具体实施方式

为了进一步阐述本发明一种用于治疗婴幼儿湿疹的乳膏及其制备方法，达到预期发明目的，以下结合较佳实施例，对依据本发明提出的一种用于治疗婴幼儿湿疹的乳膏及其制备方法，其具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构或特点可由任何合适形式组合。

对本发明一种用于治疗婴幼儿湿疹的乳膏及其制备方法做进一步的详细介绍：

本发明的技术方案为：

一种用于治疗婴幼儿湿疹的乳膏，采用以下原料制备而成：紫草、没食子、马油、硬脂酸、单双硬脂酸甘油酯、月桂氮酮、凡士林、甘油、三乙醇胺、水和对羟基苯甲酸乙酯。

优选地，所述的乳膏采用以下重量份的原料制备而成：紫草1-8份，没食子3-8份，马油3份，硬脂酸3-6份，单双硬脂酸甘油酯3-6份，月桂氮酮0.5-2份，凡士林1-6份，甘油5-8份，三乙醇胺0.5-2份，水45-60份，对羟基苯甲酸乙酯0.05-0.2份。

上述的乳膏的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备紫草油：

将紫草润湿后，置于芝麻油中，炸至紫草变枯，油呈紫黑色，去渣、过滤，得紫草油；

(2)制备油相部分：将马油、紫草油、硬脂酸、单双硬脂酸甘油酯、凡士林、对羟基苯甲酸乙酯、月桂氮酮，加热并充分混匀，得油相部分；

制备水相部分：将水、甘油、三乙醇胺，加热并混合混匀，得水相部分；

(3)制备乳膏：将所述的水相部分逐渐加入到油相部分中，并不断搅拌，至水相部分加完，搅拌成乳膏状后，加入没食子粉末，搅拌至混合均匀，冷却至室温，得所述的用于治疗婴幼儿湿疹。

优选地，所述的步骤(1)中，芝麻油的温度为120-140℃。

优选地，所述的步骤(1)中，芝麻油和紫草的质量比为5-7:1。

优选地，所述的步骤(2)中，制备油相部分的过程中：将原料加热至80℃，并充分混匀后，降温至56-60℃，得油相部分。

优选地，所述的步骤(2)中，水相部分的温度为56-60℃。

优选地，所述的步骤(3)中，加入没食子粉末，在50-60℃下搅拌20min。

没食子是没食子蜂寄生于没食子树上生成的虫瘿，没食子主要分布于地中海沿岸、阿拉伯、土耳其、希腊、印度、伊朗、巴基斯坦等地，尤以小亚细亚产量最多，新疆多由巴基斯坦进口。没食子的主要化学成分为没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、鞣花酸等，具有抗炎、抗病毒、抑菌和抗病毒、抗肿瘤等作用。

紫草为紫草科紫草属多年生草本植物，紫草主要有效成分为萘醌、苯醌、生物碱等。中医上主要用于温热斑疹、湿热黄疸、湿疹等病的治疗。现代药理学研究表明紫草具有抗病原微生物、抗炎及抗过敏、抗肿瘤、保肝、止血等作用。

实施例1.

原料准备：紫草5份，没食子5份，马油3份，硬脂酸5份，单双硬脂酸甘油酯4份，月桂氮酮1份，凡士林2份，甘油6份，三乙醇胺1份，水50份，对羟基苯甲酸乙酯0.1份。

按照原料准备称取原料，具体操作步骤：

(1)制备紫草油：

新疆紫草用少量水润湿，快速置于120-140℃的芝麻油中进行炸制，至紫草变枯，油呈紫黑色，去渣、过滤，得紫草油。

其中，芝麻油与新疆紫草的质量比为5-7:1。采用少量多次炸的方式，有利于提高操作安全性。

(2)将没食子在低温下粉碎成极细粉，得没食子粉末。

(3)制备油相部分：

取马油、紫草油、硬脂酸、单双硬脂酸甘油酯、凡士林、对羟基苯甲酸乙酯、月桂氮酮(脂溶性物质)，将其放入适当烧杯中，用80℃水浴加热，并不断搅拌，让其充分混匀后，温度降至56-60℃，不断搅拌，得油相部分；

(4)制备水相部分：

取蒸馏水、甘油、三乙醇胺、等水溶性物质一定量，将其放入适当烧杯中，在水浴锅中加热使油相中温度控制在56-60℃，并经常搅拌，让其充分混匀，得水相部分；

(5)调制乳膏：

将56-60℃的水相部分逐渐加入到油相部分中，此过程不断搅拌，水相部分加完，并搅拌至乳膏状后；将没食子药粉加入混合相中，在50-60℃不断搅拌20min左右。然后，取出放冷，当乳膏降至室温，即得。

实施例2.

原料准备：紫草1份，没食子3份，马油3份，硬脂酸3份，单双硬脂酸甘油酯3份，月桂氮酮0.5份，凡士林1份，甘油5份，三乙醇胺0.5份，水45份，对羟基苯甲酸乙酯0.05份。

按照原料准备称取原料，具体操作步骤：

(1)制备紫草油：

新疆紫草用少量水润湿，快速置于125℃的芝麻油中进行炸制，至紫草变枯，油呈紫黑色，去渣、过滤，得紫草油。

其中，芝麻油与新疆紫草的质量比为6:1。采用少量多次炸的方式，有利于提高操作安全性。

(2)将没食子在低温下粉碎成极细粉，得没食子粉末。

(3)制备油相部分：

取马油、紫草油、硬脂酸、单双硬脂酸甘油酯、凡士林、对羟基苯甲酸乙酯、月桂氮酮(脂溶性物质)，将其放入适当烧杯中，用80℃水浴加热，并不断搅拌，让其充分混匀后，温度降至59℃，不断搅拌，得油相部分；

(4)制备水相部分：

取蒸馏水、甘油、三乙醇胺、等水溶性物质一定量，将其放入适当烧杯中，在水浴锅中加热使油相中温度控制在57℃，并经常搅拌，让其充分混匀，得水相部分；

(5)调制乳膏：

将57℃的水相部分逐渐加入到油相部分中，此过程不断搅拌，水相部分加完，并搅拌至乳膏状后；将没食子药粉加入混合相中，在55℃不断搅拌20min左右。然后，取出放冷，当乳膏降至室温，即得。

实施例3.

原料准备：紫草8份，没食子8份，马油3份，硬脂酸6份，单双硬脂酸甘油酯6份，月桂氮酮2份，凡士林6份，甘油8份，三乙醇胺2份，水60份，对羟基苯甲酸乙酯0.2份。

按照原料准备称取原料，具体操作步骤：

(1)制备紫草油：

新疆紫草用少量水润湿，快速置于130℃的芝麻油中进行炸制，至紫草变枯，油呈紫黑色，去渣、过滤，得紫草油。

其中，芝麻油与新疆紫草的质量比为6:1。采用少量多次炸的方式，有利于提高操作安全性。

(2)将没食子在低温下粉碎成极细粉，得没食子粉末。

(3)制备油相部分：

取马油、紫草油、硬脂酸、单双硬脂酸甘油酯、凡士林、对羟基苯甲酸乙酯、月桂氮酮(脂溶性物质)，将其放入适当烧杯中，用80℃水浴加热，并不断搅拌，让其充分混匀后，温度降至58℃，不断搅拌，得油相部分；

(4)制备水相部分：

取蒸馏水、甘油、三乙醇胺、等水溶性物质一定量，将其放入适当烧杯中，在水浴锅中加热使油相中温度控制在58℃，并经常搅拌，让其充分混匀，得水相部分；

(5)调制乳膏：

将58℃的水相部分逐渐加入到油相部分中，此过程不断搅拌，水相部分加完，并搅拌至乳膏状后；将没食子药粉加入混合相中，在50-57℃不断搅拌20min左右。然后，取出放冷，当乳膏降至室温，即得。

实施例4.

原料准备：紫草7份，没食子4份，马油3份，硬脂酸4份，单双硬脂酸甘油酯5份，月桂氮酮0.7份，凡士林2份，甘油6份，三乙醇胺0.8份，水50份，对羟基苯甲酸乙酯0.08份。

按照原料准备称取原料，具体操作步骤：

(1)制备紫草油：

新疆紫草用少量水润湿，快速置于120℃的芝麻油中进行炸制，至紫草变枯，油呈紫黑色，去渣、过滤，得紫草油。

其中，芝麻油与新疆紫草的质量比为5:1。采用少量多次炸的方式，有利于提高操作安全性。

(2)将没食子在低温下粉碎成极细粉，得没食子粉末。

(3)制备油相部分：

取马油、紫草油、硬脂酸、单双硬脂酸甘油酯、凡士林、对羟基苯甲酸乙酯、月桂氮酮(脂溶性物质)，将其放入适当烧杯中，用80℃水浴加热，并不断搅拌，让其充分混匀后，温度降至60℃，不断搅拌，得油相部分；

(4)制备水相部分：

取蒸馏水、甘油、三乙醇胺、等水溶性物质一定量，将其放入适当烧杯中，在水浴锅中加热使油相中温度控制在60℃，并经常搅拌，让其充分混匀，得水相部分；

(5)调制乳膏：

将60℃的水相部分逐渐加入到油相部分中，此过程不断搅拌，水相部分加完，并搅拌至乳膏状后；将没食子药粉加入混合相中，在50-60℃不断搅拌20min左右。然后，取出放冷，当乳膏降至室温，即得。

实施例5.

原料准备：紫草5份，没食子7份，马油3份，硬脂酸5份，单双硬脂酸甘油酯5份，月桂氮酮1.2份，凡士林3份，甘油7份，三乙醇胺1.2份，水52份，对羟基苯甲酸乙酯0.12份。

按照原料准备称取原料，具体操作步骤：

(1)制备紫草油：

新疆紫草用少量水润湿，快速置于140℃的芝麻油中进行炸制，至紫草变枯，油呈紫黑色，去渣、过滤，得紫草油。

其中，芝麻油与新疆紫草的质量比为5:1。采用少量多次炸的方式，有利于提高操作安全性。

(2)将没食子在低温下粉碎成极细粉，得没食子粉末。

(3)制备油相部分：

取马油、紫草油、硬脂酸、单双硬脂酸甘油酯、凡士林、对羟基苯甲酸乙酯、月桂氮酮(脂溶性物质)，将其放入适当烧杯中，用80℃水浴加热，并不断搅拌，让其充分混匀后，温度降至56℃，不断搅拌，得油相部分；

(4)制备水相部分：

取蒸馏水、甘油、三乙醇胺、等水溶性物质一定量，将其放入适当烧杯中，在水浴锅中加热使油相中温度控制在56℃，并经常搅拌，让其充分混匀，得水相部分；

(5)调制乳膏：

将56℃的水相部分逐渐加入到油相部分中，此过程不断搅拌，水相部分加完，并搅拌至乳膏状后；将没食子药粉加入混合相中，在50℃不断搅拌20min左右。然后，取出放冷，当乳膏降至室温，即得。

实施例6.药效学试验

(1)材料

a实验动物

【种属】大鼠

【品系】SD(Sprague Dawley)

【来源】新疆医科大学

【实验动物许可证】许可证编号：SCXK(新)2018-0002。

【级别】无特殊病原菌(Specific Pathogen Free，SPF)

【性别】雌雄各半

【体重(年龄)】

订购：100-140g(4-6周龄)。动物到达时体重略超出此范围的(±10g)，一并进行检疫和适应。

纳入试验：检疫、适应后，称重求雌雄各自的均值，体重在±20％范围内的大鼠纳入试验。

SPF级SD大鼠60只，雌雄各半，体质量(180±20)g。采用固定配方标准饲料喂养，在同一环境下自由进食、饮水，适应环境后开始实验。

b药物及试剂

湿疹乳膏(实施例1制备的乳膏)，低、中、高剂量组(批号190706)，冰黄肤乐软膏(国药准字Z10980140，批号180909)；复方醋酸地塞米松乳膏(999皮炎平)华润三九医药股份有限公司；(2，4－二硝基氯苯(DNCB)，上海中秦化学试剂有限公司；丙醇溶液，德州德新康消毒制品有限公司。

(2)方法

①分组及造模

将70只大鼠，按体重随机分为两组，一组为正常空白组共10只，另一组为模型组共60只。大鼠背部皮肤A、B两处采用电动剃毛器去除动物颈背部(A)、背部毛(B)，A处面积2cm×2cm，B处面积4cm×4cm。大鼠于A处皮肤用移液枪涂7％DNCB丙酮溶液100μL致敏，致敏后可见大鼠瘙痒剧烈，频繁出现搔抓、打滚行为，持续约2h。1周后在B处涂敷7％DNCB丙酮溶液200μL激发。每5d激发1次，每次激发均可见大鼠瘙痒剧烈，频繁出现瘙抓、打滚行为。B处皮肤逐渐出现红斑、丘疹、水肿、抓痕、脱屑，每次激发后记录皮损情况并评分，至激发6次后，各鼠背部皮损均出现红斑、丘疹、结痂、渗出，停止激发，说明制备模型成功。该模型持续不少于9d。

②给药

【给药途径与依据】将各组按照预试确定的相应给药剂量均匀涂抹在动物裸露皮肤处，涂抹后用医用纱布包扎2-3层，并用无刺激性胶布固定，约4小时后揭去覆盖物，用温热的纯净水洗净。具体的每组的给药情况如表1所示。

空白对照组：对健康大鼠进行给药。

表1给药期各组雄性大鼠体重质量(n＝5)

注：表中的低、中、高剂量组的成分相同，区别在于制备乳膏时没食子、紫草的用量。中剂量组为本发明实施例1制备的乳膏，低剂量组的乳膏在制备时，没食子、紫草的用量为中剂量组的一半；高剂量组的乳膏在制备时，没食子、紫草的用量为中剂量组的一倍。

【给药时间及频率】每日上午涂抹药物，下午清洗，间隔4-6h。

【给药频率】每日1次。

【给药期限】连续给药10天。

③观察指标及检测方法

a表观指标观察

表观指标在湿疹临床诊断中占有重要地位，也是动物模型成功与否的直接指标。湿疹动物模型制备成功后，动物出现不同程度的瘙痒、皮损、红斑，皮毛的光泽度降低、活动减少等。

测定仪器：相机拍照，肉眼观察。

研究结果如图1-7所示。由图1可知，正常空白组大鼠的皮肤正常。由图2可知，模型对照组大鼠的皮肤存在溃烂严重的情况。由图3可知，冰黄肤乐组大鼠的皮肤有一定愈合。由图4可知，皮炎平组大鼠的皮肤有一定愈合。由图5-7可知，乳膏组大鼠的皮肤愈合情况好，且本发明制备的乳膏低中高剂量效果明显优于中药对照冰黄肤乐组和皮炎平组。

由图1-7可知，表明本发明制备的复方没食子软膏中、高剂量组对DNCB诱导的大鼠湿疹模型具有明显的抑制炎症反应，止痒，减轻渗出作用，并且效果优于对照组。

b体重

表2给药期各组雄性大鼠体重质量(n＝5)

注：与空白对照组比较^#P<0.05，^##P<0.01；与模型对照组比较^*P<0.05，^**P<0.01。

表3给药期各组雌性大鼠体重质量(n＝5)

注：与空白对照组比较^#P<0.05，^##P<0.01；与模型对照组比较^*P<0.05，^**P<0.01

雄性大鼠：在给药期间，与空白对照组比较，雄性模型对照组大鼠的体重显著降低，差异具有统计学意义(P<0.01)，与模型对照组比较，雄性皮炎平组大鼠的体重在给药期间显著降低，差异具有统计学意义(*P<0.05；**P<0.01)，如表2所示。

雌性大鼠：在给药期间，与空白对照组比较，雌性模型对照组大鼠的体重显著降低，差异具有统计学意义(P<0.01)，与模型对照组比较，雌性皮炎平组大鼠的体重在给药期间显著降低，差异具有统计学意义(**P<0.01)，如表3所示。

试验结果显示：皮炎平组体重相较模型对照组明显降低，说明给药期间皮炎平对大鼠造成了副作用，推测大鼠消化系统和免疫系统造成损伤，导致大鼠体重明显降低。

c脏器重量与系数

表4

通过表4可知以下几点：

(1)与空白对照组比较，模型组大鼠的脾脏重量显著升高。与模型组比较，皮炎平组出现大鼠的脾脏重量显著降低的现象；而冰黄肤乐软膏组、湿疹乳膏低、中、高剂量组大鼠的脾脏重量无明显变化。

与空白对照组比较，模型组大鼠的脾脏系数显著升高，与模型组比较，皮炎平组大鼠的脾脏系数显著降低，与模型组比较，而冰黄肤乐软膏组、湿疹乳膏低、中、高剂量组的脾脏系数略有降低，但无明显变化。

(2)与空白对照组比较，模型组大鼠的胸腺重量无明显变化。与模型组比较，皮炎平组、冰黄肤乐软膏组大鼠的胸腺重量有显著降低。湿疹乳膏低、中、高剂量组大鼠的胸腺重量无明显变化。

与空白对照组比较，模型组大鼠的胸腺系数无明显变化，与模型组比较，皮炎平组、冰黄肤乐组软膏大鼠的胸腺系数有显著降低，湿疹乳膏低、中、高剂量组大鼠的胸腺系数变化无明显差异。

(3)与空白对照组比较，模型组大鼠的肝脏重量无明显变化。与模型组比较，皮炎平组、冰黄肤乐软膏组、湿疹乳膏低、中、高剂量组大鼠的肝脏重量略有变化，但各组肝脏重量变化均不明显。

与空白对照组比较，模型组大鼠的肝脏系数无明显变化，与模型组比较皮炎平组、冰黄肤乐软膏组、湿疹乳膏低、中、高剂量组大鼠的肝脏系数略有变化，但各组肝脏重量变化均不明显。

结论：皮炎平组、冰黄肤乐软膏组相较于模型组对照组，脾脏、胸腺重量降低及系数降低可以看出，脾脏、胸腺可能存在萎缩、退行性变化。而湿疹乳膏组大鼠内脏重量及系数无明显变化，说明湿疹乳膏对大鼠脾脏、胸腺、肝脏未造成明显损伤。同时也表明湿疹乳膏相较于皮炎平、冰黄肤乐软膏更安全。

实施例7.

在实施例6的基础上，新增不同药材比例1-2组。不同药材比例1组为没食子与紫草油的比例为8：7，不同药材比例2组为没食子与紫草油的比例为6：9。进行表观指标观察。结果见表5和图8-11。

表5给药结束各组大鼠B区(激发区)表观评分

由图8-11可知，给药结束，正常对照组：大鼠背部皮肤为淡红色，细致滑嫩，质地柔软，皮肤纹理清晰可见。慢性湿疹模型组：大鼠背部皮损明显，可见皮肤红斑、浸润、鳞屑、结痂、粗糙增厚、色素沉着、抓痕，依旧符合慢性湿疹诊断标准。各给药组：与模型组相比，各给药组大鼠背部皮损明显好转，红斑、浸润、鳞屑、结痂等明显减轻或消退。

且从表观评分和图8-10可知，ZY-001中剂量治疗湿疹效果好于不同药材比例的1组和2组。说明目前本发明所选择的没食子与紫草油的比例是治疗湿疹效果最好的。

实施例8：马油的体外透皮试验研究

(1)离体鼠皮制备：将健康大鼠断颈处死，去除皮下脂肪组织及黏液组织。采用保湿剂甘油溶液脱毛，用生理盐水清洗皮肤至净，将取洗好的皮肤浸于生理盐水中置于冰箱(-18℃)保存备用。实验前自然解冻。

(2)离体皮肤渗透试验：剪取合适大小的大鼠皮，固定在Franz直立式扩散池上，离体皮肤角质层面向供药池，真皮层面向接受室，接受室中7ml生理盐水，开启电磁恒温搅拌器，水浴温度设置为36.5℃，模拟正常人体温度，此时应注意接收液与皮肤相接触，称取乳膏各0.25g均匀涂抹于剪取好的大鼠皮肤上，记录开启时间，在0.5、1、2h时取2mL接收液，以空白皮肤为随行对照，0.22μm微孔滤膜过滤，HPLC法测定其中没食子酸的含量。

测定方法：色谱柱：C₁₈；以甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相；梯度洗脱；检测波长为273nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000。

表6梯度洗脱时间表

检测结果见表7。

表7没食子酸含量(μg/mL)

实验结果显示：加马油的乳膏，检测出的没食子酸含量较高，也表明加马油的乳膏的透皮吸收更好。

以上所述，仅是本发明实施例的较佳实施例而已，并非对本发明实施例作任何形式上的限制，依据本发明实施例的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明实施例技术方案的范围内。