一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物
阅读说明：本技术 一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物 (Plant composition capable of relieving diarrhea-predominant irritable bowel syndrome ) 是由 李家炜 闫昌誉 叶健文 王志芳 罗莉莉 何蓉蓉 栗原博 古润金 于 2021-09-14 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物,属于植物组合物应用领域。本发明所述植物组合物以平卧菊三七为主成分,同时辅以紫苏、淡竹叶、桔梗和茯苓共同发生协同作用,可显著改善及缓解腹泻型肠易激综合症的症状,安全无毒副作用。本发明还公开了所述植物组合物的制备方法及由所述植物组合物制备的可缓解腹泻型肠易激综合症的药物制剂。(The invention discloses a plant composition capable of relieving diarrhea-predominant irritable bowel syndrome, and belongs to the field of plant composition application. The plant composition disclosed by the invention takes gynura procumbens as a main component, and simultaneously takes the perilla frutescens, the lophatherum gracile, the platycodon grandiflorum and the poria cocos to generate a synergistic effect together, so that the symptoms of diarrhea-type irritable bowel syndrome can be remarkably improved and relieved, and the composition is safe and has no toxic or side effect. The invention also discloses a preparation method of the plant composition and a medicinal preparation prepared from the plant composition and capable of relieving diarrhea-predominant irritable bowel syndrome.)
技术领域
本发明涉及植物组合物应用领域，具体涉及一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物。
背景技术
肠易激综合征(Irritable bowel syndrome，IBS)又称肠道激惹综合征或肠功能应激综合征，是一种持续的或间歇发作的、伴有腹痛、腹部不适、便秘或腹泻及排便习惯改变的胃肠功能紊乱性疾病。然而，IBS缺乏特异的胃肠道临床形态学和病理变化以及生化异常指标。IBS根据粪便性状分为以下亚型：(1)便秘型IBS(IBS-Constipation)：硬便或块状便比例≥25％，稀便或水样便比例<25％；(2)腹泻型DIBS(IBS-Diarrhea)：稀便或水样便比例≥25％，硬便或块状便比例<25％；(3)混合型IBS(IBS-Mixed)：硬便或块状便比例>25％，稀便或水样便比例≥25％；(4)不确定型IBS(IBS-Unsubtyped)：粪便性状与以上三种亚型均不符。IBS病理生理学机制尚未探明，其发病机制的研究多集中于内脏高敏感，涉及神经系统多个水平，大量研究已证实中枢神经系统参与调节胃肠道活动、吸收和分泌等。此外，IBS患者多伴有情绪焦虑和抑郁，其发病也与环境因素和精神压力密切相关。
至今为止，临床上尚无针对IBS的治疗药物，一般采用止泻、解痉止痛、调节肠道菌群等对症方法，这些方法虽然具有一定缓解作用，但停药后易反复发作。因此，人们在对IBS的病理生理进行分析的同时，也注重对其治疗方法的研制和开发。从身体健康及生活习惯角度出发，人们更需要一种可以长期服用而且安全性高的用于改善或治疗IBS疾病的医药用品，对IBS具有较好的预防和改善作用。
发明内容
基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物，该组合物以平卧菊三七为主成分，同时辅以紫苏、淡竹叶、桔梗和茯苓共同发生协同作用，可显著改善及缓解腹泻型肠易激综合症DIBS的症状，安全无毒副作用。
为了达到上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物，包括以下重量份的原料：
平卧菊三七40～50份、紫苏10～18份、淡竹叶15～25份、桔梗20～26份及茯苓12～22份。
现有缓解DIBS症状的药物大多存在短效、弱效、“治标不治本”、副作用大等缺陷，而本申请发明人在实验中意外发现，本发明所述平卧菊三七、紫苏等这几种植物作为组分原料搭配得到的产品可真正实现长效持续地预防和缓解DIBS症状；经过机理研究和分析，发明人发现所述产品可显著改善患者“脑-肠轴”的失衡状况，降低血清与结肠中5-羟色胺的水平，同时缓解HPA轴的过度激活，降低糖皮质激素皮质酮的释放，实现对多个目标靶点的打击，进而整体表现出症状的缓解效果(如腹泻导致的稀便率显著降低)，无额外副作用。
优选地，所述植物组合物中的原料可使用相应的植物提取物代替。
本领域技术人员根据实际生产的需要，可将本发明所述植物组合物的原料中的至少一种采用相应的植物提取物代替(例如平卧菊三七采用平卧菊三七提取物代替)，所得产品同样具备相同的技术效果。
优选地，所述植物组合物包括以下重量份的原料：
平卧菊三七41～43份、紫苏14～16份、淡竹叶18～22份、桔梗22～24份及茯苓15～18份。
所述优选配比下，所得产品的DIBS症状缓解效果更好。
本发明的另一目的在于提供所述可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将各原料按配比称取后混合并干燥粉碎，得到混合药材粉末；
(2)将混合药材粉末加入溶剂中超声浸泡后，进行热回流提取3～5次，过滤，合并过滤液并进行减压浓缩旋干处理，即得所述可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物。
本发明所述可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物的制备方法操作步骤简单，对设备要求低，可实现工业化规模生产。
优选地，所述溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙二醇、丙酮中的至少一种；
更优选地，所述溶剂为水，所述水与混合药材粉末的质量比为20～30:1。
基于实际需要，本发明所述产品原料在提取过程时可采用不同的溶剂进行，而基于所述产品的食用级用途安全特性，以水作为溶剂最佳。
优选地，所述超声浸泡的时间为2～4h，功率为400～800W。
所述时间和功率下对混合药材粉末进行超声预处理，可实现提取物收率上的提升。
优选地，所述每次热回流的时间为1～1.5h。
优选地，所述过滤时的目数为150～250目。
本发明的再一目的在于提供一种可缓解腹泻型肠易激综合症的药物制剂，所述药物制剂的制备原料包括本发明所述植物组合物。
本发明所述植物组合物安全无毒，对腹泻型肠易激综合症的预防、抑制缓解效果显著，性质稳定，可有效应用于制备相应功效需求的药物制剂，所得药物制剂可有效应用于预防和治疗因DIBS引起的临床病症、并发症及相关疾病。
优选地，所述药物制剂的剂型包括粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液剂中的任一种。
本发明所述植物组合物性质稳定，可在不同剂型的药物制剂发挥预期药效。
优选地，所述药物制剂的制备原料还包括加工助剂；
更优选地，所述加工助剂包括赋形剂、防腐剂、抗氧剂、润滑剂中的至少一种。
本发明所述植物组合物可与常见的载体赋形剂搭配结合使用，根据实际剂型发挥出完整功效，而添加诸如防腐剂、抗氧剂、润滑剂等也可进一步保障制得产品的稳定性，延长产品的保质期。
更优选地，所述赋形剂包括乳糖、白糖、甘露醇、淀粉中的至少一种；所述防腐剂包括氯丁醇、苄醇、二羟基乙酸中的至少一种；所述抗氧剂包括亚硫酸盐、抗坏血酸中的至少一种；所述润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉中的至少一种。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物，该组合物以平卧菊三七为主成分，同时辅以紫苏、淡竹叶、桔梗和茯苓共同发生协同作用，可显著改善及缓解腹泻型肠易激综合症的症状，安全无毒副作用。本发明还提供了所述植物组合物的制备方法及由所述植物组合物制备的可缓解腹泻型肠易激综合症的药物制剂。
具体实施方式
若无特别说明，本发明实施例中所用原料均购自市场。
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明，其目的在于详细地理解本发明的内容，而不是对本发明的限制。
实施例1
本发明所述一种可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物的实施例。
本实施例所述植物组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将平卧菊三七42份、紫苏15份、淡竹叶20份、桔梗23份及茯苓16份按配比称取后混合并干燥粉碎，得到混合药材粉末；
(2)将混合药材粉末加入纯水(水与混合药材粉末的质量比为25:1)中超声浸泡3h后，进行热回流提取4次，每次热回流1h，200目过滤，合并过滤液并进行减压浓缩旋干处理，即得所述可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物，经计算所得产品以原料算收率为21.3％。
实施例2
本实施例与实施例1的差别仅在于，各原料的添加配比为：平卧菊三七48份、紫苏16份、淡竹叶16份、桔梗25份及茯苓20份，经计算所得产品以原料算收率为20.9％。
实施例3
本实施例与实施例1的差别仅在于，各原料的添加配比为：平卧菊三七45份、紫苏12份、淡竹叶24份、桔梗22份及茯苓13份，经计算所得产品以原料算收率为19.7％。
对比例1
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述原料不含平卧菊三七。
对比例2
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述原料不含紫苏和茯苓。
对比例3
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述原料不含淡竹叶和桔梗。
对比例4
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述原料不含桔梗和茯苓。
对比例5
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述原料不含紫苏、淡竹叶、桔梗和茯苓。
效果例
为验证本发明所述可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物的肠易激综合症缓解效果，对实施例1～3和对比例1～5所得产品进行使用测试。
为了达到上述目的，本发明参考“南通大学学报(医学版)(2018,38(2):81-84)”的实验方法，利用番泻叶和拘束应激负荷制备DIBS动物模型评价组合物的生物活性：番泻叶(Sennae folium)为豆科植物狭叶番泻或尖叶番泻的小叶，传统医学用于泻热行滞、利水、热结积滞、便秘等。此外，该植物因富含大黄酚、大黄酸等活性成分又为刺激性泻药，通过肠粘膜和神经系统作用于结肠，刺激肠蠕动；但至今为止已有很多研究证明，单用番泻叶水提物灌胃进行DIBS建模效果并不显著，因此，本发明在给予小鼠番泻叶水提物的基础上，采用拘束应激负荷作为心理因素干预建立DIBS动物模型。本发明采用的拘束应激(Restraintstress)负荷实验被认为是研究神经-内分泌-免疫系统相互作用，及神经系统对机体机能应答影响的经典实验模式。本发明利用番泻叶与拘束应激负荷制备小鼠模型有效评价了组合物对DIBS的改善效果。
效果例1
本效果例具体测试方法如下：
实验使用雄性7周龄昆明小鼠，饲养条件：23±2℃，湿度55±5％，照明时间12h/天(7:00～19:00)，自由饮水，饲养一周后进行实验。此外，称取番泻叶50g添加30倍量水，在100℃条件下煎煮30分钟后，用双层纱布过滤得到上清液，继而将提取物浓缩到0.5g/mL，并在-20℃条件下的冰箱保存，使用前需要在25℃水浴预热。
实验将小鼠随机分为正常对照组、DIBS模型组、组合物1组(实施例1)、组合物2组(实施例2)、组合物3组(实施例3)、对照品1组～对照品5组(对比例1～5)，每组8只。各给药组小鼠灌胃给药(150mg/kg)后禁食12h，正常组和DIBS模型组给与等量生理盐水。紧接着，DIBS模型组和给药组的小鼠按照10mL/kg剂量，以0.5g/mL浓度灌胃给予番泻叶水溶液，然后将小鼠置于50mL拘束管负荷2h，解除束缚后观测6h内的排便情况，连续造模5天并观察排便情况。
稀便率是利用滤纸印迹法观察和计算造模后6h的小鼠排便的总粒数及稀便粒数。稀便率分析以滤纸上有无污迹为准，并通过以下方式进行计算，稀便率(％)＝稀便粒数/粪便总粒数×100％。统计学方法为所得数据采用SPSS 20.0统计软件进行分析，P<0.05表示差异具有统计学意义。
测试结果如表1所示。
表1
从表1可以看出，相比于DIBS模型组小鼠，其他试验组的平均稀便率均有所降低，但部分对照品组的降低程度极低，效果不佳或效果可忽略不计；以150mg/kg的灌药量使用的实施例1所得产品的组合物组中小鼠的稀便抑制率达到18.5％，远远高于其他对照品(对比例)产品的改善效果(均≤10％)，说明本发明所述植物组合物所用原料间相互发生协同效果，在不可分割的整体作用下发挥出优异的DIBS症状缓解功效。此外，通过比较组合物1～3的疗效发现，组合物1能更有效地改善DIBS小鼠地稀便率，表明本发明所述植物组合物中原料的配比也是影响药效的关键因素。
为继续验证上述结论，进行剂量依赖测试实验：以上述相同的方法培养小鼠模型，随后将小鼠随机分为正常对照组、DIBS模型组、低剂量、中剂量和高剂量组合物组(均使用实施例1产品)，每组10只。各给药组小鼠灌胃给药(低剂量组合物组：50mg/kg；中剂量组合物组：150mg/kg；高剂量组合物组：450mg/kg；)后禁食12h，正常组和DIBS模型组给与等量生理盐水。紧接着，DIBS模型组和给药组的小鼠按照10mL/kg剂量，以0.5g/mL浓度灌胃给予番泻叶水溶液，然后将小鼠置于50mL拘束管负荷2h，解除束缚后观测6h内的排便情况，连续造模5天并观察排便情况。
测试结果如表2和3所示。
表2
实验组别
一天
三天
五天
正常对照组
0.00±0.00
0.00±0.00
0.00±0.00
DIBS模型组
20.3±1.29*
23.6±1.02*
27.9±1.86*
高剂量组合物组(450mg/kg)
14.7±2.48#
18.2±1.14#
22.7±2.49#
中剂量组合物组(150mg/kg)
17.1±1.81#
21.1±2.49#
25.3±2.17#
低剂量组合物组(50mg/kg)
18.6±2.47
22.3±3.48
26.8±2.79
与正常对照组相比，*P<0.05；与DIBS模型组相比，#P<0.05
表3
与正常对照组相比，*P<0.05；与DIBS模型组相比，#P<0.05
从实验中发明人发现，正常小鼠的排便时间次数不多，粪便为干燥、颗粒状，在滤纸上无印记或稀便状态，而DIBS模型组小鼠排便次数较多，且滤纸上存在较多污迹，粪便周围存在明显粘液，而从表2和3可知，采用本发明所述植物组合物后，无论是低剂量、中剂量亦或是高剂量使用剂量下，测试小鼠的首次排便时间均延长，排便数也有所减少，排便量有所减少，而剂量越高，效果越明显，说明本发明所述植物组合物存在较好的剂量依赖关系。
效果例2
“脑-肠轴”指胃肠道与中枢系统存在联系，胃肠道可以通过“脑-肠轴”将信息传递至大脑，中枢系统会通过释放各种激素与神经递质调节胃肠道的消化吸收与排泄等功能。近年来的研究发现肠易激综合征患者“脑-肠轴”存在不同程度的失衡，其中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)在DIBS患者肠道黏膜组织中呈现较高水平，能够与5-HT受体Ⅲ(5-HT3 receptor,5-HT3R)结合引起胃肠道功能紊乱。实际上5-HT3R拮抗剂能改善腹泻型患者的腹痛症状及大便的次数，如阿洛司琼，但因其可引起缺血性结肠炎等不良反应，已被停止使用，可见5-HT及其受体是治疗DIBS的重要靶点。因此，发明人在本发明也探讨了所述可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物对DIBS模型小鼠的改善作用是否与5-HT有关。
测试方法如下：
(1)血清样本的准备：将效果例1中剂量依赖测试实验中的小鼠通过异氟烷麻醉，心脏取血。将全血于室温静置1h、5000rpm离心20min，分离出血清；
(2)结肠样本的准备：来自于效果例1中实验小鼠的结肠组织，按照1：10(m/v)的比例加入预冷的PBS溶液，在冰上匀浆后，4℃低温12000rpm离心15min，收取上清；
(3)5-HT的检测：使用小鼠5-HT酶联免疫分析试剂盒检测小鼠血清和结肠组织中5-HT的水平。
结果如表4所示。
表4
实验组别
血清(ng/mL)
结肠(ng/mL)
正常对照组
373.2±54.8
1306.1±89.1
DIBS模型组
716.8±98.4*
2147.9±112.6*
高剂量组合物组(450mg/kg)
534.9±121.6#
1467.1±135.7#
中剂量组合物组(150mg/kg)
590.4±120.9#
1800.4±98.4#
低剂量组合物组(50mg/kg)
691.4±112.3
2013.7±147.9
与正常对照组相比，*P<0.05；与DIBS模型组相比，#P<0.05。
从表4可知，DIBS模型组小鼠的血清和结肠组织中5-HT含量相比于正常对照组明显升高，而采用了本发明所述植物组合物进行灌药后，实验组小鼠的5-HT含量有所降低，其中中剂量和高剂量组的小鼠其血清和结肠组织中5-HT的水平抑制效果明显，证明可缓解腹泻型肠易激综合症的植物组合物对DIBS模型小鼠的改善作用与5-HT有关。
因此，发明人通过western blot技术检测了小鼠结肠组织中5-HT3R蛋白的表达与本发明所述产品的应用关系。
具体实验步骤如下：
(1)将上述实验时取出的小鼠结肠组织匀浆后，冰浴裂解1h，以12000rpm的转速在4℃低温下离心20min，收取上清通过BCA法检测蛋白浓度，加入1/4体积的5×loadingbuffer，100℃煮沸5min变性即得蛋白样品。
(2)SDS-PAGE：蛋白上样30μg，60V恒压30min，120V恒压分离90min。
(3)转膜：将蛋白从凝胶转至甲醇活化的PVDF膜上，300mA恒流转印60min。
(4)封闭：5％脱脂牛奶常温封闭PVDF膜60min。
(5)抗体孵育：TBST稀释5-HT3R多克隆抗体(Rabbit，1:1000)，置于4℃冰箱过夜。
(6)HRP孵育：TBST稀释羊抗兔二抗-HRP(1:3000)室温孵育2h。
(7)ECL化学发光：将条带放入ECL工作液中充分接触，置于天能发光工作站进行成像，使用ImageJ软件对蛋白条带进行半定量分析。
测试结果如表5所示。
表5
实验组别
5-HT3R相对水平
正常对照组
1.01±0.22
DIBS模型组
1.98±0.16*
高剂量组合物组(450mg/kg)
1.25±0.13#
中剂量组合物组(150mg/kg)
1.35±0.21#
低剂量组合物组(50mg/kg)
1.82±0.16
与正常对照组相比，*P<0.05；与DIBS模型组相比，#P<0.05。
从表5可知，与5-HT相似，本发明所述植物组合物在使用后可明显抑制DIBS模型组小鼠中5-HT3R蛋白的水平。
效果例3
IBS“脑肠轴”失衡也表现为过度激活的“下丘脑-垂体-肾上腺轴”(Thehypothalamic–pituitary-adrenal axis,HPA axis)，实际上焦虑等因素也是诱发IBS的重要原因，可能与HPA轴的激活有关。拘束应激是较好的情志焦虑模型，可以激活HPA轴促进糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)的大量释放，小鼠中最常见的为皮质酮(Corticosterone,CORT)，人体中与之对应的为皮质醇(Hydrocortisone)。因此小鼠体内CORT的水平也是重要的衡量指标，本效果例检测了效果例1中剂量依赖测试实验中的CORT水平。
血浆CORT水平的检测参考先前文献报道的方法(FASEB J.2020,34(8):10998-11014.)。
具体步骤如下：待效果例1实验结束后，各组小鼠心脏取血置于抗凝剂处理的离心管中，室温4000rpm离心5min，收集上清血浆，向0.5mL血浆样本中加入25μL皮质醇内标(4μg/mL)，然后加入2mL乙酸乙酯萃取，收集上层有机相。再加入2mL乙酸乙酯重复萃取一次，收集两次萃取液，用0.1mL NaOH碱液洗1次，再用蒸馏水洗2次，然后置于氮气下吹干乙酸乙酯。加入100μL流动相(乙腈-水：38-72)溶解即得分析样品，用于后续HPLC分析。
标准曲线的绘制：准确配制系列浓度的皮质酮标准品溶液，分别为128、64、32、16、8和4ng/mL。向50μL的标准溶液中加入50μL的cortisol(0.075mg/mL)作为内标物，即为含内标的标准曲线工作液。检测条件为：紫外检测，检测波长为254nm；色谱柱：5C18(4.6×150mm,5μm)；流动相：乙腈-水(38-72)；流速：1mL/min，进样量为20μL，以标准品峰面积/内标峰面积为纵坐标，标准品溶度(ng/mL)为横坐标，进行线性回归分析并获得回归方程，根据回归方程计算血浆样品中的CORT水平。
测试结果如表6所示。
表6
与正常对照组相比，*P<0.05；与DIBS模型组相比，#P<0.05。
从表6可看出，DIBS模型组小鼠血浆中的CORT含量相比于正常组明显升高，而按不同剂量灌药本发明所述植物组合物后的实验组各组小鼠的血浆CORT含量水平明显降低，说明本发明所述植物组合物能显著抑制血浆CORT水平。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
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