具体实施方式

本发明的肠内菌丛改善用组合物含有异黄腐酚及/或黄腐酚作为有效成分。

肠内菌丛改善用组合物可含有异黄腐酚及黄腐酚的任一者作为有效成分，也可含有此两者作为有效成分。

在本发明的一种方式中，肠内菌丛改善用组合物优选含有异黄腐酚，或异黄腐酚及黄腐酚作为有效成分。

异黄腐酚例如可通过加热等工序由大麻科植物啤酒花(Humulus lupulus)萃取物来制备。通过加热啤酒花萃取物，可在该萃取物中生成异黄腐酚。啤酒花萃取物通常可用溶剂对啤酒花的球花进行萃取，根据需要可通过和提纯相关的工序来制备，可根据公知的啤酒花萃取物的制备方法获得。作为萃取方法，例如可列举作为啤酒酿造中使用的啤酒花萃取物的制备方法而使用的基于乙醇溶剂的萃取方法。市面上销售有啤酒花萃取物，也可以使用市售的啤酒花萃取物。为了生成异黄腐酚而对啤酒花萃取物的加热优选于80～140℃(更优选85～100℃)下实施15分钟～5小时(更优选20分钟～3小时)。为了制备异黄腐酚而对啤酒花萃取物的提纯以公知的方法实施。作为提纯方法，例如可列举使用HPLC或吸附柱等，或利用溶解度的变化的析出等方法。此外，异黄腐酚可通过加热黄腐酚进行异构化来制造。此时的加热温度可优选采用80～140℃(更优选85～100℃)下15分钟～5小时(更优选20分钟～3小时)。通过异构化处理而得的异黄腐酚，根据需要可通过公知的方法(例如过滤、减压浓缩、冷冻干燥等)浓缩、提纯。

黄腐酚为来自啤酒花的成分，可通过用溶剂从啤酒花中萃取来获得。例如，可通过以下方法来获得：将对干燥的啤酒花进行粉碎等而制成粒状的物质，浸渍于醇等有机溶剂中来萃取。接下来，对所得的萃取液进行浓缩或干燥后，用色谱法等进行分离或提纯。由啤酒花进行萃取、按组分分组、提纯时的温度优选小于80℃，例如，更优选5～70℃。

异黄腐酚及黄腐酚也可使用市售品。

在本发明中，只要可发挥本发明的效果，也可使本发明的组合物含有富含异黄腐酚及/或黄腐酚的植物来源原料。

异黄腐酚及黄腐酚含于天然物或饮食品，为具有饮食经验的化合物。因此从安全性的观点出发，认为例如即使每日摄取异黄腐酚及/或黄腐酚也少有问题。从而，根据本发明，可提供含有安全性高的成分作为有效成分的肠内菌丛改善用组合物。此外，报告称例如异黄腐酚在100℃的高温条件下也稳定。日本食品卫生法中作为清凉饮料水等的规格标准规定了杀菌条件，例如pH4.0以上的物质(pH4.6以上且水分活性超过0.94的物质除外)需要于85℃下加热30分钟。考虑这样的杀菌工序中的成分转换时，认为异黄腐酚的饮料适性高。

根据本发明的一种方式，可提供表现出肠内菌丛改善作用，对热稳定，有助于健康的维持、增进的各种功能性食品、功能性饮料等。

肠内菌丛改善用组合物所含的异黄腐酚及/或黄腐酚可通过例如高效液相色谱法(HPLC)或LC-MS/MS进行定量。异黄腐酚及黄腐酚可简便地进行定量分析，具有容易作为需要有效成分的定量分析及标准化的功能性标示食品等的有效成分使用的优点。

在本发明中，肠内菌丛(肠内菌群)是指肠内存在的细菌集团(微生物丛)。构成肠内菌丛的细菌中存在：对宿主(特别是人类)的身体产生良好作用，有助于健康的细菌(有益菌)、产生有害物质等对身体产生不良作用的细菌、在宿主的抵抗力减弱时在肠内产生不良作用的细菌、无害也无益的细菌。有益菌也可称作有用菌。有时也将肠内菌丛的各细菌种的存在比率称作平衡。构成肠内菌丛的细菌的存在比率(平衡)因饮食生活、年龄、压力、抗生素等药物的服用等因素而改变。肠内菌丛的平衡对宿主的健康状态产生影响。

在本发明中，肠内菌丛的改善是指肠内菌丛向对宿主(特别是人类)有益的方向变化。肠内菌丛的改善包括肠内菌丛的平衡的改善。在本发明中，肠内菌丛的改善优选为肠内菌丛中的有益菌的存在比率(存在比例)的提高。肠内菌丛中的有益菌的存在比率为有益菌相对于肠内菌丛的总细菌数的占有率。肠内菌丛中的有益菌的存在比率提高时，通常肠内菌丛产生的代谢产物、肠内pH等指标向对宿主有益的方向改善。如此，由于有益菌的存在比率提高而肠内菌丛得到改善，或通过肠内菌丛产生的代谢产物、肠内pH等指标向对宿主有益的方向改善，肠内环境可得到改善。本发明的肠内菌丛改善用组合物可作为肠内环境改善用组合物使用。

肠内菌丛中的有益菌的存在比率，例如可通过实施粪便中的细菌的16S rRNA基因分析来调查。

作为有益菌，可列举艾克曼菌(Akkermansia)属细菌、双叉乳酸杆菌、乳酸菌等，优选艾克曼菌(Akkermansia)属细菌。

肠内菌丛中的艾克曼菌属细菌的存在比率的提高，是肠内菌丛的改善及肠内环境改善的指标之一。如上所述，通过在肠内增加艾克曼菌属细菌，可期待例如肠道屏障功能的增强。

肠道屏障功能是指，防止异物(例如内毒素等毒素、发炎物质、未消化物等)从肠道上皮细胞外(肠道内)向体内的侵入(穿透)的功能。与正常状态相比，从肠道上皮细胞外向体内的异物的侵入得到促进的状态称作肠道上皮细胞的异物穿透性提升的状态。肠道屏障功能增强指抑制肠道上皮细胞的异物的穿透性的提升及降低肠道上皮细胞的异物的穿透性的任一种均可。肠道屏障功能增强效果，例如可通过肠道上皮细胞的电阻值(跨上皮膜电阻值(Transepithelial electrical resistance：TEER))的提高，或抑制TERR的降低来显示。本领域的技术人员可根据目的来选择肠道屏障功能增强效果的具体评价方法。

此外，如上所述，在肥胖者的肠内菌丛中厚壁菌(Firmicutes)门细菌增加，拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌(上述非专利文献1)减少。从而，厚壁菌(Firmicutes)门细菌相对于拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌的存在比率(Firmicutes门/Bacteroidetes门)的降低，为肠内菌丛的改善的一种方式，可作为肠内环境改善的指标之一。Firmicutes门/Bacteroidetes门的降低也可换称拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌相对于厚壁菌(Firmicutes)门细菌的存在比率(Bacteroidetes门/Firmicutes门)的提高。

如后述实施例所示，在口服摄取(口服投用)异黄腐酚或黄腐酚的小鼠中，与未摄取的小鼠相比构成肠内菌丛的细菌的存在比发生变化，艾克曼菌(Akkermansia)属细菌的存在比率提高。从而，异黄腐酚及黄腐酚具有提高肠内菌丛中的艾克曼菌(Akkermansia)属细菌的存在比率而改善肠内菌丛的作用。进一步，在口服摄取异黄腐酚或黄腐酚的小鼠中，厚壁菌(Firmicutes)门细菌相对于拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌的存在比率(Firmicutes门/Bacteroidetes门)降低。从而，异黄腐酚及黄腐酚具有降低厚壁菌(Firmicutes)门细菌相对于拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌的存在比率(Firmicutes门/Bacteroidetes门)的作用。

本发明的肠内菌丛改善用组合物通过含有异黄腐酚及/或黄腐酚作为有效成分，可用于肠内菌丛中的有益菌例如艾克曼菌(Akkermansia)属细菌的存在比率的提高。提高艾克曼菌(Akkermansia)属细菌的存在比率对肠道屏障功能的增强有效。从而本发明的肠内菌丛改善用组合物，可适用于肠道屏障功能的增强。通过肠道屏障功能的增强，可期待慢性炎症的预防或改善、便秘的预防或改善、腹泻的预防或改善、肠胃不适的减轻、体质的改善等效果。

在一种方式中，本发明的肠内菌丛改善用组合物可用于降低厚壁菌(Firmicutes)门细菌相对于拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌的存在比率(Firmicutes门/Bacteroidetes门)。

本发明的肠内菌丛改善用组合物，例如可用于通过提高肠内菌丛中的有益菌的存在比率，改善肠内菌丛、改善肠内环境或增强肠道屏障功能。本发明的肠内菌丛改善用组合物，此外可用于通过降低肠内菌丛中的Firmicutes门/Bacteroidetes门的存在比率，改善肠内菌丛、改善肠内环境。在一种方式中，本发明的肠内菌丛改善用组合物，提高肠内菌丛中的有益菌，特别是艾克曼菌属细菌的存在比率，可用于对其预防或改善有效的状态或疾病的预防或改善。作为这样的状态或疾病，例如，可列举可期待通过肠道屏障功能增强而预防或改善的状态或疾病。作为可期待通过肠道屏障功能增强而预防或改善的状态或疾病，可列举慢性炎症、便秘、腹泻、过敏性肠症候群、感染症、食物过敏等。

本说明书中状态或疾病的预防，是指防止状态或疾病的发生、延迟状态或疾病的发生、降低状态或疾病的发生率、减轻状态或疾病的发生风险等。状态或疾病的改善，是指使对象从状态或疾病中恢复、减轻状态或疾病的症状、延迟或防止状态或疾病的进展等。

本发明的肠内菌丛改善用组合物适用于治疗用途(医疗用途)或非治疗用途(非医疗用途)的任意一种均可。

本发明的肠内菌丛改善用组合物可以饮食品、医药、医药部外品、饲料等方式提供。本发明的肠内菌丛改善用组合物其自身可为用于肠内菌丛的改善的饮食品、医药、医药部外品、饲料等，也可为这些中调配使用的原料或制剂等。

本发明的肠内菌丛改善用组合物，作为一个示例，可以制剂的形式提供，但并不限定于本形式。该制剂可直接以组合物，或以含有该制剂的组合物的方式提供。本发明的肠内菌丛改善用组合物，也可称作肠内菌丛改善剂。

从充分获得本发明的效果的观点出发，本发明的肠内菌丛改善用组合物优选为口服用组合物。作为口服用组合物，可列举饮食品、口服用的医药、医药部外品、饲料，优选为饮食品或口服用医药，更优选为饮食品。

本发明的肠内菌丛改善用组合物，只要不影响本发明的效果，除异黄腐酚及/或黄腐酚外，可含有任意的添加剂、任意的成分。这些添加剂及成分，可根据组合物的形式等来选择，可使用可用于一般的饮食品、医药、医药部外品、饲料等的物质。

将本发明的肠内菌丛改善用组合物制成饮食品、医药、医药部外品、饲料等时，其制造方法并无特别限定，可通过一般的方法来制造。此外，含有异黄腐酚的肠内菌丛改善用组合物，例如在其制造中可调配啤酒花萃取物，通过实施对该啤酒花萃取物的加热工序来制造。

例如将本发明的肠内菌丛改善用组合物制成饮食品时，可向异黄腐酚及/或黄腐酚中调配可用于饮食品的成分(例如食品原料、根据需要而使用的食品添加物等)，从而制成各种各样的饮食品。饮食品并无特别限定，例如可列举一般的饮食品、健康食品、健康饮料、功能性标示食品、特定保健用食品、患者用饮食品等。上述健康食品、功能性表示食品、特定保健用食品等可制成例如细粒剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、咀嚼剂、糖浆剂、液剂、流食等各种制剂形式。

作为本发明的肠内菌丛改善用组合物的优选方式的一个例子，可列举饮料。例如，由于异黄腐酚对热稳定，因此含有异黄腐酚的肠内菌丛改善用组合物更适合于饮料。

饮料为无酒精饮料、酒精饮料的任一种均可。作为无酒精饮料，例如可列举茶类饮料、咖啡饮料、无酒精啤酒风味饮料、碳酸饮料、功能性饮料、果实及蔬菜类饮料、乳性饮料、豆乳饮料、风味水等。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为饮料时，优选为茶类饮料、咖啡饮料、酒精饮料、无酒精啤酒风味饮料、碳酸饮料、功能性饮料、果实及蔬菜类饮料、乳性饮料、豆乳饮料或风味水。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为茶类饮料时，优选为红茶饮料或无糖茶饮料。作为无糖茶饮料，可列举绿茶饮料、乌龙茶饮料、大麦茶饮料、糙米茶饮料、薏仁茶饮料、无糖的红茶饮料等。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为咖啡饮料时，优选为容器装咖啡或液态咖啡。

作为酒精饮料，可列举啤酒、啤酒类饮料、啤酒及啤酒类饮料以外的酒精饮料。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为啤酒类饮料时，优选为发泡酒或第三啤酒。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为啤酒及啤酒类饮料以外的酒精饮料时，优选为烧酒、碳酸烧酒、利口酒、鸡尾酒、烈酒、威士忌。

本说明书中的“无酒精啤酒风味饮料”是指具有啤酒般的风味的碳酸饮料，通常为非发酵的无酒精类型，其实质上不含酒精。在此，无酒精啤酒风味饮料不排除含有无法检测的程度的极微量的酒精的饮料。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为碳酸饮料时，优选为可乐风味饮料、透明碳酸饮料、姜汁汽水、果汁类碳酸饮料、含奶类碳酸饮料或无糖碳酸饮料。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为功能性饮料时，优选为运动饮料、能量饮料、健康补给饮料或袋装果冻饮料。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为果实及蔬菜类饮料时，优选为100％果实饮料、含果实饮料、低含量果汁清凉饮料、含果粒的果实饮料或果肉饮料。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为乳性饮料时，优选牛奶、饮用酸奶、乳酸菌饮料或含乳类清凉饮料。

本发明的肠内菌丛改善用组合物为豆乳饮料时，优选豆乳或大豆饮料。

饮料形态并无特别限定，可制成容器装饮料。容器装饮料的容器并无特别限定，可使用任意形态及材质的容器，例如使用铝罐、钢罐等金属制容器；PET瓶等树脂制容器；纸盒等纸容器；玻璃瓶等玻璃制容器；木桶等木制容器等通常所用容器的任一种均可。通过将饮料填充及密封至这样的容器中，可获得容器装饮料。

将本发明的肠内菌丛改善用组合物制成医药或医药部外品时，例如可向异黄腐酚及/或黄腐酚中调配药理学所允许的载体、根据需要而添加的添加剂等制成各种剂型的医药或医药部外品。这样的载体、添加剂等，只要为可用于医药或医药部外品且药理学所允许的物质即可，例如可列举赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂等的1种或2种以上。作为医药或医药部外品的投用(摄取)方式，可列举口服、经肠、经粘膜、注射等，从更充分地获得本发明的效果的观点出发，优选口服投用方式。将肠内菌丛改善用组合物制成医药时，优选制成口服用医药。作为用于口服投用的制剂的剂型，可列举液剂、片剂、粉剂、细粒剂、颗粒剂、糖衣片剂、胶囊剂、悬浊液、乳剂、咀嚼剂等。医药也可为非人类动物用医药。

将本发明的肠内菌丛改善用组合物制成饲料时，例如只要将异黄腐酚及/或黄腐酚调配在饲料中即可。饲料中也可含有饲料添加剂。作为饲料，例如可列举用于牛、猪、鸡、羊、马等的家畜用饲料；用于兔子、大鼠、小鼠等的小动物用饲料；用于狗、猫、小鸟等的宠物食物等。

本发明的肠内菌丛改善用组合物中的异黄腐酚及/或黄腐酚的含量并无特别限定，可根据其形态等来设定。就异黄腐酚及/或黄腐酚的含量而言，例如异黄腐酚及黄腐酚的总含量在肠内菌丛改善用组合物中优选0.0001重量％以上，更优选0.001重量％以上，此外优选90重量％以下。在一种方式中，就异黄腐酚及/或黄腐酚的含量而言，异黄腐酚及黄腐酚的总含量在肠内菌丛改善用组合物中优选0.0001～90重量％，更优选0.001～90重量％。就异黄腐酚及黄腐酚的总含量而言，当组合物仅含它们中的任一者时，为异黄腐酚或黄腐酚的含量，当组合物含有异黄腐酚及黄腐酚时，为它们的合计的含量。在一种方式中，将本发明的肠内菌丛改善用组合物制成饮食品、医药、医药部外品、饲料等时，优选将异黄腐酚及黄腐酚的总含量设置为上述范围。

本发明的肠内菌丛改善用组合物，根据其形态可以适当的方法来摄取或投用。从充分获得本发明的效果的观点出发，本发明的肠内菌丛改善用组合物优选口服摄取(口服投用)。

本发明的肠内菌丛改善用组合物的摄取量(也可称投用量)并无特别限定，为可获得肠内菌丛的改善效果的量(有效量)即可，根据投用形态、投用方法、对象的体重等适当设定即可。在一种方式中，以人类(成人)为对象口服摄取或投用时，肠内菌丛改善用组合物的摄取量，以异黄腐酚及黄腐酚的总摄取量计，每1日60kg体重，优选为1～200mg，更优选为5～60mg。上述量优选1日1次以上，例如分1日1次～数次(例如2～3次)来摄取。就异黄腐酚及黄腐酚的总摄取量而言，仅摄取它们中的任一者时，为异黄腐酚或黄腐酚的摄取量，摄取异黄腐酚及黄腐酚时，为它们的合计摄取量。在一种方式中，本发明的肠内菌丛改善用组合物可为使成人摄取或对其投用每60kg体重，每1日上述量的异黄腐酚及/或黄腐酚的口服用组合物。

通过持续摄取(投用)异黄腐酚及/或黄腐酚，肠内菌丛的改善效果提高。从而在优选方式中，本发明的肠内菌丛改善用组合物为持续摄取物。在本发明的一种实施方式中，肠内菌丛改善用组合物优选持续摄取2周以上，更优选持续摄取8周以上。

本发明的肠内菌丛改善用组合物摄取对象(也可称投用对象)并无特别限定。优选为人类或非人类哺乳动物，更优选为人类。

作为本发明的肠内菌丛改善用组合物摄取对象，优选需要或希望改善肠内菌丛的对象、需要或希望改善肠内环境的对象。作为这样的对象，例如可列举具有过敏性肠症候群、便秘、腹泻、食物过敏的人类等。本发明的肠内菌丛改善用组合物，例如以可期待通过肠内菌丛的改善而预防或改善的状态或疾病的预防等为目的，也可对健康者使用。

本发明的肠内菌丛改善用组合物含有天然物或饮食品中含有的安全性高的成分作为有效成分，通过持续摄取发挥较高的肠内菌丛改善效果。因此，本发明的肠内菌丛改善用组合物作为例如健康食品、功能性标示食品等有用，该健康食品、功能性标示食品等用于具有上述过敏性肠症候群、便秘、腹泻、食物过敏的人类、健康者等通过日常口服摄取，提高肠内菌丛中的有益菌的存在比率，改善肠内菌丛，改善肠内环境。

本发明的肠内菌丛改善用组合物可附有基于肠内菌丛的改善作用的功能的标示。本发明的肠内菌丛改善用组合物可附有例如“调整肠内细菌的平衡”、“良好地维持肠内环境”、“有助于维持肠道健康”、“提高肠道屏障功能”、“增加有益菌”、“增加有用菌”、“调节肠胃的状态”、“减轻肠胃的不适感”及“改善体质”的1种或2种以上的功能的标示。

在本发明的一种实施方式中，本发明的肠内菌丛改善用组合物优选为附有上述标示的饮食品。此外上述标示也可为为了获得上述功能而使用的意思的标示。

本发明还包含以下方法。

一种肠内菌丛的改善方法，其特征在于，使对象摄取或对其投用异黄腐酚及/或黄腐酚。

一种肠内环境改善方法，其特征在于，使对象摄取或对其投用异黄腐酚及/或黄腐酚。

一种提高肠内菌丛中的有益菌的存在比率的方法，其特征在于，使对象摄取或对其投用异黄腐酚及/或黄腐酚。

上述方法可以为治疗性的方法，也可以为非治疗性的方法。所谓“非治疗性”为不包含医疗行为，即人类的手术、治疗或诊断的概念。

摄取异黄腐酚及/或黄腐酚，可提高肠内菌丛中的有益菌的存在比率。此外，可降低肠内菌丛中厚壁菌(Firmicutes)门细菌相对于拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌的存在比率(Firmicutes门/Bacteroidetes门)。通过这样的作用，可改善肠内菌丛、改善肠内环境。

本发明还包含以下应用。

一种异黄腐酚及/或黄腐酚的应用，其特征在于，用于改善肠内菌丛。

一种异黄腐酚及/或黄腐酚的应用，其特征在于，用于改善肠内环境。

一种异黄腐酚及/或黄腐酚的应用，其特征在于，用于提高肠内菌丛中的有益菌的存在比率。

上述应用优选为对人类或非人类哺乳動物，更优选为对人类的应用。应用可为治疗性的应用，也可为非治疗性的应用。

在本发明的方法及应用中，肠内菌丛的改善、有益菌及它们的优选方式等，与上述本发明的肠内菌丛改善用组合物的情况相同。

本发明还包含使对象摄取或对其投用异黄腐酚及/或黄腐酚的肠内菌丛中的艾克曼菌(Akkermansia)属细菌的存在比率的提高方法；使对象摄取或对其投用异黄腐酚及/或黄腐酚的肠内菌丛中的厚壁菌(Firmicutes)门细菌相对于拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌的存在比率(Firmicutes门/Bacteroidetes门)的降低方法；用于提高肠内菌丛中的艾克曼菌(Akkermansia)属细菌的存在比率的异黄腐酚及/或黄腐酚的应用；用于降低厚壁菌(Firmicutes)门细菌相对于拟杆菌(Bacteroidetes)门细菌的存在比率(Firmicutes门/Bacteroidetes门)的异黄腐酚及/或黄腐酚的应用。

在上述方法及应用中，从充分获得本发明的效果的观点出发，优选持续使对象摄取或对其投用异黄腐酚及/或黄腐酚。

从充分获得本发明的效果的观点出发，持续使对象摄取或对其投用异黄腐酚及/或黄腐酚时，优选持续使其摄取或对其投用2周以上，更优选持续使其摄取或对其投用8周以上。在上述方法及应用中，1日1次以上，例如1日1次～数次(例如2～3次)向对象投用或使其摄取异黄腐酚及/或黄腐酚即可。在一种方式中，在上述方法及应用中，优选使其摄取或对其投用异黄腐酚，或异黄腐酚及黄腐酚。

在上述方法及应用中，只要将可获得肠内菌丛改善效果的量(也可称为有效量)的异黄腐酚及/或黄腐酚投用至对象或使其摄取即可。异黄腐酚及/或黄腐酚的优选摄取量或投用对象等与上述本发明的肠内菌丛改善用组合物的情况相同。异黄腐酚及/或黄腐酚可直接投用或摄取，也可作为含有异黄腐酚及/或黄腐酚的组合物来投用或摄取。例如，可投用或摄取上述本发明的肠内菌丛改善用组合物。

此外，异黄腐酚及/或黄腐酚可用于为了改善肠内菌丛而使用的饮食品、医药、医药部外品、饲料等的制造。在本发明一种方式中，还包含用于制造肠内菌丛改善用组合物的异黄腐酚及/或黄腐酚的应用。

本说明书中记载的学术文献及专利文献全部作为参考纳入本说明书。

实施例

以下示出更具体地说明本发明的实施例。另外，本发明并不仅限定于这些实施例。

一系列的动物试验皆遵守日本动物爱护管理法及其他相关法令，皆基于经过公司内动物试验委员会的审查并得到机关负责人的认可的计划而实施。

＜制备例1＞黄腐酚及异黄腐酚的制备

由啤酒花萃取物(Asama Chemical株式会社制)，用以下的方法对异黄腐酚及黄腐酚进行分离提纯。即，通过正相柱层析法、反相柱层析法、制备型HPLC提纯，以啤酒花萃取物为原料，提纯异黄腐酚及黄腐酚，并通过HPLC分析来确定纯度在95％以上。另外在HPLC分析中，作为管柱使用Develosil C30-UG-5(野村化学株式会社)，检测器的紫外线吸收测定波长设置为280nm(异黄腐酚)及350nm(黄腐酚)。将得到的异黄腐酚及黄腐酚分别作为标准品(纯度皆在95％以上)用于以下实验。

＜实施例1＞

黄腐酚及异黄腐酚摄取带来的肠内菌丛改善作用的探讨

通过以下步骤，用摄取高脂肪饮食模型小鼠探讨黄腐酚及异黄腐酚对肠内菌丛造成的影响。

(组的构成)

本试验中的组的构成(组名、基础饲料、被测物质、被测物质的用量)如表1所示。用量为每1kg体重每1天的被测物质的摄取量(mg)。

另外，表中，普通饮食使用“对照组饲料”(D12450J)，60kcal％高脂肪饮食使用“超高脂肪饲料”(D12492)(以上为Research Diets公司制)，儿茶素类作为制剂使用“POLYPHENON 70A”(商品名，三井农林株式会社制)。儿茶素类用作阳性对照。黄腐酚及异黄腐酚使用制备例1中得到的标准品(纯度95％以上)。

[表1]

(驯化及分组)

购入小鼠(C57BL/6J、雄性、7周龄，日本CLEA株式会社)并经过1周的检疫及驯化后，从在一般状态观察下未确认异常的动物中以体重变化为标准选择动物。已选择的动物，通过基于驯化期间结束时的体重的分层连续随机法分成表1中所示的组的构成中的各组(每1组n＝8)，在可自由摄取规定的基础饲料及水的状态下进行饲养。

(被测物质的摄取方法)

1日1次口服摄取被测物质8周。摄取被测物质时，使用混合了被测物质和溶剂的投用液。溶剂使用0.5重量％羧甲基纤维素钠(CMC)水溶液。在被测物质的投用中，将小鼠摄取液量设置为10mL/kg，以最新体重为标准计算被测物质量及液量。

(粪便的回收及基因分析)

以自摄取被测物质开始8周后采集的粪便(新鲜便)为分析对象，进行16S rRNA基因分析。16S rRNA基因分析以日本特开2018-8911号公报的实施例中记载的方法来实施。由该基因分析，求出粪便中所含的肠内细菌的存在比例(存在比率)，作为构成肠内菌丛的细菌的存在比率。

(结果)

各组中的构成肠内菌丛的细菌的存在比例(组平均)示于图1。图1所述的存在比例为粪便中所含的各细菌相对于总细菌数的比率(占有率)。图1中的Verrucomicrobia(疣微菌门)为艾克曼菌(Akkermansia)属细菌所属的上级分类，在本分析中仅表示艾克曼菌(Akkermansia)属细菌。图1中的异黄腐酚(IXN)及黄腐酚(XN)的用量(mg/kg)为每1kg体重每1天的被测物质的摄取量(mg)。在摄取黄腐酚或异黄腐酚8周的个体中，与未摄取的个体(表1的组No.2的高脂肪饮食组)相比肠内菌丛发生变化，艾克曼菌属细菌的存在比例提高。在儿茶素类摄取组中也确认了同样的效果。此外，上述期间摄取黄腐酚或异黄腐酚的个体中，与高脂肪饮食组相比Firmicutes门细菌/Bacteroidetes门细菌的存在比率降低。Firmicutes门细菌/Bacteroidetes门细菌的存在比率在普通饮食组中为4.2，高脂肪饮食组中为7.4，儿茶素类组中为1.7、黄腐酚(60mg/kg)组中为3.2、异黄腐酚(60mg/kg)组(组No.5)中为6.0、异黄腐酚(180mg/kg)组(组No.6)中为2.4。

＜实施例2＞

图1为摄取各被测物质8周的结果，在将异黄腐酚作为被测物质，将组的构成及用量设计的一部分变更后的试验中，自摄取被测物质开始2周后，采集盲肠内容物，与上述同样地进行16S rRNA基因分析。自摄取被测物质开始2周后，在异黄腐酚(60mg/kg)组(每1kg体重每1天摄取60mg异黄腐酚的组)中，与未摄取的个体(高脂肪饮食组)相比，观察到肠内菌丛中的艾克曼菌属细菌的存在比率的提高。

工业实用性

本发明在饮食品领域、医药领域等中有用。