一种生长抑素的合成方法
阅读说明：本技术 一种生长抑素的合成方法 (Synthetic method of somatostatin ) 是由 陈永汉 尹传龙 唐洋明 余品香 于 2020-06-16 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种生长抑素的合成方法,包括以下步骤：1)制备生长抑素肽树脂；2)将生长抑素肽树脂进行裂解,并在裂解的过程中加入氧化剂进行氧化反应得到生长抑素粗肽。该合成方法中采用在粗肽裂解的过程中进行二硫键氧化,采用该氧化方法,首先,缩短了产品的生产时间；其次,避免了液相氧化产生的大量废液；另外,采用反应温和的氧化剂,可以避免相关氧化杂质的形成,提高产品的纯度及收率。本申请的新工艺精肽总收率与现有技术相比要高10％左右。(The invention discloses a synthesis method of somatostatin, which comprises the following steps: 1) preparing somatostatin peptide resin; 2) and (3) cracking the somatostatin peptide resin, and adding an oxidant in the cracking process to perform oxidation reaction to obtain the somatostatin crude peptide. The synthetic method adopts the oxidation of disulfide bonds in the cracking process of crude peptide, and firstly, the production time of the product is shortened by adopting the oxidation method; secondly, a large amount of waste liquid generated by liquid phase oxidation is avoided; in addition, the oxidant with mild reaction is adopted, so that the formation of related oxidation impurities can be avoided, and the purity and the yield of the product are improved. Compared with the prior art, the total yield of the refined peptide of the new process is about 10 percent higher.)
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及一种生长抑素的合成方法。
背景技术
生长抑素是人工合成的环状十四氨基酸肽，其与天然生长抑素在化学结构和作用机理上完全相同。生理性生长抑素主要存在于丘脑下部和胃肠道。通过静脉注射生长抑素可抑制生长激素、甲状腺刺激激素、胰岛素和胰高血糖素的分泌，并抑制胃酸的分泌。它还影响胃肠道的吸收、动力、内脏血流和营养功能。生长抑素可抑制胃泌素和胃酸以及胃蛋白酶的分泌，从而治疗上消化道出血，可以明显减少内脏器官的血流量，而又不引起体循环动脉血压的显著变化，因而在治疗食道静脉曲张出血方面有一定的临床价值。生长抑素可减少胰腺的内分泌和外分泌，用以预防和治疗胰腺外科手术后并发症。生长抑素还可以抑制胰高血糖素的分泌，从而有效地治疗糖尿病酮症酸中毒。
生长抑素的结构式如下：
目前关于生长抑素的合成方法报道主要有以下几种方案：
专利CN1552728A公开了一种生长抑素多肽的合成方法，以Wang树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，逐个接上氨基酸，用裂解试剂(TFA/EDT/H2O/TIS)进行切肽，加入乙醚沉淀粗肽，在pH7.0～10.0，于15～35℃下，通空气氧化，用C18柱进行分离纯化，精肽的总收率为22.1％～22.9％。
专利CN1923851A公开了一种固相多肽合成生长抑素的制备方法。首先以三苯甲基树脂、4-甲基三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂为起始原料，按固相合成的方法依次连接保护氨基酸，获得保护的十四肽树脂，经裂解后得到还原型生长抑素，并在pH7～11用空气氧化，获得生长抑素粗品，再经C18(或C8)高压柱分离纯化，制得生长抑素精品，精肽总收率为25％。
专利CN102952175A公开了一种固相多肽合成生长抑素的方法。以2-氯三苯基醇树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，得保护的还原型十四肽树脂，经裂解后得还原型生长抑素，在pH为7～9的条件下用双氧水氧化，获得生长抑素粗品，再经C18高效液相柱进行分离纯化，再经冷冻干燥后，制得生长抑素精品，精肽总收率为26.24％。
专利CN100338090C公开了生长抑素线肽在双氧水或二甲基亚砜水溶液中氧化环合，得到生长抑素三氟醋酸盐粗制品。该粗制品经C18键合硅胶中压柱，用甲醇-水梯度洗脱方法分离纯化，得生长抑素三氟醋酸精制产品，没有具体的收率数据。
上述专利均采用固相合成肽树脂后，裂解得到线性粗肽，然后液相分别采用空气、双氧水或二甲基亚砜进行氧化，得到生长抑素粗品，再经纯化后得到生长抑素精品。一般氧化1000g粗肽需要用1000kg的氧化液。
液相氧化的缺点为：需要采用大量的溶剂进行溶解后再进行氧化反应，因此需要大规模的氧化设备；氧化后的废液处理量很大；另外，采用双氧水或二甲基亚砜这类强氧化剂可以引起肽序中的Trp或Cys的氧化，导致杂质的增多。
综上，针对现有技术存在的以上问题，有必要发明一种新的生长抑素的合成方法。
发明内容
为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种生长抑素的合成方法。该合成方法中采用在粗肽裂解的过程中进行二硫键氧化，采用该氧化方法，首先，缩短了产品的生产时间；其次，避免了液相氧化产生的大量废液；另外，采用反应温和的氧化剂，可以避免相关氧化杂质的形成，提高产品的纯度及收率。本申请的新工艺精肽总收率与现有技术相比要高10％左右。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种生长抑素的合成方法，包括以下步骤：
1)制备生长抑素肽树脂；
2)将生长抑素肽树脂进行裂解，并在裂解的过程中加入氧化剂进行氧化反应得到生长抑素粗肽。
进一步地，2)中所述氧化剂包括2,2’-二硫二吡啶、2,2'-二硫双(5-硝基吡啶)、过氧化氢或二甲基亚砜；优选地，所述氧化剂为2,2’-二硫二吡啶、2,2'-二硫双(5-硝基吡啶)，更优选地，所述氧化剂为2,2’-二硫二吡啶。
进一步地，2)中所述氧化剂与生长抑素肽树脂的摩尔比为1-3：1，优选为2：1。
进一步地，2)中所述氧化反应的时间为1-3小时，优选地，所述氧化反应的时间为2小时。
进一步地，2)中所述裂解所用的裂解液为TFA、TIS和H2O的混合物，所述TFA、TIS和H2O的体积比为80-95：3-10：2-10，优选为90：5：5；
所述裂解液与生长抑素肽树脂的体积质量比为8-12mL：1g，优选为10mL：1g；
所述裂解的温度为10℃-40℃，优选为20℃-30℃；
所述裂解的时间为1-3小时，优选为2小时。
进一步地，1)中所述生长抑素肽树脂的制备方法为：按照Fmoc固相合成方法，逐个偶联氨基酸Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ala-OH至固相载体上，得到生长抑素肽树脂。
进一步地，1)中所述固相载体为2-CTC树脂或Wang树脂，优选地，所述固相载体为2-CTC树脂；所述固相载体的替代度为0.6-1.2mmol/g，优选地，所述固相载体的替代度为1.0mmol/g。
进一步地，1)中所述生长抑素肽树脂的制备方法具体为：将固相载体放入固相反应柱中用溶剂进行溶胀，将Fmoc-Cys(Trt)-OH用溶剂溶解后加入DIPEA活化，然后加入到上述的固相载体中，搅拌反应一段时间即可得到Fmoc-Cys(Trt)-固相载体；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Ser(tBu)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Thr(tBu)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Phe-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Thr(tBu)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Lys(Boc)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Trp(Boc)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Phe-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Phe-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Asn(Trt)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Lys(Boc)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Cys(Trt)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Gly-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Ala-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止。
进一步地，所述脱除Fmoc所用的试剂为20％的六氢吡啶/DMF溶液；
优选地，所述偶联剂为DIPCDI、DIPEA、化合物A、化合物B、DIPCDI和化合物A的组合物或DIPEA和化合物A和化合物B的组合物，其中化合物A为HOBt或HOAt，化合物B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU，优选地，所述偶联剂为DIPCDI和HOBt的组合物，优选地，所述DIPCDI和HOBt的摩尔比为1：1-2，优选为1：1.2。
进一步地，所述生长抑素粗肽的合成步骤后还包括生长抑素粗肽的纯化与转盐步骤；
优选地，所述生长抑素粗肽的合成步骤后还包括将所述生长抑素粗肽用纯化水溶解后，用十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相进行两步纯化，再进行一步转盐，得到生长抑素精肽。
本发明的有益效果为：本发明在裂解过程中加入氧化剂直接氧化得到粗肽，采用新的氧化方法可以减少传统液相氧化步骤，提高合成的效率，缩短了产品的生产时间；采用新的合成方法可以有效的减少液相氧化产生的溶剂用量，避免了液相氧化产生的大量废液，达到减废的效果；另外，采用反应温和的氧化剂，可以避免相关氧化杂质的形成，提高产品的纯度及收率；本申请的新工艺精肽总收率与现有技术相比要高10％左右。
附图说明
图1为本发明实施例中生长抑素粗肽的合成流程图；
图2为本发明实施例11中生长抑素粗肽HPLC谱图；
图3为本发明实施例12中生长抑素精肽HPLC谱图；
图4为本发明实施例12中生长抑素精肽质谱图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施方法对本发明内容作进一步说明，但本发明的保护内容不局限以下实施例。
说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列于下表中：
实施例1、肽树脂的合成
流程如图1部分所示。
称取40g替代度为1.0mmol/g的2-CTC Resin树脂。加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取46.8g Fmoc-Cys(Trt)-OH用1000ml DMF溶解，冰水浴下加入5.0mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入15mL无水甲醇封闭0.5小时。用DMF洗涤3次，DCM洗3次，之后用无水甲醇收缩3次，抽干溶剂，真空干燥，得到Fmoc-Cys(Trt)-2-CTC树脂，检测替代度为0.51mmol/g。
称取上述替代度为0.51mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-2-CTC树脂39.2g(20mmol)，加入固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀Fmoc-Cys(Trt)-2-CTC树脂30分钟后，用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次，用茚三酮法检测树脂颜色，树脂有颜色，表示Fmoc已脱除。取23.0g Fmoc-Ser(tBu)-OH(60mmol)，9.74g HOBt(72mmol)溶于体积比为1︰1的DCM和DMF混合溶液中，冰水浴下加入9.84g DIPCDI(78mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1小时，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。
重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸进行偶联的步骤，按照生长抑素的肽序，依次完成Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ala-OH的偶联。将所得产物用DMF洗涤3次，DCM洗5次，用甲醇收缩，真空干燥过夜，得到肽树脂80.4g。
实施例2、肽树脂的合成
流程如图1部分所示。
称取40g替代度为1.0mmol/g的2-CTC Resin树脂。加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取46.8g Fmoc-Cys(Trt)-OH用1000ml DMF溶解，冰水浴下加入10.0mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入30mL无水甲醇封闭0.5小时。用DMF洗涤3次，DCM洗3次，之后用无水甲醇收缩3次，抽干溶剂，真空干燥，得到Fmoc-Cys(Trt)-2-CTC树脂，检测替代度为0.48mmol/g。
称取上述替代度为0.48mmol/g的Fmoc-Cys(Trt)-2-CTC树脂41.7g(20mmol)，加入固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀Fmoc-Cys(Trt)-2-CTC树脂30分钟后，用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤4次，DCM洗2次，用茚三酮法检测树脂颜色，树脂有颜色，表示Fmoc已脱除。取23.0g Fmoc-Ser(tBu)-OH(60mmol)，9.74g HOBt(72mmol)溶于体积比为1︰1的DCM和DMF混合溶液中，冰水浴下加入9.84g DIPCDI(78mmol)活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1小时，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。
重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸进行偶联的步骤，按照生长抑素的肽序，依次完成Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ala-OH的偶联。将所得产物用DMF洗涤3次，DCM洗5次，用甲醇收缩，真空干燥过夜，得到肽树脂81.1g。
实施例3、生长抑素线性粗肽裂解
将实施例1中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素线性粗肽3.95g，收率96.8％，HPLC纯度83.7％，MS 1639.7。
实施例4、生长抑素线性粗肽裂解
将实施例2中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素线性粗肽3.85g，收率94.3％，HPLC纯度84.2％，MS 1639.8。
实施例5、生长抑素粗肽裂解
流程如图1部分所示。
将实施例1中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时，然后加入0.55g 2,2’-二硫二吡啶，继续反应1小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素粗肽3.80g，收率93.4％，HPLC纯度78.7％，MS 1637.7。
实施例6、生长抑素粗肽裂解
流程如图1部分所示。
将实施例1中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时，然后加入1.1g 2,2’-二硫二吡啶，继续反应1小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素粗肽3.78g，收率92.9％，HPLC纯度81.2％，MS 1637.8。
实施例7、生长抑素粗肽裂解
流程如图1部分所示。
将实施例1中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时，然后加入1.1g 2,2’-二硫二吡啶，继续反应2小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素粗肽3.86g，收率94.9％，HPLC纯度84.5％，MS 1637.7。
实施例8、生长抑素粗肽裂解
流程如图1部分所示。
将实施例1中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时，然后加入1.1g 2,2’-二硫二吡啶，继续反应3小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素粗肽3.65g，收率89.9％，HPLC纯度80.7％，MS 1637.8。
实施例9、生长抑素粗肽裂解
流程如图1部分所示。
将实施例1中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时，然后加入1.65g 2,2’-二硫二吡啶，继续反应2小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素粗肽3.82g，收率94.1％，HPLC纯度83.7％，MS 1637.8。
实施例10、生长抑素粗肽裂解
流程如图1部分所示。
将实施例1中的10g肽树脂加入到500m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂100mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时，然后加入1.54g 2,2'-二硫双(5-硝基吡啶)，继续反应2小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素粗肽3.80g，收率93.4％，HPLC纯度82.3％，MS1637.7。
实施例11、生长抑素粗肽裂解放大实验
流程如图1部分所示。
将实施例2中的60g肽树脂加入到1000m1反应瓶中，将配制好的裂解试剂600mL(TFA:H2O:TIS＝90:5:5)倒入至上述反应瓶中，室温反应2小时，然后加入6.6g 2,2’-二硫二吡啶，继续反应2小时。反应结束，将反应液过滤后倒入至1L冰乙醚中，洗出大量白色沉淀，离心，洗涤，干燥称重得生长抑素粗肽23.1g，收率95.2％，HPLC纯度84.7％(见附图2)，MS 1637.7。
实施例12、生长抑素的制备
样品处理：将实施例11合成所得的生长抑素用纯化水溶解(溶解浓度约为15mg/ml)，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液备用；
第一步纯化条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：10cm×25cm，流动相：A相：配比含有质量百分比浓度为0.1％的磷酸水溶液，用三乙胺调节pH至2.5；B相：纯乙腈。流速：150-300ml/min。检测波长：230nm。梯度：流动相B的质量百分浓度：20-65％，梯度处理时间40-55min。进样量为12g；
纯化过程：将色谱柱用质量百分比浓度为60％的乙腈冲洗干净平衡后上样，上样量为溶解过滤之后的样品溶液。线性梯度洗脱，收集目的峰，纯度≥95％的馏分为合格馏分，将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用；减压浓缩至一定体积除过多的乙腈，为了第二步纯化做准备；
第二步纯化条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：10cm×25cm，流动相：A相配比含有质量百分比浓度为0.2％的盐酸水溶液；B相：纯乙腈溶液。流速：150-300ml/min。检测波长230nm。梯度：流动相B的质量百分比浓度：40-60％，梯度处理时间45-60min。进样量为第一步纯化浓缩之后纯度≥95％的样品溶液；
纯化过程：将色谱柱用质量百分比浓度为90％以上的乙腈冲洗干净平衡后上样，上样量为第一步纯化浓缩之后纯度≥95％的样品溶液。线性梯度洗脱，收集目的峰，纯度≥98％的馏分为合格馏分，将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用；
转盐条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：10cm×25cm，流动相：A相配比含有质量百分比浓度为0.2％的醋酸水溶液；B相：纯乙腈溶液，95％A+5％B冲洗20min，去除盐类，然后梯度洗脱，B相梯度变化为10％-50％(40min)，收集产品，合格馏分进行浓缩，浓缩温度不超过40℃，然后冷冻干燥得纯度大于99.0％的生长抑素8.90g，总收率可得36.7％，精肽HPLC纯度为99.4％(见附图3)，MS 1637.7(见附图4)。
以上所述仅为本发明的具体实施方式，不是全部的实施方式，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。
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