一种菊花叶微生物发酵饲料的制备方法
阅读说明：本技术 一种菊花叶微生物发酵饲料的制备方法 (Preparation method of chrysanthemum leaf microbial fermentation feed ) 是由 竺利红 李孝辉 施跃峰 于 2021-01-27 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种菊花叶微生物发酵饲料的制备方法,以菊花叶作为主要培养基质,通过解淀粉芽孢杆菌发酵菊花叶制备菊花叶发酵饲料,不仅有效解决菊花叶的污染问题,还能使菊花叶的功效成分得到充分利用。本发明制得的菊花叶发酵饲料富含益生菌解淀粉芽孢杆菌及其利用菊花叶后的发酵产物,含有多种酶和抗菌活性物质,是一种兼具药用功能和营养功能的绿色饲料产品,可作为添加剂添加在动物饲料中；将其添加于蛋鸡饲料中,在降低蛋鸡料蛋比的同时,还能极显著地提高蛋鸡产蛋率和蛋的品质。(The invention provides a preparation method of chrysanthemum leaf microbial fermentation feed, which takes chrysanthemum leaves as a main culture medium and prepares the chrysanthemum leaf fermentation feed by fermenting the chrysanthemum leaves through bacillus amyloliquefaciens, thereby not only effectively solving the pollution problem of the chrysanthemum leaves, but also fully utilizing the functional components of the chrysanthemum leaves. The chrysanthemum leaf fermented feed prepared by the invention is rich in probiotics bacillus amyloliquefaciens and fermentation products of the chrysanthemum leaf fermented feed, contains various enzymes and antibacterial active substances, is a green feed product with medicinal function and nutritional function, and can be added into animal feed as an additive; when the additive is added into the laying hen feed, the laying rate of laying hens and the quality of eggs can be remarkably improved while the feed-egg ratio of the laying hens is reduced.)
技术领域
本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体而言，涉及一种通过解淀粉芽孢杆菌发酵菊花叶制备发酵饲料的方法。
背景技术
菊花(Dendranthema morifolium(Ramat.)Tzvel.)是原产于我国的传统名花，既富有观赏性，又极具药性。菊花采摘后，其茎叶的处置方法多为弃去，造成了严重的环境污染和资源浪费。
菊花叶中含有与菊花类似的活性物质成分包括挥发油、黄酮、酚酸类、多糖类等，具有抗菌和抗氧化活性，在清除脂自由基方面还胜于菊花。但是菊花叶的活性物质多存在于细胞壁内，不易被动物直接利用。
我国是菊花种植和出口大国，根据农业部统计数据，2017年我国菊花种植面积在7520.5万公顷左右，每年产生的废弃叶不可估量，如能将其利用起来，经济效益和社会效益不容小觑。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)属于革兰氏阳性芽孢杆菌，能产生拮抗蛋白类、脂和聚酮类化合物等丰富的抗菌活性物质，可有效地抑制多种动植物病原菌，具有抑菌活性强、稳定性好以及不易产生耐药性等优点，可以作为替代抗生素的绿色饲料添加剂或者兽药应用于动物生产中。
现有技术中已有采用菊花叶作为辅助培养成分通过微生物发酵制备发酵肥料的的相关专利申请，如CN108997058A、CN108440193A等，本申请的发明人竺利红等曾报道了采用菊花叶为主要培养基质，通过植物乳杆菌和酿酒酵母混合发酵制备菊花叶发酵饲料(浙江农业科学，2020，61(4):715-716，719)；截至目前以菊花叶作为主要培养基质，通过解淀粉芽孢杆菌发酵来制备菊花叶发酵饲料未见报道。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种以菊花叶作为主要培养基质，通过解淀粉芽孢杆菌发酵菊花叶制备菊花叶发酵饲料的方法，不仅有效解决菊花叶的污染问题，还能使菊花叶的功效成分得到充分利用。本发明制得的菊花叶发酵饲料富含益生菌解淀粉芽孢杆菌及其利用菊花叶后的发酵产物，含有多种酶和抗菌活性物质，是一种兼具药用功能和营养功能的绿色饲料产品，将其添加于蛋鸡饲料中，在降低蛋鸡料蛋比的同时，还能极显著地提高蛋鸡产蛋率和蛋的品质。
菊花叶的活性物质多存在于细胞壁内，不易被动物直接利用。解淀粉芽孢杆菌在发酵过程中可以产生淀粉酶、蛋白酶、果胶酶和纤维素酶等多种胞外酶，不仅可分解植物细胞壁的纤维素、半纤维素、果胶质等转化成动物可直接利用的小分子糖、单糖、多肽和氨基酸等，提高营养成分，同时可使植物细胞破裂，使细胞壁内的有效成分充分溶出。因此，通过解淀粉芽孢杆菌可以发酵菊花叶，制备菊花叶发酵饲料，从而有效解决菊花叶的污染问题，还能为生产上提供一种兼具药用功能和营养功能的绿色饲料添加剂产品。
一方面，本发明提供了一种菊花叶微生物发酵饲料，所述饲料中含有解淀粉芽孢杆菌及其利用菊花叶后的发酵产物，所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌HZ179，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CFMCC NO：11358，保藏名称为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏日期为2015年9月24日。
另一方面，本发明提供了一种菊花叶微生物发酵饲料的制备方法，采用菊花叶配制发酵培养基，接入解淀粉芽孢杆菌发酵制得。
进一步地，所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌HZ179，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CFMCC NO：11358，保藏名称为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
进一步地，所述方法包含以下步骤：
(1)发酵培养基配制：采用菊花叶制备发酵培养基；
(2)种子液制备：将解淀粉芽孢杆菌新鲜斜面接入肉汤培养液培养，得到种子液；
(3)发酵：将种子液接入发酵培养基中进行发酵，得到菊花叶微生物发酵饲料。
进一步地，步骤(1)所述的发酵培养基，还可以添加辅助的碳源和/或辅助的氮源。
实验证明，发酵培养基中添加辅助的碳源或氮源，能使解淀粉芽孢杆菌生长得更好，提高发酵效率。
进一步地，步骤(1)所述辅助的碳源为选自淀粉、糊精或葡萄糖中的任意一种或多种；所述辅助的氮源为选自蛋白胨、酵母膏、麸皮、黄豆饼粉、牛肉膏或玉米浆中的任意一种或多种。
本发明所述的添加辅助的碳源和辅助的氮源，只是为了提高发酵效率，因此其中辅助碳源和辅助氮源的比例均可由使用者根据实际情况进行调整，本发明对此并无特别要求。在一些实施方式中，发酵培养基中还可添加其他物质，如微量元素、磷酸盐、pH调节剂等等。
进一步地，步骤(2)为将解淀粉芽孢杆菌新鲜斜面接入肉汤培养液中，经35～37℃、200r/min培养12～18h，得到种子液。
进一步地，步骤(3)所述发酵为固体发酵。
进一步地，步骤(3)为将种子液按体积比3-5％接入发酵培养基中，发酵时控制温度为30～39℃，发酵时间为30～52小时，得到菊花叶微生物发酵饲料。
再一方面，本发明提供了菊花叶用于制备解淀粉芽孢杆菌发酵培养基的用途。
进一步地，所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌HZ179，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CFMCC NO：11358，保藏名称为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
再一方面，本发明提供了菊花叶微生物发酵饲料用于制备动物饲料添加剂的用途，所述微生物为解淀粉芽孢杆菌。
进一步地，所述菊花叶微生物发酵饲料按照0.1-20％比例添加于动物饲料中。
再一方面，本发明提供了一种菊花叶微生物发酵饲料在降低蛋鸡料蛋比、或提高蛋鸡产蛋率和蛋的品质方面的用途，所述微生物为解淀粉芽孢杆菌。
进一步地，所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌HZ179，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CFMCC NO：11358，保藏名称为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
进一步地，所述菊花叶微生物发酵饲料可作为添加剂添加于蛋鸡的饲料中。
进一步地，所述菊花叶微生物发酵饲料按照0.1-20％比例添加于蛋鸡的饲料中。
本发明的有益效果为：
1、提供了一种以菊花叶作为主要培养基质，通过解淀粉芽孢杆菌发酵菊花叶制备菊花叶发酵饲料的方法，不仅有效解决菊花叶的污染问题，还能使菊花叶的功效成分得到充分利用；
2、制得的菊花叶发酵饲料兼具药用功能和营养功能，可作为添加剂添加在动物饲料中；
3、制得的菊花叶发酵饲料添加于蛋鸡饲料中，在降低蛋鸡料蛋比的同时，还能极显著地提高蛋鸡产蛋率和蛋的品质。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。本实施例中使用的试剂、物料均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1菊花叶微生物发酵饲料的制备与使用
一、菊花叶微生物发酵饲料的制备
本实施例提供的菊花叶微生物发酵饲料的制备方法包括以下步骤：
(1)将新鲜菊花叶打成浆；
(2)取上述浆液，可以进一步添加少量碳源和氮源配制发酵培养基，其中碳源可选淀粉、糊精或葡萄糖；氮源可选蛋白胨、酵母膏、麸皮、黄豆饼粉、牛肉膏或玉米浆；当然，这一步并非是必须的，不添加辅助的碳源和氮源，也可以直接作为发酵培养基；
(3)取解淀粉芽孢杆菌HZ179新鲜斜面接入肉汤培养液中，经35～37℃、200r/min培养12～18h，得到种子液；
(4)将种子液按体积比3-5％接入发酵培养基中，搅拌均匀，发酵时控制温度为30～39℃，发酵时间为48～80小时，得到发酵产品。
本实施例中，培养基中碳源和氮源的比例均可由使用者根据实际情况进行调整，并无特别要求。
二、菊花叶微生物发酵饲料的使用
将菊花叶微生物发酵饲料，按照0.1-20％比例添加于动物饲料中。
实施例2菊花叶微生物发酵饲料的制备
本实施例采用实施例1提供的制备方法，主要步骤为：取解淀粉芽孢杆菌HZ179新鲜斜面接入肉汤培养液中，经37℃、200r/min培养18h，得到种子液；将5000g新鲜菊花叶打浆，加入750ml水，混匀，按5％比例接入种子液，37℃下发酵72小时，即得到菊花叶微生物发酵饲料。
实施例3菊花叶微生物发酵饲料的制备
本实施例采用实施例1提供的制备方法，主要步骤为：取解淀粉芽孢杆菌HZ179新鲜斜面接入肉汤培养液中，经35℃、200r/min培养18h，得到种子液；将5000g新鲜菊花叶打浆，加入75g玉米淀粉、40g酵母膏、750ml水，混匀，按5％比例接入种子液，32℃下发酵52小时，即得到菊花叶微生物发酵饲料。
实施例4菊花叶微生物发酵饲料的制备
本实施例采用实施例1提供的制备方法，主要步骤为：取解淀粉芽孢杆菌HZ179新鲜斜面接入肉汤培养液中，经37℃、200r/min培养16h，得到种子液。将6000g新鲜菊花叶打浆，加入60g葡萄糖、100g黄豆饼粉、860ml水，混匀，按3％比例接入种子液，36℃下发酵48小时，即到菊花叶微生物发酵饲料。
实施例5菊花叶微生物发酵饲料的使用
取蛋鸡180只，随机分为4组，每组4个重复，每个重复15只。分为对照组(基础日粮)、试验组1(基础日粮中按5％添加采用实施例2提供的方法制备的菊花叶微生物发酵饲料)、试验组2(基础日粮中按5％添加实施例3提供的方法制备的菊花叶微生物发酵饲料)、试验组3(基础日粮中按10％添加实施例4提供的方法制备的菊花叶微生物发酵饲料)。预试期7d，正试期14d。正式试验第1天开始采集蛋样，标号，随取随检。试验期每天记录鸡只存栏数、死淘率、产蛋数、蛋重、投料量，计算产蛋率、料蛋比。测定第14d蛋的蛋黄颜色以及蛋白高度，结果如表1所示。
表1日量中添加不同水平的菊花叶微生物发酵饲料对蛋鸡生产性能的影响
从表1可以看出，菊花叶微生物发酵饲料在降低蛋鸡料蛋比的同时，还能极显著地提高产蛋率和蛋的品质。试验组1和试验组2进行对比发现，试验组1直接以菊花叶为主要培养基制备的发酵饲料，与试验组2添加辅助碳氮源后制备的发酵饲料，在提高产蛋率和降低蛋鸡料蛋比的功效非常接近，证明不加辅助碳氮源，直接以菊花叶为主要培养基时，制得的菊花叶发酵饲料，与添加辅助碳氮源后制得的发酵饲料同样具有极显著地提高产蛋率和蛋的品质的效果。
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。
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