具体实施方式

本发明提供了制备微囊化包埋颗粒的方法。该方法可以包括通过将囊壁材料熔解，然后加入活性成分溶解，并且通过喷雾干燥法制备微囊化包埋颗粒。囊壁材料的熔解温度没有特别限定，只要能够熔解本发明的疏水性材料即可。本领域技术人员也可以根据疏水性材料的熔点，适当选择熔解温度。熔解温度可以是70℃-90℃，例如71℃、72℃、73℃、74℃、75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃、86℃、87℃、88℃或89℃。

囊壁材料可以包含第一疏水性材料和第二疏水性材料。第一疏水性材料可以是单双甘油脂肪酸酯。第二疏水性材料可以是高级饱和脂肪酸或巴西棕榈蜡中的一种或多种。第一疏水性材料和第二疏水性材料的重量比可以为1:4-9:1，优选3:7-8:2。在一个实施方案中，第一疏水性材料和第二疏水性材料的重量比为1:3、1:2、2:3、1:1、2:1、3:2、7:3、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或8:1。在一个实施方案中，疏水性材料的含量可以为微囊化包埋颗粒原料的50wt％-99wt％。例如，疏水性材料可以占微囊化包埋颗粒原料的55wt％、60wt％、65wt％、70wt％、75wt％、80wt％、85wt％、90wt％、95wt％、96wt％、97wt％、98wt％或99wt％。活性成分的含量可以为占微囊化包埋颗粒原料的1wt％-50wt％，例如2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、15wt％、20wt％、25wt％、30wt％、35wt％、40wt％或45wt％。

单双甘油脂肪酸酯是一种食品添加剂，以饱和或不饱和脂肪酸或油脂与甘油反应生成的，经过或不经过分离提纯等加工得到的单，双甘油脂肪酸酯(油酸、亚油酸、亚麻酸、棕榈酸、山嵛酸、硬脂酸、月桂酸)，具体可见国家标准GB 1886.65。

高级饱和脂肪酸指含十个碳原子以上的饱和脂肪酸。在本文中，高级饱和脂肪酸可以指十烷酸、十二烷酸、十四烷酸、棕榈酸(十六烷酸)、硬脂酸(十八烷酸)、二十烷酸或二十二烷酸中的一种或多种。在一个实施方案中，高级饱和脂肪酸是棕榈酸(十六烷酸)和/或硬脂酸(十八烷酸)。

活性成分可以是容易受到选自下组的因素影响而降解的活性成分：pH值、温度、氧气、湿度、光照或金属离子。例如，活性成分可以是维生素、酶、益生菌、氨基酸、碳水化合物、多肽或油脂中的一种或多种。维生素可以是维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、维生素H、维生素P、维生素PP、维生素M、维生素T、维生素U、叶酸或生物素中的一种或多种。维生素B可以是维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6或维生素B12中的一种或多种。本领域技术人员可以根据上述具体的影响因素适当选择活性成分。优选地，活性成分是维生素B，更优选是维生素B1或维生素B12中的一种或两种。

通过本发明的方法制备得到的微囊化包埋颗粒可以包含活性成分和包裹活性成分的囊壁的结构。这种微囊化包埋颗粒可以具有较高的活性成分包埋率。在本文中，微囊化包埋颗粒的活性成分包埋率可以是90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。

由于本发明的微囊化包埋颗粒具有高活性成分包埋率的特点，可以通过将本发明的微囊化包埋颗粒与其它成分混合制成组合物。组合物可以为任何合适的形式，例如固体、悬浮液或凝胶等形式。优选地，组合物为固体的形式。由于片剂因携带与使用方便、制备方法的机械化程度高、产量高等优点深受大众认可，也是市面上应用最广泛的剂型。组合物可以制备成片剂形式。其它成分可以是微囊化包埋颗粒中的活性成分以外的成分，例如营养成分，例如矿物质，例如钙、铜、铁、锰、镁盐等和维生素。例如，当活性成分是维生素B1或维生素B12时，其它成分可以包含除了维生素B1或维生素B12以外的其它维生素。这些其它维生素的含量可以大于0wt％且小于等于20wt％，例如1wt％、5wt％、10wt％或15wt％。

矿物质是人体需要的矿物质，例如钙、铜、铁、锰、镁、锌的氯化盐、碳酸盐、葡萄糖酸盐、氧化物、柠檬酸盐、硫酸盐等以及它们的组合。在一个实施方案中，矿物质可以是碳酸钙、柠檬酸钙、碳酸镁、氧化镁、葡萄糖酸铜、硫酸铜或氧化锌中的一种或多种。矿物质在组合物中的含量可以为10wt％-50wt％，例如20wt％、30wt％或40wt％以及其间的任何数值。

组合物还可以包含填充剂。例如，组合物还可以包含10wt％-50wt％填充剂，例如20wt％、30wt％或40wt％以及其间的任何数值。填充剂的种类没有特别限制。例如，填充剂是山梨醇、淀粉、微晶纤维素、糊精、糖粉、乳糖或无机钙盐中的一种或多种。

组合物还可以包含润滑剂。例如，组合物还可以包含1wt％-3wt％润滑剂，例如1.5wt％、2wt％或2.5wt％润滑剂。润滑剂的种类没有特别限制。例如，润滑剂是硬脂酸镁、滑石粉、硼酸、氢化植物油或PEG类化合物中的一种或多种。

本发明的组合物可以常规的压片步骤制备成片剂。例如，可以将微囊化包埋颗粒与矿物质和填充剂进行混合，或者当存在其他维生素时将微囊化包埋颗粒、其他维生素、矿物质和填充剂进行混合，过筛，再加入润滑剂总混，最后上机压片，制备成片剂。特别地，本发明的组合物可以制成维生素矿物质片，其可以同时补充有多种维生素和矿物质。

特别地，本发明的维生素矿物质片对于维生素B族中维生素B1(硫胺素)和维生素B12(钴胺素)是特别有用的。维生素B1(硫胺素)是维生素B族中最不稳定的维生素，维生素B1(硫胺素)的稳定性与pH值、温度、介质和其他反应有关。对金属离子(如钙、铜、铁、锰、镁等)、温度、氧气、pH(中性和碱性)、强光照等因素敏感。维生素B12(钴胺素)的稳定性与氧气、光照、热、金属离子、还原剂如抗坏血酸、亚硫酸盐等有关。当片剂配方中含有敏感金属离子时，必然影响其稳定性。包埋材料，例如如本文所述的疏水材料与维生素B1或B12的简单搭配，并通过常规的工艺可以制得微囊化包埋颗粒，但存在包埋率低，应用于片剂中保留率低的缺陷。然而，通过本发明的微囊化包埋颗粒包裹维生素B1和/或维生素B12可以保护维生素B1和/或维生素B12免受pH值、温度、金属离子等所致的降解，从而克服了现有技术中通过增加投料量来解决维生素B不稳定性的问题(包括维生素B服用量增加，甚至产生毒性；初始含量很可能就超出法规标签要求范围；配方成本、生产成本的增加等)。也就是说，选择合适的疏水性材料组合及特定的比例范围才能制得高保留率的维生素B矿物质片，既提高了维生素B本身的稳定性(高包埋率)，又能有效阻断片剂中维生素B与矿物质组分(含敏感金属离子)之间的反应，改善其稳定性(高保留率)。

本文中的包埋率可以通过本领域已知的任何合适的方法测定。在本文中，包埋率可以以(微囊化包埋颗粒中活性成分的总含量-微囊化包埋颗粒中未包埋的活性成分含量)/微囊化包埋颗粒中活性成分的总含量X100％计算。

本文中的保留率反映了片剂保存一定时间后活性物质的保留百分比。例如，保留率可以以(片剂加速3个月后的活性成分含量)/(片剂0月检出的活性成分含量)X100％计算。加速条件可以是本领域技术人员已知的。在本文中，加速条件可以是温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件。

在一个实施方案中，活性成分是维生素B12。维生素B12的包埋率可以通过测定微囊化包埋颗粒中维生素B12的总含量和微囊化包埋颗粒中未包埋的维生素B12含量计算。维生素B12的保留率可以通过测定片剂加速3个月后的维生素B12含量/片剂0月检出的维生素B12含量X100％计算。

可以采用GB 5009.217中所述的方法测定维生素B12含量。简而言之，将待测试的片剂粉碎，称取试样于离心管中，加入水，混匀，置于超声波清洗器中，超声提取后离心。吸取上清液置于离心管中。对残留物按上述步骤每次加入一定水重复提取两次，合并提取液于离心管中。向提取液添加5％四丁基氯化铵溶液、三氯甲烷，使用涡旋混匀器充分混匀，离心。将水层转入蒸发皿中，置于水浴锅加热蒸发至干。残留物用乙醇溶解，转移至离心管中，超声溶解，离心，吸取上清液至蒸发皿中。再重复提取两次，合并提取液于蒸发皿中。蒸干乙醇，试样用5％乙腈溶液定量转移到试管，用于固相萃取柱。固相萃取柱先用甲醇进行活化，再用水对固相萃取柱进行平衡。将试样加到固相萃取柱。上样后，用5％乙腈溶液作为洗脱溶液将干扰物质洗脱，最后用25％乙腈溶液将维生素B12洗脱。用液相色谱对洗脱液进行测定。液相色谱条件为：色谱柱C18反相色谱柱；流动相：0.025％三氟乙酸(pH2.6)(溶液A)和乙腈(溶液B)；检测波长361nm。

在一个实施方案中，活性成分是维生素B1。维生素B1的包埋率可以通过测定微囊化包埋颗粒中维生素B1的总含量和微囊化包埋颗粒中未包埋的维生素B1含量计算。维生素B1的保留率可以通过测定片剂加速3个月后的维生素B1含量/片剂0月检出的维生素B1含量X100％计算。

可以采用USP<oil-and-water-soluble-vitamins with minerals tables(Method1)中所述的方法测定维生素B1含量。简而言之，将片剂磨成粉末，将粉末置于离心管中。添加25mL稀释液(乙腈：冰醋酸：水＝5:1:94)，并且使用涡旋混合器混合30秒以完全悬浮粉末。将离心管在65℃-75℃水浴中加热5分钟，然后在涡旋混合器混合30秒。将管返回到热水浴中再加热5分钟，在涡旋混合器混合30秒。经0.45um微孔滤膜过滤，冷却到室温，使用滤液进行上样测试。色谱条件：液相色谱，检测器UV280nm，柱3.9-mm×30-cm；packingL1；流速1mL/min；注射体积10μL。

提供以下实施例以便于理解本发明。应当理解，这些实施例仅仅是例示性的而非限制性的。本发明的范围仅由所附权利要求书限定。

实施例

片剂的制备方法

(1)将疏水性材料组合单双甘油脂肪酸酯和硬脂酸、或单双甘油脂肪酸酯和棕榈酸、或单双甘油脂肪酸酯和巴西棕榈蜡按比例混合，于70℃-80℃加热熔解后，加入维生素B1和/或维生素B12原料，搅拌溶解至均匀，喷雾冷却、收集，制得维生素B微囊化包埋颗粒。

(2)维生素矿物质片工艺步骤：将维生素B微囊化包埋颗粒、其他维生素、矿物质和山梨醇进行混合、过筛，再加入硬脂酸镁总混，最后上机压片，制得。其他维生素、矿物质、山梨醇和硬脂酸镁的含量见下表。

包埋率测定

维生素B1的包埋率测定方法

1)先通过测定维生素B1总含量，再测定未包埋维生素B1的含量，即可以计算维生素B1包埋率。

2)维生素B1总含量测定：参考USP维生素B族方法进行测定，可以进行适当修改。简言之，称取适量试样于容量瓶中，加入乙腈-冰醋酸-水溶剂，涡旋分散，在65℃-75℃水浴加热溶解微囊化包埋颗粒，再重复涡旋提取，冷却，经0.45um微孔滤膜过滤后，取滤液测定包埋颗粒中维生素B1总含量。色谱条件：液相色谱，检测器UV280nm，柱3.9-mm×30-cm；packing L1；流速1mL/min；注射体积10μL。

3)未包埋维生素B1含量测定：称取适量试样于容量瓶中，加水涡旋，经0.45um微孔滤膜过滤后，取滤液进样测定。色谱条件：液相色谱，检测器UV280nm，柱3.9-mm×30-cm；packing L1；流速1mL/min；注射体积10μL。

维生素B12的包埋率测定方法

1)先通过测定维生素B12总含量，再测定维生素B12未包埋的含量，即可以计算维生素B12包埋率。

2)维生素B12总含量测定：称取适量试样于容量瓶中，加水涡旋分散，在65℃-75℃水浴加热溶解包埋颗粒，再涡旋提取，冷却，经0.45um微孔滤膜过滤后，取滤液进样测定。液相色谱条件为：色谱柱C18反相色谱柱；流动相：0.025％三氟乙酸(pH2.6)(溶液A)和乙腈(溶液B)；检测波长361nm；流速1mL/min；柱温：室温。流动相：采用梯度洗脱方式：

具体参考GB 5009.217方法。

3)未包埋维生素B12含量测定：称取试样于容量瓶中，加水涡旋，摇匀后立即经0.45um微孔滤膜过滤，然后取滤液进样测定。测定方式同上。

包埋率的计算公式如下：

包埋率％＝(颗粒中活性成分的总含量-颗粒中未包埋的活性成分含量)/颗粒中活性成分的总含量X100％

保留率测定

维生素B1的保留率测定方法遵循USP<oil-and-water-soluble-vitamins withminerals tables(Method 1)。简言之，将片剂磨成粉末，将粉末置于离心管中。添加25mL稀释液(乙腈：冰醋酸：水＝5:1:94)，并且使用涡旋混合器混合30秒以完全悬浮粉末。将离心管在65℃-75℃水浴中加热5分钟，然后在涡旋混合器混合30秒。将管返回到热水浴中再加热5分钟，在涡旋混合器混合30秒。经0.45um微孔滤膜过滤，冷却到室温，使用滤液进行上样测试。色谱条件：液相色谱，检测器UV280nm，柱3.9-mm×30-cm；packing L1；流速1mL/min；注射体积10μL。

维生素B12的保留率测定方法遵循GB/T 5009.217《保健食品中维生素B12的测定》。简而言之，将待测试的片剂粉碎，称取试样于离心管中，加入水，混匀，置于超声波清洗器中，超声提取后离心。吸取上清液置于离心管中。对残留物按上述步骤每次加入一定水重复提取两次，合并提取液于离心管中。向提取液添加5％四丁基氯化铵溶液、三氯甲烷，使用涡旋混匀器充分混匀，离心。将水层转入蒸发皿中，置于水浴锅加热蒸发至干。残留物用乙醇溶解，转移至离心管中，超声溶解，离心，吸取上清液至蒸发皿中。再重复提取两次，合并提取液于蒸发皿中。蒸干乙醇，试样用5％乙腈溶液定量转移到试管，用于固相萃取柱。固相萃取柱先用甲醇进行活化，再用水对固相萃取柱进行平衡。将试样加到固相萃取柱。上样后，用5％乙腈溶液作为洗脱溶液将干扰物质洗脱，最后用25％乙腈溶液将维生素B12洗脱。样品测定方法同上。

保留率的计算公式如下：

保留率％＝(片剂加速3个月后的活性成分含量)/(片剂0月检出的活性成分含量)X100％。

片剂加速条件为温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件。

实施例1-14：维生素B微囊化包埋颗粒的包埋率测定

将疏水性材料组合单双甘油脂肪酸酯和硬脂酸、或单双甘油脂肪酸酯和棕榈酸、或单双甘油脂肪酸酯和巴西棕榈蜡按比例混合，于70℃-80℃加热熔解后，加入维生素B1原料，搅拌溶解至均匀，喷雾冷却、收集，制得维生素B微囊化包埋颗粒。各组分的含量如下表1-表3中所示。对得到的维生素B微囊化包埋颗粒测定维生素B1的包埋率。

表1

表2

表3

采用单、双甘油脂肪酸酯与硬脂酸或棕榈酸或巴西棕榈蜡组合并且满足特定的比例范围内(3：7-8：2)，与该比例范围外的比例的组合相比制备得到的微囊化包埋颗粒的维生素B1包埋率更高。调整维生素含量范围(1％-40％)时，仍具有高维生素B1包埋率。

实施例15-18：包埋率测定

将单独的单双甘油脂肪酸酯、单独的硬脂酸、单双甘油脂肪酸酯和蜂蜡的组合、和氢化蓖麻油和硬脂酸的组合于70℃-80℃加热熔解后，加入维生素B1原料，搅拌溶解至均匀，喷雾冷却、收集，制得维生素B微囊化包埋颗粒。各组分的含量如下表4中所示。对得到的维生素B微囊化包埋颗粒测定维生素B1的包埋率。

表4

采用单独的单双甘油脂肪酸酯或硬脂酸对维生素B1进行包埋，维生素B微囊化包埋颗粒的维生素B1包埋率较低。此外，采用单双甘油脂肪酸酯和蜂蜡的组合、氢化蓖麻油和硬脂酸的组合对维生素B1进行包埋，维生素B微囊化包埋颗粒的维生素B1包埋率也较低。

实施例19-34：片剂的保留率测定

将上述实施例获得的维生素B1微囊化包埋颗粒，与柠檬酸钙、山梨醇和硬脂酸镁制备成维生素矿物质片，测定保留率。制备维生素矿物质片的工艺步骤：将维生素B微囊化包埋颗粒、矿物质、山梨醇进行混合、过筛，再加入硬脂酸镁总混，最后上机压片，制得。各组分的含量如下表5-表7中所示。对得到的维生素B1片剂在加速条件(温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件)3月后测定维生素B1保留率。

表5

表6

表7

当单、双甘油脂肪酸酯：硬脂酸或棕榈酸或巴西棕榈蜡以特定的比例范围(3：7-8：2)组合，得到的微囊化包埋颗粒的维生素B1包埋率高，且包含该微囊化包埋颗粒的片剂的维生素B1保留率高。当使用其他疏水材质的组合时，得到的微囊化包埋颗粒的维生素B1包埋率低且包含该得到的微囊化包埋颗粒的片剂的维生素B1保留率也低。

实施例35-42：保留率测定

将以上实施例获得的维生素B1微囊化包埋颗粒，与矿物质(葡萄糖酸铜、碳酸钙或碳酸镁)、山梨醇和硬脂酸镁制备成维生素矿物质片，测定维生素B1保留率。制备维生素矿物质片的工艺步骤：将维生素B微囊化包埋颗粒、矿物质、山梨醇进行混合、过筛，再加入硬脂酸镁总混，最后上机压片，制得。各组分的含量如下表8中所示。加速(温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件)3个月后对得到的片剂测定维生素B1保留率。

表8

使用维生素B1微囊化包埋颗粒的片剂在含有不同矿物质，即葡萄糖酸铜、碳酸钙或碳酸镁的情况下与常规维生素B1原料得到的片剂相比维生素B1保留率均有明显提高。

实施例43-49：维生素B12微囊化包埋颗粒的包埋率和保留率测定

将疏水性材料组合单双甘油脂肪酸酯和硬脂酸、单双甘油脂肪酸酯和棕榈酸、或单双甘油脂肪酸酯和巴西棕榈蜡按比例混合，于70℃-80℃加热熔解后，加入维生素B12原料，搅拌溶解至均匀，喷雾冷却、收集，制得维生素B微囊化包埋颗粒。各组分的含量如下表9中所示。

将获得的维生素B12微囊化包埋颗粒，与葡萄糖酸镁、碳酸钙、山梨醇和硬脂酸镁制备成维生素B12矿物质片，测定维生素B12的保留率。制备维生素B12矿物质片的工艺步骤：将维生素B12微囊化包埋颗粒、矿物质、山梨醇进行混合、过筛，再加入硬脂酸镁总混，最后上机压片，制得。各组分的含量如下表10中所示。对得到的微囊化包埋颗粒和片剂测定维生素B12包埋率和加速(温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件)3月后的维生素B12保留率。

表9

表10

单双甘油脂肪酸酯与硬脂酸的组合对维生素B12进行包埋处理，维生素B12包埋率也高达90％，并且使用维生素B12微囊化包埋颗粒制备得到的含矿物质的片剂与常规维生素B12原料得到的片剂相比在含有不同矿物质，葡萄糖酸镁或碳酸钙的情况下，维生素B12的保留率均有明显提高。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。