可用作RORγ调节剂的苯胺类化合物
阅读说明：本技术 可用作RORγ调节剂的苯胺类化合物 (Anilines useful as ROR gamma modulators ) 是由 程耀邦 黄亚飞 周娟 董志强 于 2021-05-14 设计创作，主要内容包括：本发明涉及式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、包含其的药物组合物、使用其治疗或预防与RORγt有关的疾病的方法,以及其在制备用于治疗或预防RORγt有关的疾病的药物中的用途。(The present invention relates to compounds of formula (I), stereoisomers, tautomers, stable isotopic variations, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, pharmaceutical compositions comprising the same, methods of using the same for treating or preventing diseases associated with ROR γ t, and uses thereof in the manufacture of a medicament for treating or preventing ROR γ t-associated diseases.)
具体实施方式
，还涵盖上述各个实施方式或具体实施方式的任何组合或亚组合构成的实施方式，也涵盖以上任何优选或例举的任何组合所构成的实施方式。
优选地，本发明的式(I)化合物是具有式(Ia)、尤其是式(Ia’)的化合物，其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
其中R1、R2、R3、R4和n各自具有上文对式(I)化合物的一般或具体实施方式中所定义的含义。
更优选地，本发明的式(I)化合物是具有式(Ia)、尤其是式(Ia’)的化合物，其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中
R1选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或5-7元杂环烯基，其中每个任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：卤素、Ra或-ORa；
R2在每次出现时独立地选自氢、卤素或任选被卤素取代的C1-C6烷基；
R3选自氢、C1-C6烷基、C3-C7环烷基或-NRaRb，其中的C1-C6烷基或C3-C7环烷基任选被独立地选自以下的基团取代：卤素、Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-S(O)2NRaRb、-ORa或-NRaRb；
R4选自C1-C6烷基或-NRaRb，所述的C1-C6烷基任选被独立地选自以下的基团取代：Ra、卤素、-ORa或-NRaRb；
Ra和Rb各自独立地选自H，或任选被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基或任选被一个或多个卤素取代的C3-C7环烷基；且
n是0、1或2。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R1为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，其被至少3个独立地选自以下的基团取代：卤素、Ra或-ORa，其中Ra是H或被一个或多个卤素取代的C1-C3烷基。在更具体的实施方式中，R1为C1-C3烷基，其被2个被至少3个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基和1个独立地选自卤素(优选F)或-OH的基团取代，例如R1为甲基、乙基或丙基，取代基为两个三氟甲基或三氟乙基和一个卤素，或取代基为两个三氟甲基或三氟乙基和一个-OH。
在具体的实施方式中，R1为甲基，其被两个被至少三个F取代的C1-C3烷基和一个选自F、Cl、Br、I或-OH的基团取代。在具体的实施方案中，R1为
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R1为C1-C6烷氧基，其被一个或多个卤素取代。在更具体的实施方式中，R1为C1-C3烷氧基，其被一个或多个卤素、优选至少三个卤素(优选F)取代，例如三氟甲氧基、三氟乙氧基、三氟丙氧基、五氟乙氧基。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R1为5-7元杂环烯基，其任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：卤素、Ra或-ORa，其中Ra是H或被一个或多个卤素取代的C1-C3烷基。在更具体的实施方式中，R1为包含1个选自N、O或S的杂原子的环戊烯基或环己烯基，例如任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：卤素(优选F)、Ra或-ORa，其中Ra是H或被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R2在每次出现时独立地选自氢或卤素。在更具体的实施方式中，R2为H。在更具体的实施方式中，n＝1且R2在每次出现时独立地选自卤素、优选F或Cl。在更具体的实施方式中，n＝2且R2在每次出现时独立地选自卤素、优选F或Cl。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R3为H。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R3为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R3为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，其任选被-C(O)ORa或-C(O)NRaRb取代，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基。在更具体的实施方案中，R3为例如甲基、乙基、丙基、异丙基、-CH2COOH、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2COOH、-CH2-COOCH3、-CH2-CH2-COOCH3、-CH2-COOCF3、-CH2-CH2-COOCF3、-CH2C(O)NH2、--CH2C(O)NHCH3、-CH2C(O)N(CH3)2等。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R3为-C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，任选被-NRaRb取代，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基。具体的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、甲基氨基甲基、二甲基氨基甲基、甲基乙基氨基甲基等。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R3为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，被任选被卤素(优选F)取代的C3-C7环烷基取代。具体的实例包括但不限于环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基甲基、环丁基乙基、环戊基甲基、环戊基乙基等。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R3为C3-C7环烷基，其任选被独立地选自以下的基团取代：卤素、Ra、-C(O)ORa或-NRaRb，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基。在更具体的实施方式中，R3为C3-C5环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R3为-NRaRb，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基，例如-NH2、-NHCH3、-NCH3CH3、-N(CH2CH3)CH3、-N(CH2CH3)(CH2CH3)-、-NHCF3、-N(CH3)CF3、-N(CF3)CF3、-N(CH2CF3)CF3或-N(CH2CF3)(CH2CF3)-。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，R4为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，任选被一个或多个卤素(优选F)取代，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、三氟乙基、四氟乙基、五氟丙基等。在更具体的实施方式中，R4选自C1-C3烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的实施方式中，R4为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C3-C7环烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、-CH2-CF3、-CH2-环丙基、-CH2-环丁基、-CH2-环戊基、-CH2-CH2-环丙基、-CH2-CH2-环丁基、-CH2-CH2-环戊基等。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的实施方式中，R4为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，任选被-NRaRb取代，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基，例如-CH2NH2、-CH2CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CH2N(CH2CH3)CH3、-CH2N(CH2CH3)(CH2CH3)-、-CH2NHCF3、-CH2N(CH3)CF3、-CH2N(CF3)CF3、-CH2N(CH2CF3)CF3或-CH2N(CH2CF3)(CH2CF3)等。
在一种式(I)化合物的实施方式中，R4选自-NRaRb，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C6烷基。在具体的实施方案中，R4选自例如-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)CH3、-N(CH2CH3)(CH2CH3)-、-NHCF3、-N(CH3)CF3、-N(CF3)CF3、-N(CH2CF3)CF3或-N(CH2CF3)(CH2CF3)-。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，n是0。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，n是1。
在一种上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物的具体实施方式中，n是2。
需要说明的是，上述更优选式(Ia)、尤其是式(Ia’)化合物涵盖以上各个独立的实施方式或各个具体实施方式，还涵盖上述各个实施方式或具体实施方式的任何组合或亚组合构成的实施方式。
最优选地，本发明的式(I)化合物是具有式(Ia”)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
其中：
R1a、R1b、R1c中的任意两个选自被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基，且R1a、R1b、R1c中的另一个独立地选自卤素或-ORa；
R2在每次出现时独立地选自氢、卤素或任选被卤素取代的C1-C6烷基；
R3选自氢、C1-C6烷基、C3-C7环烷基或-NRaRb，其中的C1-C6烷基或C3-C7环烷基任选被独立地选自以下的基团取代：-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-S(O)2NRaRb、-ORa或-NRaRb；
R4选自C1-C6烷基；
Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基；且
n是0、1或2。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R1a、R1b、R1c中的任意两个为被至少3个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基，另一个独立地选自卤素(优选F)、-OH或被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷氧基，例如
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R2在每次出现时独立地选自氢或卤素。在更具体的实施方式中，R2为H。在更具体的实施方式中，n＝1且R2在每次出现时独立地选自卤素，优选F或Cl。在更具体的实施方式中，n＝2且R2在每次出现时独立地选自卤素，优选F或Cl。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R3为H。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R3为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R3为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，其任选被独立地选自以下的基团取代：-C(O)ORa或-NRaRb，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、甲基氨基甲基、二甲基氨基甲基、甲基乙基氨基甲基、-CH2COOH、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2COOH、-CH2-COOCH3、-CH2-CH2-COOCH3、-CH2-COOCF3、-CH2-CH2-COOCF3等。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R3为C3-C7环烷基，其任选被独立地选自以下的基团取代：-C(O)ORa或-NRaRb，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基。在更具体的实施方式中，R3为C3-C5环烷基，例如环丙基、环丁基或环戊基。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R3为-NRaRb，其中Ra和Rb各自独立地选自H或任选被一个或多个卤素(优选F)取代的C1-C3烷基，例如-NH2、-NHCH3、-NCH3CH3、-N(CH2CH3)CH3、-N(CH2CH3)(CH2CH3)-、-NHCF3、-N(CH3)CF3、-N(CF3)CF3、-N(CH2CF3)CF3或-N(CH2CF3)(CH2CF3)-。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，R4为C1-C6烷基，优选C1-C3烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，n是0。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，n是1。
在一种上述最优选式(Ia”)化合物的具体实施方式中，n是2。
需要说明的是，上述最优选式(Ia”)化合物涵盖以上各个独立的实施方式或各个具体实施方式，还涵盖上述各个实施方式或具体实施方式的任何组合或亚组合构成的实施方式。
本发明第一方面还提供以下式(Ib)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其也是式(I)化合物的子集，
其中：
X1和X2各自独立地选自C、N、O或S，条件是(1)X1和X2不同时为O和/或S，和(2)至少X1和X2之一选自N、O或S；
R1、R2、R3、R4和n具有上文对式(I)化合物所定义的含义。
在一种式(Ib)化合物的实施方式中，X1选自N、O或S，X2为CH。
在一些式(Ib)化合物的实施方式中，R1、R2、R3、R4和n各自具有上文对更优选式(Ia)化合物定义的各实施方式或具体实施方式中给出的含义。
在一些式(Ib)化合物的实施方式中，R1、R2、R3、R4和n各自具有上文对最优选式(Ia”)化合物定义的各实施方式或具体实施方式中给出的含义。
需要说明的是，上述式(Ib)化合物涵盖各个独立的实施方式或各个具体实施方式，还涵盖其上述各个实施方式或具体实施方式的任何组合或亚组合构成的实施方式。
本发明化合物的具体实施方式包括但不限于以下化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
本发明化合物的优选具体实施方式包括以下化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
本发明的有益效果
本发明提供了一类具有通式(I)结构的苯胺类化合物，经研究发现，该类化合物可有效抑制RORγt蛋白受体，从而调控Th17细胞的分化，抑制IL-17的产生，可作为炎症及自身免疫性相关类疾病的治疗药物。
具体而言，本发明的化合物具有下列有益效果：
对RORγt受体有高的抑制活性，RORγt荧光素酶报告基因试验中显示IC50在0.1nM～10μM范围，优选在0.1nM～0.5μM范围；
调控Th17细胞的分化，抑制IL-17的产生；和/或
具有良好的药物代谢动力学性质，例如具有更长的t1/2，从而例如可以加大给药间隔，更长的半衰期，使患者具有更好的依从性；
具有改善的AUC0-last数据，具有更好的成药性，更高的生物利用度；和/或良好的安全性，如透膜性、P450(减少的药物相互作用风险)、溶解性等优异的性质。基于以上本发明化合物的有益效果，本发明还提供以下各个方面的技术方案。
用于治疗或用作药物的本发明化合物
一方面，本发明提供用作药物、尤其是用作RORγt抑制剂的本发明化合物。
另一方面，本发明提供用于治疗、尤其是用于治疗和/或预防与RORγt有关疾病的本发明化合物。
在具体的实施方式中，本发明提供用于治疗和/或预防RORγt对所述疾病的发生和发展起到促进作用或抑制RORγt将降低疾病的发生率、减少或消除疾病病状的疾病的本发明化合物，所述疾病例如炎症或自身免疫性疾病、癌症等，包括但不限于银屑病、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主疾病、炎症性肠病、克隆氏病、溃疡性结肠炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、血管球性肾炎、狼疮性肾炎、心肌炎、甲状腺炎、干眼症、葡萄膜炎、白塞病、过敏性皮肤炎、粉刺、硬皮病、支气管炎、皮肌过敏性鼻炎、坏死性小肠结肠炎、肝纤维化、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、新冠病毒肺炎、胰岛素依赖性I型糖尿病、三阴乳腺癌和前列腺癌等。
药物组合物及其施用
另一方面，为了使用本说明书的化合物用于治疗或预防目的，可以将本发明化合物根据标准药学实践配制为药物组合物。同时，基于本发明化合物良好的药物代谢动力学性质、改善的AUC0-last、良好的成药性，由本发明化合物可制备具有更好的药动学性质、更高生物利用度的药物。
因此，本发明提供一种药物组合物，其包含上述本发明化合物和药学可接受的赋形剂。
在一个具体的实施方式中，提供了所述本发明的药物组合物，用于在哺乳动物如人受试者中预防或治疗与RORγt有关的疾病。
在一个具体的实施方式中，本发明的药物组合物可以另外包含适合与本发明化合物组合使用的另外的治疗活性成分。在另一个具体的实施方式中，所述另外的治疗剂如本文对药物组合所定义。
本发明的药物组合物可以通过本领域技术人员已知的技术来配制，如在Remington’sPharmaceutical Sciences第20版中公开的技术。例如，上述本发明的药物组合物，可以通过将本发明化合物与一种或多种药学可接受的赋形剂混合来制备。制备可进一步包括将一种或多种其它活性成分与本发明化合物和一种或多种药学可接受的赋形剂混合的步骤。
选择包含在特定组合物中的赋形剂将取决于多种因素、例如给药方式和所提供的组合物的形式。合适的药学可接受的赋形剂是本领域技术人员熟知的且描述于例如Ansel,Howard C.,等,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004中，包括例如佐剂、稀释剂(例如葡萄糖、乳糖或甘露醇)、载体、pH调节剂、缓冲剂、甜味剂、填充剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、加香剂、调味剂、其它已知添加剂。
本发明的药物组合物可以以标准方式施用。例如，合适的施用方式包括口服、静脉内、直肠、肠胃外、局部、经皮、眼、鼻、颊或肺(吸入)给药，其中肠胃外输注包括肌肉、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。为了这些目的，本发明的化合物可以通过本领域已知的方法配制成例如片剂、胶囊、糖浆、粉末、颗粒、水性或油性溶液或悬浮液、(脂质)乳剂、可分散粉末、栓剂、软膏、乳膏、滴剂、气溶胶、干粉制剂和无菌可注射水性或油性溶液或悬浮液的形式。
本发明化合物的预防或治疗剂量的大小将根据一系列因素而变化，包括所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言，有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约5000mg，例如约0.01至约1000mg/kg/日(单次或分次给药)。对70kg的人而言，这会合计为约0.007mg/日至约7000mg/日，例如约0.7mg/日至约1500mg/日。根据给药模式，本发明化合物在药物组合物中的含量或用量可以是约0.01mg至约1000mg，适合地是0.1-500mg，优选0.5-300mg，更优选1-150mg，特别优选1-50mg，例如1.5mg、2mg、4mg、10mg、25mg等；相应地，本发明的药物组合物将包含0.05至99％w/w(重量百分比)，例如0.05至80％w/w，例如0.10至70％w/w，例如0.10至50％w/w的本发明化合物，所有重量百分比均基于总组合物。应当理解，可能有必要在某些情况下使用超出这些限制的剂量。
在一种具体实施方式中，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明化合物和一种或多种药学可接受的赋形剂，该组合物被配制用于口服施用。该组合物可以以单位剂型提供，例如以片剂、胶囊或口服液体制剂的形式。这样的单位剂型可以含有0.1mg至1g，例如5mg至250mg的本发明化合物作为活性成分。
在一种具体实施方式中，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明化合物和一种或多种药学可接受的赋形剂，该组合物被配制用于局部施用。局部施用可以是以例如乳膏剂、洗剂、软膏剂或透皮贴剂的形式。
在一种具体实施方式中，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明化合物和一种或多种药学可接受的赋形剂，该组合物被配制用于吸入施用。吸入施用可以通过口服吸入，也可以通过鼻内施用。当通过口服吸入施用时，本发明的化合物可以以每日剂量有效地用于本发明，例如至多500μg，如0.1-50μg、0.1-40μg、0.1-30μg、0.1-20μg或0.1-10μg的本发明化合物。口服吸入的本发明药物组合物可以配制成干粉、悬浮液(在液体或气体中)或溶液(在液体中)，且可以以任何合适的形式和使用任何本领域已知的合适的吸入器装置施用，包括例如定量吸入器(MDI)、干粉吸入器(DPI)、喷雾器和软雾吸入器。多室装置可用于递送本说明书的化合物和一种或多种其它活性成分(当存在时)。
治疗方法和用途
基于上述本发明化合物具有的有益效果，本发明化合物可用于治疗动物，特别是哺乳动物例如人的各种病症的方法中。
因此，另一方面，本发明提供了调节、尤其是抑制RORγt活性的方法，所述方法包括使细胞与如前所述的本发明化合物相接触以调节、尤其是抑制细胞中RORγt的活性。
另一方面，本发明提供了预防或治疗与RORγt相关的疾病(例如通过RORγt抑制可治疗或预防的疾病)的方法，所述方法包括向需要其的个体施用有效量的如前所述的本发明化合物或包含其的本发明药物组合物。
另一方面，本发明提供了如前所述的本发明化合物或包含其的药物组合物的用途，用于抑制RORγt活性，或者用于治疗和/或预防与RORγt相关的疾病、例如通过RORγt抑制可治疗或预防的疾病。
另一方面，本发明还提供了如前所述的本发明化合物或包含其的药物组合物在制备药物中的用途，尤其是具有RORγt受体抑制剂活性的药物中的应用。
另一方面，本发明提供如前所述的本发明化合物或包含其的药物组合物在制备用于治疗或预防与RORγt相关的疾病、例如通过RORγt抑制可治疗或预防的疾病的药物中的用途，其中所述化合物或药物组合物任选地与一种或多种化学治疗或免疫治疗联合。
药物组合
本发明的化合物可以作为唯一的活性成分施用，也可以与另外的药物或疗法组合进行施用。所述另外的药物或疗法可以具有或产生相同或不同的药理学功效，但条件是在与本发明化合物联合使用时不会导致不期望的活性降低、不良相互作用或副作用。
因此，另一方面，本发明提供药物组合，包含如前所述的本发明化合物以及一种或多种通过相同或不同作用机制发挥作用的其他药物或疗法，或由二者组成。在具体的实施方式中，该药物组合用于抑制RORγt活性，或用于治疗和/或预防与RORγt相关的疾病。
本发明的药物组合中的本发明化合物和组合使用的其他活性剂可以通过相同或不同的施用途径同时、分别或依次施用。所述其他活性剂可以与本发明化合物在单一药物组合物中共同施用，或与本发明化合物处于不同的离散单元中分别施用，例如组合产品,优选为药盒形式。当分别施用时可以同时或相继进行，所述相继施用在时间上可以是接近或隔远的。而且，本发明的化合物和另外的药物可以(i)在将组合产品发送给医师之前(例如在包含本发明的化合物和另外的药物的药盒的情形中)；(ii)在临施用前由医师自身(或在医师指导下)；(iii)由患者自身、例如在本发明的化合物和另外药物的依次施用期间，一起加入组合治疗中。
因此，在具体的实施方式中，本发明还提供了药盒，其包含两种或多种单独的药物组合物，其中至少一种包含本发明的化合物，其余的包含组合使用的其他活性剂，以及分别容纳所述组合物的装置。本发明的药盒特别适用于施用不同的剂型，如口服剂型和胃肠外剂型，或者适合于以不同的剂量间隔施用不同的组合物。
在本发明的药物组合中，本发明化合物和其他活性剂在组合时的适合用量通常可由本领域技术人员通过例如从本说明书中描述的化合物的剂量范围和其它活性化合物的批准或公布的剂量范围开始来确定，共施用的其它药物的剂量当然将根据所用的共用药物的类型、所用具体药物、待治疗的病症、患者的一般健康状况、医师或兽医的判断等因素而变化。
就本发明的药物组合物和药物组合而言，所述其他活性剂可以是一种或多种与本发明化合物不会相互不利影响、具有增强、互补活性的第二种或另外的(例如第三种)化合物，例如这些活性剂可以是已知调节其他生物活性通路的化合物，或者可以是调节本发明化合物所涉及生物活性通路中的不同组分的化合物，或甚至是与本发明化合物的生物靶点相重叠的化合物。
在一个具体的实施方式中，本发明提供了药物组合，例如用作用于治疗本文所列疾病之一的药物，所述疾病例如银屑病、COPD、哮喘、银屑病关节炎或强制性脊柱炎，其包含本发明化合物，和至少一种选自以下的活性成分：
a)β-肾上腺素受体激动剂；
b)毒蕈碱性受体拮抗剂；
c)关节毒蕈碱受体拮抗剂和β-肾上腺素受体激动剂；以及
d)糖皮质激素受体激动剂(甾族或非甾族)；
e)磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制剂。
本发明化合物还可以与其他疗法组合，所述其他疗法包括但不限于手术、辐射治疗、移植(例如干细胞移植、骨髓移植)、肿瘤免疫疗法等。
相应地，本发明提供了用于抑制RORγt活性或用于治疗和/或预防与RORγt相关疾病的方法，包括向有需要的受试者施用本发明的药物组合。本发明还提供了所述本发明药物组合在制备用于抑制RORγt活性或用于治疗和/或预防与RORγt相关疾病的药物中的用途。
对于上述涉及药物组合物、治疗方法和用途以及药物组合的各个方面，与RORγt相关的疾病(例如通过RORγt抑制可治疗或预防的疾病)包括炎症或自身免疫疾病、癌症等，包括但不限于银屑病、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主疾病、炎症性肠病、克隆氏病、溃疡性结肠炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、血管球性肾炎、狼疮性肾炎、心肌炎、甲状腺炎、干眼症、葡萄膜炎、白塞病、过敏性皮肤炎、粉刺、硬皮病、支气管炎、皮肌过敏性鼻炎、坏死性小肠结肠炎、肝纤维化、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、新冠病毒肺炎、胰岛素依赖性I型糖尿病、三阴乳腺癌和前列腺癌等。优选的与RORγt相关的疾病选自银屑病、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、多发性硬化、炎症性肠病、干眼症、过敏性皮肤炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、坏死性小肠结肠炎、肝纤维化、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、新冠病毒肺炎、三阴乳腺癌和前列腺癌。
对于上述本发明化合物、药物组合物、方法、用途、药物组合而言，优选上文所述式(Ia)、尤其式(Ia’)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物；更优选式(Ia”)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物以及上文所列的具体化合物；最优选式(Ia”)化合物以及上文所列的具体化合物、例如化合物1-18，或它们药学可接受的盐或溶剂合物。
当本文描述化合物或药物的施用剂量时，应理解，该剂量基于游离碱的重量，不包括其任何衍生成份，除非说明书另外指出。
本发明化合物的合成
另一方面，本发明还提供了一种制备式(I)化合物的方法，下文举例说明了合成本发明化合物的通用合成方案。对于各反应步骤而言，适当的反应条件是本领域技术人员已知的或可以常规确定的。如果没有特别说明，在制备这些化合物中使用的原料和试剂通常可商购获得，或者可以通过下文的方法、与下文给出的方法类似的方法或本领域已知的方法制得。如果需要，合成反应流程中的原料和中间体可以采用常规技术进行分离和纯化，所述技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。所述材料可以采用包括物理常数和波谱数据在内的常规方法表征。
在一个实施方案中，所述方法包括以下步骤：
其中R1、R2、R3、R4如上面对通式(I)所定义，Prot是氨基保护基，包括但不限于Boc、Cbz、Fmoc或PMB，优选Boc；
步骤1：由式(I-1)化合物生成游离或盐形式的式(I-2)化合物；该反应优选在氢溴酸(例如40％氢溴酸水溶液)的作用下进行，优选在适合的温度进行，例如50-200℃、80-150℃，优选90-120℃；所述盐形式例如氢溴酸盐形式；
步骤2：游离或盐形式的式(I-2)化合物跟式(I-3)化合物环合生成游离或盐形式的式(I-4)化合物；该反应优选在适当的溶剂中进行，且优选在适当的温度进行，所述溶剂可选自例如质子溶剂，例如甲醇、乙醇、丙醇等，所述温度选自例如50-200℃、80-150℃，优选90-120℃；所述盐形式例如氢溴酸盐形式；
步骤3：游离或盐形式的式(I-4)化合物与氨基保护剂生成式(I-5)化合物；其中氨基保护剂是本领域众所周知的，包括但不限于二碳酸二叔丁酯((Boc)2O)、CbzCl、FmocCl或PMB-Cl，所述反应优选在适合的有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氯甲烷、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选四氢呋喃；所述反应优选在适合的碱存在下进行，所述的碱可选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、HOBt或吡啶，优选地，所述的碱是三乙胺；所述反应优选在适合的温度进行，例如0-200℃、5-100℃、10-50℃，优选室温；
步骤4：式(I-5)化合物跟Tf试剂反应生成式(I-6)化合物；所述Tf试剂是能与羟基反应生成OTf基团的试剂，包括但不限于三氟甲磺酸酐、三氟甲磺酰氯或N-苯基双(三氟甲磺酰)亚胺；所述反应优选在碱存在下进行，所述的碱可选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、HOBt或吡啶；所述反应优选在有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选二氯甲烷；所述反应优选在适合的温度下进行，例如-50℃至200℃、-20℃至100℃、例如-10℃至50℃，例如-10℃至10℃，优选在冰浴中；所述反应优选在惰性气体气氛下进行，所述惰性气体包括但不限于氮气、氩气或氦气等；
步骤5：式(I-6)化合物跟式(I-7)的化合物在催化剂、如钯催化剂的作用下通过偶联得到式(I-8)化合物；
其中所述钯催化剂是本领域众所周知的用于偶联的钯催化剂，包括但不限于Pd2(dba)3等；所述反应优选在适合的有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氯甲烷、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选1,4-二氧六环；所述反应优选在膦配体存在下进行，所述膦配体包括但不限于4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽；所述反应优选在适合的碱存在下进行，所述的碱可选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、HOBt或吡啶，优选地，所述的碱是N,N-二异丙基乙胺；所述反应优选在适合的温度下进行，例如50-200℃、80-150℃，优选90-120℃；
步骤6：式(I-8)化合物在氧化剂的作用下生成式(I-9)化合物；所述氧化剂选自例如H2O2、mCPBA和过氧乙酸；所述反应优选在有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选二氯甲烷；所述反应优选在适合的温度下进行，例如-50℃至200℃、-20℃至100℃、例如-10℃至50℃，例如-10℃至10℃，优选在冰浴中；
步骤7：式(I-9)化合物水解生成式(I-10)化合物；所述反应优选在碱存在下进行，所述的碱可选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯，所述碱优选以水溶液形式应用；所述反应优选在有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自醇溶剂例如(甲醇、乙醇或丙醇)、四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选甲醇；所述反应优选在适合的温度下进行，例如-20℃至-200℃、5-100℃、10-50℃，优选室温；
步骤8：式(I-10)化合物在缩合剂的作用下跟式(I-11)化合物反应生成式(I-12)化合物；
其中所述缩合剂是本领域众所周知的用于羧酸与胺偶联的缩合剂，包括但不限于1-丙基磷酸酐(T3P)、EDC、DCC、HATU等；所述反应优选在适合的有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选二氯甲烷；所述反应优选在适合的碱存在下进行，所述的碱包括但不限于碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、HOBt或吡啶，优选地，所述的碱是N,N-二异丙基乙胺；所述反应优选在适合的温度下进行，例如0-200℃、10-100℃或20-50℃，优选室温(20-25℃)。
步骤9：式(I-12)化合物脱除氨基保护基生成式(I-13)的化合物；所述反应例如在酸(如TFA或者HCl)的作用下进行，所述反应优选在适合的有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选二氯甲烷；所述反应优选在适合的温度下进行，例如-50℃至200℃、-20℃至100℃、例如-10℃至50℃，例如-10℃至20℃；
步骤10：式(I-13)化合物与式(I-14)或其活化形式(例如相应的酰氯(式(I-15)或酸酐)反应生成目标化合物I，所述反应优选在碱存在下进行，所述的碱可选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、HOBt或吡啶；所述反应优选在有机溶剂中进行，所述有机溶剂可选自二氯甲烷、四氢呋喃、醚类(例如乙醚、乙二醇单甲醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合，优选二氯甲烷；所述反应可在缩合剂例如等存在下进行，其中所述缩合剂是本领域众所周知的用于羧酸与胺偶联的缩合剂，包括但不限于1-丙基磷酸酐(T3P)、EDC、DCC、HATU；所述反应优选在适合的温度下进行，例如0-200℃、10-100℃或20-50℃，优选室温(20-25℃)。
上述合成方案只是列举了本发明中部分化合物的制备方法。本发明的化合物或者其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素衍生物、药学上可接受的盐或溶剂合物可以通过多种方法、包括上文给出的方法、实施例中给出的方法或与之类似的方法、由本领域普通技术人员在上述合成方案的基础上、结合本领域的常规技术而制备得到。
本说明书中描述的化合物在以下实施例中进一步举例说明。这些实施例仅作为说明给出，而非限制性的。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照这类反应的常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。除非另外说明，否则液体的比为体积比。
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得、依据现有技术的方法制得或根据与本申请公开的类似的方法制得。
本申请使用化学名称是IUPAC名称,所用的缩写具有本领域通常理解的含义，除非说明书中另外清楚定义。在下面列出说明书中使用的缩写的含义：
pd2(dba)3:三(二亚苄基丙酮)二钯
HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’,-四甲基脲六氟磷酸盐
DIEA：N,N-二异丙基乙胺
DCM：二氯甲烷
EA:乙酸乙酯
PE：石油醚
LC-MS：液相色谱质谱联用
ESI电喷雾离子化
m/z：质荷比
TLC:薄层色谱
Ret.time：保留时间
合成实施例
本发明提供的目标化合物制备方法中，柱层析色谱采用乳山太阳干燥剂有限公司生产的硅胶(300-400目)；薄层色谱采用GF254(0.25毫米)；核磁共振色谱(NMR)使用Varian-400核磁共振仪测定；液质联用(LC/MS)使用Agilent TechnologiESI 6120液质联用仪。
此外，凡涉及易氧化或易水解的原料的所有操作都在氮气保护下进行。除非另有说明，本发明使用的原料都是市售原料、无需进一步纯化可以直接使用，本发明使用的温度均为摄氏度℃。
当本发明化合物结构与化合物名称不一致时，通常以结构式所示为准，除非通过上下文可以确定化合物名称正确。
实施例1：2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：3-(2-氨基乙基)苯酚氢溴酸盐的合成
将2-(3-甲氧基苯基)乙胺(9.00g，59.5mmol)溶于40％氢溴酸水溶液(120g，595mmol)中。反应液在110℃下搅拌反应6小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(9.00g，粗品，浅棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z:179.1[M+ACN+H]+。
步骤2:6-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸乙酯氢溴酸盐的合成
将3-(2-氨基乙基)苯酚氢溴酸盐(9.00g，65.6mmol)溶于乙醇(90mL)中。在室温下，将50％乙醛酸乙酯甲苯溶液(14.7g，72.2mmol)滴加到反应液中。加完后，反应混合物在100℃下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(20.0g，粗品，棕色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:222.0[M+H]+。
步骤3：6-羟基-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯的合成
将6-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸乙酯氢溴酸盐(20.0g，66.2mmol)溶于四氢呋喃(200mL)和水(40mL)的混合溶剂中，在室温下，依次将三乙胺(11.0mL,79.4mmol)和二碳酸二叔丁酯(16.7mL,72.8mmol)加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应1小时，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(150mL)中，用EA(50mL x 2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵水溶液(100mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝4:1-2:1)，得到目标化合物(12.3g，三步收率64.4％，黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:320.1[M-H]-。
步骤4：6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯的合成
将6-羟基-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯(1.10g,3.42mmol)溶于无水DCM(20mL)中，在冰浴和氮气保护下，依次将N-苯基双(三氟甲磺酰)亚胺(1.47g,4.11mmol)和DIEA(1.13mL，6.85mmol)加入到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下搅拌反应3小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(3.70g，粗品，棕色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:353.9[M-BOC+H]+。。
步骤5：6-(乙硫基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯的合成
依次将6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯(3.70g，8.16mmol)、Pd2(dba)3(747mg，0.816mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(944mg，1.63mmol)、DIEA(2.70mL，16.3mmol)、乙硫醇(1.22mL，16.3mmol)和1,4-二氧六环(20mL)加入到封管中。向封管中吹氮气，快速密封管子，反应混合物在100℃下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝20:1-15:1)，得到目标化合物(1.80g，粗品，黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:266.0[M-BOC+H]+。
步骤6：6-(乙基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯的合成
将6-(乙硫基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯(1.80g，4.92mmol)溶于DCM(30mL)中。在冰浴下，将85％间氯过氧苯甲酸(2.50g，12.3mmol)缓慢加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝15:1-5:1)，得到目标化合物(1.10g，三步收率：81.0％，黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:396.1[M-H]-。
步骤7：2-(叔丁氧基羰基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸的合成
将6-(乙基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯(460mg，1.16mmol)溶于甲醇(5mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(3.47mL，3.47mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入冰水(20mL)中，用1mol/L稀盐酸调pH到3左右，用EA(10mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(362mg，收率84.7％，黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:737.1[2M-H]-。
步骤8:6-(乙基磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(360mg，0.975mmol)和2-(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-醇(253mg，0.975mmol)溶于无水DCM(5mL)中。在室温下，依次将50％的1-丙基磷酸酐乙酸乙酯溶液(1.24g，1.95mmol)和DIEA(0.483mL，2.92mmol)滴加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应液倒入饱和碳酸氢钠(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝2:1-0:1)，得到目标化合物(170mg，收率28.6％，淡黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:609.1[M-H]-。
步骤9:6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将6-(乙基磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(170mg，0.278mmol)溶于DCM(2mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(1mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(120g，收率84.4％，黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:509.1[M-H]-。
步骤10:2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(42.0 mg，0.0823 mmol)溶于无水DCM(3 mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.054mL，0.329 mmol)和乙酰氯(0.018 mL，0.247 mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩并溶于甲醇(3 mL)中，在室温下，将1 mol/L氢氧化钠水溶液(2 mL)滴加到反应液中。加完后，在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20 mL)中，用EA(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20 mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝1:1-0:1)，得到目标化合物(10.0 mg，收率22.6％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:553.0[M+H]+。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ11.04,10.77(s,1H),8.42(s,1H),7.81(d,J＝8.2 Hz,1H),7.79–7.76(m,1H),7.75–7.71(m,1H),7.70–7.64(m,2H),7.58(d,J＝8.8 Hz,2H),5.91,5.87(s,1H),4.09–4.00(m,1H),3.70–3.63(m,1H),3.27–3.21(m,2H),3.20–3.16(m,1H),3.06–2.98(m,1H),2.14,2.11(s,3H),1.07(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例2和3：(R)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺或(S)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
外消旋体2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(500 mg溶于约120 mL甲醇，进样体积6.0mL)经Waters SFC 150(室温,100bar,214nm)和250*25mm 10μm Dr.maish Reprosil Chiral-OM(类似于OD)(超临界二氧化碳：甲醇，70:30,3.0min,70mL/min)分离，得到(R)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺或(S)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(175mg，白色固体，Ret.time＝3.762min,e.e.99％).LC-MS(ESI)m/z 553.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.76(s,1H),7.83–7.74(m,2H),7.64(d,J＝8.6Hz,1H),7.52–7.39(m,4H),6.19(s,1H),4.39(s,1H),4.03–3.93(m,1H),3.82–3.72(m,1H),3.35–3.25(m,1H),3.11(q,J＝7.4Hz,2H),3.06–2.97(m,1H),2.35(s,3H),1.29(t,J＝7.4Hz,3H)。
(S)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺或(R)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(186mg，白色固体，Ret.time＝4.162min,e.e.98％)。LC-MS(ESI)m/z 553.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.75(s,1H),7.81–7.76(m,2H),7.64(d,J＝8.6Hz,1H),7.52–7.42(m,4H),6.20(s,1H),4.39(s,1H),4.03–3.91(m,1H),3.82–3.69(m,1H),3.36–3.25(m,1H),3.11(q,J＝7.4Hz,2H),3.06–2.97(m,1H),2.34(s,3H),1.29(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例4：4-(6-(乙基磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-4-氧代丁酸
步骤1：4-(6-(乙基磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-4-氧代丁酸甲酯的合成
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(45.0mg，0.088mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.044mL，0.265mmol)和丁二酸单甲酯酰氯(33.2mg，0.221mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩，得到目标化合物(70.0mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:625.0[M+H]+。
步骤2：4-(6-(乙基磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-4-氧代丁酸的合成
将4-(6-(乙基磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-4-氧代丁酸甲酯(70.0mg)溶于甲醇(3mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(2mL)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入冰水(20mL)中，用1mol/L稀盐酸调pH到3左右，用乙酸乙酯(15mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经反向硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝2:3)，得到目标化合物(14.0mg，两步收率：26.0％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:611.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11,25,10.76(s,1H),8.37(s,1H),7.83-7.79(m,1H),7.79–7.66(m,4H),7.60-7.54(m,2H),6.07,5.91(s,1H),4.15–3.99(m,1H),3.75–3.60(m,1H),3.25(q,J＝14.7,7.3Hz,2H),3.19–3.12(m,1H),3.05–2.97(m,1H),2.74–2.67(m,1H),2.64–2.57(m,1H),2.42–2.34(m,2H),1.07(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例5：2-乙酰基-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：6-(甲硫基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯的合成
依次将6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯(10.2g，12.4mmol)、Pd2(dba)3(1.13g，1.24mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.43g，2.47mmol)、DIEA(4.09mL，24.7mmol)、甲硫醇(11.9g，24.7mmol)和1,4-二氧六环(50mL)加入到闷罐中。向闷罐中吹氮气，快速密封罐子，反应混合物在100℃下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应。将反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝20:1-15:1)，得到目标化合物(6.20g，粗品，黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:252.0[M-Boc+H]+。步骤2:6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯的合成
将6-(甲硫基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯(6.20g，17.6mmol)溶于DCM(100mL)中。在冰浴下，将间氯过氧苯甲酸(8.95g，44.1mmol,85％含量)缓慢加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝10:1-2:1)，得到目标化合物(1.38g，两步收率：29.0％，黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:382.1[M-H]-。
步骤3：2-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸合成
将6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-1,2-(1H)-二甲酸1-乙基酯2-叔丁基酯(1.38g，3.60mmol)溶于甲醇(20mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(10.8mL，10.8mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入冰水(30mL)中，用1mol/L稀盐酸调pH到3左右，用EA(20mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(1.12g，收率87.6％，黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:709.1[2M-H]-。
步骤4：1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(300mg，0.844mmol)和2-(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-醇(219mg，0.844mmol)溶于无水DCM(5mL)中。在室温下，依次将50％1-丙基磷酸酐乙酸乙酯溶液(1.07g，1.69mmol)和DIEA(0.419mL，2.53mmol)滴加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应液倒入饱和碳酸氢钠(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(550mg，粗品，浅棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z:595.1[M-H]-。
步骤5：N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(550mg，0.922mmol)溶于DCM(6mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(3mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(550mg，粗品，棕色固体)。LC-MS(ESI)m/z:497.0[M+H]+。
步骤6:2-乙酰基-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(550mg，1.11mmol)溶于无水DCM(6mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.549mL，3.32mmol)和乙酰氯(0.198mL，2.77mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩并溶于甲醇(6mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(3mL)滴加到反应液中。加完后，在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用EA(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝1:1-0:1)，得到目标化合物(120mg，三步收率26.4％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:539.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.36(s,1H),7.98–7.75(m,2H),7.62-7.56(m,4H),7.46(d,J＝8.3Hz,1H),6.19(s,1H),3.86(s,1H),3.83–3.77(m,2H),3.24–3.11(m,1H),3.06(s,3H),3.04–2.98(m,1H),2.29(s,3H).
实施例6：6-乙酰基-2-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酰胺
步骤1：2-(噻吩-3-基)乙胺盐酸盐的合成
将2-(噻吩-3-基)乙腈(4.63mL，40.6mmol)溶于无水四氢呋喃(60mL)中。在室温下，将2mol/L硼烷四氢呋喃溶液(30.4mL，60.9mmol)滴加到反应液中。加完后，反应混合物在60℃下搅拌反应过夜。将反应液倒入冰的1mol/L稀盐酸(100mL)中，用EA萃取(30mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(60mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。将其溶于甲基叔丁基醚(20mL)中，并滴加6mol/L盐酸二氧六环溶液直到有白色固体析出，过滤，滤饼用油泵抽干，得到目标化合物(4.80g，收率72.2％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:128.1[M+H]+。
步骤2:4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯的合成
将2-(噻吩-3-基)乙胺盐酸盐(2.80g，22.0mmol)溶于乙醇(30mL)中。在室温下，将50％乙醛酸乙酯甲苯溶液(4.94g，24.2mmol)滴加到反应液中。加完后，反应混合物在100℃下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(3.2g，粗品，棕色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:212.0[M+H]+。
步骤3：6-乙酰基-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯的合成
将4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯(1.00g，4.73mmol)溶于无水DCM(20mL)中。在室温下，依次将DIEA(1.96mL，11.8mmol)和乙酰氯(0.507mL，7.10mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应1小时，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝10:1-5:1)，得到目标化合物(571mg，两步收率32.8％，淡棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:254.0[M+H]+。
步骤4：6-乙酰基-2-溴-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯的合成
将6-乙酰基-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯(571mg,2.25mmol)溶于DCM(10mL)中，在冰浴下，将N-溴代丁二酰亚胺(602mg,3.381mmol)缓慢加入到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝10:1-5:1)，得到目标化合物(631mg，收率84.3％，黄色油状)。LC-MS(ESI)m/z:331.9[M+H]+。
步骤5：6-乙酰基-2-(乙硫基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯的合成
依次将6-乙酰基-2-溴-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯(631mg，1.90mmol)、Pd2(dba)3(174mg，0.190mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(220mg，0.380mmol)、DIEA(0.628mL，3.80mmol)、乙硫醇(0.284mL，3.80mmol)和1,4-二氧六环(8mL)加入到封管中。向封管中吹氮气，快速密封管子，反应混合物在100℃下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝4:1-2:1)，得到目标化合物(570mg，收率95.7％，棕色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:314.0[M+H]+。
步骤6：6-乙酰基-2-(乙基磺酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯的合成
将6-乙酰基-2-(乙硫基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯(210mg，0.670mmol)溶于DCM(5mL)中。在冰浴下，将85％间氯过氧苯甲酸(272mg，1.34mmol)缓慢加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝5:1-1:1)，得到目标化合物(89.0mg，收率38.5％，黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:346.0[M+H]+。
步骤7：6-乙酰基-2-(乙基磺酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸的合成
将6-乙酰基-2-(乙基磺酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸乙酯(89.0mg，0.258mmol)溶于甲醇(3mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(0.773mL)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入冰水(20mL)中，用1mol/L稀盐酸调pH到3左右，用EA(10mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(80.0mg，收率97.8％，黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:318.0[M+H]+。
步骤8：6-乙酰基-2-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酰胺的合成
将6-乙酰基-2-(乙基磺酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸(40.0mg，0.126mmol)和2-(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-醇(32.7mg，0.126mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将50％1-丙基磷酸酐乙酸乙酯溶液(160mg，0.252mmol)和DIEA(0.063mL，0.378mmol)滴加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和氯化铵(20mL)，饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝2:1-0:1)，得到目标化合物(10.0mg，收率14.2％，白色固体)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(s,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,2H),7.57(d,J＝8.6Hz,2H),7.43(s,1H),6.26(s,1H),4.09–4.00(m,2H),3.71–3.59(m,1H),3.21(q,J＝7.4Hz,2H),2.91–2.83(m,2H),2.31(s,3H),1.36(t,J＝7.4Hz,3H).LC-MS(ESI)m/z:559.0[M+H]+。
实施例7：2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：4-(全氟丙烷-2-基)苯胺的合成
依次将苯胺(1.00g，10.7mmol)、七氟-2-碘代丙烷(1.82mL，12.9mmol)、连二亚硫酸钠(2.24g，12.9mmol)、四丁基硫酸氢铵(4.38g，12.9mmol)和碳酸氢钠(1.08g，12.9mmol)加入到水(20mL)和甲基叔丁基醚(20mL)的混合溶剂中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜，TLC监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用甲基叔丁基醚(20mLx2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(1.40g，收率49.9％，棕色油状)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.20(d,J＝8.3Hz,2H),6.66(d,J＝8.5Hz,2H),5.71(s,2H).
步骤2：6-(乙基磺酰基)-1-((4-(全氟丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(100mg，0.271mmol)和4-(全氟丙烷-2-基)苯胺(70.7mg，0.271mmol)溶于无水DCM(5mL)中。在室温下，依次将50％1-丙基磷酸酐乙酸乙酯溶液(345mg，0.541mmol)和DIEA(0.134mL，0.812mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和氯化铵(20mL)，饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(200mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:611.2[M-H]-。
步骤3：6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将6-(乙基磺酰基)-1-((4-(全氟丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(200mg)溶于DCM(2mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(1mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(200mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:513.0[M+H]+。
步骤4：2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(200mg，0.390mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.129mL，0.781mmol)和乙酰氯(0.042mL，0.586mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟。LC-MS监测反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠(20mL)中，用DCM(10mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝2:1-0:1)得到粗品，再经反向柱分离纯化(乙腈：水＝7：3)，得到目标化合物(15.0mg，三步收率：10.0％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:555.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.55(s,1H),7.82–7.78(m,2H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.52–7.46(m,3H),6.20(s,1H),3.86–3.80(m,2H),3.25–3.00(m,4H),2.31(s,3H),1.31(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例8和9：(R)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺或(S)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
外消旋体2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(50.0mg溶于约25.0mL甲醇，进样体积6.0mL)经Waters SFC 150(室温,100bar,214nm)和250*25mm 10μm Dr.maish Reprosil Chiral-OM(Similar toOD)(超临界二氧化碳：甲醇，70:30,3.5min,70mL/min)分离，得到(R)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺或(S)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(15.46mg，白色固体，Ret.time＝3.091min,e.e.100.00％)。LC-MS(ESI)m/z:555.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.93(s,1H),7.86–7.74(m,5H),7.61(d,J＝8.5Hz,2H),5.93(s,1H),4.11–4.04(m,1H),3.73–3.65(m,1H),3.30–3.19(m,3H),3.08–3.01(m,1H),2.20–2.12(m,3H),1.09(t,J＝7.3Hz,3H)。
(S)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺或(R)-2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(全氟丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(17.39mg，白色固体，Ret.time＝3.682min,e.e.98.90％)。LC-MS(ESI)m/z:555.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.93(s,1H),7.87–7.74(m,5H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),5.93(s,1H),4.11–4.03(m,1H),3.73–3.65(m,1H),3.30–3.19(m,3H),3.09–3.00(m,1H),2.20–2.12(m,3H),1.09(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例10：2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3，4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：2-(4-氨基-3-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇的合成
将2-氟苯胺(3.00g，27.0mmol)、三水六氟丙酮(6.54g，29.7mmol)和对甲基苯磺酸(465mg，2.70mmol)加入到封管中。加完后，反应混合物在90℃下搅拌反应5天。待反应液冷却至室温，将其倒入水(50mL)中，用EA(30mL)萃取，用饱和碳酸氢钠(30mL)和饱和盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝10:1-2:1)得到目标化合物(2.32g，收率31.0％，无色油状)。LC-MS(ESI)m/z:276.1[M-H]-。
步骤2:6-(乙基磺酰基)-1-((2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(80.0mg，0.217mmol)和2-(4-氨基-3-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(60.0mg，0.217mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将HATU(123mg，0.325mmol)和DIEA(0.107mL，0.650mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(130mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:627.2[M-H]-。
步骤3：6-(乙基磺酰基)-N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将6-(乙基磺酰基)-1-((2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(130mg)溶于DCM(2mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(1mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(120mg，粗品，棕色液体)。步骤4：2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将6-(乙基磺酰基)-N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(120mg，0.227mmol)溶于无水DCM(5mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.113mL，0.681mmol)和乙酰氯(0.041mL，0.568mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩并溶于甲醇(6mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(3mL)滴加到反应液中。加完后，在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用EA(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝1:1-0:1)，得到目标化合物(12.6mg，三步收率10.2％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:571.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.35(s,1H),8.32(t,J＝8.4Hz,1H),7.85–7.77(m,2H),7.51(d,J＝12.7Hz,1H),7.47–7.39(m,2H),6.24(s,1H),4.08–3.97(m,1H),3.89–3.71(m,2H),3.20–3.01(m,4H),2.29(s,3H),1.32(t,J＝7.5Hz,3H).
实施例11:2-乙酰基-N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：1-((2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(80.0mg，0.225mmol)和2-(4-氨基-3-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(62.4mg，0.225mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将HATU(128mg，0.338mmol)和DIEA(0.112mL，0.675mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(130mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:613.2[M-H]-。
步骤2：N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将1-((2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(130mg)溶于DCM(2mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(1mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(120mg，粗品，黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:515.0[M+H]+。
步骤3：2-乙酰基-N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将N-(2-氟-4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(120mg，0.233mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.116mL，0.670mmol)和乙酰氯(0.042mL，0.583mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LCMS监测反应完全。将反应液直接浓缩并溶于甲醇(6mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(3mL)滴加到反应液中。加完后，在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用EA(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝1:1-0:1)，得到目标化合物(16.1mg，三步收率12.9％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:557.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.38(s,1H),8.33(t,J＝8.4Hz,1H),7.88–7.83(m,2H),7.51(d,J＝11.8Hz,1H),7.46–7.41(m,2H),6.25(s,1H),3.89–3.80(m,2H),3.80–3.71(m,1H),3.20–3.00(m,5H),2.30(s,3H).
实施例12:2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：6-(乙基磺酰基)-1-((4-(三氟甲氧基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(70.0mg，0.190mmol)和4-(三氟甲氧基)苯胺(33.6mg，0.190mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将HATU(108mg，0.284mmol)和DIEA(0.094mL，0.569mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和氯化铵(20mL)，饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(110mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:527.2[M-H]-。
步骤2：6-(乙基磺酰基)-N-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将6-(乙基磺酰基)-1-((4-(三氟甲氧基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(110mg)溶于DCM(2mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(1mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(100mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:429.0[M+H]+。
步骤3：2-乙酰基-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(100mg，0.233mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.077mL，0.467mmol)和乙酰氯(0.025mL，0.350mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟。LC-MS监测反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠(20mL)中，用DCM(10mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝2:1-0:1)，得到目标化合物(26.0mg，三步收率29.1％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:471.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.42(s,1H),7.82–7.77(m,2H),7.53–7.47(m,3H),7.10(d,J＝8.8Hz,2H),6.18(s,1H),3.87–3.78(m,2H),3.26–3.16(m,1H),3.13(q,J＝7.5Hz,2H),3.08–3.00(m,1H),2.31(s,3H),1.31(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例13：6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-2-丙酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(200mg，0.392mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将三乙胺(0.163mL，1.18mmol)和丙酰氯(0.086mL，0.980mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩并溶于甲醇(3mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(2mL)滴加到反应液中。加完后，在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用EA(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝1:1-0:1)得到粗品，再经反相柱分离纯化(乙腈：水＝7:3)，得到目标化合物(15.0mg，三步收率14.7％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:567.1[M+H]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.40(s,1H),7.83–7.76(m,2H),7.64–7.57(m,4H),7.48(d,1H),6.21(s,1H),3.87–3.81(m,1H),3.80–3.74(m,1H),3.19–3.10(m,3H),3.07–3.00(m,1H),2.61–2.48(m,2H),1.32(t,J＝7.4Hz,3H),1.26(t,3H).
实施例14：2-(环丙烷羰基)-6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(200mg，0.392mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将三乙胺(0.163mL，1.18mmol)和环丙基甲酰氯(0.089mL，0.980mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩并溶于甲醇(3mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(2mL)滴加到反应液中。加完后，在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用EA(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝1:1-0:1)得到粗品，再经反相柱分离纯化(乙腈：水＝7:3)，得到目标化合物(40.0mg，三步收率38.4％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:579.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.65(s,1H),7.85–7.80(m,2H),7.63–7.57(m,2H),7.56–7.50(m,3H),6.20(s,1H),4.17–3.96(m,3H),3.31–3.22(m,1H),3.20–3.06(m,3H),1.97–1.88(m,1H),1.34(t,J＝7.4Hz,3H),1.12–0.93(m,4H).
实施例15：6-(乙基磺酰基)-N1-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-N2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酰胺
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(200mg，0.392mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将三乙胺(0.163mL，1.18mmol)和甲胺基甲酰氯(91.6mg，0.980mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和氯化铵(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝1:1-0:1)得到粗品，再经反相柱分离纯化(乙腈：水＝7:3)，得到目标化合物(30.0mg，三步收率29.3％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:568.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H),8.64(s,1H),7.84–7.65(m,5H),7.58(d,J＝8.5Hz,2H),6.71–6.63(m,1H),5.81(s,1H),3.88–3.78(m,1H),3.57–3.47(m,1H),3.29–3.21(m,2H),3.20–3.11(m,1H),3.03–2.91(m,1H),2.61(d,J＝4.0Hz,3H),1.07(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例16：5-(1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-氧代戊酸
步骤1：5-(1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-氧代戊酸甲酯的合成
将N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(50.0mg，0.101mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.050mL，0.302mmol)和5-氯-5-氧代戊酸甲酯(41.4mg，0.252mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应1小时，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩，得到目标化合物(100mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:625.0[M+H]+。
步骤2：5-(1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-氧代戊酸的合成
将5-(1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(100mg)溶于甲醇(3mL)中，在室温下，将1mol/L氢氧化钠水溶液(2mL)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入冰水(20mL)中，用1mol/L稀盐酸调pH到3左右，用EA(15mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经反向硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝2:3)，得到目标化合物(20.0mg，两步收率：32.5％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:611.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.42,10.79(s,1H),8.38(s,1H),7.86–7.71(m,4H),7.67(d,J＝8.7Hz,2H),7.57(d,J＝8.3Hz,2H),6.08,5.89(s,1H),4.10–4.01(m,1H),3.69–3.59(m,2H),3.16(s,3H),3.04–2.93(m,2H),2.59–2.50(m,2H),2.25–2.16(m,2H),1.76–1.68(m,2H).
实施例17：2-乙酰基-N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯胺的合成
将4-溴-3,5-二氯苯胺(700mg，2.91mmol)、3,6-二氢-2H-吡喃-4-硼酸频哪醇酯(671mg，3.20mmol)、碳酸钾(803mg，5.81mmol)和二氯[1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁钯(II)](94.7mg，0.145mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)的混合溶剂中。在氮气保护下，反应混合物在110℃搅拌反应1.5小时，LC-MS监测反应完全。将反应混合物冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE:EA＝20:1-5:1)，得到目标化合物(350mg，收率49.3％)。LC-MS(ESI)m/z:285.0[M+H+MeCN]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.62(s,2H),5.61(s,1H),4.30(q,J＝5.3,2.6Hz,2H),3.91(t,J＝5.4Hz,2H),3.75(s,2H),2.31–2.24(m,2H).
步骤2：1-((3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(50.0mg，0.141mmol)和3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯胺(34.3mg，0.141mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将HATU(80.3mg，0.211mmol)和DIEA(0.070mL，0.422mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和氯化铵(20mL)，饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(30mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(100mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:579.1[M-H]-。
步骤3：N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将1-((3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(甲基磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(100mg)溶于DCM(2mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(1mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(90.0mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:480.9[M+H]+。步骤4：2-乙酰基-N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(90.0mg，0.187mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.093mL，0.561mmol)和乙酰氯(0.027mL，0.374mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(10mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠(20mL)，饱和氯化铵(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝2:1-0:1)，得到目标化合物(20.0mg，三步收率27.2％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:523.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.38(s,1H),7.90–7.79(m,2H),7.53(s,2H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),6.14(s,1H),5.61(s,1H),4.33–4.26(m,2H),3.91(t,J＝5.0Hz,2H),3.80(t,J＝5.6Hz,2H),3.23–3.10(m,1H),3.06(s,3H),3.05–2.99(m,1H),2.30(s,3H),2.28–2.24(m,2H).
实施例18：2-乙酰基-N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：1-((3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)氨甲酰)-6-(乙基磺基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(50.0mg，0.135mmol)和3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯胺(33.0mg，0.135mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将HATU(77.2mg，0.203mmol)和DIEA(0.067mL，0.406mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和氯化铵(20mL)，饱和碳酸氢钠(20mL)和饱和食盐水(30mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(100mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:593.1[M-H]-。
步骤2：N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐的合成
将1-((3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)氨基甲酰基)-6-(乙基磺基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(100mg，0.168mmol)溶于DCM(2mL)中。在冰浴下，将6mol/L盐酸二氧六环溶液(1mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(100mg，粗品，棕色油状)。LC-MS(ESI)m/z:493.1[M-H]-。
步骤3：2-乙酰基-N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将N-(3,5-二氯-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-6-(乙基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺盐酸盐(100mg，0.202mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将DIEA(0.100mL，0.605mmol)和乙酰氯(0.029mL，0.404mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM(10mLx2)萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠(20mL)，饱和氯化铵(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱分离纯化(PE：EA＝2:1-0:1)，得到目标化合物(30.0mg，三步收率41.5％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:537.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.51(s,1H),7.84–7.74(m,2H),7.54–7.43(m,3H),6.14(s,1H),5.60(s,1H),4.36–4.22(m,2H),3.90(t,J＝5.0Hz,2H),3.87–3.73(m,2H),3.29–3.18(m,1H),3.12(q,J＝7.3Hz,2H),3.07–2.97(m,1H),2.32(s,3H),2.27–2.21(m,2H),1.30(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例19：6-(乙基磺酰基)-2-甲酰基-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
将6-(乙基磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(100mg,0.196mmol)和甲酸(37.7mg,0.196mmol)溶于无水DCM(2mL)中。在室温下，依次将1-丙基磷酸环酐(50％EA溶液)(93.5mg,0.294mmol)和DIEA(50.6mg,0.392mmol)滴加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应液倒入饱和碳酸氢钠(3mL)中，用DCM(4mLx2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱快速分离纯化(PE:EA＝3:1-0:1)，得到目标化合物(21mg,收率19.9％,淡黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:537.1[M-H]-。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.95,10.75(s,1H),8.64(s,1H),8.35,8.30(s,1H),7.82–7.68(m,5H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),5.87,5.74(s,1H),4.07–3.96(m,1H),3.87–3.77(m,1H),3.28–3.22(m,2H),3.19–3.08(m,1H),3.06–2.95(m,1H),1.08(t,J＝7.0Hz,3H).
实施例20：2-乙酰基-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-氨基磺酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：2-(叔丁基)1-乙基6-(苄硫基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二羧酸酯的合成
依次将2-(叔丁基)1-乙基6-((((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二羧酸酯(5.00g,11.0mmol)，pd2(dba)3(995mg,1.09mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.26g,2.17mmol)，DIEA(3.60mL,21.7mmol)和苄硫醇(1.26g,2.17mmol)加入到1,4-二氧六环(50mL)中。在氮气保护下了，反应混合物在100℃下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经TLC分离纯化(PE：EA＝20:1-15:1)，得到目标化合物(3.50g,收率74.2％,黄色油状物)。
步骤2:6-(苄硫基)-2-(叔丁氧羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸的合成
将2-(叔丁基)1-乙基6-(苄硫基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二羧酸酯(1.20g,2.81mmol)溶于甲醇(12mL)中，在室温下，将2mol/L氢氧化钠水溶液(4.21mL,8.42mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，TLC监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用1M稀盐酸调pH到3左右，用EA(10mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物(1.20g,粗品,黄色固体)。
步骤3:6-(苄硫基)-1-(((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯的合成
将6-(苄硫基)-2-(叔丁氧羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(1.20g,3.00mmol)和2-(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-醇(778mg,3.00mmol)溶于无水DCM(12mL)中。在室温下，依次将HATU(1.37g,3.60mmol)和DIEA(1.48mL,9.01mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，用DCM(15mLx2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(2.00g,粗品,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:641.0[M+H]+。步骤4:6-(苄硫基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将6-(苄硫基)-1-(((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(2.00g,3.12mmol)溶于DCM(20mL)中。在冰浴下，将6M盐酸二氧六环溶液(10mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，TLC监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标化合物(1.60g,粗品,黄色固体)。
步骤5:2-(4-(2-乙酰基-6-(苄硫基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺基)苯基)-1,1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-基乙酸酯的合成
将6-(苄硫基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(1.60g,2.96mmol)溶于无水DCM(20mL)中。在冰浴下，依次将DIEA(1.96mL,11.8mmol)和乙酰氯(0.634mL,8.88mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，TLC监测(PE:EA＝1:1)反应完全。将反应液直接浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(PE:EA＝1:1-0:1)，得到目标化合物(230mg,四步收率5.88％,白色固体)。
步骤6:2-乙酰基-1-(((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-磺酰氯的合成
将2-(4-(2-乙酰基-6-(苄硫基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺基)苯基)-1,1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-基乙酸酯(230mg,0.368mmol)溶于醋酸(2mL)与水(0.5mL)混合溶液中。在冰浴下，将N-氯代丁二酰亚胺(101mg,0.756mmol)缓慢加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应1小时，TLC监测反应完全。将反应液倒入冰水(20mL)，用EA(10mLx2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标产物(230mg,粗品,白色固体)。
步骤7:2-乙酰基-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-氨基磺酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将2-乙酰基-1-(((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-磺酰氯(118mg,0.211mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中。在冰浴下，将氨水(2mL)缓慢滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应液在室温下继续搅拌反应1小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(EA:PE＝1:10-1:2)得到目标产物(6.00mg，两步收率3.02％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:540.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.70(s,1H),10.15(s,1H),8.79–8.64(m,2H),7.73–7.62(m,4H),7.59–7.54(m,2H),7.31(s,1H),5.84(s,1H),4.07–4.02(m,1H),3.67–3.61(m,1H),3.20–3.14(m,1H),3.00–2.94(m,1H),2.12,2.10(s,3H).
实施例21：2-乙酰基-6-((环丙基甲基)磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
步骤1：2-(叔丁基)1-乙基6-(氯磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二羧酸酯的合成
将2-(叔丁基)1-乙基6-(苄硫基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二羧酸酯(3.50g,8.19mmol)溶于醋酸(28mL)与水(7mL)混合溶液中。在冰浴下，将N-氯代丁二酰亚胺(2.19g,16.4mmol)缓慢加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应混合物在室温下继续搅拌反应1小时，TLC监测反应完全。将反应液倒入冰水(20mL)，用EA(10mLx2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标产物(1.10g,粗品,白色固体)。
步骤2：2-(叔丁氧羰基)-1-(乙氧羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-亚磺酸钠的合成
将2-(叔丁基)1-乙基6-(氯磺酰基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二羧酸酯(1.10g,2.72mmol)溶于四氢呋喃(16.5mL)与水(11mL)混合溶液中。将碳酸氢钠(457mg,5.45mmol)和亚硫酸钠(412mg,3.27mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在70℃下继续搅拌反应3小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩，得到目标产物(1.01g,粗品,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:368.1[M-Na]-.
步骤3：2-(叔丁氧羰基)-6-((环丙基甲基)磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸乙酯的合成
将2-(叔丁氧羰基)-1-(乙氧羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-亚磺酸钠(1.01g,2.58mmol)溶于二甲基亚砜(10mL)中，加入(溴甲基)环丙烷(1.04g,7.74mmol)。反应液升温至100℃搅拌3小时，TLC监测反应完成后，将反应液加入到水(20mL)中，用EA(30mLx 3)萃取，合并有机相后，用硫酸钠干燥，旋干，通过柱层析纯化(EA:PE＝1:9-1:4)，得到目标产物(200mg,三步收率5.77％,黄色固体)。
步骤4：2-(叔丁氧基羰基)-6-((环丙基甲基)磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸的合成
将2-(叔丁氧羰基)-6-((环丙基甲基)磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸乙酯(200mg,0.472mmol)溶于甲醇(3mL)中，在室温下，将2M氢氧化钠水溶液(2mL)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用1M盐酸水溶液调pH到3左右，用EA(10mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(160mg,粗品,白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:337.1[M-Boc+ACN+H]+。
步骤5：6-(((环丙基甲基)磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁基酯的合成
将2-(叔丁氧基羰基)-6-((环丙基甲基)磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(160mg,0.405mmol)和2-(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-醇(105mg,0.405mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在室温下，依次将HATU(231mg,0.607mmol)和DIEA(105mg,0.809mmol)加到反应液中。加完后，反应混合物在室温下搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全。将反应液用饱和食盐水(10mL)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(271mg,两步收率90.1％,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:537.1[M-Boc+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.33(s,1H),7.87–7.75(m,2H),7.60(q,J＝8.7Hz,4H),7.44(d,J＝8.2Hz,1H),6.19(s,1H),3.91(s,1H),3.81(t,J＝6.2Hz,2H),3.22–3.10(m,1H),3.09–2.97(m,3H),2.30(s,3H),1.02(s,1H),0.61(d,J＝7.8Hz,2H),0.22(d,J＝5.1Hz,2H).
步骤6：6-((环丙基甲基)磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将6-(((环丙基甲基)磺酰基)-1-((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁基酯(271mg,0.426mmol)溶于DCM(5mL)中。在冰浴下，将6M盐酸/二氧六环溶液(5mL)滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应液在室温下继续搅拌反应2小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩得到目标化合物(160mg,粗品,黄色固体)。LC-MS(ESI)m/z:537.1[M+H]+。
步骤7：2-(4-(2-乙酰基-6-(((环丙基甲基)磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺基)苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-基乙酸酯的合成
将6-((环丙基甲基)磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(160mg,0.298mmol)溶于无水DCM(3mL)中。在冰浴下，依次将DIEA(116mg,0.895mmol)和乙酰氯(58.5mg,0.746mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，LC-MS监测反应完全。将反应液直接浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得到目标化合物(180mg,两步收率68.1％,黄色油状物)。
步骤8：2-乙酰基-6-((环丙基甲基)磺酰基)-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的合成
将2-(4-(2-乙酰基-6-(((环丙基甲基)磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺基)苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-基乙酸酯(180mg,0.29mmol)溶于甲醇(2mL)中，在室温下，将2mol/L氢氧化钠水溶液(2mL,0.87mmol)滴加到反应液中。加完后，反应液在室温下继续搅拌反应30分钟，TLC监测反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，用1mol/L稀盐酸调pH到3左右，用EA(10mLx2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物(20mg,黄色油状物)。LC-MS(ESI)m/z:579.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.33(s,1H),7.87–7.80(m,2H),7.66–7.54(m,4H),7.48–7.41(d,J＝8Hz,1H),6.19(s,1H),3.91(s,1H),3.85–3.76(m,2H),3.24–3.11(m,1H),3.10–2.99(m,3H),2.30(s,3H),1.08–0.97(m,1H),0.67–0.56(m,2H),0.26–0.18(m,2H).
实施例22：2-乙酰基-N-(4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)-6-甲基氨基磺酰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺
将2-乙酰基-1-(((4-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-磺酰氯(112mg,0.200mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中。在冰浴下，将甲氨水溶液(2mL)缓慢滴加到反应液中。加完后，撤掉冰浴，反应液在室温下继续搅拌反应1小时，LC-MS监测反应完全。将反应液减压浓缩得到粗品，经柱层析分离纯化(PE:EA＝10:1-2:1)，得到目标产物(14.0mg，两步收率14.1％，白色固体)。LC-MS(ESI)m/z:554.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80,10.74(s,1H),8.66,8.62(s,1H),7.76(d,J＝8.2Hz,1H),7.71–7.57(m,6H),7.45–7.37(m,1H),5.90,5.79(s,1H),4.11–4.01(m,1H),3.72–3.64(m,1H),3.27–3.14(m,1H),3.05–2.94(m,1H),2.40(d,J＝4.9Hz,3H),2.15,2.12(s,3H).
活性实施例
活性实施例1：体外测定化合物对RORγt荧光素酶报告基因的抑制作用
本实验基本上按照文献(Current Chemical Genomics,2010,4,43-49)所述的方法进行。
将RORγ-LBD编码序列插入到pBIND质粒(Promega,E1581)。该表达载体和报告载体(携带稳定整合的GAL4启动子驱动的荧光素酶报告基因的pGL4.35)在HEK293T宿主细胞中共表达。当抑制剂与相应的嵌合受体结合时，嵌合受体与报告基因载体上的GAL4结合位点结合并抑制报告基因表达。根据化学发光信号的强弱来判定化合物对RORγ的抑制活性。
试剂与耗材
1实验方法：
1.准备实验化合物
1.1所有待测化合物用DMSO进行3倍梯度稀释，10个稀释梯度，起始浓度为10mM。
1.2阳性对照AZD-0284用DMSO进行3倍梯度稀释，10个稀释梯度，起始浓度为10mM。
1.3准备1000×阳性对照(10mM AZD-0284)和1000×阴性对照(100％DMSO)。
1.4将化合物板子封闭并震荡5min。
2.实验过程
2.1细胞悬浊液制备和种板
a)所有细胞都按照ATCC标准操作培养，HEK293T在指数生长期进行实验。
b)弃去培养基。
c)用PBS清洗细胞2次。
d)加入胰酶消化液消化细胞，用完全培养基终止消化。
e)收集细胞并计数，只有在细胞活率大于90％时才可以进行实验。
f)种6*106HEK293T细胞到100mm细胞培养皿中。
g)将种好细胞的培养皿置于37℃，5％CO2培养箱过夜培养。
2.2细胞转染
a)将Trans-IT转染试剂放置室温平衡；
b)加20μl转染试剂600μl Opti-MEMTM培养基，注意不要碰到管壁，用移液枪吹吸混匀，室温静置5分钟；
c)加入10μg质粒到转染试剂中(见步骤2.2.b)，室温静置20分钟；
质粒：分别加入5μg pBIND-RORγ和5μg pGL4.35质粒
d)将混好DNA的转染试剂加到100mm细胞培养皿中(见步骤2.1)；
e)将培养皿置于37℃，5％CO2培养箱培养5h。
2.3化合物的处理
a)将稀释好的化合物用Echo550转移25nl到细胞培养板中(6007680-50,PE)；
b)将细胞(见步骤2.2)接种到384细胞培养板中(6007680-50,PE)，每孔15,000细胞数，25μl含5％炭吸附FBS培养基；
c)细胞在37℃，5％CO2培养箱中过夜培养
2.4化合物的检测：
a)将Steady-GloTM检测试剂放置室温；
b)将384细胞板(见步骤2.3)放置室温；
c)每孔加入25μL Steady-GloTM检测试剂于细胞培养板(见步骤2.4b)；
d)将板子放到振荡器上避光震荡5min；
e)用Envision 2104检测化学发光值。
％Inhibition的计算：
RLUcmpd:测试化合物的荧光值
阳性对照平均值
阴性对照平均值
用Graphad8.0通过拟合％Inhibition和化合物浓度的log值来计算化合物的IC50。测定结果显示，本发明的化合物对RORγt荧光素酶报告基因有较好的抑制活性(如表1所示)。
表1.实施例化合物对RORγt荧光素酶报告基因抑制活性测定
实施例
IC<sub>50</sub>(nM)
Emax％
1
19.14
101.6
2
8.001
100.1
3
681.3
111.3
4
3050
73.85
5
128.5
102.3
6
113.1
99.94
7
12.43
99.59
8
3.783
99.25
9
616
107.1
10
40.49
102
11
91.31
104.4
12
289.8
95.71
13
154.2
101.2
14
83.42
98.81
17
67.08
95.92
18
106.9
95.75
19
14.67
100.7
21
12.52
101.5
22
17.81
101.7
AZD-0284
34.81
99.79
注：Emax％为相对于AZD-0284 10μM时的相对最大抑制率。
上表结果显示，本发明的化合物对RORγt抑制剂荧光素酶报告基因有较好的抑制活性。
活性实施例2：化合物对人PBMC Th17细胞分化抑制实验
试验材料：
实验方法：首先将PBMC细胞复苏铺板，然后用刺激因子(anti-hCD28：5μg/mL；rhTGF-β1：5ng/mL；rhIL-6：20ng/mL；rhIL-23：10ng/Ml)刺激PBMC细胞分化至Th17，同时加入不同浓度化合物，最大浓度从3μM开始，48小时后收集上清液进行IL-17ELISA检测，与溶剂组比较，测定化合物抑制Th17细胞分泌IL-17的抑制率，用Graphad8.0拟合IC50值。
测定结果显示，本发明的化合物对Human PBMC具有较好的抑制Th17细胞分化分泌IL-17的能力(如表2所示)。
表2.化合物抑制Th17细胞分化分泌IL-17实验结果
实施例
IC<sub>50</sub>(nM)
Emax％
1
51.36
79.01
2
22.66
78.28
7
21.14
72.02
AZD-0284
28.41
78.54
注:Emax％为最大抑制率。
活性实施例3：化合物在小鼠中PK测定
每个化合物的PK测定方法如下：6只C57BL/6小鼠(来源上海灵畅生物科技有限公司)分为两组，每组3只。其中一组通过静脉(IV)给药，剂量为1mg/kg，溶媒为5％DMSO/95％(20％Captisol)；一组通过口服(PO)灌胃给药，剂量为5mg/kg，溶媒为0.5％CMC-Na/0.5％Tween 80。每一组在给药后0、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24h分别通过小腿隐静脉采血。将约40μL血液收集到含EDTA-K2的抗凝管中。在收集完成后迅速将采血管倒置至少5次，以确保混合均匀，然后放置在冰上。采集到的各时间点血液在4℃，8000rpm离心5分钟以获得血浆。另取1.5mL离心管标记好化合物名称，动物编号，时间点，将血浆转移至该管中。血浆保存在-80℃直至分析。
采用UPLC-MS/MS方法测定血浆中化合物浓度，用Phoenix WinNolin 6.4药代动力学软件对所得数据进行药代动力学参数计算。
具体实验结果如下，结果表明化合物药代吸收较好，具有药代动力学优势，尤其对于口服施用而言，本发明化合物的AUC0-last(ng/mL*hr)和生物利用度都显著提高，显示其具有更好的成药性。
具体实验结果如下，结果表明化合物药代吸收较好，具有药代动力学优势。
表3.实施例化合物体内PK结果
活性实施例4：人和小鼠肝微粒体代谢稳定性实验
根据本领域常规的体外代谢稳定性研究的标准方法，例如(Kerns,Edward H.andDi Li(2008).Drug-like Properties:Concepts,Structure Design and Methods:fromADME to Toxicity Optimization.San Diego:Academic Press；Di,Li等人，Optimizationof a Higher Throughput Microsomal Stability Screening Assay for ProfilingDrug Discovery Candidates,J.Biomol.Screen.2003,8(4),453.)中所述的方法，类似地如下进行本发明化合物的肝微粒体代谢稳定性试验。
孵育体系包含0.5mg蛋白/mL微粒体、辅助因子、PBS，37℃预孵育3min，加入底物(即待测化合物)启动反应。在反应开始0、1、5、10、15、20、30、60min取样，加入适当终止物终止反应。
样品处理(n＝3)：各加合适样品，涡旋后高速离心，取上清液，采用HPLC-MS/MS对底物进行检测。把0min时间点峰面积作为100％。其他时间点的峰面积转换为百分剩余量，各时间点的百分剩余量的自然对数对孵育时间作图，直线回归求算出斜率(-k)，然后按固有清除率(Clint)＝(k*孵育液体积)/肝微粒体质量，计算出Clint(uL/min/mg)及化合物半衰期(T1/2，min)。结果见表4。
表4.人和小鼠肝微粒体代谢稳定性实验结果
上述实验结果表明本发明的化合物具有很好的代谢稳定性。
以上实验中使用对照化合物的结构如下：
本领域技术人员将了解，上文描述本质上为示例性及说明性的，且欲说明本发明及其优选实施方案。通过常规实验，技术人员将了解可作出明显修正及变化而不悖离本发明的精神。在随附申请专利范围内的所有此类修正欲包括于其中。因此，本发明意欲并非由上述描述而是由以下权利要求范围及其等效物定义。
本说明书中所引用的所有公开出版物以引用方式并入本文中。
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