一种五彩芋的选育方法
阅读说明：本技术 一种五彩芋的选育方法 (Breeding method of colocasia esculenta ) 是由 刘金梅 叶远俊 徐晔春 朱根发 谭健俊 钟荣辉 尤毅 于 2021-09-03 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种五彩芋的选育方法,具体包括以下步骤：(1)外植体消毒；(2)诱导培养；(3)分化培养；(4)定向淘汰筛选培养；(5)生根培养；(6)炼苗移栽；(7)选择变异单株；(8)建立优选单株的无性系后代群体；(9)培育新品种。本发明通过对传统品种进行改良,培育出的五彩芋新品种株型变矮,叶片变圆形,叶色表现更佳,叶片质地更硬,叶柄更粗壮,综合性状明显优于亲本。(The invention discloses a method for breeding five-color taro, which specifically comprises the following steps: (1) sterilizing explants; (2) performing induction culture; (3) performing differentiation culture; (4) directional elimination, screening and culturing; (5) rooting culture; (6) hardening and transplanting seedlings; (7) selecting variant individual plants; (8) establishing a clonal progeny population of preferred individuals; (9) breeding new varieties. According to the invention, by improving the traditional variety, the cultivated new variety of the five-color taro has the advantages of short plant type, round leaf, better leaf color performance, harder leaf texture, stronger leaf stalk and obviously better comprehensive properties than the parent.)
技术领域
本发明涉及花卉遗传育种技术领域，更具体的说是涉及一种五彩芋的选育方法。
背景技术
五彩芋(学名：Caladium bicolor(Ait.)Vent.)又名彩叶芋、花叶芋，天南星科，五彩芋属多年生草本植物。五彩芋的基生叶通常盾状箭形，色泽美丽，变种极多；佛焰苞绿色，上部绿白色，呈舟状；肉穗花序。五彩芋叶片色泽美丽，变种极多，适于温室栽培观赏，5-9月是五彩芋的主要观赏期，叶片色彩斑斓、观赏性状奇特。冬季气温低于7-10℃叶片开始枯黄，进入休眠期，到春末夏初重新萌芽生长。五彩芋叶色变化非常丰富，有红色、粉色、白色、紫色等，并配于不同斑点斑块的变化，是彩色基因最为丰富的彩叶植物之一。五彩芋经常给作为室内盆栽植物，通常都是放置在具有明亮散射光的桌面或窗台，显得更为雅致和典雅。此外，还可用于花坛、花境和花带等景观营造和环境美化，起到“无花胜有花”的景观效果，亦可作切叶花材与其他花卉搭配。五彩芋花语为喜欢、欢喜、愉快，总能给人带来喜悦的感觉，因而深受消费者喜爱。
五彩芋经过近150多年不断选育，培育出2000多个品种(Hayward，1950)，目前市场流通品种有90多个，大面积生产应用的品种有50多个(Deng et al.，2007)。在观赏性状方面不断改良，选育出叶片白色、红色、粉色、黄色、紫色等色彩丰富的优良品种；在光照适应性方面，筛选出耐日晒和耐荫品种；在抗病方面，选育出一批抗细菌性叶斑病和抗块茎腐烂病的品种。国际上五彩芋主要围绕块茎产量高、分枝多、叶色鲜艳独特、耐日晒和抗病等方面进行育种。美国佛罗里达海湾沿岸教育研究中心选育出了抗病、分枝多的新品种，美国经典花叶芋公司选育出了叶色鲜艳、耐日晒的新品种，泰国选育出叶色鲜艳、叶形独特的新品种。这些新品种的推出，扩大了五彩芋的应用范围，推动着产业的发展(Deng，2012)。
目前，五彩芋主要采用常规的杂交育种方法，存在育种周期较长，进程慢等问题，且获得的部分变异单株仍然存在性状遗传不稳定。
体细胞无性系变异是指植物体细胞在组织培养过程发生变异，进而导致再生植株发生遗传改变的现象。该现象普遍存在于各种再生途径的组织培养过程中，最早是在甘蔗组织培养过程中报道的体细胞无性系变异现象，随后在小麦、水稻、烟草等植物中均发现了这种现象。体细胞无性系变异的优点有：1.适用范围广，可以进行组织培养的植物都可以产生体细胞无性系变异；2.产生变异速度快；3.可以克服优良品种的个别缺陷；4.能够产生新型的变异株系。
因此，如何对五彩芋进行体细胞无性系变异选育是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种五彩芋的选育方法，该方法稳定，速度快，且效率高。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种五彩芋的选育方法，具体包括以下步骤：
(1)外植体消毒
选取五彩芋的幼嫩叶片和叶柄为外植体，进行消毒处理，得到消毒后的外植体；
(2)诱导培养
将消毒后的外植体切段，接种于诱导培养基中，先全暗培养2-3天，再光照培养30-50天，得到愈伤组织；
(3)分化培养
将愈伤组织转入分化培养基中，先全暗培养2-3天，再光照培养20-40天，得到分化培养体；
(4)定向淘汰筛选培养
将分化培养体切掉叶片和须根，逐次继代转入筛选培养基Ⅰ、筛选培养基Ⅱ和筛选培养基Ⅲ进行培养，得到分化株；
(5)生根培养
将分化株转入生根培养基中，先全暗培养2-3天，再光照培养30-50天，得到幼苗；
(6)炼苗移栽
选取高度为5-8cm、生长良好且健壮的幼苗，将其培养瓶置于自然光照下炼苗8-10天后，取出幼苗，洗掉根部培养基，栽入混合基质，置于光照培养箱内培养，待植株长到有2-4片叶时，移栽上盆；
(7)选择变异单株
从亲本的无性系后代群体中，筛选出性状独特的变异单株，并采用流式细胞仪对变异单株的细胞DNA含量进行测定和分析，选择峰值位置为亲本1.8-2.0倍的变异单株作为优选单株；
(8)建立优选单株的无性系后代群体
选取优选单株的幼嫩叶片为外植体进行组培扩繁，并以亲本为对照，对植株主要性状进行多年多点试验调查，验证优选单株后代群体的特异性、一致性和稳定性；
(9)培育新品种
经品种比较试验调查，选择具有独特的观赏性状、形成性状和表现一致的后代群体植株作为新品种进行培育。
进一步，上述步骤(1)中，五彩芋的品种为：日出、白色圣诞、雪天使、华彩漫天或姜黄大地。
采用上述进一步技术方案的有益效果在于，本发明所选五彩芋的品种包括不同叶色类：白色叶类、红色叶类和花斑叶类；不同叶形类：阔心形叶类和披针形叶类，从而证明本发明选育方法应用广泛，具有适应性。
进一步，上述步骤(1)中，消毒处理具体为：先将五彩芋外植体放入质量浓度为75％-85％的乙醇溶液中浸泡30-60s，然后用无菌水冲洗3-5次，再放入质量浓度为0.1％-0.3％的氯化汞溶液中浸泡5-10min，然后用无菌水冲洗4-6次，最后用无菌滤纸擦干表面的水珠。
采用上述进一步技术方案的有益效果在于，通过消毒，能够除去外植体表面的病菌，避免其对后续操作的影响，从而保证了选育新品种的质量。
进一步，上述步骤(2)中，切段具体为：将五彩芋的幼嫩叶片切成0.5-1.5cm长的小段；诱导培养基的组成为MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤1-3mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.5-2mg/L、蔗糖20-30g/L和琼脂4-6g/L，pH为5.7-5.9。
进一步，上述步骤(3)中，分化培养基的组成为：MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤1-3mg/L、a-萘乙酸0.1-1mg/L、蔗糖20-40g/L和琼脂4-8g/L，pH为5.7-5.9。
进一步，上述步骤(4)中，筛选培养基Ⅰ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、二水合氯化钙440mg/L、氯化钠300mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤1-3mg/L、a-萘乙酸0.1-1mg/L、蔗糖40-45g/L和琼脂4-8g/L，pH为5.7-5.9，培养时间为30-45天；筛选培养基Ⅱ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤1-3mg/L、a-萘乙酸0.1-1mg/L、蔗糖40-45g/L和琼脂4-8g/L，pH为5.7-5.9，培养时间为30-45天；筛选培养基Ⅲ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钾380mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤1-3mg/L、a-萘乙酸0.1-1mg/L、蔗糖40-45g/L和琼脂4-8g/L，pH为5.7-5.9，培养时间为30-45天。
进一步，上述步骤(5)中，生根培养基的组成为：硝酸钾2000mg/L、硝酸铵1400mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾360mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、烟酸0.5mg/L、蔗糖30-35g/L和琼脂4-8g/L，pH为5.7-5.9。
采用上述进一步技术方案的有益效果在于，本发明所选诱导培养基中，添加2,4-二氯苯氧乙酸能够显著提高五彩芋的变异率；然后进行三次筛选培养，定向淘汰筛选出符合育种目标的变异单株。其中，筛选培养基中改良MS培养基的特点是硝酸钾和磷酸二氢钾含量提高，结合不断提高氯化钠浓度，进行高盐胁迫，逐级筛选；6-苄基氨基腺嘌呤是一种植物生长调节剂，是第一个人工合成的细胞分裂素，能够抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；2,4-二氯苯氧乙酸是一种生长素类似物，能够刺激细胞分化，促进愈伤组织的形成；萘乙酸能够促进扦插枝条生根；蔗糖除供能之外，还能诱导愈伤组织组织的再分化；琼脂作为凝固剂，能够将液体培养基转化为固体培养基或半固体培养基，操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究。
进一步，上述步骤(2)、(3)和(5)中，全暗培养的温度为25-28℃；光照培养的温度为25-28℃，每天光照10-12h，光照强度为1500-3000lux。
进一步，上述步骤(6)中，培养过程中，用2000-3000倍20：20：20平衡肥给移栽苗施肥；混合基质由营养土和珍珠岩以3:(1-2)的质量比混合制得。
采用上述进一步技术方案的有益效果在于，本发明通过薄肥勤施20：20：20平衡肥，有利于植株快速生长。
进一步，上述步骤(7)中，变异单株的筛选标准包括：叶片变圆形、质地变硬、叶柄变粗壮和株型变矮；主要性状包括：株高、叶片和叶柄。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、本发明在愈伤组织诱导培养中添加能够显著提高变异率的2,4-二氯苯氧乙酸，并进行三次逐级递增的高盐胁迫培养，定向淘汰筛选出符合育种目标的变异单株；
2、本发明在人工选择的基础上，结合流式细胞仪检测方法，能够快速获得稳定遗传的优选变异单株，从而大大提高了变异单株的稳定性；
3、本发明方法的选育周期为5-6年，其中包括对亲本进行组织培养至出苗需1年；亲本移栽种植，进行变异单株选择，并利用流式细胞仪对变异单株的细胞DNA含量的测定和分析，确定优选单株需1年；对优选单株进行组织培养至出苗需1年；变异单株移栽种植，进行多年多点品种试验调查，最终选育出新品种需2-3年。相较于常规杂交育种周期为7-8年，本发明选育方法大约缩短了2-3年；
4、本发明通过对传统品种进行改良，培育出的新品种株型变矮，叶片变圆形，叶色表现更佳，叶片质地更硬，叶柄更粗壮，综合性状明显优于亲本。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
五彩芋的选育方法，具体包括以下步骤：
(1)外植体消毒
选取五彩芋品种‘日出’的幼嫩叶片和叶柄为外植体，先将五彩芋外植体放入质量浓度为70％的乙醇溶液中浸泡30s，然后用无菌水漂洗3次，再放入质量浓度为0.1％的氯化汞溶液中浸泡8min，然后用无菌水漂洗4次，最后用无菌滤纸擦干表面的水珠，得到消毒后的外植体；
(2)诱导培养
将消毒后的幼嫩叶片切成1.2cm长的小段，接种于诱导培养基中，先全暗培养2天，再在光照培养45天，每天光照10h，温度为26℃，光照强度为1500lux，得到愈伤组织；
其中，诱导培养基的组成为：MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5g/L，pH为5.7；
(3)分化培养
将愈伤组织转入分化培养基中，先在全暗培养2天，再在光照培养30天，每天光照10h，温度为26℃，光照强度为3000lux，得到分化培养体；
其中，分化培养基的组成为：MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5g/L，pH为5.7；
(4)定向淘汰筛选培养
经过诱导后分化的培养体切掉叶片和须根，逐次继代转入筛选培养基Ⅰ、筛选培养基Ⅱ和筛选培养基Ⅲ进行培养，得到分化株；
其中，筛选培养基Ⅰ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、二水合氯化钙440mg/L、氯化钠300mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖40g/L和琼脂5g/L，培养时间为35天；
筛选培养基Ⅱ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖40g/L和琼脂5g/L，pH为5.7-5.9，培养时间为35天；
筛选培养基Ⅲ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钾380mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖40g/L和琼脂5g/L，pH为5.7-5.9，培养时间为35天；
(5)生根培养
将诱导筛选培养基中获得的分化株转入生根培养基中，先在全暗培养2天，再在光照培养30天，每天光照10h，温度为26℃，光照强度为3000lux，45天可见须根，得到幼苗，即可出瓶温室内移栽管理；
其中，生根培养基的组成为：硝酸钾2000mg/L、硝酸铵1400mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾360mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、烟酸0.5mg/L、蔗糖35g/L和琼脂6g/L，pH为5.7；
(6)炼苗移栽
选取高度为6cm、生长良好且健壮的幼苗，将其培养瓶置于自然光照下炼苗8天后，取出幼苗，洗掉根部培养基，栽入由营养土和珍珠岩以3:1的质量比混合制得的混合基质中，出瓶移栽1周后用1000倍的多菌灵淋一次，20天后用3000倍的20：20：20通用肥液进行叶面喷施及浇灌，保持叶面和盆土湿润，光照强度控制在10000Lux以内，温度为28℃，30天后，待植株长到有2-4片叶时，移栽上盆；
(7)选择变异单株
从亲本的无性系后代群体中，筛选出叶片变圆形、质地变硬、叶柄变粗壮和株型变矮的变异单株，并采用流式细胞仪对变异单株的细胞DNA含量进行测定和分析，选择峰值位置为亲本1.8倍的变异单株作为优选单株；
(8)建立优选单株的无性系后代群体
选取优选单株的幼嫩叶片为外植体进行组培扩繁，并以亲本为对照，对植株主要性状如植株、叶片、叶柄和生长势等进行多年多点试验调查，验证优选单株后代群体的特异性、一致性和稳定性；
(9)培育新品种
经品种比较试验调查，选择具有独特的观赏性状、形成性状和表现一致的后代群体植株，与亲本比较，株系的株型变矮，叶片变圆形，叶片质地更硬，叶柄更粗壮，符合选育目标，作为新品种进行培育。
实施例2
五彩芋的选育方法，具体包括以下步骤：
(1)外植体消毒
选取五彩芋品种‘雪天使’的幼嫩叶片为外植体，先将五彩芋外植体放入质量浓度为70％的乙醇溶液中浸泡30s，然后用无菌水漂洗3次，再放入质量浓度为0.1％的氯化汞溶液中浸泡6min，然后用无菌水漂洗4次，最后用无菌滤纸擦干表面的水珠，得到消毒后的外植体；
(2)将消毒后幼嫩叶片切成0.5cm长的小段，接种于诱导培养基中，先全暗培养2天，再在光照培养30天，每天光照10h，温度为25℃，光照强度为1500lux，得到愈伤组织；
其中，诱导培养基的组成为：MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤3mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸10mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5g/L，pH为5.8；
(3)分化培养
将愈伤组织转入分化培养基中，先在全暗培养2天，再在光照培养20天，每天光照10h，温度25℃，光照强度为3000lux，得到分化培养体；
其中，分化培养基的组成为：MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5g/L，pH为5.8；
(4)定向淘汰筛选培养
经过诱导后分化的培养体切掉叶片和须根，逐次继代转入筛选培养基Ⅰ、筛选培养基Ⅱ和筛选培养基Ⅲ进行培养，得到分化株；
其中，筛选培养基Ⅰ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、二水合氯化钙440mg/L、氯化钠300mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖40g/L和琼脂5g/L，pH为5.8，培养时间为35天；
筛选培养基Ⅱ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖40g/L和琼脂5g/L，pH为5.8，培养时间为35天；
筛选培养基Ⅲ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钾380mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖40g/L和琼脂5g/L，pH为5.8，培养时间为35天；
(5)生根培养
将诱导筛选培养基中获得的分化株转入生根培养基中，先在全暗培养2天，再在光照培养30天，每天光照10h，温度为25℃，光照强度为3000lux，45天可见须根，得到幼苗，即可出瓶温室内移栽管理；
其中，生根培养基的组成为：硝酸钾2000mg/L、硝酸铵1400mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾360mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、烟酸0.5mg/L、蔗糖35g/L和琼脂6g/L，pH为5.7；
(6)炼苗移栽
选取高度为5cm、生长良好且健壮的幼苗，将其培养瓶置于自然光照下炼苗8天后，取出幼苗，洗掉根部培养基，栽入由营养土和珍珠岩以3:2的质量比混合制得的混合基质中，置于温室培养，出瓶移栽1周后用1000倍的多菌灵淋一次，20天后用3000倍的20：20：20通用肥液进行叶面喷施及浇灌，保持叶面和盆土湿润，光照强度控制在10000Lux以内，温度为28℃，20天后，待植株长到有2-4片叶时，移栽上盆；
(6)选择变异单株
从亲本的无性系后代群体中，筛选出叶片变圆形、质地变硬、叶柄变粗壮和株型变矮的变异单株，并采用流式细胞仪对变异单株的细胞DNA含量进行测定和分析，选择峰值位置为亲本1.8倍的变异单株作为优选单株；
(7)建立优选单株的无性系后代群体
选取优选单株的幼嫩叶片为外植体进行组培扩繁，并以亲本为对照，对植株主要性状如植株、叶片、叶柄和生长势等进行多年多点试验调查，验证优选单株后代群体的特异性、一致性和稳定性；
(8)培育新品种
经品种比较试验调查，选择具有独特的观赏性状、形成性状和表现一致的后代群体植株，与亲本比较，株系的株型变矮，叶片变圆形，叶片质地更硬，叶柄更粗壮，符合选育目标，作为新品种进行培育。
实施例3
五彩芋的选育方法，具体包括以下步骤：
(1)外植体消毒
选取五彩芋品种‘姜黄大地’的幼嫩叶片和叶柄为外植体，先将五彩芋外植体放入质量浓度为85％的乙醇溶液中浸泡60s，然后用无菌水漂洗5次，再放入质量浓度为0.3％的氯化汞溶液中浸泡10min，然后用无菌水漂洗6次，最后用无菌滤纸擦干表面的水珠，得到消毒后的外植体；
(2)诱导培养
将消毒后的幼嫩叶片切成1.5cm长的小段，接种于诱导培养基中，先在26℃温度下全暗培养3天，再在光照培养50天，每天光照10h，温度为26℃，光照强度为1500lux，得到愈伤组织；
其中，诱导培养基的组成为：MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤3mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH为5.9；
(3)分化培养
将愈伤组织转入分化培养基中，先在全暗培养3天，再在光照培养40天，每天光照10h，温度为26℃，光照强度为3000lux，得到分化培养体；
其中，分化培养基的组成为：MS培养基、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5g/L，pH为5.9；
(4)定向淘汰筛选培养
经过诱导后分化的培养体切掉叶片和须根，逐次继代转入筛选培养基Ⅰ、筛选培养基Ⅱ和筛选培养基Ⅲ进行培养，得到分化株；
其中，筛选培养基Ⅰ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、二水合氯化钙440mg/L、氯化钠300mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖45g/L和琼脂5g/L，pH为5.8，培养时间为35天；
筛选培养基Ⅱ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖45g/L和琼脂5g/L，pH为5.8，培养时间为35天；
筛选培养基Ⅲ的组成为：硝酸钾2300mg/L、硝酸铵1500mg/L、磷酸二氢钾400mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、氯化钾380mg/L、氯化钠880mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、MS培养基有机物质、6-苄基氨基腺嘌呤2mg/L、a-萘乙酸0.2mg/L、蔗糖45g/L和琼脂5g/L，pH为5.8，培养时间为35天；
(5)生根培养
将诱导筛选培养基中获得的分化株转入生根培养基中，先在全暗培养3天，再在光照培养30天，每天光照10h，温度为28℃，光照强度为3000lux，50天可见须根，得到幼苗，即可出瓶温室内移栽管理；
其中，生根培养基的组成为：硝酸钾2000mg/L、硝酸铵1400mg/L、四水合硝酸钙700mg/L、七水合硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾360mg/L、MS培养基微量元素、MS培养基铁盐、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、烟酸0.5mg/L、蔗糖35g/L和琼脂8g/L，pH为5.9；
(6)炼苗移栽
选取高度为8cm、生长良好且健壮的幼苗，将其培养瓶置于自然光照下炼苗8天后，取出幼苗，洗掉根部培养基，栽入由营养土和珍珠岩以3:1的质量比混合制得的混合基质中，出瓶移栽1周后用1000倍的多菌灵淋一次，20天后用3000倍的20：20：20通用肥液进行叶面喷施及浇灌，保持叶面和盆土湿润，光照强度控制在10000Lux以内，温度为28℃，30天后，待植株长到有2-4片叶时，移栽上盆；
(7)选择变异单株
从亲本的无性系后代群体中，筛选出叶片变圆形、质地变硬、叶柄变粗壮和株型变矮的变异单株，并采用流式细胞仪对变异单株的细胞DNA含量进行测定和分析，选择峰值位置为亲本2.0倍的变异单株作为优选单株；
(8)建立优选单株的无性系后代群体
选取优选单株的幼嫩叶片为外植体进行组培扩繁，并以亲本为对照，对植株主要性状如植株、叶片、叶柄和生长势等进行多年多点试验调查，验证优选单株后代群体的特异性、一致性和稳定性；
(9)培育新品种
经品种比较试验调查，选择具有独特的观赏性状、形成性状和表现一致的后代群体植株，与亲本比较，株系的株型变矮，叶片变圆形，叶片质地更硬，叶柄更粗壮，符合选育目标，作为新品种进行培育。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。