具体实施方式

以下，将详细描述本发明。

在一个方面，本说明书公开的技术提供一种用于改善皮肤透明度的组合物，其包含作为有效成分的野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供一种改善皮肤透明度的方法，其包括将改善皮肤透明度的有效剂量的野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物施用于所需受试者。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供用于改善皮肤透明度的野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物的用于改善皮肤透明度的非治疗性用途。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物在制备用于改善皮肤透明度的组合物中的用途。

在又另一个方面，本说明书公开的技术提供一种用于改善皮肤暗沉的组合物，其包含作为有效成分的野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供一种改善皮肤暗沉的方法，其包括将改善皮肤暗沉的有效剂量的野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物施用于所需受试者。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供用于改善皮肤暗沉的野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物的用于改善皮肤暗沉的非治疗性用途。

在另一个方面，本说明书公开的技术提供野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物在制备用于改善皮肤暗沉的组合物中的用途。

在一个示例性的实施例中，所述野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物或所述组合物可以以选自药物组合物、皮肤外用剂组合物、食品组合物或化妆品组合物中的一或多种形式施用于受试者。

在一个示例性的实施例中，所述野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子的混合提取物或所述组合物可施用于受试者的皮肤。

在一个示例性的实施例中，所述施用可为向受试者进行的给药或涂布。

在本说明书中，有效成分是指可单独表现出所需活性的成分或与自身无活性的载体等一起表现出所需活性的成分。

在本说明书中，皮肤透明度是指在皮肤表面上透射光与入射光的比率。入射光中一部分在皮肤表面处会被散射而散开，其余部分会透射至皮肤内部，透射的光(透射光)在皮肤内部被反射后会再次射出。皮肤透明度随着从皮肤内部反射而出的光(漫反射)的量增加而提高。

在一个示例性实施例中，所述皮肤透明度为皮肤表面上透射光与入射光的比率，所述透射光可通过从皮肤内部反射而出的皮肤内部漫反射(subsurface reflection)值来测定。

在一个示例性的实施例中，在皮肤表面以入射角60°及反射角60°的角度，对使用所述混合提取物或所述组合物之前及之后的皮肤内部漫反射(subsurface reflection)值进行测定时，使用所述混合提取物或所述组合物之后的皮肤内部漫反射值相对于使用之前的增加率可为2％或以上、3％或以上、4％或以上、5％或以上、或者6％或以上。

在另一个示例性的实施例中，在皮肤表面以入射角60°及反射角60°的角度，对使用所述混合提取物或所述组合物之前及之后的皮肤内部漫反射值进行测定时，使用所述混合提取物或所述组合物之后的皮肤内部漫反射值相对于使用之前的增加率可为2％至12％、2％至10％、或2％至8％。

在一个示例性的实施例中，散射皮肤内部漫反射值可使用Radioscan^TM(Truesystem，韩国)来测定。

在本说明书中，皮肤暗沉可指以下状态：因皮肤的亮度及色度降级而导致的肤色变暗，或因局部呈现暗且深的色泽而导致的肤色不均匀。皮肤暗沉是由各种复杂因素诸如生理因素、遗传因素、环境因素等引起的。

在一个示例性的实施例中，所述混合提取物或所述组合物在涂布于皮肤时，可抑制在340nm的激发光(excitation)及440nm的发射光(emission)的萤光测定条件下呈现自体荧光(autofluorescence)的物质的生成或减少所述物质。

根据本说明书的混合提取物或包含所述混合提取物的组合物具有净化暗沉(dull)皮肤并提高皮肤透明度的效果。

在一个示例性的实施例中，所述混合提取物或所述组合物的使用可以是将混合提取物或组合物涂布于皮肤上并持续2周或更久、4周或更久、或4周至8周。

在一个示例性的实施例中，所述混合提取物或所述组合物的使用可以是每天两次将混合提取物或组合物涂布于皮肤上。

在本说明书中，混合提取物可指从一种提取原料中提取的提取物的混合物、将一或多种提取原料进行混合并提取的提取物的混合物、或将五种提取原料进行混合并提取的提取物。所述提取原料为野蔷薇果、黑芝麻、梅果、榅桲及松子。

在一个示例性的实施例中，所述野蔷薇果及黑芝麻可为发芽的野蔷薇果及发芽的黑芝麻。

所述野蔷薇果是指通常生长于山里的蔷薇科野蔷薇(Rosa multifloraThunberg)的果实。

在一个示例性的实施例中，从改善皮肤透明度及改善皮肤暗沉的功效方面考虑，所述发芽的野蔷薇果、发芽的黑芝麻、梅果、榅桲及松子优选以10至30:20至40:10至25:15至30:15至30的重量比进行混合并提取。

在一个示例性的实施例中，所述提取物不仅是指粗提取物，还指粗提取物的加工物，例如包括通过干燥、浓缩、分馏、纯化、发酵、悬浮等额外加工获得的所有形式，且所述额外加工可包括一种或多种加工。例如，分馏的提取物包括通过将所述粗提取物悬浮于某种溶剂后与极性不同的溶剂混合并静置而获得的分馏物，及用连续溶剂对所述粗提取物进行分馏而获得的分馏物。此外，本说明书的提取物还包括通过以下额外进行的各种纯化方法获得的分馏物：诸如使用具有一定的分子量截留值的超滤膜进行的分离、通过各种层析法(根据尺寸、电荷、疏水性或两亲性进行分离进行分离)进行的分离。

在一个示例性的实施例中，制备提取物的方法可根据常规方法采用任何方式，考虑到有效成分的提取程度或保存程度，例如可采用热水提取法、浸渍提取法、蒸汽蒸馏法、冷提取法、回流冷却提取法、超声波提取法、超临界提取法、亚临界提取法、溶剂提取法、溶析法、压缩法、高温提取法、高压提取法、利用包含XAD及HP-20的吸附树脂的提取法、或利用微生物的发酵或天然发酵代谢。提取次数可为1至5次，并且可在提取后额外进行诸如减压蒸馏、减压浓缩、冷冻干燥或喷雾干燥等方法。

在一个示例性的实施例中，所述提取物可用选自水、具有1至4个碳原子的无水或水合低级醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等)、乙烯、丙酮、己烷、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷、二甲基亚砜(DMSO)、甘油、丁二醇、丙二醇、二丙二醇(dipropylene glycol)、二氯甲烷、二乙醚、及它们的混合物中的一种或多种溶剂进行提取。

在一个示例性的实施例中，所述提取物可为选自水及具有1至4个碳原子的低级醇中的一种或多种溶剂的提取物。

在一个示例性的实施例中，所述提取物可为乙醇提取物。所述乙醇提取物是指使用仅由乙醇组成的提取溶剂、或混合有水与乙醇的提取溶剂进行提取的提取物。

在一个示例性的实施例中，所述提取物可通过以下步骤来制备：将野蔷薇果及黑芝麻浸渍于水中使其发芽；以及将发芽的野蔷薇果及发芽的黑芝麻与梅果、榅桲及松子进行混合并提取。

在一个示例性的实施例中，所述浸渍可进行2小时至20小时。

在一个示例性的实施例中，所述发芽可在室温下，例如15℃至25℃或20℃至25℃下进行。

在一个示例性的实施例中，所述发芽可进行30小时至60小时。

在一个示例性的实施例中，所述提取物可通过浓度为30％(v/v)至80％(v/v)的乙醇溶剂来提取。在另一个示例性实施例中，所述提取物可通过浓度(v/v)为30％或以上、35％或以上、40％或以上、45％或以上、50％或以上、55％或以上、60％或以上、65％或以上、70％或以上、或75％或以上，及80％或以下、75％或以下、70％或以下、65％或以下、60％或以下、55％或以下、50％或以下、45％或以下、40％或以下、或35％或以下的乙醇溶剂来提取。

在一个示例性的实施例中，所述提取物可在15℃至85℃下进行提取。在另一个示例性实施例中，所述提取物可在15℃或以上、25℃或以上、35℃或以上、45℃或以上、55℃或以上、65℃或以上、或75℃或以上，及85℃或以下、75℃或以下、65℃或以下、55℃或以下、45℃或以下、35℃或以下、或25℃或以下的温度下进行提取。

在一个示例性实施例中，所述提取时间可为1小时或以上、或1小时至24小时。

在一个示例性的实施例中，所述组合物可包含0.001重量％至20重量％的所述混合提取物。在另一个示例性实施例中，所述组合物可通过包含0.001重量％或以上、0.005重量％或以上、0.01重量％或以上、0.05重量％或以上、0.1重量％或以上、0.5重量％或以上、1重量％或以上、1.5重量％或以上、2重量％或以上、2.5重量％或以上、3重量％或以上、3.5重量％或以上、4重量％或以上、4.5重量％或以上、或5重量％或以上，及20重量％或以下、15重量％或以下、10重量％或以下、5重量％或以下、或1重量％或以下的所述混合提取物，从而提供优异的改善皮肤透明度及暗沉的效果。

在一个示例性的实施例中，所述组合物中所包含的所述混合提取物的浓度可为10ppm、15ppm、20ppm、25ppm、30ppm、35ppm、40ppm、45ppm、或50ppm或以上。所述组合物中所包含的所述混合提取物的浓度可优选为25ppm、30ppm、35ppm、40ppm、45ppm、或50ppm或以上。

在一个示例性的实施例中，所述组合物可为药物组合物。

在一个示例性的实施例中，所述药物组合物的剂型可为溶液、悬浮剂、乳液、凝胶剂、滴剂、栓剂、霜剂、软膏剂、贴剂、垫片剂或喷雾剂，但不限于此。按照本领域的常规方法，可容易地制备出所述剂型，并可以进一步使用赋形剂、可湿性粉剂、乳化剂、悬浮剂、用于调节渗透压的盐或缓冲剂、着色剂、香料、稳定剂、防腐剂、保存剂或其他商用辅助剂。

此外，所述药物组合物可根据所需方法进行口服给药、肠胃外给药、直肠给药、局部给药、经皮给药、静脉内给药、肌内给药、腹腔内给药、皮下给药等，并且药物组合物的有效剂量将根据待给药的受试者的年龄、性别、体重、病理状态及其严重程度、给药途径或处方者的判断而变化。基于这些因素来决定适当剂量属于本领域技术人员的水平内，其一天的给药剂量例如可为0.001mg/kg/天至100mg/kg/天，更具体地可为0.5mg/kg/天至50mg/kg/天，但不限于此。

在一个示例性实施例中，所述组合物可为皮肤外用剂组合物，并且所述皮肤外用制剂为可包括涂抹于皮肤外部的任何物质的总称，其中可包括各种剂型的医药品。例如，所述组合物可为软膏、乳液、凝胶、霜、喷雾、混悬剂、乳剂、贴剂等剂型，但不限于此。

在一个示例性的实施例中，除了包含根据本说明书的有效成分之外，所述皮肤外用剂组合物可进一步包含防腐剂、稳定剂、可湿性粉剂或乳化剂、如盐和/或缓冲剂等的用于调节渗透压的药物辅助剂、以及其它对治疗有用的物质。

在一个示例性的实施例中，所述组合物可为食品组合物。

在本说明书中，食品组合物可提供各种形式的食品添加剂或功能性食品。具体地，可以加工成包含所述组合物的浸出茶、液体茶、饮料、发酵乳、奶酪、酸奶、果汁、益生菌或保健食品等，并且可以以各种食品添加剂的形式使用。

此外，在不损害所需的有效成分的主要效果的范围内，所述食品组合物还可以包含对主要效果产生协同效果的其他成分。例如，可以进一步包含香料、色素、杀菌剂、抗氧化剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、无机盐类、乳化剂或合成高分子物质等的添加剂，以改善物理性能。此外，可以进一步包含水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖或海藻提取物等的辅助成分。本领域技术人员可根据剂型或使用目的毫无困难地适当选择和配制上述成分，并可在不损害本说明书的目的及效果的范围内选择其的添加量。例如，基于组合物的总重量，上述成分的添加量可为0.001重量％至5重量％、或0.01重量％至3重量％。

在一个示例性的实施例中，所述组合物可为化妆品组合物。

除了包含所述混合提取物以外，所述化妆品组合物还可以包含功能性添加剂和通常化妆品组合物中所含的成分。所述功能性添加剂可包括选自水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖、鞘脂和海藻提取物中的成分。除此之外，包含的调配成分可为油脂成分、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机颜料和无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、色素、香料、血液循环促进剂、冷却剂、止汗剂、纯净水等。

所述化妆品组合物的剂型没有特别的限定，可根据目的适当进行选择。例如，可制成选自润日水、柔肤、化妆水、收敛水、乳液、滋润乳液、保湿乳液、营养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华素、营养精华、面膜、香皂、洁面泡沫、洁面乳、洁面霜、身体乳和沐浴露中的一种或多种，并且不限于此。

当本发明的剂型为糊剂、霜剂或凝胶剂时，作为载体成分可使用动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等。

当本发明的剂型为粉末或喷雾剂时，作为载体成分可使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末，尤其，当剂型为喷雾剂时，可进一步包含如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚的推进剂。

当本发明的剂型为溶液或乳浊液时，作为载体成分使用溶剂、溶剂化剂或乳浊化剂，例如为水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或脱水山梨糖醇的脂肪酸酯。

当本发明的剂型为悬浮液时，作为载体成分可使用如水、乙醇或丙二醇的液体稀释剂、如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯的悬浮剂、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄蓍胶等。

当根据本发明的剂型为含有表面活性剂的洁面剂时，作为载体成分可使用脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等。

实施例

以下，将参考实施例对本发明进行更详细的描述。这些实施例仅作为说明本发明的示例，本领域技术人员应理解的是，这些实施例并不限制本发明的范围。

【实施例1】混合提取物的制备

将野蔷薇果及黑芝麻分别浸渍于水中，然后从水中取出并在室温下使其发芽，然后进行干燥。干燥之后，将发芽的野蔷薇果及发芽的黑芝麻与梅果、榅桲及松子进行混合，然后用70％(v/v)的乙醇作为提取溶剂在50℃至55℃下进行提取，并进行过滤及浓缩，以制备混合提取物(参考图1)。

【实验实施例1】细胞毒性评估

对人类成纤维细胞进行CCK-8分析，以评估所述实施例1中制备的混合提取物的细胞毒性。根据常规方法进行CCK-8分析。

每组以n＝4进行实验，在37℃、5％CO₂培养箱(incubator)条件下，在含有10％胎牛血清(FBS，Gibco公司)的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)培养基中对人类成纤维细胞(Human Dermal Fibroblast neonatal：HDFn)进行培养。

用浓度为6ppm至100ppm的所述实施例1的混合提取物对成纤维细胞进行18小时的处理，将未经混合提取物处理的无处理组作为对照组(Control:CON)，以比较细胞存活率并示于图2。其结果，在用混合提取物进行处理的所有浓度下均没有显示出细胞毒性，因此确认到所述实施例1的混合提取物没有细胞毒性。

【实验实施例2】改善皮肤暗沉的功效的评估

将具有改善色素沉着功效氨基胍(Aminoguanidine:AG)用作阳性对照组，以评估所述实施例1的混合提取物的改善皮肤暗沉的功效。根据专利文献JP2004-509912A，已知氨基胍为改善色素沉着、皮肤暗沉的有效成分，并将所述文献的内容以引用的方式全部并入本申请中。

在48孔板中制备添加有成纤维细胞(Human Dermal Fibroblast neonatal:HDFn)的胶原基质，用样本处理后，在胶原基质中对成纤维细胞进行7天的培养(培养条件；37℃、5％CO₂的培养箱)。样本处理分别为用30mM的核糖(Sigma aldrich公司，目录编号为R9629)单独处理的组、用30mM的核糖及20mM的氨基胍(Sigmaaldrich公司，目录编号为A7009)处理的组、以及用30mM的核糖及12ppm至50ppm的所述实施例1的混合提取物处理的组。用样本对成纤维细胞处理7天之后，在因氨基胍(其具有改善色素沉着功效)的处理而减少的物质产生特异性反应的特定波长下测定自体荧光值，以比较改善皮肤暗沉的功效。通过使用微孔板读数仪(BioTek产品)在激发光(excitation)为340nm及发射光(emission)为440nm的萤光测定条件下测定所述自体荧光(autofluorescence)。

每组以n＝6进行实验，如图3所示，用不同图形示出各个实验结果，并且用实线(-)表示每组平均值。

用核糖(Ribose:Rib)作为刺激源进行处理并在胶原基质中对成纤维细胞进行培养，其结果，确认到核糖使得在340nm的激发光及440nm的发射光下呈现自体荧光的物质的生成增加。具体而言，与无处理组(对照组：CON)相比，核糖的自体荧光强度增加了约132％。此外，具有改善色素沉着功效的氨基胍使得因所述核糖增加的自体荧光强度降低了约54.0％。由此，在本说明书中，将在所述340nm的激发光和440nm的发射光下呈现自体荧光的物质称作“皮肤褐变成分”。

如图3所示，确认到在用所述实施例1的混合提取物对成纤维细胞进行处理时，因核糖增加的自体荧光强度也得到降低。由此可知，与氨基胍相同地，所述实施例1的混合提取物具有抑制皮肤褐变成分生成并改善皮肤暗沉的功效。此外，当用浓度大于25ppm的所述实施例1的混合提取物对成纤维细胞进行处理时，皮肤褐变成分的减少率提高，从而证实了在一定浓度以上时改善皮肤暗沉的效果优异。当用浓度为50ppm的混合提取物对成纤维细胞进行处理时，相较于用核糖单独处理的组，自体荧光强度降低了约29.4％。

【实验实施例3】改善皮肤透明度的功效的评估

按照表1的组成制备包含所述实施例1的混合提取物的实验产品，并如下所述评估改善皮肤透明度的功效。

【表1】

让年龄在30至50岁之间的21名女性每天两次将所述实验产品涂布于整个面部，持续8周。此外，分别在使用产品前、使用4周后、及使用8周后，通过使用Radioscan^TM(Truesystem公司，韩国)在相同环境条件下以入射角60°及反射角60°的角度对右脸颊正面部位的皮肤透明度进行测定，并通过漫反射(subsurface reflection)值进行分析。当光线入射至皮肤时，具有高透明度的皮肤在皮肤内部的光反射(漫反射)会比较高。

通过皮肤内部漫反射值来分析8周期间使用实验产品后的皮肤透明度变化，并示于表2及图4中。由其结果可知，漫反射平均值在使用实验产品之后显著增大，因此皮肤透明度在4周后及8周后均得到提高。从而证实根据本说明书的混合提取物具有改善皮肤透明度的显著效果。

【表2】

(*,p<0.05；***,p<0.001vs.使用前)

以下将描述根据本说明书的一个方面的组合物的剂型实施例，但是也可以将其应用于各种其他剂型，其仅旨在详细地描述本发明，而并非限制本发明。

【剂型实施例1】化妆水

根据常规方法，按照下表3中所示的组成制备化妆水。

【表3】

【剂型实施例2】乳液

根据常规方法，按照下表4中所示的组成制备乳液。

【表4】

【剂型实施例3】精华素

根据常规方法，按照下表5中所示的组成制备精华素。

【表5】

【剂型实施例4】霜

根据常规方法，按照下表6中所示的组成制备霜。

【表6】

【剂型实施例5】凝胶

根据常规方法，按照下表7中所示的组成制备凝胶。

【表7】

【剂型实施例6】面膜

根据常规方法，按照下表8中所示的组成制备面膜。

【表8】

如上所述，已详细描述了本发明内容的特定部分，本领域技术人员应理解的是，这些具体的技术仅为优选实施例，本发明的范围不限于此。因此，本发明的保护范围将由所附权利要求书及其等同物限定。