强效抗衰老的枇杷花提取物在制备抗衰老化妆品中的应用
阅读说明：本技术 强效抗衰老的枇杷花提取物在制备抗衰老化妆品中的应用 (Application of loquat flower extract with strong anti-aging effect in preparation of anti-aging cosmetics ) 是由 龚盛昭 郑丹阳 黎晓燕 林彤彤 陈杰生 于 2021-08-06 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种强效抗衰老的枇杷花提取物在制备抗衰老化妆品中的应用,属于化妆品领域。该枇杷花提取物的制备方法为：将枇杷花粉碎,加入提取溶剂(乙醇与水的混合溶液),用常温高压均质法提取,得到提取液,经离心分离后,离心液用大孔树脂吸附,用乙醇水溶液洗脱,洗脱液减压浓缩后加入1,3-丁二醇,制得枇杷花提取物。利用该方法获得的枇杷花提取物天然安全,能强效促进人胚肺成纤维细胞增殖和生长,强效清除自由基,抑制酪氨酸酶活性,减少黑色素生成,加快皮肤表层细胞更新,延缓肌肤衰老,添加于抗衰老化妆品中,制出性质稳定、效果良好的抗衰老化妆品,抗衰老功效显著。(The invention discloses application of a loquat flower extract with strong anti-aging effect in preparing anti-aging cosmetics, and belongs to the field of cosmetics. The preparation method of the loquat flower extract comprises the following steps: pulverizing flos Eriobotryae, adding extraction solvent (mixed solution of ethanol and water), homogenizing at normal temperature under high pressure to obtain extractive solution, centrifuging, adsorbing centrifugate with macroporous resin, eluting with ethanol water solution, concentrating eluate under reduced pressure, and adding 1, 3-butanediol to obtain flos Eriobotryae extract. The loquat flower extract obtained by the method is natural and safe, can strongly promote the proliferation and growth of human embryonic lung fibroblasts, strongly remove free radicals, inhibit tyrosinase activity, reduce melanin generation, accelerate the renewal of skin surface cells and delay skin aging, and is added into an anti-aging cosmetic to prepare the anti-aging cosmetic with stable property and good effect, and the anti-aging effect is remarkable.)
技术领域
本发明涉及一种中药提取物，具体的说是一种强效抗衰老的枇杷花提取物在制备抗衰老化妆品中的应用，属于化妆品领域。
背景技术
皮肤的衰老是一种正常现象，从我们出生开始，皮肤老化的现象就一直存在，皮肤老化的结果，除了使皮肤的生理功能减退外，最重要的是使人的外貌发生了变化。人们往往通过皮肤及头发的一些外在特征，来判断一个人的年龄、身份和地位。衰老使美丽减色，也会对人的心理产生负面效应，因此人人都希望保持外貌年轻、青春永驻。
预防和延缓皮肤衰老是美容皮肤科学的重要课题。开发效果明显、安全、稳定、吸收好的抗衰老活性物，已成为当前美容行业的热点，而植物来源、天然的中药抗衰老活性物是其主要研究方向。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种强效抗衰老的枇杷花提取物在制备抗衰老化妆品中的应用。该枇杷花提取物天然安全，具有强效激活皮肤细胞增殖和生长、抑制酪氨酸酶、清除体内自由基等作用；用于抗衰老化妆品中，制出性质稳定、效果良好的抗衰老化妆品。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明提供一种强效抗衰老的枇杷花提取物在制备抗衰老化妆品中的应用。
所述抗衰老化妆品中强效抗衰老的枇杷花提取物的添加量以质量分数计为0.1～25％，优选为1～10％，进一步为4.5～6％。
所述的抗衰老化妆品为：水剂、乳液类、膏霜类、啫喱类、粉类、粉末成型类、面膜、喷雾类、精华液类。
具体的，本发明提供一种抗衰老营养霜，包括如下质量分数计的组分：
原料名称
质量分数(％)
鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯
2.5
山梨坦橄榄油酸酯
0.8
鲸蜡硬脂基葡糖苷
0.6
辛酸癸酸甘油酯
4.0
棕榈酸异丙酯
4.0
乳木果油
2.0
氢化聚癸烯
3.0
环聚二甲基硅氧烷
4.0
羟苯甲酯
0.15
羟苯丙酯
0.10
水
加至100
枇杷花提取物
6.0
尿囊素
0.1
葡聚糖
0.50
汉生胶
0.15
EDTA二钠
0.02
甘油
10.0
透明质酸钠
0.05
苯氧乙醇
0.20
香精
0.15
具体的，本发明提供一种抗衰老乳液，包括如下质量分数计的组分：
具体的，本发明提供一种抗衰老面膜液，包括如下质量分数计的组分：
原料名称
质量分数(％)
去离子水
加至100
EDTA-2Na
0.03
羟乙基纤维素
0.20
甘油聚丙烯酸酯
2.80
黄原胶
0.12
1,3-丁二醇
7.00
透明质酸钠
0.08
库拉索芦荟叶提取物
1.00
枇杷花提取物
5.00
馨鲜酮
0.30
1,2-己二醇
0.50
苯氧乙醇
0.20
具体的，本发明提供一种抗衰老啫喱，包括如下质量分数计的组分：
上述强效抗衰老的枇杷花提取物的制备方法，包括如下步骤：
①将枇杷花粉碎，用20～120目筛子筛分，混合，得到枇杷花粉末；
②按液料质量比为2～20：1加入提取溶剂，浸泡0.5～6h后，在2～20MPa提取压力下用高压均质提取机进行常温提取，得到提取液；提取溶剂为乙醇与水的混合溶液；
③提取液经离心分离后，离心液用大孔树脂吸附，用体积分数为40～95％的乙醇水溶液洗脱；
④洗脱液减压浓缩至浓缩液与枇杷花粉末质量比为1：1，加入与浓缩液质量相同的1,3-丁二醇，即为枇杷花提取物。
优选的，步骤①中，用40～100目筛子筛分；进一步，用40～80目筛子筛分。
优选的，步骤②中所述的液料质量比为5～15：1；进一步为10～15：1。
优选的，步骤②中所述的浸泡时间为2～3h。
优选的，步骤②中所述的提取溶剂为乙醇与水的混合溶液，其体积分数为20～60％乙醇水溶液；进一步，体积分数为40～60％乙醇水溶液。
优选的，步骤②中所述的提取压力为4～10MPa；进一步为4～6MPa。
优选的，步骤③中所述的离心的半径为8～12cm。
优选的，步骤③中所述的离心的条件为500～4000rpm、常温离心15～60min；进一步为3000rpm、常温离心20～40min。
优选的，步骤③中，离心液用AB-8大孔吸附树脂吸附。
优选的，步骤③中，用体积分数为50～95％的乙醇水溶液洗脱；进一步，用体积分数为70％的乙醇水溶液洗脱。
本发明中所述的常温的温度是指15～40℃。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)枇杷花是蔷薇科植物枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的花，具有疏风止咳、通鼻窍之功效。常用于治疗头风、鼻塞流涕、虚劳久嗽、痰中带血等症候。本发明经研究创新性地发现枇杷花的提取物还具有强效激活皮肤细胞生长、抑制酪氨酸酶、清除体内自由基等作用，是非常好的抗衰老活性物。
为了获得最佳的提取效果，本发明首先进行了提取溶剂的科学试验，分别用水、乙醇、1,3-丁二醇、PEG400和石油醚等作为提取溶剂，结果发现乙醇水溶液效果最佳。分别采用加热提取法、微波提取法、超声波提取法、超临界萃取法和高压均质提取法，结果发现高压均质提取法效果最佳。对提取条件进行了大量科学研究。
为了获得最佳的分离提纯效果，分别采用了膜分离和大孔树脂分离，结果发现膜分离和大孔树脂分离后，提取物活性得到显著提高，而且发现大孔树脂分离得到的提取物活性更好，提取物的电导率小于300μS/cm，也比膜分离法的提取物电导率(约1200μS/cm)低得多。分别用AB-8、X-5、D101、LSA-20等型号的大孔树脂型号进行了提取物分离科学实验，结果发现经AB-8大孔吸附树脂处理后效果最佳。分别考察了体积分数为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％和100％乙醇作为洗脱液，结果发现70％乙醇洗脱获得的提取物效果最佳。
提取和分离处理过程在常温下进行，确保活性成分不因热处理而失去活性。
(2)利用本发明方法获得的枇杷花提取物能强效促进人胚肺成纤维细胞增殖和生长，强效清除自由基，抑制酪氨酸酶活性，减少黑色素生成，加快皮肤表层细胞更新，延缓肌肤衰老，添加于化妆品中，抗衰老功效显著。
附图说明
图1是枇杷花提取物对于细胞生长曲线的影响。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1枇杷花提取物(Ⅰ)的制备
①取干枇杷花1kg，将枇杷花粉碎，用60目筛子筛分，混合，得到枇杷花粉末；
②按液料质量比为12：1加入提取溶剂，浸泡2.5h后，在5MPa提取压力下用高压均质提取机进行常温提取，得到提取液；提取溶剂为体积分数为50％乙醇水溶液；
③提取液经离心(离心半径10cm、离心条件3000rpm、常温离心30min)分离后，离心液用AB-8大孔吸附树脂(购自天津普拉德生物科技有限公司)吸附，用体积分数为70％的乙醇水溶液洗脱；
④洗脱液减压浓缩至浓缩液与枇杷花粉末质量比为1：1，加入与浓缩液质量相同的1,3-丁二醇，即为枇杷花提取物(Ⅰ)。
实施例2枇杷花提取物(Ⅱ)的制备
①取干枇杷花1kg，将枇杷花粉碎，用80目筛子筛分，混合，得到枇杷花粉末；
②按液料质量比为15：1加入提取溶剂，浸泡2h后，在4MPa提取压力下用高压均质提取机进行常温提取，得到提取液；提取溶剂为体积分数为40％乙醇水溶液；
③提取液经离心(离心半径12cm、离心条件3000rpm、常温离心20min)分离后，离心液用AB-8大孔吸附树脂吸附，用体积分数为70％的乙醇水溶液洗脱；
④洗脱液减压浓缩至浓缩液与枇杷花粉末质量比为1：1，加入与浓缩液质量相同的1,3-丁二醇，即为枇杷花提取物(Ⅱ)。
实施例3枇杷花提取物(Ⅲ)的制备
①取干枇杷花1kg，将枇杷花粉碎，用40目筛子筛分，混合，得到枇杷花粉末；
②按液料质量比为10：1加入提取溶剂，浸泡3h后，在6MPa提取压力下用高压均质提取机进行常温提取，得到提取液；提取溶剂为体积分数为60％乙醇水溶液；
③提取液经离心(离心半径8cm、离心条件3000rpm、常温离心40min)分离后，离心液用AB-8大孔吸附树脂吸附，用体积分数为70％的乙醇水溶液洗脱；
④洗脱液减压浓缩至浓缩液与枇杷花粉末质量比为1：1，加入与浓缩液质量相同的1,3-丁二醇，即为枇杷花提取物(Ⅲ)。
试验例1枇杷花提取物对于细胞增殖的影响
MTT实验检测原理为：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源MTT(噻唑蓝)还原为水不溶性的蓝紫结晶甲瓚并沉积在细胞中，但死细胞不具备这样的功能；然后使用DMSO溶解细胞中的甲瓚，用酶标仪在570nm处进行测定；通常情况下，甲瓚的生成量与活细胞数成正比，因此可以根据酶标仪测定出来的OD数来反应活细胞的数目。
将MRC5细胞(选用的MRC5细胞为正常人胚肺成纤维细胞，常规市售产品)悬液以5×103个/孔接种于96孔细胞培养板，待细胞贴壁后，加入100μL含有质量分数为0.1％的实施例1～3的枇杷花提取物的新鲜MEM培养基，每个组分设3个复孔；37℃恒温、5％CO2培养箱中培养48h后，加入10μL含有5mg/mL的MTT溶液；4h后终止培养，吸去孔内的培养基，每孔加入150μL的DMSO，使甲瓚充分溶解；然后用酶标仪测量各孔的吸光值。同时需设置调零孔(培养基、MTT、DMSO)，对照孔(细胞、含有与提取物相同体积DMSO的培养基、MTT、DMSO)。结果见表1所示。
表1
实验项目
实施例1
实施例2
实施例3
空白对照
MRC5细胞活力
131％
132％
130％
100％
结果表明，本发明的枇杷花提取物明显促进了MRC5细胞的增殖，具有显著的抗衰老功效。
试验例2枇杷花提取物对于细胞生长曲线的影响
为了进一步验证枇杷花提取物对于细胞活力的长期影响，以实施例1的枇杷花提取物为例，按照天数以及PD数(群体倍增数)测定了MRC5细胞的长期生长关系，它可以准确描述整个培养过程中细胞的生长状况。选用的MRC5细胞为正常的人胚肺成纤维细胞，其在体外仅仅具有有限的分裂能力，之后便进入衰老阶段。PD数计算公式为Y＝Y0+log2Nt/N0，其中N0为初种细胞数，Nt为t时间的细胞数，Y0为初种细胞时的PD数。
以培养天数横坐标，PD数为纵坐标绘制MRC5细胞的长期生长曲线，结果见图1所示。
由图1可以看出枇杷花提取物处理后的细胞进入平台期的PD数显著高于对照组，这个结果反映了枇杷花提取物起到了显著延迟MRC5细胞进入衰老进程的作用。
试验例3枇杷花提取物对于酪氨酸酶、自由基的影响
1、试样的配制
将枇杷花提取物配成浓度为1％的样品溶液，进行下面实验。
2、对酪氨酸酶活性抑制能力评价
按照表2加样，不加酪氨酸酶作为对照进行对比，将溶液置于37℃水浴中恒温10min；加入酪氨酸酶(110U/mL)，将溶液置于37℃水浴中恒温10min后，于475nm下测量其吸光度值。
表2
按式(1)计算样品对酪氨酸酶的相对抑制率(I，简称抑制率，下同)。
式中：A1、A2、A3、A4分别为1组-4组溶液的吸光度。
3、对超氧阴离子自由基清除能力评价
取0.05mol/L pH＝8.2的Tris-HCl缓冲液4.5mL，于25℃水浴锅中预热20min。再加入1mL样品和0.4mL 25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后，于25℃水浴中反应5min，加入8mol/L的HCl 1.0mL终止反应。以Tris-HCl缓冲液作参比，在299nm处测吸光度值。空白对照用1mL样品的溶剂来替代样品。按照式(2)计算清除率(D)。
超氧阴离子自由基清除率(％)＝[1－(A2/A1)]×100％ (2)
式中A1为空白对照的吸光度值；A2为样品的吸光度值。
4、对羟自由基的清除能力评价
在25mL比色管中依次加入2mmol/L FeSO4 3mL，1mmol/L H2O2 3mL，摇匀，接着加入6mmol/L水杨酸3mL，摇匀，于37℃水浴加热15min后取出，在510nm处测其吸光度；分别加入待测试样，摇匀，继续水浴加热15min，取出在510nm处测其吸光度。下式为待测试样对羟自由基(·OH)的清除率：
羟自由基清除率(％)＝[A1－A2－(A1－A3)]/A1×100％ (3)
式中A1为未加药品前反应体系的吸光度值；A2为药品清除·OH后体系的吸光度值；A3为空白对照清除·OH后体系的吸光度值。
5、实验结果
抗衰老功能评价实验如表3所示。
表3
实验项目
实施例1
实施例2
实施例3
对酪氨酸酶活性抑制率/％
82.3
83.1
81.5
对超氧阴离子清除率/％
93.1
91.6
92.3
对羟自由基清除率/％
92.9
91.9
91.2
实验表明，本发明的枇杷花提取物能强效清除自由基，并有良好抑制酪氨酸酶活性作用，具有显著的抗衰老功能。
应用实施例1抗衰老营养霜
表4给出含有本发明的枇杷花提取物的抗衰老营养霜配方。
表4
制备方法：A相80℃溶解混合均匀，B相80℃溶解混合均匀，环聚二甲基硅氧烷乳化前加入B相，乳化时B相加入A相并均质5min，降温至50℃时加入C相并均质2分钟，陈化24h后包装，即可。
应用实施例2抗衰老乳液
表5给出含有本发明的枇杷花提取物的抗衰老乳液配方。
表5
制备方法：
预先分散均匀C相，待用；将A相组分投入油相锅加热到80℃，搅拌至完全溶解；将B相组分投入乳化锅，加热到80℃，搅拌溶解至完全透明；乳化锅保温80℃，控制搅拌速度在300r/min的真空无泡状态，慢慢抽入A相；均质速度为3000r/min，在80℃条件下持续乳化10min；停止均质后，将C相组分投入乳化锅，保持真空状态，在400r/min条件下搅拌均匀，降温；50℃将热敏感成分D相组分加入乳化锅，搅拌至混合均匀；降温到38℃出料，灌装封存。
应用实施例3抗衰老面膜液
表6给出含有本发明的枇杷花提取物的抗衰老乳面膜液配方。
表6
制备方法：将B相预先分散备用；将A相组分和已分散均匀的B相共同投入乳化锅，加热到80℃，搅拌溶解至完全透明后降温；降温至45℃将C相活性物和D相加入乳化锅搅拌溶解至混合均匀；降温到38℃出料，灌装封存。
应用实施例4抗衰老啫喱
表7给出含有本发明的枇杷花提取物的抗衰老啫喱配方。
表7
制备方法：将组分A原料投入到制造锅，加热升温至70℃，开启搅拌并3000rpm均质10min，至分散均匀。降温至45℃后，加入已经预先混合溶解均匀的组分B和已经预先混合溶解均匀的组分C，搅拌溶解完全，真空脱气，过滤出料。
应用对比例1普通乳液
除了不含有枇杷花提取物(Ⅰ)外，其他与表5一致。
效果实施例1人体试用评价实验
1、实验方法
应用实施例2及应用对比例1制备的乳液分别进行人体试用评价。选取40-50岁的志愿者50名，均为女性。使用方法为每日洁面后使用，每天两次(早晚各一次)，左脸使用按应用实施例2制备的乳液，右脸使用按应用对比例1制备的乳液。实验期为两个月，使用两个月后观察左脸和右脸的肤色和皱纹。
2、实验结果
使用两个月后，用VISA皮肤检测仪检测，并与使用前对比，发现，有43名使用者使用了按应用实施例2制备的乳液的左脸的肤色明显好于使用了按应用对比例1制备的乳液的右脸的肤色，左脸皱纹得到了显著改善，右脸皱纹没有改善，有效率达86％。其中，从保湿度、光泽度、紧致度和抗皱效果进行综合评价，其中最高分为5，最低分为1，高于3.5分者为得到改善。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
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