一种吲哚-2-酮brd4抑制剂及其制备与应用
阅读说明：本技术 一种吲哚-2-酮brd4抑制剂及其制备与应用 (Indol-2-one BRD4 inhibitor and preparation and application thereof ) 是由 陈世武 徐宇 向蓉 于 2020-06-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种吲哚-2-酮BRD4抑制剂及其制备与应用。本发明的吲哚-2-酮化合物由2-甲氧基-N-(2-氧吲哚-5-基)苯磺酰胺与酮或醛经克脑文格尔反应制备,或5-氨基-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-2-酮与磺酰氯经磺酰胺化反应制备。本发明的用途是作为BRD4抑制剂,将所述的吲哚-2-酮化合物用于制备抗癌药物。(The invention discloses an indol-2-one BRD4 inhibitor and a preparation method and application thereof. The indole-2-ketone compound is prepared by performing a Kenawenger reaction on 2-methoxy-N- (2-oxyindole-5-yl) benzene sulfonamide and ketone or aldehyde, or performing a sulfonylation amination reaction on 5-amino-3- (propane-2-alkylidene) indole-2-ketone and sulfonyl chloride. The application of the invention is as BRD4 inhibitor, and the indole-2-ketone compound is used for preparing anticancer drugs.)
技术领域
本发明涉及有机化学和药物化学领域，具体为一种吲哚-2-酮BRD4抑制剂及其制备与应用。
背景技术
溴结构域和超末端结构(BET)蛋白家族，是一类表观遗传密码的“解读”蛋白，能够特异性地识别组蛋白H3和H4中乙酰化的赖氨酸残基(Nature,2000,403(6765):41-45)，由位于细胞核上且在蛋白空间结构上高度同源的溴结构域蛋白2、3、4和T(BRD2、BRD3、BRD4和BRDT)组成(Cell,2012,149(1):214-231；Biological&Pharmaceutical Bulletin,2012,35(11):2064-2068)。每种蛋白都包含D1和D2两种亚型，且全部位于细胞核中，其中BRD2-4在各种组织细胞中普遍表达，而BRDT仅在上皮性精细胞、二倍体上皮精细胞和圆形精子等组织中特异性表达(Journal of Medicinal Chemistry,2017,60(11),4533-4558)。其中，BRD4不仅能够调控癌细胞的增殖，影响细胞凋亡和转录，还可能参与肿瘤细胞的浸润和转移等过程，是抗肿瘤药物研究的重要靶点之一。此外，BRD4抑制剂还能通过影响炎细胞因子(IL-1β,IL-6,IL-12α,CXCL9和CCL12)和核因子(NF-kB)等参与免疫、炎症和糖尿病等的治疗。
目前已有一些BRD4蛋白抑制剂进入了临床研究，并在治疗急性髓性白血病(AML)、淋巴瘤等血液瘤和乳腺癌、前列腺癌等实体瘤的临床实验研究中，展现了良好的治疗效果。其中，(+)-JQ1是报道的第一个BRD4抑制剂，已在白血病细胞AML和结肠癌细胞HT-29的体外抗增殖活性中，展现了良好的抑制活性(IC50<0.5μM)(Journal of Medicinal Chemistry,2016,59(4):1565)。如在急性髓性白血病(AML)中，(+)-JQ1能够通过下调Bcl-2和c-Myc的表达来抑制肿瘤细胞的增殖。但由于(+)-JQ1代谢快、毒性高，体内药代动力学性质差，并未进入临床研究(Nature,2010,468(7327):1067)。I-BET762是一种三氮唑类BRD4抑制剂，在淋巴瘤的临床治疗中，已于2019年进入临床一期；ABBV-075是另一类重要的BRD4抑制剂，目前在乳腺癌和AML的临床研究中，已于2015年进入了临床一期。鉴于BRD4抑制剂潜在的应用价值，本发明发现一种吲哚-2-酮化合物，对BRD4具有较高的抑制活性，同时还对白血病和结肠癌细胞也具有较好的体外增殖抑制活性；在制备方法上，本发明可通过简单方法高效地合成关键中间体及目标化合物。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种作为BRD4抑制剂的吲哚-2-酮类化合物。
本发明提供结构式如式Ⅰ所示的化合物或其在药学上可接受的盐：
其中R1和R2为C1-C2的烷基，且R1和R2不同时为氢；或R1和R2连接形成四元环状结构；R3为取代环己基或取代苯基，或稠合芳基；
优选R1为氢或甲基，R2为烷基；R3为2-甲氧苯基、或4-甲氧苯基、或2-溴苯基、或环己基、或2-甲氧基-5-溴苯基、或2-甲氧基-5-氟苯基、或2-甲氧基-5-甲基苯基、或2,5-二氟苯基、或2-氟-5-甲基苯基、或1-萘基、或2-萘基、或5-N,N-二甲基-萘基-1、或2,3-二氢苯并呋喃基-5。
更优选R1为甲基、R2位甲基，R3为2-甲氧苯基、或4-甲氧苯基、或2-甲氧基-5-溴苯基；或R1和R2连接成环丁基，R3为2-甲氧苯基。
式I所示的化合物可通过式Ⅱ所示的化合物与酮或醛直接经克脑文格尔反应制备，或式Ⅲ所示的的化合物与磺酰氯经磺酰胺化反应制备。
本发现的一些优选结构：
本发明式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐，作为BRD4抑制剂，用于制备抗癌药物。
具体实施方式
本发明提供以下的实施例，应特别说明的是，本发明实施例的制备方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1：5-氨基吲哚-2-酮的制备
取5-硝基吲哚-2-酮(0.50g,2.81mmol)于EtOH/H2O＝4:1(10mL)中，缓慢升温至85℃后，再加入铁粉和氯化铵，继续加热反应。反应结束后，趁热过滤，滤液蒸干，得到产物(0.41g)。黄色固体，产率99％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),6.54(s,1H),6.51(d,J＝7.8Hz,1H),6.41(d,J＝7.8Hz,1H),5.03(s,2H),3.26(s,2H).
实施例2：2-甲氧基-N-(2-氧吲哚-5-基)苯磺酰胺的制备
取5-氨基吲哚-2-酮(0.70g,4.73mmol)于二氯甲烷中，在室温搅拌的条件下，加入N,N-二异丙基乙胺(1.64mL，9.46mmol)和邻甲氧基苯磺酰氯(1.17g，5.68mmol)，反应结束后，抽滤，滤饼烘干，得黑色固体(0.90g)。产率60％；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),7.65(d,J＝7.2Hz,1H),7.54(d,J＝7.2Hz,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,1H),7.00-6.95(m,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.61(d,J＝7.8Hz,1H),3.91(s,3H),3.37(s,2H).
实施例3：5-硝基-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-2-酮的制备
取5-硝基吲哚-2-酮(2.00g,11.22mmol)于烧瓶内，室温下加入6mL丙酮溶液。在搅拌的条件下，加入哌嗪(0.67mL,6.73mmol)。反应结束后，抽滤，滤饼烘干，得黄色固体(2.10g)。产率86％；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H),8.27(d,J＝6.0Hz,1H),8.15-8.14(m,1H),6.99-6.97(m,1H),2.49(s,3H),2.42(s,3H).
实施例4：5-氨基-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-2-酮的制备
取制备的5-硝基-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-2-酮(0.50g,2.81mmol)于EtOH/H2O＝4:1(10mL)中，缓慢升温至85℃后，再加入铁粉和氯化铵，继续加热反应。反应结束后，趁热过滤，滤液蒸干，得黄色固体(0.41g)。产率90％；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),6.91(s,1H),8.50-8.37(m,2H),5.19(brs,2H),2.44(s,3H),2.21(s,3H).
实施例5：化合物(Z)-N-(3-亚乙基-2-氧吲哚-5-基)-2-甲氧基苯磺酰胺的合成
取2-甲氧基-N-(2-氧吲哚-5-基)苯磺酰胺(0.10g,0.31mmol)于烧瓶内，在室温和氮气保护下，加入适量的二氯甲烷，并加入哌嗪(0.02mL,0.16mmol)，搅拌两分钟。继续在氮气保护的条件下，缓慢滴加乙醛(3.10mmol)。反应结束后，蒸干溶剂，柱层析得黄色固体238mg。产物检测数据如下：
收率:40％；m.p.195-197℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.04min,99.3％.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(s,1H),9.60(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(t,J＝8.0Hz,1H),7.26(s,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),6.95(t,J＝7.6Hz,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(q,J＝8.4Hz,1H),6.63(d,J＝8.4Hz,1H),3.88(s,3H),2.07(d,J＝8.4Hz,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.2,156.7,139.3,136.7,135.5,131.7,130.7,129.2,126.6,122.9,122.8,120.5,117.9,113.1,110.2,56.5,15.2.MS(ESI)m/z 343.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为1。
实施例6：化合物(Z)-2-甲氧基-N-(2-氧代-3-亚丙基吲哚啉-5-基)苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例5相同，只是用丙醛代替乙醛，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:31％；m.p.164-166℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝3.76min,99.1％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.62(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,1H),7.56(t,J＝7.8Hz,1H),7.24(s,1H),7.19(d,J＝8.4Hz,1H),6.99(t,J＝7.8Hz,1H),6.94(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(t,J＝7.8Hz,1H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),3.92(s,3H),2.48-2.45(m,2H),1.13(t,J＝7.2Hz,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ156.3,142.5,134.9,131.3,130.2,127.5,122.4,122.1,112.6,109.8,55.9,21.8,18.5.MS(ESI)m/z 381.3for[M+Na]+.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为2。
实施例7：化合物2-甲氧基-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例5同，只是用丙酮代替乙醛，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:70％；m.p.180-182℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝3.72min,95.8％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),9.56(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(d,J＝7.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝7.8Hz,1H),7.00-6.97(m,1H),6.91-6.89(m,1H),6.63(d,J＝8.4Hz,1H),3.92(s,3H),2.46(s,3H),2.17(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.4,156.3,154.6,137.3,134.9,130.8,130.2,126.3,123.7,122.5,121.5,120.0,117.9,112.6,108.9,56.0,24.4,22.2.MS(ESI)m/z 357.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为3。
实施例8：化合物N-(3-环丁叉基-2-氧吲哚-5-基)-2-甲氧基苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例5同，只是用环丁酮代替乙醛，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:60％；m.p.148-150℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝3.93min,98.8％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.53(brs,1H),7.62(brs,1H),7.54(brs,1H),7.16(brs,1H),6.97(brs,1H),6.87(brs,2H),6.61(brs,1H),3.90(s,3H),3.21(brs,2H),3.07(brs,2H),2.25(brs,2H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ167.5,161.8,156.3,137.6,134.9,131.0,130.2126.3,123.0,121.5,120.0,115.7,112.6,109.3,55.9,33.4,32.5,18.9.MS(ESI)m/z 369.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为4。
实施例9：化合物2-溴-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)苯磺酰胺的合成
取化合物5-氨基-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-2-酮(0.10g，0.53mmol)于烧瓶内，依次加入DCM(3mL)、DIPEA(0.19mL，1.06mmol)和邻溴苯磺酰氯(0.64mmol)，于常温下反应。反应结束后，采用DCM：MeOH＝150:1柱层析得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:65％；m.p.145-147℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.19min,99.2％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),10.19(s,1H),7.94(d,J＝7.2Hz,1H),7.81(d,J＝7.8Hz,1H),7.50(brs,2H),7.24(s,1H),6.90(d,J＝7.8Hz,1H),6.65(d,J＝9.0Hz,1H),2.45(s,3H),2.14(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.3,154.8,138.3,137.6,135.3,134.4,131.8,129.8,128.1,123.8,122.4,121.6,119.2,117.8,109.1,24.4,22.2.MS(ESI)m/z 405.1for[M-H]-and 407.1for[M+H]+.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为5。
实施例10：化合物N-(2-氧-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)环己烷磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用环己基磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:28％；m.p.156-158℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.50min,95.5％.1H NMR(600MHz,CDCl3)δ10.40(s,1H),10.22(s,1H),7.78(s,1H),7.02(d,J＝7.8Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),2.35-2.31(m,5H),1.85-1.79(m,5H),1.65-1.65(m,1H),1.45-1.39(m,3H),1.30-1.22(m,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ169.8,158.8,136.8,131.3,125.2,122.8,121.9,119.2,110.1,60.2,29.7,26.9,26.5,25.6,25.1,23.6.MS(ESI)m/z 333.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为6。
实施例11：化合物5-溴-2-甲氧基-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用5-溴-2-甲氧基苯磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:43％；m.p.143-145℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.39min,96.6％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.78(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(s,1H),7.21(s,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,1H),6.89(d,J＝7.8Hz,1H),6.65(d,J＝8.4Hz,1H),3.90(s,1H),2.46(s,3H),2.17(s,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.8,156.0,155.3,138.0,137.8,132.5,130.7,128.6,124.3,122.9,122.2,118.4,115.7,111.4,109.6,56.9,24.9,22.7.MS(ESI)m/z435.1for[M-H]-and 437.1for[M+H]+.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为7。
实施例12：化合物5-氟-2-甲氧基-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用5-氟-2-甲氧基苯磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:17％；m.p.205-207℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.11min,99.9％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),9.75(s,1H),7.43-7.39(m,2H),7.21(d,J＝6.0Hz,2H),6.89(d,J＝7.2Hz,1H),6.64(d,J＝8.4Hz,1H),3.90(s,3H),2.46(s,3H),2.17(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.3,153.9,152.8,137.5,130.3,123.7,122.5,121.7,117.9,116.7,114.4,109.0,56.6,24.4,22.2.MS(ESI)m/z 375.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为8。
实施例13：化合物2-甲氧基-5-甲基-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用2-甲氧基-5-甲基苯磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:61％；m.p.231-233℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝3.95min,98.8％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.51(brs,1H),7.45(s,1H),7.32(d,J＝6.6Hz,1H),7.22(s,1H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),6.89(d,J＝7.2Hz,1H),6.62(d,J＝7.8Hz,1H),3.86(s,1H),2.45(s,3H),2.19(s,3H),2.16(s,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.8,155.0,154.6,137.7,135.7,131.3,130.7,129.5,126.4,124.2,123.0,121.9,118.2,112.9,109.5,56.5,24.9,22.7,20.2.MS(ESI)m/z 371.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为9。
实施例14：化合物2,5-二氟-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用2,5-二氟-苯磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:17％；m.p.238-240℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.22min,95.8％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),10.39(brs,1H),7.56(brs,1H),7.51-7.48(m,2H),7.24(s,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),6.69(d,J＝8.4Hz,1H),2.46(s,3H),2.17(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.4,157.9,155.2,138.0,129.5,123.9,122.4,122.2,119.3,118.4,116.7,109.2,24.4,22.3.MS(ESI)m/z 363.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为10。
实施例15：合物2-氟-5-甲基-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)苯磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用2-氟-5-甲基苯磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:39％；m.p.240-242℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.18min,96.6％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),10.17(s,1H),7.54(d,J＝5.4Hz,1H),7.46(d,J＝3.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),6.90(d,J＝7.2Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,1H),2.48(s,3H),2.28(s,3H),2.17(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.3,157.1,155.5,154.8,137.7,135.9,134.3,130.1,130.0,123.9,122.5,121.7,117.9,116.9,116.8,109.1,24.3,22.2,19.9.MS(ESI)m/z 359.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为11。
实施例16：化合物N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)-2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:61％；m.p.159-161℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.05min,98.1％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),9.67(s,1H),7.54(s,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),7.21(s,1H),6.83(d,J＝7.2Hz,2H),6.65(d,J＝8.4Hz,1H),4.58(t,J＝8.4Hz,2H),3.17(t,J＝8.4Hz,2H),2.46(s,3H),2.16(s,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.9,163.5,155.2,137.9,131.5,131.4,129.1,128.7,124.6,124.3,122.9,122.4,118.8,109.6,109.4,72.6,55.4,28.8,24.9,22.7.MS(ESI)m/z 369.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为12。
实施例17：化合物N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)萘-2-磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用萘-2-磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:60％；m.p.244-246℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.37min,97.0％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),9.99(s,1H),8.32(s,1H),8.08(d,J＝8.4Hz,2H),7.99(d,J＝7.2Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.20(s,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.61(d,J＝7.8Hz,1H),2.41(s,3H),2.05(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.3,154.7,137.7,136.5,134.1,131.5,130.4,129.2,129.1,128.8,127.9,127.7,127.6,123.8,122.4,122.2,118.6,109.5,109.0,24.3,22.1.MS(ESI)m/z 377.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为13。
实施例18：化合物N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)萘-1-磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用萘-1-磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:50％；m.p.135-137℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.27min,98.8％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),10.23(s,1H),8.73(d,J＝8.4Hz,1H),8.18(d,J＝9.0Hz,1H),8.05(d,J＝6.0Hz,2H),7.72(d,J＝7.8Hz,1H),7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),2.39(s,3H),1.92(s,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.8,155.2,137.9,134.8,134.7,134.1,130.7,130.5,129.5,128.5,128.0,127.4,124.9,124.2,122.8,122.3,118.4,109.5,55.4,24.7,22.6.MS(ESI)m/z 377.2for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为14。
实施例19：化合物5-(二甲氨基)-N-(2-氧代-3-(丙烷-2-亚烷基)吲哚-5-基)萘-1-磺酰胺的合成
操作过程与实施案例9同，只是用2,5-(二甲氨基)萘-1-磺酰氯代替邻溴苯磺酰氯，得黄色固体。产物检测数据如下：
收率:28％；m.p.220-222℃；HPLC(MeOH:H2O＝85:15,1.0mL/min)tR＝4.70min,97.4％.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.30(s,1H),10.17(s,1H),8.41-8.37(m,2H),8.04(d,J＝6.6Hz,1H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.17(t,J＝7.8Hz,1H),7.24(d,J＝7.2Hz,1H),6.96(s,1H),6.79(d,J＝7.8Hz,1H),6.58(d,J＝7.8Hz,1H),2.79(s,6H),2.39(s,3H),1.90(s,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.8,155.1,151.9,137.9,135.2,130.8,130.4,130.3,129.6,129.3,128.5,124.2,123.9,122.8,122.3,119.3,118.4,115.6,109.5,45.5,24.7,22.7.MS(ESI)m/z 420.3for[M-H]-.
进行后述对酶抑制和细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为15。
实施例20：化合物1–15的BRD4抑制活性
采用TR-FRET方法，选用BRD4抑制剂(+)-JQ1和PFI-1作为阳性化合物，研究了吲哚-2-酮类化合物1–15对体外BRD4(D1)抑制活性，实验结果见表1。
TR-FRET检测：配置的不同浓度梯度的化合物溶液，将其加入到384孔的Source板上备用，并加入等量的阳性对照化合物及DMSO。然后配置缓冲液，蛋白溶液；离心、孵育；将配置多肽溶液加入后，离心；随后加入待测液并继续离心、孵育。待化合物与酶蛋白结合反应之后，EnVisio读数，用GraphPad Prism 5计算IC50值。
实施例21：化合物1–15增殖抑制活性
用MTT法测定化合物对HT-29或WI-38细胞的体外细胞毒活性，用CCK8法测定化合物对HL-60细胞的体外细胞毒活性，同样(+)-JQ1和PFI-1作为阳性对照，结果见表1。
MTT法：将对数生长期的HT-29或WI-38细胞(人胚肺细胞)(5×103个细胞/孔)加入到含有10％FBS的96孔板，在培养箱(37℃、5.0％CO2)培养24小时。后加入不同浓度的药物，培养72小时。加入MTT溶液(5mg/mL)，培养4小时，弃去培养液，加入DMSO，震荡摇匀，用酶标仪在490nM测吸光度。用GraphPad Prism Software version 5.02计算IC50值。
CCK8法：培养及加药方法与MTT法类似。用CCK8溶液代替上述方法中的MTT溶液测定HL-60细胞的增殖抑制活性。
表1化合物BRD4(D1)抑制活性及增殖抑制活性
a两次实验的均值
b 三次实验的均值，时间72 h
c HL-60由CCK8法测定，HT-29和WI-38由MTT法测定
实验结果表明，本发明的多数化合物对BRD4(D1)具有强效的抑制活性，其中，化合物1、化合物3–11和化合物14对BRD4(D1)的抑制活性比阳性对照PFI-1强，其IC50值均小于70nM。同时，这些化合物对HL-60和HT-29细胞具有较好的抗增殖活性，且对WI-38细胞具有较低的毒性。其中，化合物2–5和化合物7–9对HL-60的抑制活性最强；而化合物2、化合物10、化合物15对HT-29的抑制活性最强；化合物10、化合物16、化合物19、化合物21对WI-38的抑制活性最弱，对正常细胞的毒性较低。尤其是化合物3和化合物7不仅具有强的BRD4抑制活性，而且对HL-60和HT-29癌细胞有较好的增殖抑制活性，对正常细胞的毒性较低。
对比例
疗效对比
一类新型BRD4类抗肿瘤活性化合物，它们与(+)-JQ1和PFI-1对比，发现化合物3对人粒细胞白血病细胞HL-60及人结肠癌细胞HT-29的生长抑制活性和BRD4抑制活性均强于PFI-1，而且对WI-38细胞的毒性小于(+)-JQ1和PFI-1。其中化合物3对HL-60和HT-29的抑制活性分别是PFI-1的2和3倍，正常人胚胎肺成纤维细胞WI-38的毒性是PFI-1的1/2以下，是(+)-JQ1的1/8以下。并且对BRD4的抑制活性是PFI-1的4倍以上。