阅读说明：本技术 含有难溶性抗肿瘤活性剂的药物组合物及其制备方法 (Pharmaceutical composition containing insoluble antitumor active agent and preparation method thereof ) 是由 吴翠栓 程晓波 王胜男 李思明 林家亮 孙亚美 张强 于 2021-01-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及含有难溶性抗肿瘤活性剂的组合物及其制备方法。本发明的药物组合物包含难溶性抗肿瘤活性剂、稳定剂和冻干保护剂,其适用于癌症术后创面给药优选淋洒给药,用于术后癌症的治疗,减少术后肿瘤复发、转移和提高患者生存率。(The present invention relates to a composition containing a poorly soluble antitumor active agent and a method for preparing the same. The pharmaceutical composition comprises the insoluble antitumor active agent, the stabilizing agent and the freeze-drying protective agent, is suitable for the administration of the wound surface after the operation of cancer, preferably for the administration of shower, is used for treating the cancer after the operation, reduces the recurrence and the metastasis of the tumor after the operation and improves the survival rate of patients.)

具体实施方式

实施例

以下实施例用于对本发明进行举例说明，但不以任何方式限制所附的权利要求所定义的范围。

实施例中所用的缩略语的含义如表1所示。

表1—缩略语含义

实施例1：紫杉醇纳米混悬剂稳定剂的筛选

1、处方1～5:稳定剂种类的筛选

表2—包含不同稳定剂(F68、Tween20、Tween80、ELP或HS15)的处方

组分	处方1	处方2	处方3	处方4	处方5
						紫杉醇	10g	10g	10g	10g	10g
F68	3g	--	--	--	--
						Tween20	--	3g	--	--	--
Tween80	--	--	3g	--	--
						ELP	--	--	--	3g	--
HS15	--	--	--	--	3g
						蔗糖	100g	100g	100g	100g	100g
总计	113g	113g	113g	113g	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅拌使稳定剂完全溶解；

(2)紫杉醇原料药混悬液配制：称取紫杉醇原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得紫杉醇混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得紫杉醇冻干混悬剂；

处方1-5所得的紫杉醇制剂均为冻干制剂，冻干后所得粉饼均完整未见塌陷；将所得冻干制剂(1支2ml)用4ml 5％葡萄糖注射液复溶后，用激光粒度仪(美国PSS,型号NicompZ3000)测定其平均粒径，并考察其稳定性，结果见表3。

表3—用不同稳定剂制备的紫杉醇冻干混悬剂复溶后形成的混悬液的粒径及稳定性

注：“--”表示因沉淀未测量粒径；“MD”表示平均粒径(Mean Diameter)，单位是nm；“PDI”表示粒径分散系数(Polydispersity index)。

实验结果表明，稳定剂为Tween20和F68时，对应的紫杉醇混悬液粒径和分散系数均较大，且稳定性差，复溶后3min左右就会有大量沉淀，故未再测定；而当稳定剂种类为纯的聚氧乙烯35蓖麻油、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯、聚山梨酯80时，对应的紫杉醇混悬液粒径均一，室温放置8h稳定性良好，粒径未发生显著性变化且未见沉淀。

2、处方6～8:稳定剂用量的筛选

表4—不同用量稳定剂的处方

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)紫杉醇原料药混悬液配制：称取紫杉醇原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得紫杉醇混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得紫杉醇冻干混悬剂；

处方6-11所得的紫杉醇制剂均为冻干制剂，冻干后所得粉饼均完整未见塌陷；将所得冻干制剂(1支用4ml5％葡萄糖注射液复溶后，用激光粒度仪(美国PSS,型号NicompZ3000)测定其平均粒径，并考察其稳定性，结果见表5。

表5—不同稳定剂用量制备的紫杉醇冻干混悬剂复溶后形成的混悬液的粒径及稳定性

注：“--”表示因沉淀未测量粒径；“MD”表示平均粒径(Mean Diameter)，单位是nm；“PDI”表示粒径分散系数(Polydispersity index)。

实施例2：紫杉醇纳米混悬剂冻干保护剂剂的筛选

1、处方3、处方12～14:冻干保护剂种类的筛选

表6—包含不同冻干保护剂的处方

组分	处方3	处方12	处方13	处方14
					紫杉醇	10g	10g	10g	10g
Tween80	3g	3g	3g	3g
					蔗糖	100g	--	--	--
海藻糖	--	100g	--	--
					甘露醇	--	--	100g	--
葡萄糖	--	--	--	100g
					总计	113g	113g	113g	113g

工艺：同实施例1

处方3及处方12～14所得的紫杉醇制剂均为冻干制剂，处方3、处方12及处方13冻干后所得粉饼均完整未见塌陷；处方14对应的冻干制剂全部塌陷；将处方3及处方12～14所得冻干制剂(1支)用4ml 5％葡萄糖注射液复溶后，用激光粒度仪(美国PSS,型号NicompZ3000)测定其平均粒径，并考察其稳定性，结果见表7。

表7—用不同冻干保护剂制备的紫杉醇冻干混悬剂复溶后形成的混悬液的粒径及稳定性

注：“--”表示因沉淀未测量粒径；“MD”表示平均粒径(Mean Diameter)，单位是nm；“PDI”表示粒径分散系数(Polydispersity index)。

实验结果表明，只有冻干保护剂为蔗糖时，所得制剂粒径均一且稳定性良好。对应的紫杉醇混悬液粒径均一，室温放置8h稳定性良好，粒径未发生显著性变化且未见沉淀。

2、处方6～8:冻干保护剂用量的筛选

表8—不同用量冻干保护剂的处方

工艺：同实施例1

处方3及处方16～19所得的紫杉醇制剂均为冻干制剂，冻干后所得粉饼均完整未见塌陷；而处方15对应的冻干制剂出现塌陷，粉饼不完整等问题；故不再对其进行复溶后的粒径测定及稳定性考察；

将处方3及处方16～19所得冻干制剂(1支2ml)用4ml 5％葡萄糖注射液复溶后，用激光粒度仪(美国PSS,型号NicompZ3000)测定其平均粒径，并考察其稳定性，结果见表9。

表9—不同冻干保护剂用量制备的紫杉醇冻干混悬剂复溶后形成的混悬液的粒径及稳定性

注：“--”表示因沉淀未测量粒径；“MD”表示平均粒径(Mean Diameter)，单位是nm；“PDI”表示粒径分散系数(Polydispersity index)。

实验结果表明，只有紫杉醇与冻干保护剂的重量比为10:80～10:300时，所得制剂粒径均一且稳定性良好。对应的紫杉醇混悬液粒径均一，室温放置8h稳定性良好，粒径未发生显著性变化且未见沉淀。

实施例3：含有难溶性抗肿瘤活性剂的组合物的制备

冻干制剂1

组分	用量
		紫杉醇	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)紫杉醇原料药混悬液配制：称取紫杉醇原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得紫杉醇混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得紫杉醇冻干混悬剂；

冻干制剂2

组分	用量
		多西他赛	10g
HS15	5g
		蔗糖	200g
总计	215g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)多西他赛原料药混悬液配制：称取多西他赛原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，50℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：50％(V/V)；转速：3500rpm；进水温度：7℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得多西他赛混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得多西他赛冻干混悬剂；

冻干制剂3

组分	用量
		紫杉醇	10g
Tween80	2g
		蔗糖	100g
总计	112g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)紫杉醇原料药混悬液配制：称取紫杉醇原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.2mm；装填量：60％(V/V)；转速：8000rpm；进水温度：4℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨3h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得紫杉醇混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得紫杉醇冻干混悬剂；

冻干制剂4

组分	用量
		紫杉醇	10g
Tween80	8g
		蔗糖	80g
总计	98g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)紫杉醇原料药混悬液配制：称取紫杉醇原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，80℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.5mm；装填量：50％(V/V)；转速：3500rpm；进水温度：15℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨4h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得紫杉醇混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得紫杉醇冻干混悬剂；

冻干制剂5

组分	用量
		紫杉醇	10g
Tween80	6g
		蔗糖	300g
总计	316g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)紫杉醇原料药混悬液配制：称取紫杉醇原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：5000rpm；进水温度：7℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨1.2h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得紫杉醇混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得紫杉醇冻干混悬剂；

冻干制剂6

组分	用量
		紫杉醇	10g
HS15	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)紫杉醇原料药混悬液配制：称取紫杉醇原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得紫杉醇混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得紫杉醇冻干混悬剂；

冻干制剂7

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)多西他赛原料药混悬液配制：称取多西他赛原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，50℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：50％(V/V)；转速：3500rpm；进水温度：7℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得多西他赛混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得多西他赛冻干混悬剂；

冻干制剂8

组分	用量
		卡巴他赛	10g
ELP	1g
		蔗糖	100g
总计	111g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)卡巴他赛原料药混悬液配制：称取卡巴他赛原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.2mm；装填量：60％(V/V)；转速：8000rpm；进水温度：4℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨3h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得卡巴他赛混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得卡巴他赛冻干混悬剂；

冻干制剂9

组分	用量
		依托泊苷	10g
Tween80	8g
		蔗糖	100g
总计	118g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)依托泊苷原料药混悬液配制：称取依托泊苷原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，80℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.5mm；装填量：50％(V/V)；转速：3500rpm；进水温度：15℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨4h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得依托泊苷混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得依托泊苷冻干混悬剂；

冻干制剂10

组分	用量
		奥沙利铂	10g
Tween80	6g
		蔗糖	300g
总计	316g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)奥沙利铂原料药混悬液配制：称取奥沙利铂原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：5000rpm；进水温度：7℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨1.2h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得奥沙利铂混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得奥沙利铂冻干混悬剂；

冻干制剂11

组分	用量
		吉非替尼	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)吉非替尼原料药混悬液配制：称取吉非替尼原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得吉非替尼混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得吉非替尼冻干混悬剂；

冻干制剂12

组分	用量
		羟基喜树碱	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)羟基喜树碱原料药混悬液配制：称取羟基喜树碱原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得羟基喜树碱混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得羟基喜树碱冻干混悬剂；

冻干制剂13

组分	用量
		顺铂	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)顺铂原料药混悬液配制：称取顺铂原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得顺铂混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得顺铂冻干混悬剂；

冻干制剂14

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)依托泊苷原料药混悬液配制：称取依托泊苷原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得依托泊苷混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得依托泊苷冻干混悬剂；

冻干制剂15

组分	用量
		替尼泊苷	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)替尼泊苷原料药混悬液配制：称取替尼泊苷原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得替尼泊苷混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得替尼泊苷冻干混悬剂；

冻干制剂16

组分	用量
		卡培他滨	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)卡培他滨原料药混悬液配制：称取卡培他滨原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得卡培他滨混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得卡培他滨冻干混悬剂；

冻干制剂17

组分	用量
		卡铂	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)卡铂原料药混悬液配制：称取卡铂原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得卡铂混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得卡铂冻干混悬剂；

冻干制剂18

组分	用量
		长春新碱	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)长春新碱原料药混悬液配制：称取长春新碱原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得长春新碱混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得长春新碱冻干混悬剂；

冻干制剂19

组分	用量
		吉非替尼	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)吉非替尼原料药混悬液配制：称取吉非替尼原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得吉非替尼混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得吉非替尼冻干混悬剂；

冻干制剂20

组分	用量
		长春碱	10g
Tween80	3g
		蔗糖	100g
总计	113g

工艺：

(1)稳定剂溶液配制：称取处方量的稳定剂到500mL烧杯中，另称取注射用水100g加入烧杯中，水浴加热搅使稳定剂完全溶解；

(2)长春碱原料药混悬液配制：称取长春碱原料药10g加入到(1)所得的稳定剂溶液中，60℃水浴加热搅拌至体系呈均一混悬液；

(3)湿法研磨：按照顺序，安装湿法研磨机(研磨珠直径：0.3mm；装填量：55％(V/V)；转速：4000rpm；进水温度：8℃)。从进样漏斗将(2)所得混悬液倒入研磨机中，开机研磨2.5h，即得原液。

(4)冷冻干燥：将(3)所得原液用注射用水稀释50倍后，向其中加入处方量的蔗糖，搅拌溶解后，得长春碱混悬液，将其分装于7ml西林瓶中，每瓶2ml，放入冻干机中冻干，得长春碱冻干混悬剂；

粒径测定：

实施例3中冻干制剂1～20对应的制剂(1支用4ml 5％葡萄糖注射液复溶后，用激光粒度仪(美国PSS,型号NicompZ3000)测定其平均粒径，结果见下表。

实施例4：本发明的组合物的稳定性考察

按照《中国药典》2015版四部通则9001中关于原料药与药物制剂稳定性试验指导原则，按市售包装，对实施例3中的冻干制剂1，在温度25℃±2℃、相对湿度60％±5％的条件下放置，于第3、6、12、24个月末取样，对相应指标进行考察。

1、样品信息：按照制备实施例3中的冻干制剂1的方法制备的紫杉醇冻干制剂，批号02170901

2、稳定性试验放样条件：

3、分析方法

(1)性状

检查方法：目测。

(2)pH值

将冻干制剂(1支2ml)用4ml 5％葡萄糖注射液复溶后，用激光粒度仪(美国PSS,型号NicompZ3000)测定其pH值；pH值应为4.0～7.0之间

(3)有关物质

检测方法：HPLC法

实验条件：

色谱柱：C18柱(型号：资生堂C18，长15cm，内径4.6mm，填料粒径3.0μm)

柱温：35℃

检测器：UV检测器(检测波长227nm)

流动相：流动相A：水-乙腈(3:2)，流动相B：乙腈；按下表进行线性梯度洗脱：

流速：1.2ml/min

进样体积：10μL

运行时间：75min

系统适应性：紫杉醇杂质e与紫杉醇之间的分离度应大于1.2；重复进样的主峰及各已知杂质峰峰面积的相对标准偏差应不大于2.0％；对照溶液主峰信噪比应大于10。

具体实验操作：

取本品1支，用乙醇-水(3:2)溶解并稀释成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用乙醇-水(3:2)稀释成每1ml中约含12μg溶液，作为对照溶液。另取紫杉醇、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e与杂质f对照品适量，用乙腈溶解并用流动相A稀释制成每1ml含紫杉醇为1.2mg、杂质a为9μg、杂质b为4.5μg、杂质c为9μg、杂质d为6μg、杂质e为6μg与杂质f为7μg的溶液，作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法(附录V D)试验，用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂(色谱柱为150*4.6mm，3.0μm)；以水-乙腈(3:2)为流动相A，以乙腈为为流动相B；流速为1.2ml/min；柱温为35℃；按下表进行梯度洗脱。分别精密量取对照品溶液、系统适用性溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。紫杉醇峰与紫杉醇杂质e峰之间的分离度应大于1.2，重复进样的主峰及各已知杂质峰峰面积的相对标准偏差应不大于2.0％，对照溶液主峰信噪比应大于10。

精密量取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％～20％，精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中，除空白溶剂峰外如有杂质峰(最小峰面积1000counts)，按加校正因子的1％自身对照法计算杂质含量，其杂质限度见下表。

计算公式：

各已知杂质的量(％)＝(Ai/Ar)×(1/Fi)×100％

其他单一杂质(％)＝A_单杂/Ar×100％；

杂质总量(％)＝∑i/Ar×100％

备注：Ai：供试品溶液中各已知杂质的峰面积；

Ar：对照品溶液的主峰面积；

Fi：各已知杂质的校正因子；

A_单杂：供试品溶液中单个最大的杂质峰面积(除已知杂质峰外)；

A_总杂：供试品溶液中各杂质峰面积之和。

(4)粒径

动态光散射，将冻干制剂(1支2ml)用4ml 5％葡萄糖注射液复溶后，用激光粒度仪(美国PSS,型号NicompZ3000)测定其平均粒径和多分散系数(PDI)；

(5)水分

ChP2015版四部通则0861含水分不得过5％(w/w)

(6)含量

检测方法：HPLC法

实验条件：

色谱柱：5-氟苯基柱(型号：FluoroSep-RP Phenyl，长25cm，内径4.0mm，填料粒径5μm)

柱温：室温

检测器：UV检测器(检测波长227nm)

流动相：水-乙腈(11:9)

流速：1.5ml/min

进样体积：10μL

运行时间：15min

系统适应性：取有关物质项下系统适用性溶液10μl注入液相色谱仪，紫杉醇与杂质峰的分离度大于1.0，重复进样的相对标准偏差不超过1.5％。

具体实验操作：

用5-氟苯基柱(型号：FluoroSep-RP Phenyl，长25cm，内径4.0mm，填料粒径5μm)为分析柱，水-乙腈(11:9)为流动相，检测波长为227nm，流速为1.5ml/min，重复进样的主峰保留时间的相对标准偏差不超过1.5％。

取有关物质项下系统适用性溶液10μL注入液相色谱仪，紫杉醇与杂质峰的分离度应大于1.0。取本品1支，用乙醇-水(3:2)溶解并稀释成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另取紫杉醇对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

计算公式：

注：Wr：对照品称样量(mg)；

P：制剂的标示量(mg)；

Ar：对照品主峰面积；

As：供试品主峰面积；

Dr：对照品的稀释体积；

Ds：供试品的稀释体积；

Cr：对照品纯度。

4、实验结果

表10实施例3中的冻干制剂1长期试验(25℃±2℃RH60％±5％)考察结果(批号：02170901)

以上实验结果显示，冻干制剂1在温度25℃±2℃、相对湿度60％±5％的条件下放置24个月，各项指标均符合要求，稳定性良好。

实验证明，实施例3的冻干制剂2-6与冻干制剂1具有类似的稳定性。

发明人还将实施例3中部分冻干制剂(冻干制剂7、8、10、12、15)进行了影响因素考察，考察条件为40℃，取样时间为0、5、10、30天，考察指标为含量，结果如下表所示。

表11实施例3中的部分冻干制剂40℃影响因素试验考察结果

制剂	0天	5天	10天	30天
					冻干制剂7	100％	100.2％	99.5％	97.8％
冻干制剂8	100％	100.3％	101.2％	96.3％
					冻干制剂10	100％	98.6％	97.9％	98.5％
冻干制剂12	100％	99.6％	97.7％	96.9％
					冻干制剂15	100％	100.6％	101.7％	98.5％

由上述结果可知，实施例3的冻干制剂化学稳定性良好。

实施例5：本发明的紫杉醇混悬剂创面淋洒给药的动物体内药效学研究

1细胞株与实验动物

人源卵巢癌SK-OV-3细胞，购于中国医学科学院基础医学研究所。

Balb/c裸鼠，雌性，6～8周龄，购于北京维通利华实验动物中心，研究前在SPF级条件下饲养一周，小鼠能自由进食和水。

2实验方法

2.1细胞培养与接种

细胞完全培养液的配制：取MCCOY’S 5A培养液一瓶，倒出50ml于离心管中封存备用，向剩余培养液中加入5ml双抗(青霉素-链霉素溶液100X，即双抗，上海碧云天生物技术有限公司)和50ml FBS(即胎牛血清，PAN，北京华美兰博生物科技有限公司)，混匀，封口备用，4℃保存。

细胞复苏：从液氮罐中取出冻存的SK-OV-3细胞，37℃水浴融化后，转移至15ml离心管中，添加10倍量的细胞完全培养液，1000rpm离心3min，弃去上清液，加1ml完全培养液吹打至细胞悬浮，转移至25cm²培养瓶中，添加完全培养液至完全覆盖整个瓶底，拧紧瓶口转移至CO₂培养箱37℃条件下培养。

细胞换液：观察到细胞培养液由红色变黄时，转移出25cm²培养瓶中的培养液，先用PBS清洗1-2次，再加入适量相应的完全培养液完全覆盖瓶底，于CO₂培养箱37℃闭口培养。

细胞传代：待细胞铺满底面积90％后，转移出25cm2培养瓶中的培养液，先用PBS清洗1-2次，再加入1ml胰酶消化，培养箱中放置2-3min，显微镜下观察，待细胞完全脱离瓶壁且细胞连接较松散时，再加入3ml完全培养液终止消化，轻柔吹打细胞层表面数次，使细胞分散，成为细胞悬液。将细胞悬液转移到15ml离心管中，1000rpm离心3min，弃上清，加3ml完全培养液，吹打成细胞悬液，转移至75cm²培养瓶，补足完全培养液，于CO₂培养箱37℃闭口培养。

细胞收集与接种：转移出75cm²培养瓶中的培养液，先用PBS清洗1-2次，再加入3ml胰酶消化，培养箱中放置2-3min，显微镜下观察，待细胞完全脱离瓶壁且细胞连接较松散时，再加入3ml完全培养液终止消化，轻柔吹打细胞层表面数次，使细胞分散，成为细胞悬液。将细胞悬液转移到15ml离心管中，1000rpm离心3min，弃上清，用适当体积的空白培养基重悬细胞，1ml注射器吸取后用于接种。平均两个75cm²培养瓶中的细胞总量接种于一只Balb/c裸鼠腋窝皮下，共接种8只Balb/c裸鼠。

2.2皮下肿瘤切除后复发模型的构建

瘤块传代：当腋下接种SK-OV-3细胞的8只Balb/c裸鼠的瘤块长到100mm³左右时，在超净台中将小鼠颈椎脱臼处死，对小鼠腋下皮肤进行酒精消毒，切开后剥离完整肿瘤，放于备用的空白细胞培养液中，用无菌手术刀片修剪，保留生长旺盛、边缘无溃烂的瘤组织，剪成1.5mm³左右方块，用套管针接种于70只健康Balb/c裸鼠同一侧腋窝皮下。

皮下肿瘤手术切除：当动物肿瘤长到100-250mm³时，选取56只体型正常、体重18-22g、瘤块无溃烂的荷瘤裸鼠，用4％水合氯醛溶液经腹腔注射麻醉后置于超净台中，酒精消毒腋下皮肤，剪开后切除大部分肿瘤组织，留下约2mm³大小的瘤块作为复发灶，留作后续分组实验。

2.3剂量与分组

共设置3个本发明制剂实验组、1个空白对照组和3个市售制剂对照组，每组8只动物，每4只一笼，SPF环境饲养。

其中本发明制剂实验组使用的是由实施例3冻干制剂1用生理盐水复溶制备的混悬剂。

空白对照组(Blank Control)：切除肿瘤后不做处理即刻缝合伤口。

本发明制剂低剂量组(NCs Low)：使用移液枪在术后创面均匀淋洒0.012ml局部用紫杉醇本发明制剂0.06mg的生理盐水混悬液。

本发明制剂中剂量组(NCs Medium)：使用移液枪在术后创面均匀淋洒0.024ml含局部用紫杉醇本发明制剂0.12mg的生理盐水混悬液。

本发明制剂高剂量组(NCs High)：使用移液枪在术后创面均匀淋洒0.048ml含局部用紫杉醇本发明制剂0.24mg的生理盐水混悬液。

市售制剂对照组1(Taxol)：(尾静脉注射，术后第三天开始给药，每三天一次，每次10mg/kg，给药浓度1mg/ml，共计30mg/kg)。

市售制剂对照组2(Abraxane)：(尾静脉注射，术后第三天开始给药，每三天一次，每次10mg/kg，给药浓度1mg/ml，共计30mg/kg)。

市售制剂对照组3(Taxol local)：使用移液枪在术后创面均匀淋洒0.048ml含紫杉醇0.12mg的氯化钠稀释溶液(2.5mg/ml)。

其中本发明制剂各剂量组与市售制剂对照组3均为切除肿瘤后立即在术腔内创面给药，尽量确保覆盖创口和残留的复发灶，在液体渗入组织不再流动后缝合伤口；市售制剂对照组1和2在切除肿瘤后立即缝合伤口，在术后的第3、6、9天进行3次尾静脉注射给药。

2.4给药后复发肿瘤生长情况的监测

从手术当天起，每3天观察各实验组动物伤口愈合情况和生存状态，使用游标卡尺测量皮下复发肿瘤的长径(length)和短径(width)，根据下述公式计算肿瘤体积(Volume)。

于术后的第60天处死动物，剥离肿瘤称重并计算平均瘤重，同时对离体肿瘤进行拍照。结合复发肿瘤体积、各组平均瘤重、每组复发动物只数、相对肿瘤增值率和小鼠体重变化等指标综合评价各组制剂对肿瘤的治疗效果和体内毒性。

肿瘤体积Volume＝[length×(width)2]/2

2.5相对肿瘤增殖率

相对肿瘤增殖率T/C％＝TRTV/CRTV×100％。

RVT＝Vn/V0，Vn代表术后第n天的复发肿瘤体积；V0代表术后残余肿瘤复发灶体积。TRTV代表治疗组RVT，CRTV代表空白对照组RVT。

评价标准：T/C％>40％为无效；T/C％≤40％，并经统计学处理P<0.05为治疗有效。

2.6动物体重的监测与用药安全性的初步判断

从手术当天起，每3天称量小鼠体重，绘制体重-时间变化图。以手术前体重为参比值，计算小鼠体重变化比值，绘制体重变化率-时间变化图。

用药安全性的初步判断集中于考察本发明制剂给药组动物的体重变化率：给药后的30天内，动物体重若降低了10％及以上，则认为该用药形式的安全性不佳；若体重降低在10％以内，则认为该用药形式的安全性良好。给药后30天以上，则有可能伴随动物周龄增大、体重自然增长或是复发肿瘤体积大等因素导致体重变化趋势不尽相同，因此不纳入用药安全性判断的时间范围。

3实验结果与分析

3.1术后动物伤口愈合与精神状态

肿瘤切除术后的2-3小时内，经麻醉的动物全部苏醒，能够正常进食饮水和运动，伤口无明显渗血；1天后所有动物精神状态恢复良好。术后第9天，各组均有部分动物伤口已经完全愈合脱线，没有感染化脓现象；实验第15天，所有动物伤口都已愈合。

3.2肿瘤复发和瘤体积变化

截止到术后第60天，各组动物出现肿瘤复发现象的比例见表11，空白对照组和市售制剂对照组的裸鼠全部长出了复发肿瘤，空白组的一只在第54天死亡。在本发明制剂3个实验组复发比例不超过50％，高剂量组无一复发。

表11 SK-OV-3荷瘤裸鼠在肿瘤切除术后实验组与对照组动物的肿瘤复发率(n＝8)

在术后60天的药效考察期内，SK-OV-3细胞生长速度较快。从术后第12天开始一些动物出现了可测量的复发肿瘤。Taxol local组的复发肿瘤生长速度与未给药的BlankControl组相近；Taxol和Abraxane两组市售制剂在经尾静脉给药后，复发肿瘤的生长速度和平均体积都优于空白组；NCs Medium组和NCs High组的抑制复发效果明显，尤其是高剂量组的动物在60天内没有长出复发肿瘤。

NCs Low组和NCs Medium组两组组内差异较大，既有无复发的动物，也有复发肿瘤体积较大的动物。Taxol和Abraxane尾静脉给药组在前30天体现出了抑制复发肿瘤生长的效果，但后期复发肿瘤生长速度逐渐加快。

处死后剖出肿瘤，如图1，所有局部给药组均未发现未降解的残留药物。BlankControl组有一只第54天死亡，复发肿瘤纳入瘤体积和瘤重的计算但是未呈现在图内；Taxol local组有的肿瘤内部溃烂有脓水，剖出时已不是完整固体。各组平均瘤重结果如图2。本发明制剂低中高三组呈现出剂量依赖型抑制肿瘤复发的治疗效果，显著优于市售制剂对照组。

3.3相对肿瘤增殖率与统计学差异

以第60天各实验组的平均肿瘤体积计算得出相对肿瘤增殖率的结果如表12。

表12 SK-OV-3荷瘤裸鼠在肿瘤切除术后给药动物的相对肿瘤增殖率

经Student’s t-test的统计学处理，结果显示NCs Medium组、NCs High组分别与Blank Control组之间P<0.05，存在显著差异，可以认为治疗有效。

3.4小结与讨论

本实验通过构建裸鼠皮下SK-OV-3人源卵巢癌肿瘤切除后复发的动物模型，验证本发明的制剂可以方便地直接创面淋洒给药，出乎意料的是本发明制剂能够显著更有效地抑制了肿瘤复发，大大优于现有制剂，并且抑制复发的效果呈剂量依赖型，效果极大地优于传统静脉化疗及市售制剂的局部施用。

本文所给出的具体实施方案仅用于对本发明进行举例说明，不构成对权利要求所定义的范围的限制。在本申请所公开的内容的基础上，本领域技术人员能显而易见地了解本申请的技术方案的等价变体，这些变体也涵盖在本申请的范围内。