一种从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法
阅读说明：本技术 一种从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法 (Method for comprehensively extracting fucoxanthin and algal polysaccharides from Fucus vesiculosus ) 是由 田军 刘青 卢伊娜 于 2020-12-30 设计创作，主要内容包括：本发明属于海洋天然产物提取技术领域,具体是指一种可以充分提取墨角藻中的海藻多糖和岩藻黄质的工艺,以便使墨角藻的经济价值最大化。亦可适用于其他种类的褐藻综合提取岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯、生物糖胶等海藻多糖。本发明所公开的一种从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法包括以下步骤(1)破壁；(2)提取岩藻黄质；(3)提取海藻多糖；(4)海藻多糖粗产品提纯。本发明具有操作简单,岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的得率及纯度较高等优点。(The invention belongs to the technical field of marine natural product extraction, and particularly relates to a process capable of fully extracting algal polysaccharides and fucoxanthin in Fucus vesiculosus, so as to maximize the economic value of the Fucus vesiculosus. It can also be used for extracting fucoxanthin, fucoidan, biological carbohydrate gum, etc. from other brown algae. The invention discloses a method for comprehensively extracting fucoxanthin and algal polysaccharide from Fucus vesiculosus, which comprises the following steps of (1) breaking the wall; (2) extracting fucoxanthin; (3) extracting algal polysaccharide; (4) and (5) purifying the crude seaweed polysaccharide product. The method has the advantages of simple operation, higher yield and purity of fucoxanthin and fucoidan sulfate, and the like.)
技术领域
本发明属于海洋天然产物提取技术领域，具体是指一种从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法。
背景技术
墨角藻(拉丁学名Fucus vesiculosus)是一种贴附在岸边岩石上生长的褐藻。它的藻体为黑褐色，成双叉状分枝，为扁平的角状叶。大部分分布于热带和亚热带海洋，部分分布寒带。在我国分布于辽宁、山东等沿海。墨角藻的复叶上覆盖着一层粘液，它可使海草在海潮退却时不至死掉。藻体为多年生，二叉分枝，无中央主轴。精子囊和卵囊生长在藻体顶端膨大的生殖托上的生殖窝内(或称孢子叶)。基部具有盘形固着器，扁平的带形叶，由基部到顶端有一条明显的纵贯叶带的中肋，在中肋的两侧叶带上常有成对的气囊以利漂浮。
墨角藻含有岩藻聚糖硫酸酯(fucoidan，又称褐藻糖胶和海藻多糖)、岩藻黄质(fucoxanthin，又称岩藻黄素)等多种对人体有益的成分。墨角藻提取物所含的海藻酸钠与具致癌作用的锶、镉有很强的结合能力，并将它们排出体外，从而具有一定的防癌功效，尤其对于提高镉污染地区的人民健康水平有着巨大的应用前景。
研究显示，岩藻聚糖硫酸酯具有显著的抑抗肿瘤功效，同时还具有抗凝血、降血脂、抗病毒、增强机体免疫机能等多种生物学活性，是当前海洋功能性食品和药物研究的热点，岩藻聚糖硫酸酯粉剂和含岩藻聚糖硫酸酯的饮品已经在国内外市场销售。而岩藻聚糖硫酸酯作为一种水溶性天然高分子化合物，可以用作增稠剂、分散剂、乳化剂、稳定剂、粘结剂、成膜剂、凝胶剂和离子交换剂，广泛应用于工农业生产的各方面。
常用的岩藻聚糖硫酸酯提取方法包括：水提法、酶解法、酸提法和超声波提取法，这些方法各有利弊：水提法可避免岩藻聚糖硫酸酯降解，是常用的提取方法，但是得率低；酶解法条件温和，对岩藻聚糖硫酸酯的结构影响不大，也可提高得率，但是成本较高，限制了其应用；酸提法可以提高岩藻聚糖硫酸酯的得率，但会显著降解褐藻糖胶，影响岩藻聚糖硫酸酯的生物活性；超声提取法可以提高岩藻聚糖硫酸酯得率，但是时间过长同样会引起岩藻聚糖硫酸酯的降解。
研究发现，岩藻聚糖硫酸酯等物质主要存在于裙带菜孢子叶粘液基质中。如果先将孢子叶粘液分离出来，再从粘液中提取岩藻聚糖硫酸酯等生物活性物质，可减少酶制剂用量，降低岩藻聚糖硫酸酯等活性物质的提取成本。现有技术公开了一种使用NaOH与Na2CO3复合液对褐藻孢子叶进行处理的工艺，以达到分离粘液效果。然而岩藻聚糖硫酸酯在碱性环境下稳定性较差，采用碱性提取液会导致原料中所含有岩藻聚糖硫酸酯的损耗。
墨角藻所含有的另一种有益成分——岩藻黄质——为脂溶性色素，易溶于非极性有机溶剂，且耐热性较差，在酸性环境下的稳定性较差。目前通常采取非极性溶液提取法。虽有报道显示可采用二氧化碳超临界流体萃取。QuitainAT等运用超临界萃取从裙带菜中提取岩藻黄素在40℃和40MPa条件下提取180min，回收率为80％。但是其所耗费时间长，工艺要求苛刻，会导致生产成本大幅上升。在岩藻黄质目前的市场价格水平而言，该技术不具备工业应用价值。
岩藻聚糖硫酸酯不耐碱，岩藻黄质不耐酸；而且二者均不耐温，岩藻黄质的耐温性差于岩藻聚糖硫酸酯，且在光照条件下易于分解。现有工艺通常只从墨角藻中提取岩藻聚糖硫酸或者提取岩藻黄质，目前缺乏可兼顾提取墨角藻中含有的岩藻聚糖硫酸酯和岩藻黄质的提取工艺。此外，现有技术通常只提取墨角藻孢子叶中的有效成分，难以对墨角藻藻体其他部分所含有的有效成分进行提取。
发明内容
为了解决上述难题，本发明提供了一种可以充分提取墨角藻中的海藻多糖和岩藻黄质的工艺，以便使墨角藻的经济价值最大化的从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法。此方法还可应用于以其他褐藻为原料，综合提取岩藻黄质和海藻多糖。
为了实现上述功能，本发明采取的技术方案如下：一种从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法，包括以下步骤：
(1)破壁：取新鲜墨角藻包含有孢子叶的全部藻体，干燥、粉碎、过筛后用碳酸氢钙水溶液浸泡洗涤，随后将墨角藻取出平铺于容器中，置于0℃以下的温度使之冰冻硬化，随后采用微波解冻；随后再次将容器置于0℃以下的温度，待冰冻硬化后采用微波炉解冻，使墨角藻细胞壁破裂，随后沥干水分备用。
(2)提取岩藻黄质：取步骤(1)处理后的墨角藻置于容器中，加入多量无水乙醇，放置在恒温环境中保持温度，混合均匀并充分搅拌后，对混合物进行抽滤，抽滤后的固相物在同等条件下再次加入无水乙醇进行抽滤提取一次，将两次提取的液相混合在一起，放入离心机中离心，移除固相物，将离心后的液相进行旋蒸，得到岩藻黄素液浓缩液。
(2-a)纯化岩藻黄质方法a。将硅胶加热后倒入石油醚，静置24小时以上，然后将处理后的硅胶加入层析柱内。将旋蒸后的岩藻黄素液浓缩液倒入其中，用石油醚-乙酸乙酯混合液体进行洗脱，收集岩藻黄素洗脱液，最后对岩藻黄素洗脱液进行旋蒸、冷冻干燥，将溶剂挥发后得到岩藻黄质。
(2-b)纯化岩藻黄质方法b。向旋蒸后的岩藻黄素液浓缩液加入去离子水，将乙醇的浓度稀释到40-50％，4-8℃静置一段时间后离心，大极性杂质随液相去除，得到沉淀物为岩藻黄质粗品。将岩藻黄质粗品用高浓度乙醇溶解，随后向液相中加入3-5％(重量比)的非极性大孔树脂，搅拌吸附小极性杂质(如酯类)。树脂吸附纯化后的液相浓缩至原体积的45-60％，4-8℃静置一段时间后离心，移除液相，所得固相物为岩藻黄质。
(3)提取岩藻聚糖硫酸酯：在步骤(2)中经过抽滤和离心得到的固相物混合，加入含有钙离子的溶液充分搅拌，加热一定时间后降至室温，离心后保留液相上清液，舍弃固相物。将上清液蒸发浓缩后加入无水乙醇至溶液产生絮状沉淀，去除液相后得到的沉淀物即为海藻多糖粗产品；
(4)海藻多糖粗产品提纯：将步骤(3)得到的海藻多糖粗产品加入少量去离子水使其完全溶解。
(4-a)向溶解后的海藻多糖粗产品溶液加入无水乙醇至溶液中产生少许不溶物，进行离心，取上清液，在其中加入适量乙醇后，溶液中有白色沉淀产生，离心后弃上清液，沉淀物用乙醚清洗，再经冻干后得到的白色粉末即为纯化岩藻聚糖硫酸酯。
(4-b)向溶解后的海藻多糖粗产品溶液加入聚酰胺，搅拌吸附以脱除蛋白质；聚酰胺吸附后的液相进行超滤以脱除残留的盐和小分子杂质。超滤的截留液加入无水乙醇，沉淀物用乙醚清洗，再经冻干后得到的白色粉末即为纯化岩藻聚糖硫酸酯。
(5)岩藻黄质纯度的测定：采用高效液相色谱法，使用岩藻黄质标准溶液配置不同浓度溶液，在450nm波长下进行测定并绘制标准曲线；取步骤(2)得到的岩藻黄质样品，加有机溶剂使之溶解，在450nm波长下测定，计算样品中藻黄质含量。
(6)海藻多糖纯度的测定：利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，紫外检测波长为490nm。取L-岩藻糖10mg为标准品置于25ml容量瓶中配制海藻多糖标准溶液，使用L-岩藻糖标准溶液配置不同浓度溶液，在UV 490nm波长绘制L-岩藻糖吸光度标准曲线。取步骤(4)得到的纯化岩藻聚糖硫酸酯样品，加定量水溶解，在UV 490nm波长下测定溶液吸光度后计算样品中海藻多糖含量。
进一步地，所述步骤(1)中对墨角藻预先进行粉碎的粒度为50-70目。
进一步地，所述步骤(1)中采用浓度为5-10％的碳酸氢钙水溶液浸泡洗涤。
进一步地，所述步骤(1)中微波解冻温度<40℃。所述容器是平底的表面皿或塑料托盘。
进一步地，所述步骤(1)中沥干水分采用离心法，离心条件为3000-5000r/min，5-15min，
进一步地，所述步骤(2)中无水乙醇和墨角藻的重量比为20:1～60:1，离心时转速为8000r/min，离心10min，水浴温度为30-50℃。
进一步地，所述步骤(2-a)中岩藻黄素液浓缩液体积为离心液体积1/5，硅胶在120℃温度下加热1h，石油醚-乙酸乙酯混合液体积比为2:3。
进一步地，所述步骤(2-a)旋蒸的过程需要遮光。
进一步地，所述步骤(3)中滤渣与含钙离子溶液质量比为1:15，含钙离子溶液为含氯化钙2％以上的水溶液。
进一步地，所述步骤(3)中水浴温度为98℃，抽提时间为3h，离心条件为5000r/min，15min；分两次加入无水乙醇，第一次加入无水乙醇至溶液中的乙醇质量分数为20％，第二次加入无水乙醇至溶液中的乙醇质量分数为60％以上。
进一步地，所述步骤(4)中海藻多糖粗产品与去离子水质量比为1:5。
进一步地，所述步骤(4-a)加入无水乙醇至溶液中的乙醇重量含量为30％-70％。
进一步地，所述步骤(4-b)加入聚酰胺的重量为液体总重量的2％以上。
进一步地，，所述步骤(4-b)超滤截留分子量为3k。
与现有技术相比，本发明的优点和有益效果在于：1、充分利用原材料。本发明可以将墨角藻的全部藻体作为提取原料，避免现有技术中只采用孢子叶不采用全部藻体，造成原材料的大量浪费的情况；可以将墨角藻中的两种有益成分共同提取，其中岩藻黄质的得率为74％以上，且岩藻聚糖硫酸酯得率为85％以上；2、相比于单纯的提取岩藻黄质的方法而言，本方法不仅能经济快速地提取岩藻黄质，且提取过程避免对岩藻聚糖硫酸酯的破坏，可以继续充分提取岩藻聚糖硫酸酯，提高了原料的综合利用率和经济效益；3、本发明所提取得到的岩藻黄质和海藻多糖提取物纯度较高：本发明的硅胶活化及预处理方法使纯化后的岩藻黄质纯度不低于90％(HPLC 450nm波长检测)；乙醇沉淀、聚酰胺吸附联合超滤纯化岩藻多糖，多糖含量不低于95％(UV 490nm波长检测)，相比于现有提取技术有了明显的提高；4、本发明提取速度快、速率高、所使用的提取溶剂低毒经济环保，避免了现有技术大量采用树脂导致的环境污染，不仅有效降低生产成本增加企业利润，而且还同时得到了高品质岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯，从而满足不同的市场需求，具有较强的进步性。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
本发明实施例提供了一种从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法，包括以下步骤：
(1)破壁：取新鲜墨角藻包含有孢子叶的全部藻体，干燥后碎粒并采用50目筛子过筛，取通过筛孔的细粉用5-10％碳酸氢钙水溶液浸泡1小时洗涤去除表面的杂质，离心(5000r/min，10min)沥除墨角藻表面的水分，随后将墨角藻取出平铺于塑料托盘中，铺层厚度不超过3厘米，放入-20℃以下的冷柜中30分钟以上使藻体完全冰冻结冰；随后将塑料托盘送入微波炉采用低功率持续辐射约3分钟，至完全化冻并控制解冻温度不超过25℃。重复进行冰冻和微波解冻步骤2次，使细胞壁破裂，得到墨角藻粉末。
(2)提取岩藻黄质：称取步骤(1)墨角藻粉末于提取罐中，加入水乙醇，无水乙醇和墨角藻粉末的质量比为20：1；放置在恒温水浴锅中在40±5℃恒温加热，用电动搅拌器搅拌60分钟后，对混合物进行抽滤；抽滤后残留滤渣在同等条件下再加入无水乙醇(固液质量1：20)40±5℃水浴搅拌60分钟进行提取并抽滤一次；将两次抽滤提取的液相混合，放入离心机中离心(转速8000r/min，离心时间10min)；将离心得到的上清液进行旋蒸至离心液体积缩至原体积1/5以下，得到岩藻黄素液浓缩液。
(3)岩藻黄质提纯：取硅胶在120℃温度下加热1小时，然后按照质量比1：1的比例加入石油醚，随后静置24小时待其自然冷却；将处理后的硅胶加入层析柱内，放净石油醚之后将旋蒸浓缩的岩藻黄素液浓缩液倒入其中，用石油醚-乙酸乙酯混合液(体积比为石油醚：乙酸乙酯＝2：3)进行洗脱，收集岩藻黄质洗脱液。最后在遮光环境对岩藻黄质洗脱液进行旋蒸，溶剂充分挥发后冷冻干燥，得到纯化后的岩藻黄质。
(4)提取海藻多糖：在步骤(2)经过两次抽滤后得到的滤渣中加入2％氯化钙水溶液，滤渣与氯化钙水溶液质量比为1：10～15，98℃水浴加热并搅拌180分钟，随后静置冷却至室温，离心(5000r/min，15min)分离，取上清液，在其中加入无水乙醇至乙醇含量为40％以上，此时溶液产生絮状沉淀，再次进行离心(5000r/min，15min)，去除液相后得到的沉淀即为海藻多糖粗产品；
(5)海藻多糖粗产品提纯：在海藻多糖粗产品中加入去离子水溶解，海藻多糖粗产品与去离子水质量比为1：5，加入无水乙醇至乙醇含量达到30％，溶液中产生少许不溶物；离心(5000r/min，15min)去除沉淀，取上清液，在其中加入无水乙醇至乙醇含量不超过70％，溶液中有白色沉淀产生，离心后去除上清液，沉淀物用无水乙醚清洗，再经冷冻干燥得到的白色粉末即为海藻多糖；
(6)岩藻黄质纯度的测定：取10mg岩藻黄质标准品置于25ml容量瓶中配置岩藻黄质标准溶液，以90％甲醇(体积比，甲醇：水＝90：10)为溶剂，使用岩藻黄质标准溶液配置不同浓度溶液，在450nm波长下进行HPLC分析，绘制岩藻黄质标准曲线，取步骤(3)得到的样品，加定量溶剂溶解，在450nm波长下测定，计算样品中藻黄质纯度为90.6％。
(7)海藻多糖纯度的测定：利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，苯酚浓度5％，测试之前现配，硫酸浓度95％以上。取L-岩藻糖10mg为标准品置于25ml容量瓶中配置海藻多糖标准溶液，使用L-岩藻糖标准溶液配置不同浓度溶液，在UV 490nm波长绘制L-岩藻糖吸光度标准曲线。取步骤(5)得到的样品，加定量水溶解，在UV 490nm波长下测定溶液吸光度后计算样品中海藻多糖纯度为71.5％。
实施例二：
本发明实施例提供了一种从墨角藻中综合提取岩藻黄质和海藻多糖的方法，包括以下步骤：
(1)破壁：破壁：取新鲜墨角藻包含有孢子叶的全部藻体，干燥后粉碎并采用70目筛子过筛，取通过筛孔的细粉用5-10％碳酸氢钙水溶液浸泡30分钟洗涤去除表面的杂质，离心(5000r/min，15min)沥干墨角藻表面的水分，随后将墨角藻取出平铺于玻璃表面皿中，铺层厚度不超过2厘米，置于零度以下的环境使藻体冰冻至完全结冰；随后将玻璃表面皿送入微波炉采用1000瓦特的功率脉冲式辐射，每次微波辐射时间5秒，间隔10秒，2-3分钟后完成解冻。重复进行冰冻和微波解冻步骤2次，使细胞壁破裂，得到墨角藻粉末。
(2)提取岩藻黄质：称取步骤(1)墨角藻粉末于提取罐中，加入无水乙醇，无水乙醇和墨角藻粉末的质量比为30：1，放置在恒温水浴锅中在40±5℃恒温加热，用电动搅拌器进行搅拌后，对混合物进行抽滤，移除提取液备用，抽滤后残留滤渣在同等条件下再加入无水乙醇进行抽滤提取一次，将两次提取的提取液混合在一起，放入离心机中离心(8000r/min，10min)去除沉淀物，将离心液进行旋蒸至离心液原体积1/4以下，得到岩藻黄素液浓缩液。
(3)提纯岩藻黄质。向旋蒸后的岩藻黄素液浓缩液加入去离子水，将乙醇的浓度稀释到40-50％，在4-8℃静置20分钟后离心分离，大极性杂质随液相去除，得到沉淀物为岩藻黄质粗品；在遮光环境下将岩藻黄质粗品用高浓度乙醇溶解，随后向液相中加入3-5％(重量比)的苯乙烯-二乙烯苯聚合物树脂，充分搅拌使酯类等小极性杂质被树脂吸附去除；树脂吸附纯化后的液相浓缩至原体积的50％，4-8℃静置30分钟后离心(8000r/min，15min)分离，移除液相，所得固相物为岩藻黄质。
(4)提取海藻多糖：在步骤(2)经过两次抽滤的滤渣中加入5％氯化钙水溶液，滤渣与氯化钙水溶液质量比为1：10～15，98℃水浴加热并搅拌120分钟，随后静置冷却至室温，离心(5000r/min，15min)分离，取上清液，分两次加入无水乙醇，第一次加入无水乙醇至溶液中的乙醇质量分数为20％，静置5分钟后再次加入无水乙醇至溶液中的乙醇质量分数为60％以上；离心(5000r/min，15min)，分离去除液相后得到的沉淀即为海藻多糖粗产品。
(5)海藻多糖粗产品提纯：取步骤(4)得到的海藻多糖粗产品加入去离子水溶解，海藻多糖粗产品与去离子水质量比为1：5，向溶解后的海藻多糖粗产品溶液加入不少于2％(重量比)的聚酰胺-6，搅拌30分钟以吸附脱除蛋白质，随后以截留分子量为3k的超滤膜从液相中脱除残留的盐和小分子杂质；超滤后的液相加入无水乙醇至乙醇含量为70％，出现大量沉淀，离心(5000r/min，15min)分离，去除液相，得到的沉淀物以乙醚抽滤清洗3次，每次加入乙醚与沉淀物的质量比为6：1，清洗后得到的白色沉淀物冻干脱除溶剂，得到纯化岩藻聚糖硫酸酯。
(6)岩藻黄质含量的测定：以90％甲醇(体积比，甲醇：水＝90：10)为溶剂，取10mg岩藻黄质标准品置于25ml容量瓶中配置岩藻黄质标准溶液，使用岩藻黄质标准溶液配置不同浓度溶液，用HPLC在450nm波长下测定，绘制岩藻黄质标准曲线，取步骤(2)中样品，加定量甲醇溶解，在450nm波长下测定，样品中藻黄质纯度为85.4％；
(7)海藻多糖含量的测定：利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，苯酚浓度5％，测试之前现配，硫酸浓度95％以上。取L-岩藻糖10mg为标准品置于25ml容量瓶中配置海藻多糖标准溶液，使用L-岩藻糖标准溶液配置不同浓度溶液，在UV 490nm波长绘制L-岩藻糖吸光度标准曲线。取步骤(4)中样品，加定量水溶解，在UV 490nm波长下测定溶液吸光度后计算样品中海藻多糖纯度为96.5％。
对比例一：
本对比例提供了一种从墨角藻中提取岩藻黄质的方法。包括以下步骤：
(1)破壁：操作同实施例一的步骤(1)
(2)提取岩藻黄质：操作同实施例一的步骤(2)
(3)岩藻黄质提纯：与实施例一步骤(3)的区别是，硅胶未经高温活化及石油醚预处理。旋蒸浓缩的岩藻黄素液浓缩液倒入不作任何处理的硅胶柱中，用石油醚-乙酸乙酯混合液(体积比为石油醚：乙酸乙酯＝2：3)进行洗脱，收集岩藻黄质洗脱液。最后在遮光环境对岩藻黄质洗脱液进行旋蒸，溶剂充分挥发后冷冻干燥，得到纯化后的岩藻黄质。
(4)岩藻黄质纯度的测定：操作同实施例一步骤(6)，岩藻黄质的纯度为79.6％。
实验例。岩藻黄质提取率的测定。
实施例1或实施例2的步骤(1)得到的墨角藻粉末样品干燥后取10克，加入50毫升无水乙醇。
采用固相萃取仪，萃取温度不超过45℃，避光环境下对样品进行萃取2小时以上。去除固相物后的澄清萃取液称重。采用高效液相色谱法测定样品萃取液中岩藻黄质的含量，依公式I计算得到岩藻黄质的理论含量，依公式II计算得到岩藻黄质的得率(“得率”为实际产量/理论产量，“收率”为实际产量/原料质量)。
岩藻黄质理论含量＝100％*(萃取液中岩藻黄质含量*萃取液质量)/样品质量(式I)
得率＝100％*(产品中岩藻黄质含量*产品重量/原料质量)/岩藻黄质理论含量(式II)
表1岩藻黄质收率计算
实施例1
实施例2
萃取液中岩藻黄质含量(％)
0.06
0.06
萃取液质量(克)
35.2
34.5
产品中岩藻黄质含量(％)
90.6
85.4
产品质量(克)
3.0
1.8
原料质量(千克)
1.5
1.0
实际得率(％)
88.80
74.26
实施例一与对比例一的结果表明，本发明的硅胶活化及预处理方法可显著提高岩藻黄质的纯度；实施例一和实施例二的对比结果表明，采用乙醇沉淀、聚酰胺吸附联合超滤纯化的岩藻多糖，多糖含量更高。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
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