具体实施方式

下面通过实施例对本发明内容作进一步地详细说明，但本发明并不局限于这些实施例。

本发明通过特定制备及测定抑菌活性实例更加具体说明吲哚取代酰胺类化合物VI、VII的合成与生物活性及应用，下述实施例和生物活性测定结果仅用对本发明作进一步地详细说明，但不意味本发明局限于这些实施例。

本发明中吲哚取代酰胺类化合物的生物活性测定的具体方法包括：

(1)吲哚取代酰胺类化合物的离体抑菌活性测定：

具体步骤为：用适量二甲亚砜将样品溶解，并用0.05％的吐温80水溶液稀释至所需浓度，在无菌条件下，将药液加入灭菌培养液中，摇匀制成所需浓度的含药培养基，不含药剂的培养基设为空白对照，将培养好的病原菌用灭菌打孔器接种于培养基上。接种后，在25±1摄氏度的恒温培养箱中培养，三天后，用十字交叉法计算菌盘直径，并与空白对照比较计算相对抑菌率，“0”代表最严重的发病程度(通常以此值作为基础调查标准)，“100”代表无菌落生长，供试菌种为我国农业生产中田间实际发生的大部分典型植物病原菌种属，其代号和名称如下：PS:水稻纹枯病菌，其拉丁名为:Pellicularia sasakii、GZ:小麦赤霉病菌，其拉丁名为:Gibberella zeae、AS:番茄早疫病菌，其拉丁名为:Alternaria solani、PP:苹果轮纹病菌，其拉丁名为:Physalospora piricola、PA:瓜果腐霉病菌，其拉丁名为:Pythium aphanidermatum、PI:番茄晚疫病菌，其拉丁名为:Phytophthora infestans、甜瓜疫霉病菌，其拉丁名为:Phytophthora dreschsleri。

(2)吲哚取代酰胺类化合物的活体抑菌活性测定：

具体方法如下：用适量二甲亚砜将样品溶解，并用0.05％的吐温80水溶液稀释至所需浓度，然后将药液均匀喷施到叶片上，并设未用药剂处理的叶片作空白对照，24小时后均进行病害接种，接种后，将植物放在恒温恒湿培养箱中，保持光照/黑暗各12小时交替，待对照充分发病后进行评估调查，与空白对照比较计算病害抑制百分比，“0”代表最严重的发病程度(通常以此值作为基础调查标准)，“100”代表无任何病斑，测供试菌种为我国农业生产中田间实际发生的大部分典型植物病原菌种属，其代号和名称如下：PS:水稻纹枯病菌，其拉丁名为:Pellicularia sasakii、PC:黄瓜霜霉病菌，其拉丁名为:Pseudoperonosporacubensis、PI:番茄晚疫病菌，其拉丁名为:Phytophthora infestans。

实施例1

以化合物I为原料制备中间体III：

将1.0毫摩化合物I、5毫升四氢呋喃加入到单口瓶中，搅拌下，加入1.0毫摩1,5,7-三氮杂二环癸-5-烯和5.0毫摩化合物II，回流反应15小时；反应结束后，减压脱除溶剂，残余物经300-400目硅胶柱层析分离纯化(洗脱液为乙酸乙酯-石油醚的混合溶液，V_石油醚:V_乙酸乙酯为3:1)可得中间体III，收率为53-83％。用以上方法制备如下中间体III：

实施例2

以化合物I′为原料制备中间体III：

将1.0毫摩化合物I′加入到单口瓶中，在氩气保护下，再加入6毫升甲苯和2滴N,N-二甲基甲酰胺，最后加入2.0毫摩氯化亚砜，50摄氏度反应至固体溶解；反应结束后，减压脱除溶剂及未反应完全的氯化亚砜，得到中间体I″的粗产物；向中间体I″的粗产物中加入6毫升二氯甲烷，然后将反应液降至0摄氏度，再向其中加入1.5毫摩化合物II，50摄氏度下反应12小时；反应结束后，用蒸馏水(10毫升)洗涤反应液，并用乙酸乙酯萃取水相，共萃取三次，每次使用乙酸乙酯10ml；收集并合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，减压脱除溶剂，残余物经300-400目硅胶柱层析分离纯化(洗脱液为乙酸乙酯-石油醚的混合溶液，V_石油醚:V_乙酸乙酯为3:1)可得中间体III，收率为46-87％。

用以上方法制备如下中间体III：

实施例3

制备中间体IV：

将1.0毫摩中间体III、1.2毫摩二甲基亚砜加入到反应瓶中，然后加入4毫升乙酸乙酯，最后加入1.2毫摩33wt％的溴化氢水溶液，60摄氏度下反应0.5小时；反应结束后，用蒸馏水洗涤反应液，并用乙酸乙酯萃取水相，收集并合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，减压脱除溶剂，残余物经300-400目硅胶柱层析分离纯化(洗脱液为乙酸乙酯-石油醚的混合溶液，V_石油醚:V_乙酸乙酯为3:1)可得中间体IV，收率为67-100％。

用以上方法制备如下中间体IV：

实施例4

制备化合物VI：

将1.0毫摩中间体IV、6毫升甲苯、6毫升乙醇和2.5毫升碳酸钠水溶液(1M)加入到50毫升单口瓶中，搅拌下加入1.5毫摩化合物V，随后加入5mol％四三苯基磷钯，最后加入3.0毫摩氯化锂，110摄氏度反应4小时；反应结束后，用乙酸乙酯萃取反应液，共萃取三次，每次使用乙酸乙酯20ml；收集并合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，减压脱除溶剂，残余物经300-400目硅胶柱层析分离纯化(洗脱液为乙酸乙酯-石油醚的混合溶液，V_石油醚:V_乙酸乙酯为1:1)可得吲哚取代酰胺类化合物VI，收率为44-78％。

用以上方法制备如下化合物VI：

实例5

化合物VII的制备：

将1.0毫摩化合物VI加入反应瓶中，氩气气氛下，加入4毫升N,N-二甲基甲酰胺；将反应液降至0摄氏度后，加入1.2毫摩氢化钠，室温反应0.5小时；然后再次将反应液降至0摄氏度，加入1.2毫摩碘甲烷，40摄氏度下反应2小时；反应结束后，用蒸馏水(6毫升)洗涤反应液，并用乙酸乙酯萃取水相，共萃取三次，每次使用乙酸乙酯10ml；收集并合并有机相，经无水硫酸镁干燥后，减压脱除溶剂，残余物经300-400目硅胶柱层析分离纯化(洗脱液为乙酸乙酯-石油醚的混合溶液，V_石油醚:V_乙酸乙酯为1:1)可得吲哚取代酰胺类化合物VII，收率为88.7-96.2％。

用以上方法制备如下化合物VII：

实施例6

吲哚取代酰胺类化合物VI、VII的离体抑菌活性测定结果：

吲哚取代酰胺类化合物VI、VII离体抑菌活性见表1，从表1可知本发明的大部分化合物VI、VII在离体条件下对测试的菌体生长抑制率均优于或相当于与本发明化学结构最接近的烯酰吗啉和氟吗啉；大部分吲哚取代肉桂酰类化合物对番茄早疫病的抑制率是氟吗啉的1-12倍不等，而烯酰吗啉对该病害则无抑制效果。大部分吲哚取代肉桂酰类化合物对瓜果腐霉病的抑制率是烯酰吗啉的1-5倍不等，是氟吗啉的1-10倍不等。合成的吲哚取代肉桂酰类化合物对番茄晚疫病的抑菌率均达到100％。显然，吲哚环稳定肉桂酰胺类化合物中的顺式苯乙烯基团对该类化合物的抑菌活性和抑菌广谱性均有一定的促进作用。

表1吲哚取代酰胺类化合物VI、VII的离体抑菌活性

实施例7

吲哚取代酰胺类化合物VI、VII的活体抑菌活性测定结果：

吲哚取代酰胺类化合物VI、VII活体抑菌活性见表1，从表1可知合成的部分吲哚取代肉桂酰类化合物对水稻纹枯病具有一定的抑制效果，其中所有取代基均为氢原子的化合物VI-8对水稻纹枯病的抑制率可达80％，而烯酰吗啉和氟吗啉对该病害则无抑制效果。推测该类化合物的空间位阻可能是影响其对水稻纹枯病能够发挥抑菌效果的重要因素之一，该类化合物空间位阻越小，可能对其抑制该病害越有益。合成的部分吲哚取代肉桂酰类化合物对黄瓜霜霉病表现出较佳的抑制效果，其中化合物VI-10、VII-1、VII-5、VII-9、VII-10的抑制率均在80～100％不等，而对照试剂对该病害则无抑制效果。该类化合物化学结构中吲哚苯环被氯原子取代或其吲哚环中氮原子的甲基化，对其抑制黄瓜霜霉病有利。此外，创新性地在该类化合物化学结构中的吗啉环上引入甲基取代基后，也对其抑制黄瓜霜霉病有利。合成的绝大部分吲哚取代肉桂酰类化合物对番茄晚疫病具有极佳的抑制效果，其对番茄晚疫病的抑制率接近或等于100％，与烯酰吗啉和氟吗啉对该病害的抑制效果相当。

表2吲哚取代酰胺类化合物VI、VII的活体抑菌活性

实施例8

吲哚取代酰胺类化合物VI、VII在农药组合物中的应用：

吲哚取代酰胺类化合物VI或VII均可配制农药混合物，该农药混合物中包含所述吲哚取代酰胺类化合物VI或VII作为活性成分；农药混合物含有0.1到99.9％重量的活性成分，99.9到0.1％重量的固体或液体助剂，以及任选0到25％重量的表面活性剂。

实施例9

吲哚取代酰胺类化合物VI或VII与杀菌剂组合在防治农业和林业以及园艺植物病害中的应用：

吲哚取代酰胺类化合物VI或VII与商品杀菌剂中的任意一种或两种及以上组合形成杀菌组合物用于防治农业和林业及园艺植物病害，商品杀菌剂选自：苯并噻二唑、噻酰菌胺，简写为TDL、噻酰胺、甲噻诱胺、4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-甲酸、4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-甲酸钠、4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-甲酸乙酯、DL-β-氨基丁酸、异噻菌胺，其英文通用名为：isotianil、3,4-二氯异噻唑-5-甲酸、3,4-二氯异噻唑-5-甲酸钠、3,4-二氯异噻唑-5-甲酸乙酯、病毒唑、安托芬、宁南霉素或水杨酸、霜脲氰、福美双、福美锌、代森锰锌、乙磷铝、甲基硫菌灵、百菌清、敌可松、腐霉利、苯锈啶、甲基托布津、托布津、精甲霜灵、氟吗啉、烯酰吗啉、高效甲霜灵、高效苯霜灵、双氯氰菌胺、磺菌胺、甲磺菌胺、噻氟菌胺、氟酰胺、叶枯酞、环丙酰菌胺、环氟菌胺、环酰菌胺、氰菌胺、硅噻菌胺、呋呲菌胺、吡噻菌胺、双炔酰菌胺、苯酰菌胺、甲呋酰胺、萎锈灵、乙菌利、异菌脲、嘧菌酯、醚菌胺、氟嘧菌酯、醚菌酯、苯氧菌胺、肟醚菌胺、啶氧菌酯、唑菌胺酯、肟菌酯、烯肟菌酯、烯肟菌胺、氧环唑、糠菌唑、环丙唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、高效烯唑醇、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、亚胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、四氟醚唑、三唑醇、灭菌唑、联苯三唑醇、噻菌灵、麦穗宁、抑霉唑、高效抑霉唑、咪鲜胺、氟菌唑、氰霜唑、咪唑菌酮、噁咪唑、稻瘟酯、噁唑菌酮、啶菌噁唑、噁霉灵、噁霜灵、噻唑菌胺、土菌灵、辛噻酮、苯噻硫氰、十二环吗啉、丁苯吗啉、十三吗啉、拌种咯、咯菌腈、氟啶胺、啶斑肟、环啶菌胺、啶酰菌胺、氟啶酰菌胺、啶菌胺、嘧菌环胺、氟嘧菌胺、嘧菌腙、嘧菌胺、嘧霉胺、氯苯嘧啶醇、氟苯嘧啶醇、灭螨猛、二氰蒽醌、乙氧喹啉、羟基喹啉、丙氧喹啉、苯氧喹啉、乙霉威、异丙菌胺、苯噻菌胺、霜霉威、磺菌威、敌瘟磷、异稻瘟净、吡菌磷、甲基立枯磷、灭瘟素、春雷霉素、多抗霉素、多氧霉素、有效霉素、井冈霉素、链霉素、甲霜灵、呋霜灵、苯霜灵、呋酰胺、灭锈胺、多菌灵、苯菌灵、甲基硫菌灵、三唑酮、乙嘧酚磺酸酯、二甲嘧酚、乙嘧酚、敌菌丹、克菌丹、灭菌丹、乙烯菌核利、氟氯菌核利、菌核净、百菌清、稻瘟灵、稻瘟净、叶枯唑、五氯硝基苯、丙森锌、三乙膦酸铝、硫磺、波尔多液、硫酸铜、氧氯化铜、氧化亚铜、氢氧化铜、苯菌酮、戊菌隆、哒菌酮、四氯苯酞、咯喹酮、螺环菌胺、三环唑、嗪胺灵、多果啶、双胍辛盐、双胍辛胺、氯硝胺、苯磺菌胺、甲苯磺菌胺、吲哚酯、敌磺钠、喹菌酮、烯丙苯噻唑、溴硝醇、碘甲烷、威百亩、敌线酯、棉隆、二氯异丙醚、噻唑磷、丰索磷、虫线磷、除线磷、丁硫环磷、杀线威、硫酰氟、二氯丙烯、二氯异烟酸、烯丙异噻唑；本发明中的吲哚取代酰胺类化合物VI或VII在杀菌组合物中的总的质量百分含量是1％-90％，99％到10％重量的固体或液体助剂，以及任选0到25％重量的表面活性剂，本发明中的吲哚取代酰胺类化合物VI或VII与前述商品杀菌剂的比例为质量百分比1％:99％到99％:1％；本发明中的杀菌组合物加工的剂型选自：种子处理乳剂、水乳剂、大粒剂、微乳剂、水溶性粒剂、可溶性浓剂、水分散性粒剂、毒谷、气雾剂、块状毒饵、缓释块、浓毒饵、胶囊粒剂、微胶囊悬浮剂、干拌种粉剂、乳油、静电喷雾剂、油包水乳剂、水包油乳剂、烟雾罐、细粒剂、烟雾烛、烟雾筒、烟雾棒、种子处理悬浮剂、烟雾片、烟雾丸、粒状毒饵、热雾剂、药漆、微粒剂、油悬剂、油分散性粉剂、片状毒饵、浓胶剂、泼浇剂、种衣剂、涂抹剂、悬浮乳剂、成膜油剂、可溶性粉剂、种子处理水溶性粉剂、超低容量悬浮剂、追踪粉剂、超低容量液剂、湿拌种水分散性粉剂中的任意一种；本发明中的杀菌组合物防治的植物病害选自：水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌、甜瓜疫霉病菌；本发明中的杀菌组合物适用的植物选自：稻谷、小麦、大麦、燕麦、玉米、高梁、甘薯、马铃薯、木薯、大豆、荷兰豆、蚕豆、豌豆、绿豆、小豆、棉花、蚕桑、花生、油菜、芝麻、向日葵、甜菜、甘蔗、咖啡、可可、人参、贝母、橡胶、椰子、油棕、剑麻、烟草、番茄、辣椒、萝卜、黄瓜、白菜、芹菜、榨菜、葱、大蒜、西瓜、甜瓜、哈密瓜、木瓜、苹果、柑桔和桃树、茶、山野菜、竹笋、啤酒花、胡椒、香蕉、番木瓜、兰花、盆景。

以上所述，仅作为说明的目的，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的修改，皆应仍属本发明涵盖的范围内。