一种藤黄酸纳米粒及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种藤黄酸纳米粒及其制备方法和应用 (Gambogic acid nanoparticles and preparation method and application thereof ) 是由 牛生吏 刘明春 田春莲 王盈予 于 2021-06-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种藤黄酸聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物纳米粒制剂及其制备方法和应用,属于药物制剂技术领域,本发明通过乳化溶剂挥发法制备藤黄酸纳米粒,并以包封率为指标优化处方工艺。本发明制备的藤黄酸纳米粒为平均粒径为338.9nm的圆形纳米粒颗粒,大小均一,分散均匀能够改善藤黄酸的水溶性,并且在小鼠体内表现出了明显优于原料药的抗炎活性。(The invention discloses a gambogic acid polyethylene glycol polylactic acid segmented copolymer nanoparticle preparation, and a preparation method and application thereof, belonging to the technical field of pharmaceutical preparations. The gambogic acid nanoparticles prepared by the method are round nanoparticles with the average particle size of 338.9nm, are uniform in size and uniform in dispersion, can improve the water solubility of gambogic acid, and show anti-inflammatory activity obviously superior to that of raw material medicines in a mouse body.)
技术领域
本发明属于药物制剂
技术领域
，具体涉及一种藤黄酸聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物纳米粒制备方法及其在治疗炎症中的应用。背景技术
藤黄酸是从藤黄中提取的笼状呫吨酮类化合物，为藤黄的主要活性成分之一，目前已被证实具有抑制肿瘤细胞增殖、抗炎、抗病毒和神经保护等多种生物学活性。作为天然药物来源的化学成分，藤黄酸还具有高效、低毒、低耐药和不易残留等优势。这都使得藤黄酸具有成为新型药物的巨大潜力。但藤黄酸本身水溶解度极低的性质使其很难作为体内抗炎药物应用于临床的研究与开发中。虽然在强碱性条件下，可以提升藤黄酸的溶解度，但当pH值过大时，又会导致藤黄酸自身的降解。当前添加增溶剂的方法也会引起一系列的不良反应，这都给藤黄酸生产和临床应用开发带来诸多障碍和限制。因此，研究开发一种可以提高藤黄酸生物利用度的藤黄酸纳米粒来解决藤黄酸的水难溶问题，并结合纳米粒自身具有靶向性的特点使藤黄酸能够最大程度的发挥药效具有十分重要的意义。
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提出一种改善藤黄酸水溶性的藤黄酸纳米粒，本发明的目的之二在于提供藤黄酸纳米粒制剂的制备方法；本发明的目的之三在于提供述藤黄酸纳米粒制剂在治疗炎症中的应用。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种藤黄酸纳米粒的制备方法，主要包括如下步骤：
(1)将藤黄酸(GA)和聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(mPEG-PLA)溶于二氯甲烷-丙酮混合溶剂中，获得有机相；
(2)取1～3％(m/v)的聚乙烯醇(PVA)水溶液作为水相，与步骤(1)所得的有机相混合均匀；
(3)冰水浴条件下超声得到初乳；
(4)聚乙烯醇(PVA)水溶液作为连续相，将步骤(3)得到的初乳缓慢滴加至搅拌下的聚乙烯醇(PVA)水溶液中；
(5)使用旋转蒸发仪除去有机溶剂和部分水；
(6)超速离心后，取沉淀物，用蒸馏水洗涤1～6次，经水分散后即得藤黄酸纳米粒(GA-mPEG-PLA-NPs)。
进一步地，步骤(1)中所述二氯甲烷-丙酮混合溶剂中二氯甲烷与丙酮的体积比为1:10～10:1。
进一步地，步骤(1)中所述聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物的浓度为1～50mg/mL，藤黄酸和聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物的重量比为1:35～1:5。
进一步地，步骤(2)中所述有机相和水相的体积比为1:5～5:1。
进一步地，步骤(3)中所述超声的条件为振幅100％，每次超声1～10s，间隔1～10s，超声总时长为30～100s。
进一步地，步骤(4)中聚乙烯醇浓度为0.1～1％(m/v)，搅拌时间为10～200min。
进一步地，步骤(6)中所述离心的条件为离心速率为10000～40000rpm，离心时间为0.5～2h；
本发明一方面提供上述制备方法制得的藤黄酸纳米粒。
本发明另一方面提供上述藤黄酸纳米粒在制备治疗炎症药物中的应用。
本发明相对于现有技术具有的有益效果如下：
1.本发明制备的藤黄酸纳米粒为平均粒径338.9nm的圆形纳米粒颗粒，表面光滑平整，大小均一，分散均匀，表面带负电荷，并且具有极高的包封率和缓释效果。
2.本发明制备的藤黄酸纳米粒改善了藤黄酸的水溶性，并且在小鼠体内表现出了明显优于原料药的抗炎活性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例，下面将对实施例涉及的附图进行简单地介绍。
图1为GA-mPEG-PLA-NPs的TEM图。
图2为GA-mPEG-PLA-NPs的粒径分布图。
图3为GA-mPEG-PLA-NPs的表面电位图。
图4为GA-mPEG-PLA-NPs的体外释放图。
图5为GA-mPEG-PLA-NPs对体外炎症模型中炎症介质与炎症因子含量的影响。
图6为GA-mPEG-PLA-NPs对体内炎症模型中炎症介质与炎症因子含量的影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细的说明，但本发明的实施方式不限于此，显而易见地，下面描述中的实施例仅是本发明的部分实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，获得其他的类似的实施例均落入本发明的保护范围。
实施例1
一种藤黄酸纳米粒的制备，包括以下步骤：
(1)将35mg mPEG-PLA与1mg藤黄酸(GA)共同溶于3ml二氯甲烷与丙酮溶液中(二氯甲烷与丙酮体积比为1:1)；
(2)将上述有机溶液加入6mL 2.5％(m/v)聚乙烯醇溶液中，混合均匀；
(3)将步骤(2)所得的溶液立即放入冰浴中，进行超声，振幅100％，每次3s，间隔3s，超声总时长为40s；
(4)超声完毕后，将所得的乳液逐滴加入加至20mL高速磁力搅拌下的0.5％(m/v)的聚乙烯醇溶液中；
(5)滴毕，继续搅拌92min；
(6)在室温条件下，旋转蒸发除去有机溶剂与部分水；
(7)离心收集藤黄酸纳米粒，并用去离子水洗涤3次，离心速率为40000rpm，离心时间为1h；
(8)取步骤(7)所得的沉淀，水洗三次后用去离子水重新分散即得。
使用透射电子显微镜(TEM)观察藤黄酸纳米粒的形貌，使用激光粒度分析仪和电位仪测定藤黄酸纳米粒的粒径与zeta电位。
藤黄酸纳米粒的TEM图如图1所示，从图中可以看出制得的藤黄酸纳米粒呈圆球状，表面光滑平整，分散均匀。藤黄酸纳米粒的粒径与zeta电位如图2和图3所示，可以看出藤黄酸纳米粒的平均粒径大小为338.9nm，zeta电位为-10.2mv。
经测定，藤黄酸纳米粒的包封率高达85％。
实施例2
藤黄酸纳米粒的体外释放
通过透析法测定GA-mPEG-PLA-NPs的体外释药特性。将透析袋置于沸水中浸泡活化5min，用去离子水洗净。将纳米粒混悬液放置透析袋中，并置于37℃恒温搅拌的PBS(pH＝7.4)缓冲液中，转速为100r/min，在规定时间取缓冲液液600μL进行检测并补充等体积的缓冲液，计算释放的药物和纳米粒混悬液中的药物之比得释放度。
结果如图4所示，从图中可以看出前16h藤黄酸纳米粒的释放速度较快，24h趋于平稳，48h的释放度为52.38％，具有一定的缓释作用。
实施例3
藤黄酸纳米粒的体外抗炎活性评价
取对数生长期的RAW264.7细胞，于六孔板中每孔加入1×106个/mL的细胞混悬液1.2ml，37℃恒温培养1h。试验共分七组。空白对照组和LPS模型组加入0.4mL生理盐水，三个药物组加低、中、高(0.5μM、1μM、2μM)三个不同浓度GA-mPEG-PLA-NPs，阳性对照组加入2μM的地塞米松磷酸钠(DEX)，原料药对照组加入0.3μM的藤黄酸培养1h。除空白对照组外，其余组均加入400μL浓度为5μg/mL的LPS，空白对照组加入完全培养基；置于37℃，5％CO2细胞培养箱中继续培养，18h后取每孔培养液于2500rpm低温4℃离心10min后取上清液检测其中炎症介质(NO、PGE2)与炎症因子(IL-1β/IL-6/IL-10/TNF-α)的含量作为藤黄酸纳米粒抗炎活性评价的依据。
结果如图5所示，与对照实验相比，藤黄酸纳米粒实验组的炎症介质(NO、PGE2)与促炎因子(IL-1β/IL-6/TNF-α)得到了有效的抑制，而抑炎因子IL-10含量得到显著的提升。
实施例4
藤黄酸纳米粒的体内抗炎活性评价
采用LPS建立小鼠急性肺损伤模型(ALI)。小鼠适应环境3天后，开始腹腔注射。试验组分为七组：5、3、1mg/kg.b.w浓度的药物组、空白对照组、阳性对照组(地塞米松磷酸钠溶液2mg/kg.b.w)、LPS对照组及原料药对照组(藤黄酸3mg/kg.b.w)。连续注射5d后，在最后一次给药30min后，七组小鼠采用支气管滴注法滴入10μLLPS(2mg/kg.b.w)。6h后断颈处死所有小鼠，检测肺部炎症因子与炎症介质的含量。
结果如图6所示，实验结果显示GA-mPEG-PLA-NPs低(1mg/kg.b.w)、中(3mg/kg.b.w)、高(5mg/kg.b.w)剂量组均可以极显著降低LPS诱导的ALI小鼠体内炎症介质NO的含量。中、高剂量组可以显著降低PGE2的含量。低中高剂量组可以极显著的降低小鼠肺灌洗液中TNF-α、IL-1β的含量。中高剂量组可以极显著降低IL-6的含量，极显著上升IL-10的含量。并且GA-mPEG-PLA-NPs体内抗炎活性要优于藤黄酸。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
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