的蝗虫微孢子虫处理3龄东亚飞蝗蝗蝻后，试虫吞食药量和第30天的死亡情况如表2所示：

表2.处理30天后蝗虫微孢子孢子水悬浮剂及对照药剂对东亚飞蝗的死亡率

注：3龄东亚飞蝗蝗蝻的平均重量为7.5×10^-2g/头；不同浓度处理的校正死亡率采用新复极差法进行比较，差异水平为P<0.05。

通过室内活性测定试验，2×10⁹/mL、2×l0⁸/mL、2×l0⁷/mL蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂处理的蝗蝻死亡率都达到95％以上，与对照药剂氟虫腈处理的蝗蝻死亡率96.94％相当，说明以蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂有效。

实验例3

为进一步验证微孢子虫悬浮剂抗分层沉淀，制备悬浮剂A作为空白对照，悬浮剂A不含分散剂，其余同实施例2；制备悬浮剂B作为试验组四，悬浮剂B仅含萘磺酸盐甲醛缩合物分散剂其余同实施例2；制备悬浮剂C作为试验组五，悬浮剂C仅含烷基萘磺酸盐其余同实施例2；实施例2制备样品作为试验组六。通过浊度仪测试静置不同时间的溶液浊度(NTU)；所选设备测量浊度，即水的混浊程度，可直接测量微量不溶性悬浮物质浓度；所选测量周期为30d，具体试验结果如表3：

表3不同干燥静置时间微孢子虫悬浮剂浊度

从试验结果可知，优化的分散剂体系，采用萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐组合物，疏水基团和孢子细胞膜结合，亲水萘磺酸基团改善了和水的亲和性，试验组四至六组中悬浮孢子可以长期不分层保持静置稳定；而对照组中由于缺少分散体系5d以后溶液浊度及悬浮物浓度迅速降低，下降速度远远高于试验组四至六。试验组四、试验组五和试验组六不同之处，试验组六采用萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐组合物，而试验组四和试验五只包含其中一种物质，实验结果显示试验组六孢子悬浮物浊度下降速率明显低于试验组四和试验组五，因而可以得出结论：萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐组合物抗沉淀分层效果较二者单独使用更为理想。

实验例4

为进一步验证微孢子虫悬浮剂分散剂对微孢子虫干燥环境下活性保持能力，选取实施例2制备微孢子虫悬浮剂作为试验组；制备悬浮剂A作为空白对照，悬浮剂A不含分散剂，其余同实施例2；在35-40℃、相对湿度10％-20％静置不同时间(0d、5d、10d、15d、20d、25d、30d)，方法同实验例2，具体结果如表4：

表4不同静置时间微孢子虫悬浮剂处理东亚飞蝗的死亡率

试验结果显示：含有分散剂组分的试验组较不含分散剂组分的对照组样品中在干燥环境下可以更长久的保持活性，在干燥环境下静置30d后被感染蝗虫依然有11.25％死亡率；而对照组在10d后几乎就不再有杀虫效果；这是因为在储存萘磺酸盐甲醛缩合物及烷基萘磺酸盐组合物含有吸水极性基团在干燥环境中可以在微孢子虫表面形成保水层，在干燥情况下保持微孢子虫较长时间活性。

实验例5

为进一步验证活性物质对微孢子虫储存活性影响，以实施例1制备微孢子虫悬浮剂作为试验组七，悬浮剂含有活性物质蔗糖；制备悬浮剂D作为试验组八，悬浮剂含有活性物质葡萄糖，其余同实施例1；制备悬浮剂E作为试验组九，悬浮剂含有活性物质海藻糖，其余同实施例1；制备微孢子虫悬浮剂F作为空白对照组，不含任何活性物质；试验方法同实验例2，具体结果如表5：

表5含有不同活性成分的微孢子虫悬浮剂处理东亚飞蝗的死亡率

试验结果显示：采用添加活性物质，试验组七至九杀虫率远远优于不含活性物质的对照组，包含葡萄糖的试验组八显著优于试验组九和试验组七中海藻糖和蔗糖单独作为活性物质使用时，这说明活性物质为了微孢子虫休眠期间提供必须的营养物质，进一步提高了微孢子虫的储存存活率，且葡萄糖作为单独活性物质所起到效果更为显著。

实验例6

为进一步验证稳定剂对噬菌体抑制作用进而对微孢子虫储存活性的影响，添加微孢子虫浓度1％浓度的T7噬菌体进行试验：以实施例1制备微孢子虫悬浮剂作为试验组十；制备悬浮剂G作为试验组十一，悬浮剂稳定剂成分仅含有碳酸钠，其余同实施例1；制备悬浮剂H作为试验组十二，悬浮剂稳定剂成分仅含有乳酸钠，其余同实施例1；制备悬浮剂I作为试验组十三，悬浮剂稳定剂成分仅含有水杨酸，其余同实施例1；制备微孢子虫悬浮剂J作为空白对照组，不含任何稳定剂成分；试验方法同实验例2，具体结果如表6：

表6含有不同稳定剂组成的微孢子虫悬浮剂处理东亚飞蝗的死亡率

试验结果显示：采用优化的组合稳定剂，杀虫率远远优于不含稳定剂成分的对照组，并显著优于碳酸钠、乳酸钠和水杨酸单独作为稳定剂使用，对微孢子虫T7噬菌体具有良好的抑制作用，进一步提高了微孢子虫的储存存活率。

实验例7

田间药效试验

1.试验目的

根据NY/T1464.1-2007“农药田间药效试验准则第1部分；杀虫剂防治飞蝗”规定的方法，旨在明确不同剂量的2000万/ml蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂对非耕地蝗虫的防治效果及对非耕地植株和非靶标有益昆虫等的安全性，明确其适宜的施药时期、用量和方法，为应用该农药奠定基础。

2.试验条件

试验对象、作物和品种的选择

试验对象：为东亚飞蝗LocustamigratoriamanilensisMeyen。

试验作物：为非耕地，主要草种为小芦苇和马绊草等，以小芦苇为主。

环境或设施栽培条件

试验地选在临海荒滩草地，滩地面积大，混生有多种杂草，植被高度在50-70cm，地势平坦；试验地飞蝗中度发生。

3.试验设计和安排

药剂：

试验药剂：2000万/ml蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂；对照药剂：100亿孢子/克金龟子绿僵菌可湿性粉剂。

药剂用量与编号：

表7供试药剂试验设计

供试药剂和对照药剂10个试验组，加空白对照，共计11个数据组；

小区面积和重复：

小区面积：666.6平方米。

重复次数：4次。

施药方法：喷雾，药剂均匀喷洒于杂草表面。

施药器械：喷雾器。

使用容量：亩用药液50千克(750Kg/hm²)。

防治其他病虫害的药剂资料：本试验地在试验前及试验期间未喷施其它药剂。

4.调查、记录和测量方法

气象及土壤资料：

气象资料：施药当日多云，平均气温24℃，最高气温32℃,最低气温22℃，相对湿度30-40％，西南风4级。

土壤资料：试验地土壤为滨海潮土，偏碱性，土壤肥力较差。

调查方法、时间和次数：

调查时间和次数：施药前调查基数，施药后7、14、21天调查防治效果，共调查4次。

调查方法：每个小区采用五点抽样的方法，东西南北中5个方位进行分配。每点不少30平方米，用捕虫网贴地全面捕捉。调查活虫数，并记录。

药效计算：

方法以校正虫口减退率表示防治效果，按照“农药田间药效试验准则(一)”规定方法进行统计计算，计算公式为：

虫口减退率(％)＝[(施药前活虫数-施药后活虫数)/施药前活虫数]×100

对照区虫口增加率(％)＝[(施药后活虫数-施药前活虫数)/施药后活虫数]×100

防治效果(％)＝[(处理区虫口减退率-对照区虫口增加率)/(1-对照区虫口增加率)]×100

对作物的直接影响：

试验期间观察，试验药剂和对照药剂各处理对各种植被生长无明显的影响。

产品的质量和产量：

未要求观测作物的质量和产量。

对其他生物影响

对其他病虫害的影响：未发现供试药剂试验剂量对其他病虫害的影响。

对其他非靶标生物的影响：未发现供试药剂试验剂量对其他非靶标生物有不良影响。

5.结果与分析

表8 2000万/ml蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂防治飞蝗试验结果

注：上表中的防效(％)为各重复平均值。

用邓肯氏新复极差(DMRT)法对试验结果数据进行分析。

药剂评价：综合上述试验结果可以看出，2000万/ml蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂防治非耕地飞蝗防治效果较好，使用制剂用量为20ml/亩时，施药后21天死亡率可达到68.36％；超过50ml/亩时，死亡率超过80％，继续增大用量，死亡率变化不显著。

推荐剂量：推荐剂量为制剂量20-60ml/亩。

安全性：田间观察表明，在所用剂量下2000万/ml蝗虫微孢子虫孢子水悬浮剂对草地生长、有益天敌种类和数量等无不良影响。

本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体案例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。