具体实施方式

Réotier水

Réotier水是具有恒定理化组成的深部来源天然水。Réotier的水源位于法国上阿尔卑斯省(Hautes-Alpes)的Réotier市，海拔约910米。从附近的温泉流出的水渗入土壤后再次上升，富含矿物质。下表描述了Réotier水的恒定组成。

表：Réotier水的离子组成(mg/l)

因此，Réotier水的特征在于高矿物质含量，特别是钙、钠、镁和锶含量。

盖仑制剂

Réotier水可以以雾剂的形式应用(通常可以借助于雾化器或汽化器来喷雾)，也可以以任何适合局部或皮肤应用的盖仑形式应用，任选作为与美容可接受的赋形剂的混合物。

由此配制的美容组合物通常可以包含1至100重量％的Réotier水。例如，它可以是包含100％的Réotier水的雾剂，或包含1至95重量％、优选1至90重量％、优选1至80重量％、更优选1至70重量％、1至60重量％、1至50重量％、1至40重量％、1至30重量％、1至20重量％、1至10重量％或1至5重量％的Réotier水的组合物。在一个优选的实施方式中，所述盖仑组合物包含1至30重量％或1至10重量％的Réotier水。

因此，可以使用固体、液体或半固体制剂，例如霜剂、乳剂、香膏剂、泡沫剂、洗剂、精华素、凝胶剂或凝胶霜。Réotier水因此可以配制成水包油或油包水乳液、多重乳液、水溶液、水-酒精或水-乙醇酸溶液、或水分散体的形式。Réotier水可以掺入各种旨在用于皮肤护理和/或皮肤化妆的产品例如保湿护理产品或粉底中，或旨在用于清洁皮肤的产品例如洗剂、凝胶剂或卸妆乳、面膜中，或掺入护发和/或洗发产品、例如洗发剂和护发素中，等等。

在一个特定实施方式中，所述美容组合物是水凝胶或水包油乳液的形式。

于是，水相含有Réotier水和任选的去离子水和/或至少一种选自多元醇和水性胶凝剂的成分。有利地，所述水总计占组合物总重量的40至95％，优选40至90％。多元醇特别可以选自甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇及其混合物，并且其可以占组合物总重量的5至30重量％。

在一个特定实施方式中，所述美容组合物是包含40至95重量％的Réotier水的凝胶。

术语“水性胶凝剂”表示能够通过变为水合来固定水分子并由此增加水相的粘度的聚合化合物。这样的胶凝剂可以选自：多糖，例如：纤维素及其衍生物，改性淀粉，角叉菜胶，琼脂，黄原胶和植物胶例如瓜尔豆胶或刺槐豆胶；合成聚合物，特别是2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸(AMPS)与乙烯基吡咯烷酮的任选交联的共聚物，丙烯酸钠均聚物，以及丙烯酸共聚物，特别是丙烯酸钠及其衍生物、和/或(甲基)丙烯酸烷基酯和/或(甲基)丙烯酸羟烷基酯和/或(甲基)丙烯酸(聚乙氧基)烷基酯与任选至少一种其它单体、有利地是2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸(AMPS)的共聚物，这些共聚物任选是交联的；及其混合物。

当存在时，脂肪相可以包含一种或多种挥发性和/或非挥发性油。挥发性油的例子是支链烷烃，例如异十二烷，以及C₁₀-C₁₃的直链烷烃。作为非挥发性油，特别可以提及：

-酸和一元醇的酯，选自：饱和直链的C₂-C₁₀(优选C₆-C₁₀)酸和饱和直链的C₁₀-C₁₈(优选C₁₀-C₁₄)一元醇的单酯和聚酯，饱和直链的C₁₀-C₂₀酸和支链或不饱和的C₃-C₂₀(优选C₃-C₁₀)一元醇的单酯和聚酯；支链或不饱和的C₅-C₂₀酸和支链或不饱和的C₅-C₂₀一元醇的单酯和聚酯；支链或不饱和的C₅-C₂₀酸和直链C₂-C₄一元醇的单酯和聚酯；

-C₆-C₁₂脂肪酸的甘油三酯，例如辛酸和癸酸的甘油三酯以及三庚酸甘油酯；

-支链和/或不饱和的C₁₀-C₂₀脂肪酸(例如亚油酸、月桂酸和肉豆蔻酸)；

-支链和/或不饱和的C₁₀-C₂₀脂肪醇(例如辛基十二烷醇和油醇)；

-烃，例如角鲨烷(C30)，特别是从橄榄油提取的植物角鲨烷，和半角鲨烷(C15)；

-碳酸二烷基酯，例如碳酸二辛酯和碳酸二乙基己酯；

-二烷基醚，例如二辛基醚；和

-其混合物。

还可以提及含有一种或多种上述成分的植物油。

作为酸和一元醇的酯，特别可以提及单酯，例如椰油醇癸酸酯和辛酸酯的混合物、澳洲坚果油酸乙酯、乳木果油乙酯、异硬脂酸异硬脂酯、异壬酸异壬酯、异壬酸乙基己酯、新戊酸己酯、新戊酸乙基己酯、新戊酸异硬脂酯、新戊酸异癸酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸乙基己酯、月桂酸己酯、月桂酸异戊酯、壬酸鲸蜡基硬脂酯、辛酸丙基庚酯、及其混合物。其它可以使用的酯是酸和一元醇的二酯，例如己二酸二异丙酯、己二酸二乙基己酯、癸二酸二异丙酯和癸二酸二异戊酯。

植物油的例子特别是麦胚油、向日葵油、摩洛哥坚果油、木槿油、芫荽油、葡萄籽油、芝麻油、玉米油、杏仁油、蓖麻油、乳木果油、鳄梨油、橄榄油、大豆油、甜杏仁油、棕榈油、菜籽油、棉籽油、榛子油、澳洲坚果油、荷荷巴油、苜蓿油、罂粟籽油、南瓜籽油、芝麻油、葫芦油、黑加仑油、月见草油、薰衣草油、琉璃苣油、小米油、大麦油、藜麦油、黑麦油、红花油、烛果油、西番莲油、玫瑰麝香油、蓝蓟油、亚麻芥油或山茶油。

脂肪相还可以包含至少一种脂肪相结构化剂。术语“脂肪相结构化剂”意指能够使组合物中所含的油变稠的化合物，特别选自蜡、脂肪相胶凝剂和糊状脂肪物质，及其混合物。

该组合物还可以含有至少一种美容活性剂，特别是另一种抗污染剂，例如能够形成抗污染保护膜的基于多糖的成膜聚合物，特别是由Solabia以商品名和出售的产品，保湿剂，例如透明质酸、尿素或由SEPPIC以商品名出售的木糖醇基葡糖苷、木糖醇和脱水木醣醇的混合物；剥脱剂，例如α–和β-羟酸；及其混合物。

所述组合物还可以含有各种可分散在乳液的脂肪相和/或水相中的成分，条件是所述成分与局部应用于皮肤不冲突。

因此，它可以含有至少一种通常为非离子型的水包油型或油包水型乳化剂，例如聚氧乙烯酯，任选聚乙氧基化脱水山梨糖醇酯，任选脂肪酸和甘油的聚乙氧基化酯，脂肪醇和糖的醚，例如烷基葡糖苷，及其混合物。所述乳化剂可以占组合物总重量的2至10％，优选4至6％。

所述组合物还可以包含添加剂，所述添加剂特别选自有机和/或无机光防护剂，其对蓝光和/或UVA和/或UVB具有活性；去角质粒子；芳香剂；抗氧化剂；螯合剂；pH调节剂；防腐剂；填充剂；颜料；染料；及其混合物。

本发明使用的组合物可以应用于个体身体的暴露于污染剂的至少一个区域，并且更特别地应用于面部、嘴唇、颈部和/或领口。作为变体或附加地，它可以应用于手或手臂，应用于小腿和脚。

该组合物可以一天一次或多次、例如在早晨和/或晚上应用于目标区域。

污染剂

污染剂主要包括大气污染物。

大气污染物是指存在于环境中的污染物，特别是以可吸入的粒子和气体的形式存在。它们可以存在于室外，例如柴油发动机粒子、臭氧或重金属，和/或存在于室内，其中污染特别可归因于香烟烟雾或由油漆、粘合剂或壁纸释放的溶剂，例如甲苯、苯乙烯、二甲苯、苯甲醛。

在存在于环境的污染物之中，将直接源自于污染源(道路交通、工业、取暖、农业等)的一次污染物与源自于气体彼此化学反应的二次污染物之间区分开来。在一次污染物之中，可以提及碳氧化物(CO和CO₂)，氮氧化物(例如NO、NO₂)，硫氧化物(例如SO、SO₂)，烃、更特别是多环芳烃(PAH)，挥发性有机化合物，金属(例如铅、汞、镉)，以及细小或超细粒子，例如PM10(直径小于10μm)和PM2.5(直径小于2.5μm)。后者由于深入渗透的能力而可能特别有毒性，它们的尺寸小于人体皮肤的孔隙尺寸。PM2.5微粒是由柴油发动机、煤炭燃烧和香烟烟雾产生的。

本发明可以通过将Réotier水应用于皮肤来限制(减慢或减少)一种或多种污染剂的皮肤渗透。

本发明对于限制PAH例如苯并芘和微粒(特别是PM10和PM2.5粒子)的渗透特别有用。

下面的实施例纯粹作为举例说明给出，并不意图限制本发明的范围。

实施例

实施例1：制剂

制剂的示例提供如下(以组合物重量表示的百分比)。

霜剂示例：

保湿凝胶的示例：

实施例2：皮肤外植体的电阻的评估(阻抗质量)

材料和方法

阻抗测量：

·原理：在施加电流(100Hz)之前，在皮肤圆片的两侧放置两个电极。阻抗测量皮肤对电流通过的电阻。皮肤受损越大，其对电流的电阻就越低。它以Ω测量。

·程序：将各皮肤片段沉积在第一个电极上，该电极上面有浸有盐水溶液(PBS)的棉绒。将100μl PBS沉积在皮肤表面。然后使第二电极与PBS接触，从而闭合电路并实行测量。

在操作当天处理来自三个不同供体(42、55和55岁的女性)的皮肤外植体。对于每种测试条件，在每个供体的皮肤上穿出四个直径为2.2cm的圆片(每种条件n＝12)。将Réotier水喷洒在一半的皮肤外植体上。然后将皮肤外植体放在6孔培养板上的气液交界面处。每两天更换一次培养基，并进一步喷洒Réotier水。5小时、10小时、3天或7天后进行经表皮电阻测量。

结果

皮肤外植体的经表皮电阻测量结果示于图1。

令人惊讶的是，仅用Réotier水处理一次后，经表皮电阻在处理后5小时迅速增加30％，然后稳定下来直到第7天(168小时，P<0.0001)。相反，对照皮肤外植体在培养中经表皮电阻略有下降，然后在10小时后稳定下来(第7天时是T0值的89％)。

实施例3：在污染剂存在下Réotier水对阻抗的效应的评估

材料和方法

为了测试Réotier水在污染物渗透方面的有效性，进行了将污染物施加于皮肤外植体的测试。在施加污染物前24小时，对某些外植体喷洒Réotier雾剂。在T0、24h和48h时，测量皮肤的电阻(阻抗质量)，反映污染物在皮肤各个层中的渗透。

1.皮肤片段

三个皮肤外植体在用手术刀从外植体中除去下皮的操作后的一小时内用于每个部分。用蒸馏水仔细清洁皮肤表面，以除去血液痕迹。

2.污染物的制备

从以下各种溶液制备污染物的混合物：

-PM2.5溶液(直径小于2.5μm的细粒子)

-PM10溶液(直径小于10μm的细粒子)

-苯并-α-芘溶液(2mg/ml)

-二苯并蒽溶液(1mg/ml)

-苯

PM 2.5和10溶液是通过在蒸馏水中提取样品盘获得的(24个盘/40ml)。

以下溶液的混合物：

-12.5μl的PM 2.5溶液

-12.5μl的PM10溶液

-25μl的苯并-α-芘溶液(2mg/ml)

-25μl的二苯并蒽溶液(1mg/ml)

-10μl的苯

3.活力、阻抗和组织学研究

3.1.外植体的制备

使用冲孔装置获得12个直径为2.2cm的圆片。将该外植体置于含有抗生素和抗真菌剂的浴中30分钟。将它们放入含有2.5ml专门培养基的6孔平板培养插件中，并置于37℃的培养箱中。

3.2.外植体的处理(T0)

次日，将每个外植体放在擦拭纸上。测量阻抗。测量后，通过三次连续的喷雾操作来施加Réotier雾剂。将该圆片放回含有新培养基的培养插件中，并在盖子打开的通风橱下留置15分钟。当外植体干燥时，将它们放入37℃、5％CO₂的培养箱中。

由此形成四个组：

-对照：无雾剂，无污染

-污染：无雾剂，沉积污染

-Réotier雾剂：喷洒Réotier雾剂，无污染

-污染+Réotier雾剂：喷洒Réotier雾剂，沉积污染。

3.3.外植体的处理(T24h)

次日，将每个外植体放在擦拭纸上。测量阻抗。测量后，通过三次连续的喷雾操作来施加Réotier雾剂。在通风橱下15分钟后，向所述圆片添加污染物的混合物(85μl)。将外植体放入插件中，然后置于培养箱中。

3.4.外植体的处理(T48h)

次日，将每个外植体放在擦拭纸上。测量阻抗。将直径为3mm的冲切片(punch)放入Eppendorf管中以进行细胞活力测量。

4.皮肤渗透研究

4.1.外植体的制备

对来自三个供体的皮肤用皮刀处理(也就是说，将皮肤的厚度减小到表皮和部分真皮)，然后使用冲孔装置获得七个直径为2.2cm的圆片。在测量了所述圆片的厚度之后，将其安装在Proviskin公司的K-系统中。K-是一种人源皮肤的即用型试剂盒，由圆形医用聚合物插件构成。然后，将所述圆片放入Proviskin公司的存在专用培养基的D-系统中。

4.2.外植体的处理(T0)

次日，将每个K-skin放在擦拭纸上。通过三次连续的喷雾操作来施加Réotier雾剂。将该圆片放回含有新培养基的D-skin系统中，并在盖子打开的通风橱下留置15分钟。当外植体干燥时，将它们放入37℃、5％CO₂的培养箱中。

由此形成四个组：

-对照：无雾剂，无污染(n＝3)

-污染：无雾剂，沉积污染(n＝3)

-Réotier雾剂：喷洒Réotier雾剂，无污染(n＝3)

-污染+Réotier雾剂：喷洒Réotier雾剂，沉积污染(n＝3)

4.3.外植体的处理(T24h)

次日，将每个K-skin放在擦拭纸上。通过三次连续的喷雾操作来施加Réotier雾剂。在通风橱下15分钟后，向所述圆片添加污染物的混合物(85μl)。用含有6％PEG的PBS替换培养混合物。将K-skins放在D-skin中，然后放入培养箱。在培养4h、6h、8h、10h、12h和24h后，取出500μl培养基用于污染物测定。将所述样品保存在-20℃下直至测定。向孔中添加500μl PBS。

4.4.外植体的处理(T48h)

在取最终样品后，将每个皮肤的表面用棉签去除皮肤表面的污染物量。将D-squame胶粘盘施加于每个圆片的表面。将每个角质层胶粘盘放入20ml玻璃管中。用镊子进行真皮-表皮分离。将如此分离出的各组织称重，然后在-20℃下保存直至对其进行处理。

结果

测量阻抗质量(或TEER(经表皮电阻))可以评估表皮的细胞旁通透性，也就是说，流体和离子在表皮的细胞之间的流通。该阻力增加与紧密连接的功能更好以及表皮的不渗透性更高相关联。

在来源于三个供体的皮肤外植体上获得的结果的平均值示于图2。在培养箱中平衡24小时后，对所述外植体(T0)进行阻抗测量，然后将Réotier雾剂施加到某些外植体上(EDR)。24小时(T24)后，再次进行阻抗测量。它揭示出在施加雾剂之后外植体的电阻略有增加。

然后，在T24时的测量后，在外植体表面施加污染物的混合物，将所述外植体置于培养中，然后在48小时(T48)时进行阻抗测量。对三个供体的平均值进行双向方差分析(ANOVA)(图2)。可以观察到以下结果：

-污染导致阻抗值下降。在时间P-T48和P-T0之间，该结果具有显著性(*p<0.05)。在对照皮肤、用Réotier水处理过的皮肤、或用Réotier水处理过且施加了污染物的皮肤上未观察到这种阻抗下降。

-用Réotier水处理导致阻抗质量增加：实际上，EDR-T24h与EDR-T0显著不同(**p<0.01)

这些结果表明，事先用Réotier水处理皮肤防止了由污染物引起并通过皮肤阻抗下降而观察到的皮肤屏障破坏。

实施例4：通过高效液相色谱法(HPLC)评估Réotier水对污染物在皮肤各层中的渗透的效果

材料和方法

在这种情况下，阻抗是在与实施例1相同的操作条件下测量的。

对与表面、角质层、表皮和真皮相对应的样品进行污染物提取。将1.5ml提取溶剂(50/50丙酮/水)放入每个试管中，然后搅拌24小时。然后将样品过滤，然后注入HPLC柱中。

·分析条件：分析条件如下：

-流动相：水/乙腈(梯度)

-柱：C18,5μm 25cm x 4.6mm

-流速：1.2ml/min

-进样体积：20μl

-T℃：30℃

-波长：254nm

结果

图3给出了皮肤各层中二苯并蒽污染物的HPLC测定结果。进行统计检验(配对t-检验(*p<0.05)).

表：二苯并蒽的测定(μg)

图4给出了皮肤各层中苯并-α-芘污染物的HPLC测定结果。进行统计检验(配对t-检验(*p<0.05和**p<0.01))。

表：苯并芘的测定(μg)

本研究中测定的两种污染物以相同的方式在洗涤液中发现(未吸附)。在用Réotier雾剂预处理的外植体的角质层中，它们的检出量明显降低。这种对抗污染物渗透的保护在剥离后的表皮(含有活的表皮以及角质层)中也有效。

这些结果表明，在施加污染物之前用Réotier水处理可以限制其渗透。