阅读说明：本技术 一种粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法 (Doubling test method for white gourd with white gourd peel under tissue culture condition ) 是由 乔燕春 李志芳 彭家柱 韩向峰 吴宇军 刘玉平 张素平 夏秀娴 于 2021-08-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及植物组培技术领域,公开了一种粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法,包括种子消毒处理、催芽处理、配置秋水仙素、芽体处理、继代扩繁、生根和驯化。本发明方法简单,可获得多倍体粉皮冬瓜,可丰富粉皮冬瓜资源创新途径,加快粉皮冬瓜倍性育种研究,加速资源纯化速度,选育出三倍体等非整倍体冬瓜,丰富冬瓜育种的多样性；本发明0.2％处理的芽体变化最为明显,刚长出侧芽的第一片叶基部膨大明显,常规苗在基部接触到培养基的部分会有膨大现象,但基部很快出现表皮撕裂,产生愈伤组织等现象,而茎段中上部分诱导10天后长出的芽起初是第一片膨大,然后整个芽体变大变光滑,继续生长不会愈伤开裂。(The invention relates to the technical field of plant tissue culture, and discloses a doubling test method under the tissue culture condition of a white gourd with sheet jelly. The method is simple, the polyploid white gourd with sheet jelly can be obtained, the innovation way of the white gourd with sheet jelly resource can be enriched, the research on ploidy breeding of the white gourd with sheet jelly can be accelerated, the resource purification speed can be accelerated, the aneuploid white gourd with triploid and the like can be bred, and the diversity of white gourd breeding can be enriched; the bud body processed by 0.2 percent of the invention has the most obvious change, the first leaf base part of the lateral bud which just grows out is obviously expanded, the part of the base part of the conventional seedling which is contacted with the culture medium can be expanded, but the epidermis of the base part is torn quickly, the phenomena of callus and the like are generated, the bud which grows out after the upper part of the stem section is induced for 10 days is initially expanded by the first leaf, then the whole bud body is enlarged and becomes smooth, and the bud body can not grow continuously and can not be callus and crack.)

一种粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法

技术领域

本发明涉及植物组培技术领域，具体涉及一种粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法。

背景技术

粉皮冬瓜在我国有悠久的种植历史，具有品质优、适应性广、产量高、耐热耐贮运等优点，是盛夏广大消费者喜欢食用的蔬菜，也是调节夏秋蔬菜淡季的主要品种之一。创新粉皮冬瓜资源是选育优质、抗病、抗逆优良新品种的基础，生产上冬瓜资源主要是二倍体材料，而生产和消费市场主要以大型冬瓜类型居多，大个的冬瓜产量高，效益好，深受种植户喜欢，粉皮冬瓜主要在华南、西南、华中地区种植面积较大，但论亩产，粉皮冬瓜没有黑皮冬瓜亩产量高，在农贸市场，粉皮冬瓜售价平均比黑皮冬瓜高一元左右，培育更加大个的粉皮冬瓜才有底气和黑皮冬瓜抗衡，加快倍性育种材料的创新，是实现大个粉皮冬瓜育种的途径。

传统加倍方法多是在田间条件下利用秋水仙素刺激顶芽或露白的胚芽，成功率低，秋水仙素用量大，种子用量也大，容易造成土壤污染。因此，发明人研发一种秋水仙素用量少、环保的粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法。

发明内容

基于以上问题，本发明提供一种粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法，本发明方法简单，可获得多倍体粉皮冬瓜，丰富粉皮冬瓜资源创新途径，加快粉皮冬瓜倍性育种研究。

为解决以上技术问题，本发明提供了一种粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法，具体步骤如下：

S1：种子消毒处理

将粉皮冬瓜种子清理干净后，浸种4-6h，沥干水转入超净工作台，用75％酒精处理1min后用0.1％的氯化汞消毒20min，然后用双蒸水清洗3次；

S2：催芽处理

将步骤S1中的种子放入经过灭菌处理的塑料瓶内，塑料瓶内装有含水分的脱脂棉，脱脂棉的含水量以满足种子萌发所需要的湿度为宜，将塑料瓶放入阳光数码箱内暗培养催芽，阳光数码箱内的温度为35℃，空气湿度为70％；

S3：配置秋水仙素

用无菌水配制浓度为0.2％的秋水仙素溶液，在超净工作台上用0.22um单位的专用滤网和500毫升无菌针管抽滤灭菌秋水仙素溶液2次，备用；

S4：芽体处理

当步骤S2中种子萌发的芽体长到4-5cm高的茎时，将其切成0.8-1.0cm的茎段，去除掉每茎段基部的1-2片切叶，使茎段稳稳插入继代培养基中，再在继代培养基表面加2-3ml经步骤S3处理之后的无菌秋水仙素溶液，于摇床上低速振荡培养7天，使秋水仙素与茎段充分接触，增加秋水仙素的作用效果，之后选择膨大变粗壮的芽体进行继代培养；

S5：将步骤S4中选择的芽体进行继代扩繁、生根和驯化。

进一步的，步骤S5中继代扩繁的继代培养基的配方如下：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L+3％白砂糖+0.65％琼脂粉。

进一步的，步骤S5中生根所用的生根培养基的配方如下：1/2MS+IAA0.5mg/L+2％白砂糖+0.65％琼脂粉。

进一步的，步骤S1至步骤S4的操作均在组织培养室进行，组织培养室的培养条件为：温度25±2℃，光照时间14h，相对湿度70％。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过组培的方式保证组培过程不受外界杂交授粉、蚊虫叮咬及恶劣天气等的影响，既可保持母本的优良特性，又使加倍条件稳定，大大增加了加倍的几率，加倍出来的组培苗数量呈几何数量递增，远远超过播种苗；本发明在芽期加入适量的秋水仙素，选择膨大变粗壮的芽体进行继代培养，起到快繁和纯化苗的作用，比大田处理的成功率高，秋水仙素用量水，减少了秋水仙素和土壤的直接接触，绿色环保；本发明可丰富粉皮冬瓜资源创新途径，加快粉皮冬瓜倍性育种研究，加速资源纯化速度，选育出三倍体等非整倍体冬瓜，丰富冬瓜育种的多样性。

附图说明

图1为本发明的实施例的芽体加倍前后的对照图，其中A和C为常规芽生长情况，B和D(0.2％秋水仙素处理后的芽体)为加倍后芽体生长情况；

图2为本发明的实施例加倍后芽体膨大生长情况图；

图3为本发明的实施例中秋水仙素作用继代苗的状态图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

实施例：

本实施例用无菌水将秋水仙素配制成浓度分别为0.2％和0.3％的处理液，研究两个浓度下的秋水仙素溶液对粉皮冬瓜芽体的影响，具体方法见下文。

种子消毒处理：将粉皮冬瓜种子分为两组(0.2％秋水仙素处理组和0.3％秋水仙素处理组)，将种子清理干净后，浸种4-6h，沥干水转入超净工作台，用75％酒精处理1min后用0.1％的氯化汞消毒20min，然后用双蒸水清洗3次。

催芽处理：将上述消毒后的两组种子分别放入经过灭菌处理的两组塑料瓶内，塑料瓶内装有含水分的脱脂棉，脱脂棉的含水量以满足种子萌发所需要的湿度为宜，将塑料瓶放入阳光数码箱内暗培养催芽，阳光数码箱内的温度为35℃，空气湿度为70％。

秋水仙素灭菌：取浓度分别为0.2％和0.3％的秋水仙素溶液，在超净工作台上用0.22um单位的专用滤网和500毫升无菌针管抽滤灭菌秋水仙素溶液2次，备用。

芽体处理：当经上述催芽诱导的芽体长到4-5cm高(约2-3个节位)的茎时，将其切成0.8-1.0cm的茎段，去除掉每茎段基部的1-2片切叶，使茎段稳稳插入继代培养基中，再在继代培养基表面加2-3ml上述处理之后的无菌秋水仙素溶液，继代培养基分为两组，分别加入浓度为0.2％和0.3％的秋水仙素溶液，并用无菌水作为对照组，于摇床上低速振荡培养7天，使秋水仙素与茎段充分接触，增加秋水仙素的作用效果，震荡结束后，见附图1、附图2和附图3，观察到节位上长出的新芽芽体膨大，变短粗，叶脉加粗。之后选择膨大变粗壮的芽体进行继代扩繁、生根和驯化。

培养过程中，从第11天开始发现新长出的芽体变化较大，0.2％处理的变化最为明显，刚长出侧芽的第一片叶基部膨大明显，常规苗在基部接触到培养基的部分会有膨大现象，但基部很快出现表皮撕裂，产生愈伤组织等现象，而茎段中上部分诱导10天后长出的芽起初是第一片膨大，然后整个芽体变大变光滑，继续生长不会愈伤开裂。

本实施例除组培苗训化是在温室进行之外，步骤S1至步骤S4中的其他操作均在组织培养室进行，组织培养室的培养条件为：温度25±2℃，光照时间14h，相对湿度70％；基本培养基：MS+3％白砂糖+0.65％琼脂粉。本实施例继代扩繁的继代培养基的配方如下：MS+6-BA 0.2mg/L+NAA0.05mg/L+3％白砂糖+0.65％琼脂粉；生根所用的生根培养基的配方如下：1/2MS+IAA 0.5mg/L+2％白砂糖+0.65％琼脂粉。

如上即为本发明的实施例。上述实施例以及实施例中的具体参数仅是为了清楚表述发明验证过程，并非用以限制本发明的专利保护范围，本发明的专利保护范围仍然以其权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。