粉防己提取物的抗痤疮应用
阅读说明：本技术 粉防己提取物的抗痤疮应用 (Anti-acne application of tetrandra root extract ) 是由 张鑫 陆泽安 陈园园 于 2019-09-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了粉防己提取物在非治疗目的的抗痤疮方面的应用。本发明所述粉防己提取物采用乙醇进行提取。本发明还涉及粉防己提取物在制备具有抗痤疮功效的个人护理产品中的应用。所述个人护理产品包括护肤霜,护肤乳,精华液等。(The invention discloses application of a tetrandra root extract in the aspect of non-treatment-purpose anti-acne. The tetrandra root extract is extracted by ethanol. The invention also relates to the use of a tetrandra root extract in the preparation of a personal care product having anti-acne efficacy. The personal care products include skin creams, skin lotions, serums, and the like.)
技术领域
本发明属于植物化学领域，具体涉及粉防己提取物的抗菌作用，尤其涉及其在抗痤疮丙酸杆菌领域的应用。
背景技术
目前国内外多数抗菌添加剂以合成化合物为主。虽然这些化合物具有快速杀灭致病微生物，有效浓度低等优点，但其毒性、刺激性又不同程度地影响人体健康。抗生素的滥用，也导致了耐药细菌的出现，导致细菌感染类的疾病越来越难治愈。随着天然、安全与环保要求的提出，植物抗菌添加剂越来越为人们所青睐。
防己科千金藤属植物粉防己(Stephania tetrandra S.Moore)的干燥根具有祛风止痛，利水消肿之功效。用于风湿痹痛，水肿脚气，小便不利，湿疹疮毒。现代分析表明，粉防己含多种生物碱，其中粉防己碱(特船君)(tetrandrine)治风湿关节炎和高血压症均有效。
粉防己的主要功效包括：钙通道阻滞剂；高血压病；抗心肌缺血作用；抗心律失常作用；降压作用；抗过敏作用；高血压危象；心绞痛。
痤疮是由黑头、白头、丘疹、脓包、囊肿以及各种结节和疤痕引起的普通病症。痤疮通常在脸部和上臂、背部出现。理论上讲痤疮至少部分是由细菌引起的，如丙酸菌属痤疮。
痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes,C.acnes)，也称痤疮杆菌、疮疱丙酸杆菌，是造成痤疮的主要细菌。痤疮是一常见的慢性炎症性皮肤病，在青少年中发病率达70％-87％(俗称青春痘)。研究表明，痤疮的发生与痤疮丙酸杆菌密切相关。因此，常常使用某些抑制或杀死痤疮丙酸杆菌的药物能达到祛痘效果。熟知过氧化苯甲酰和水杨酸可用作抗痤疮活性成分。然而，这些化学成分(例如，过氧化苯甲酰或水杨酸)的制剂常常物理不稳定，容易从溶液中析出。又或者，这些化学成分(例如，过氧化苯甲酰或水杨酸)的制剂常常导致严重的皮肤刺激。因此，本领域仍然需要从中草药领域寻找能够预防和治疗痤疮的产品。例如，文献《中药对痤疮致病菌的体外抑菌活性实验研究》(江丽，单萍萍，申国庆等)和文献《中药体外抑制痤疮丙酸杆菌的活性测定》(朱亚芳，赵浩如)披露了中药提取物成分复杂，作用机制多样，副作用小，其治疗痤疮已成为一个新的方向。
发明人意外地发现，粉防己提取物具有抑菌作用，具体是粉防己提取物具有抗痤疮丙酸杆菌的作用，其可作为功能添加剂应用到护肤霜，护肤乳，精华液等个人护理产品中。
发明内容
本发明首次发现粉防己提取物具有抗痤疮丙酸杆菌的作用。因此，粉防己提取物可以作为功能添加剂应用到护肤霜，护肤乳，精华液等个人护理产品中。
一方面，本发明提供了粉防己提取物在非治疗目的的抗痤疮方面的应用。
在优选的实施方式中，本发明所述抗痤疮通过抗痤疮丙酸杆菌实现。
在优选的实施方式中，本发明所述粉防己提取物通过溶剂提取法制备。在更优选的实施方式中，提取溶剂是体积浓度为60-80％的乙醇。
另一方面，本发明还涉及粉防己提取物在制备具有抗痤疮功效的个人护理产品中的应用。
在优选的实施方式中，本发明所述抗痤疮功效通过抗痤疮丙酸杆菌实现。
在优选的实施方式中，本发明所述粉防己提取物通过溶剂提取法制备。在更优选的实施方式中，提取溶剂是体积浓度为60-80％的乙醇。
在优选的实施方式中，所述个人护理产品包含浓度至少为0.016g/ml的粉防己提取物。
在优选的实施方式中，所述个人护理产品选自：护肤霜，护肤乳，精华液。
发明详述
痤疮是毛囊皮脂腺单位的一种慢性炎症性皮肤病，主要好发于青少年，对青少年的心理和社交影响很大。临床表现以好发于面部的粉刺、丘疹、脓疱、结节等多形性皮损为特点。痤疮的发生常常与细菌(例如，痤疮丙酸杆菌)感染密切相关。毛囊中多种微生物尤其是痤疮丙酸杆菌大量繁殖，痤疮丙酸杆菌产生的脂酶分解皮脂生成游离脂肪酸，同时趋化炎症细胞和介质，最终诱导并加重炎症反应。
粉防己是一种中药名，是防己科千金藤属植物粉防己(Stephania tetrandraS.Moore)的干燥根。我国南方大部分地区有分布，主产于浙江、安徽、湖北、江西等省。具有祛风止痛，利水消肿之功效。用于风湿痹痛，水肿脚气，小便不利，湿疹疮毒。迄今为止没有任何文献公开报道粉防己具有抑菌功效，尤其是针对痤疮丙酸杆菌的抑菌功效。
可使用任何合适的制备根据本发明使用的粉防己提取物的方式。可使用常规方法获得合适提取物，所述常规方法包括但不限于通过下述方法从原料中直接提取：研磨、浸渍、挤压、压榨、捣碎、离心，和/或以下方法诸如冷渗漉、搅拌/蒸馏、微波辅助提取、超声处理、含或不含极性改性剂的超临界/亚临界CO2压缩气体提取、加压溶剂提取、加速溶剂提取、表面活性剂辅助的加压热水提取、油提取、膜提取、索氏提取、或通过其他方法诸如溶剂提取等等。具体地，根据本发明的提取物优选是通过在溶剂中研磨或浸渍植物材料而制备的基于溶剂的提取物，所述溶剂通常为有机溶剂诸如醇、丙酮、含或不含极性改性剂的液体二氧化碳、己烷或氯仿。
在本发明中，粉防己提取物采用溶剂提取法进行制备。提取过程中采用的提取溶剂可以是本领域已知的任意溶剂，例如极性溶剂和非极性溶剂。极性或非极性溶剂可包括选自下列的溶剂：含或不含极性改性剂的液体二氧化碳、含水乙醇、C1-C8醇(诸如甲醇、乙醇、丙醇和丁醇)、C1-C8烷烃(诸如戊烷、己烷和庚烷)、C2-C8二醇/多元醇(诸如甘油、丁二醇和丙二醇)、C5-C8环烷烃(诸如环戊烷、环己烷和环庚烷)、C1-C8烷基醚、C1-C8脂族化合物、酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、二甲苯、甲苯、植物油、矿物油以及它们的组合。
在某些优选的实施例中，本发明的提取物是通过将粉防己原材料磨成粉并使用具有如下介电常数值的溶剂提取而制备的提取物，所述溶剂具有在20℃下介于约1和约80之间的介电常数值，优选在20℃下介于约2和约60之间的介电常数值，更优选在20℃下介于约2和约40之间的介电常数值，并且甚至更优选在20℃下介于约2和35之间的介电常数值。
在一个优选的实施方式中，提取溶剂可以采用乙醇。在一个优选的实施方式中，提取溶剂采用体积浓度为60-80％的乙醇。在一个更优选的实施方式中，提取溶剂采用体积浓度为70％的乙醇。
粉防己提取物的抑菌作用相对于化学合成的化合物而言具有许多优点。首先，天然中草药作为原料提取得到的粉防己提取物更加符合天然、安全和环保的要求。在消费者群体中，中草药提取物作为抑菌剂将具有广泛的应用前景和巨大的市场价值。其次，中草药作为原料提取得到的粉防己提取物在毒性和刺激性方面显著优于现有技术常规使用的化学品抑菌剂。第三，由于抗生素的滥用，导致了细菌耐药性的出现，因此以中草药为原料的粉防己提取物将越来越为消费者所接受。
现有技术对粉防己提取物的研究重要集中于其中的多种生物碱。粉防己的药用价值目前主要体现在粉防己碱(一种生物碱)在风湿性关节炎和高血压方面的疗效。然而，本发明人意外地发现粉防己提取物具有抑菌功效，对于痤疮丙酸杆菌尤其有效。
另一方面，本发明还涉及粉防己提取物在制备具有抗痤疮功效的个人护理产品中的应用。在一些实施方式中，这种个人护理产品包含本发明所述粉防己提取物以及合适的载体。在一些实施方式中，所述个人护理产品包含浓度至少为0.016g/ml的粉防己提取物。在优选的实施方式中，个人护理产品包含浓度至少为0.02g/ml的粉防己提取物。在优选的实施方式中，个人护理产品包含浓度至少为0.05g/ml的粉防己提取物。在优选的实施方式中，个人护理产品包含浓度至少为0.1g/ml的粉防己提取物。在优选的实施方式中，个人护理产品包含浓度为0.016-0.5g/ml的粉防己提取物。
任何合适的载体可用于所述个人护理产品中。优选地，所述载体是美容上可接受的载体。如本领域的技术人员将认识到，美容上可接受的载体包括适于与身体，具体地皮肤接触使用的载体，而没有不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、变应性应答等等。安全有效量的载体占个人护理产品的约50％至约99.999％、优选约80％至约99.9％、更优选约99.9％至约95％、最优选约98％至约99.8％。
载体可以广泛多样的形式存在。例如，以乳液形式的载体，包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅氧烷包水包油乳液可用于本文中。这些乳状液可涵盖范围较宽的粘度，例如约100厘泊至约200,000厘泊。
合适的美容上可接受的载体的例子包括用于化妆品溶液、悬浮液、洗剂、霜膏、精华液、精华素、凝胶、调色剂、棒剂、喷剂、膏剂、洗液和皂条、洗发剂、毛发调理剂、糊剂、泡沫、摩丝、粉剂、剃须膏、擦拭物、贴片、带、强力贴片、微针贴片、绷带、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤贴膜、粉底、液滴等等的美容上可接受的溶剂和材料。这些产品类型可包含若干类型的美容上可接受的载体，包括但不限于溶液、悬浮液、乳液诸如微乳液和纳米乳液、凝胶、固体、脂质体、其他包封技术等等。
下述是载体的非限制性例子。其他载体可由本领域的普通技术人员配制。在一个实施例中，载体包含水。在另一个实施例中，载体还可包含一种或多种含水溶剂或有机溶剂。有机溶剂的例子包括但不限于：二甲基异山梨醇；肉豆蔻酸异丙酯；阳离子、阴离子和非离子表面活性剂；植物油；矿物油；蜡；树胶；合成的和天然的胶凝剂；链烷醇；二醇；和多元醇。二醇的例子包括但不限于甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二甘醇、三甘醇、辛二醇、甘油、丁二醇和己三醇以及它们的共聚物或混合物。链烷醇的例子包括但不限于具有约2个碳原子至约12个碳原子(例如，约2个碳原子至约4个碳原子)的那些，诸如异丙醇和乙醇。多元醇的例子包括但不限于那些具有约2个碳原子至约15个碳原子(例如，约2个碳原子至约10个碳原子)的那些，诸如丙二醇。基于载体的总重量计，有机溶剂可以约1％至约99.99％(例如，约20％至约50％)的量存在于载体中。基于载体的总重量计，水可以约5％至约95％(例如，约50％至约90％)的量存在于载体中(使用前)。溶液可包含任何合适量的溶剂，包括约40％至约99.99％。某些优选的溶液包含约50％至约99.9％、约60％至约99％、约70％至约99％、约80％至约99％、或约90％至99％的溶剂。
洗剂可由这种溶液制成。除了溶剂之外，洗剂通常包含至少一种润肤剂。洗剂可包含约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的润肤剂和约50％至约90％(例如，约60％至约80％)的水。
可由溶液配制的另一类产品是霜膏。霜膏通常包含约5％至约50％(例如，约10％至约20％)的润肤剂和约45％至约85％(例如，约50％至约75％)的水。
还可由溶液配制的另一类产品是膏剂。膏剂可包含动物油、植物油或合成油或半固态10烃类的简单基料。膏剂可包含约2％至约10％的润肤剂和约0.1％至约2％的增稠剂。
可用于本发明的产品还可作为乳液配制。如果载体是乳液，则约1％至约10％(例如，约2％至约5％)的载体包含乳化剂。乳化剂可为非离子、阴离子或阳离子的。
洗剂和霜膏可作为乳液配制。通常此类洗剂包含0.5％至约5％的乳化剂，而此类霜膏通常将包含约1％至约20％(例如约5％至约10％)的润肤剂；约20％至约80％(例如30％至约70％)的水；和约1％至约10％(例如约2％至约5％)的乳化剂。
水包油型和油包水型单乳液护肤制剂，诸如洗剂和霜膏，是本领域中是众所周知的，并且可用于本发明。多相乳液产品，诸如水包油包水型或油包水包油型，也可用于本发明。通常，此类单乳液或多相乳液包含水、润肤剂和乳化剂作为主要成分。
本发明的产品还可作为凝胶(例如，使用合适的胶凝剂的含水凝胶、醇凝胶、醇/水型凝胶或油凝胶)配制。用于含水凝胶和/或醇凝胶的合适胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物以及纤维素衍生物(例如，羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。用于油(诸如矿物油)的合适胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。此类凝胶通常包含介于约0.1重量％和5重量％之间的此类胶凝剂。
本发明的产品还可配制成固体制剂(例如，基于蜡的棒剂、皂条产品、粉剂或擦拭物)。本发明的产品还可与固体、半固体或可溶解的基材(例如，擦拭物、面膜、垫、手套或带)组合。
根据本发明原理使用的产品还可包含多种另外的美容活性剂的任一种。合适的另外的活性剂的例子包括：亮肤剂、深色剂、另外的抗衰老剂、原弹性蛋白促进剂、胶原促进剂、抗痤疮剂、控油光剂、抗微生物剂诸如抗酵母剂、抗真菌剂和抗细菌剂、抗炎剂、抗寄生虫剂、外用止痛剂、防晒剂、光照保护剂、抗氧化剂、角质层分离剂、洗涤剂/表面活性剂、保湿剂、营养物质、维生素、能量增强剂、止汗剂、收敛剂、除臭剂、脱毛剂、毛发生长增强剂、毛发生长延缓剂、固化剂、补水剂、增效剂、抗硬结剂、皮肤调理剂、抗蜂窝炎剂、气味控制剂诸如气味遮盖剂或pH改变剂等等。
具体实施方式
本发明的发明人意外地发现：粉防己提取物具有抗痤疮丙酸杆菌的作用，可以作为功能添加剂应用到护肤霜，护肤乳，精华液等个人护理产品中。文献中均未涉及粉防己提取物具有抑菌功效，也未涉及将其作为具有抑菌作用的功能添加剂加入到个人护理产品中用于痤疮的治疗和处理。
因此，本发明首次提出粉防己提取物具有抗痤疮丙酸杆菌的作用。将粉防己提取物作为功能添加剂加入到个人护理产品中可以有效地预防和治疗痤疮。
下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。但是，应该明白，这些实施例仅用于说明本发明而不构成对本发明范围的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明，所有的百分比和份数按重量计。
实施例1：粉防己提取物的制备
取粉防己药材，粉碎，称取100g倾入玻璃烧杯内，加入70％乙醇800mL，充分搅拌后置室温下提取3h，期间间断性进行搅拌，3h后以滤纸(新星公司的定性滤纸，直径9cm，中速，孔径15-20μm)过滤提取液，残渣再加入70％乙醇800mL在室温下进行提取，间断性进行搅拌，3h后以滤纸过滤提取液；残渣再加入70％乙醇800mL，搅拌混匀后置室温下过夜，以滤纸过滤提取液，合并3次提取液，在减压条件下回收乙醇至体积约100mL，备用。
实施例2：粉防己提取物抑菌作用
1.培养基和试剂
1.1标准菌株：痤疮丙酸杆菌(ATCC11827)。
1.2培养基：
脑心浸液琼脂培养基(Brian Heart Infusion Agar；商品名：脑心浸液琼脂培养基，生产商：BD)(细菌培养)[按说明书配制，121℃(151b)，15min高压灭菌后使用]
2.操作步骤
2.1抑菌片的制备：抑菌剂载体为7mm直径圆形新华一号定性滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后，置120℃烤干2h，保存备用。
2.2取无菌并干燥的滤纸片，每片滴加实施例1制备的粉防己提取液10ul，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿中，置室温下自然干燥5min后备用。
2.3对液体抑菌剂的阴性对照样本：可取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌去离子水10ul，干燥后备用。
2.4阳性对照样本：采用滴露原液(生产商利时洁家化(中国)有限公司批号：EXP2019-01-04)，取无菌干燥滤纸片，每片滴加10ul，干燥后备用。
2.5溶剂对照样本：应取给定溶剂样本，取无菌干燥滤纸片，每片滴加10ul，干燥后备用；若溶剂为去离子水，则可省略此对照样本。
2.6试验菌的接种：
2.6.1制备无菌培养基平板(无菌平板生产商青岛金典生化器材有限公司规格90×15mm培养皿(环氧乙烷灭菌)。每块培养基平板注入约15ml的培养基，置于室温下，自然干燥凝固。
2.6.2试验菌悬液制备：
试验菌液要求第四代或第五代新鲜菌液，即细菌提前24h划斜面，酵母菌提前48h划斜面，试验时用挑棒挑取新鲜斜面菌2-3环于9ml灭菌生理盐水中(与0.5麦的比浊管比浊，实际浓度应比比浊管略偏浓，比浊实际浓度应为108cfu/ml)，然后按照试验需要将菌液进行1：100稀释成试验所需菌悬液。
2.6.3取上述浓度为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml的试验菌悬液，用微量移液器吸取50μl试验用菌悬液至事先制备好的平板表面，并用无菌L棒将菌液涂抹均匀后，盖好平板。置室温干燥5min。
2.6.4试验菌液计数：以平板计数法对试验菌悬液进行计数。
2.7抑菌剂样片的贴放：
每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放2片平行试验样片，1片阴性对照，1片阳性对照样片，1片溶剂对照样片(若有)，共4-5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面，各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面，盖好平板，厌氧条件下，置37℃培养箱，培养48h，观察结果(第一次试验结束，应根据抑菌圈大小适当调整样片贴放规则)。
3.抑菌环直径的测量：
3.1试验菌悬液计数结果应在所需菌液的要求浓度范围内(5×105cfu/ml～5×106cfu/ml)。
3.2测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行，测量其直径应以抑菌环外沿为界。
4.抑菌作用的判定：
4.1抑菌环直径大于7.00mm者，判为有抑菌作用。
4.2抑菌环直径小于或等于7.00mm者，判为无抑菌作用。
5.实验结果
表1
如表1所示，粉防己提取物对痤疮丙酸杆菌(ATCC11827)的抑菌圈为48.01mm，有强效抑菌作用。
实施例3：最小抑菌浓度(MIC)测定试验
1.适用范围：本实施例采用肉汤稀释法，本方法适用于对可溶性抗(抑)菌产品其最小抑菌浓度的测定。
2.培养基和试剂
2.1标准菌株：痤疮丙酸杆菌(ATCC11827)菌悬液及根据抑菌剂特定用途所用的其他菌种。
2.2脑心浸出液肉汤培养基(Brain Heart Infusion Broth；商品名：脑心浸出液肉汤，生产商：BD)[按产品说明书配制,121℃(151b)，15min高压灭菌后使用]
2.3PBS缓冲液
用HCl调pH至7.2～7.4，再加蒸馏水定容至1000m1。
2.4生理盐水
配制方法：NaCl 8.5g
蒸馏水 加至1000ml
溶解后，加至可调瓶顶配液器中。将可调瓶顶配液器的刻度调节至每次加样量为9ml，再将生理盐水加入到20ml取样瓶中，每瓶9ml，高温高压灭菌。室温保存备用。
2.5脑心浸液琼脂培养基(Brian Heart Infusion Agar；商品名：脑心浸液琼脂培养基，生产商：BD)(细菌培养)[按说明书配制,121℃(151b)，15min高压灭菌后使用。
3.操作步骤
3.1制备试验用菌种的菌悬液，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度至108cfu/ml。
3.2含抗菌剂培养基的配制：将抗(抑)菌溶液用蒸馏水配制成不同浓度的受试液，取各稀释度受试液2.5ml加入到含有2.5ml双倍浓度脑心浸出液肉汤培养基的试管中。
3.3取0.1ml含菌量为108cfu/ml的菌悬液，接种于含抗(抑)菌剂的脑心浸出液肉汤的试管中，作为试验组样本。
3.4以同样方法接种菌悬液至不含抗(抑)菌剂的单倍脑心浸出液肉汤试管中，作为阳性对照组样本。
3.5取2支仅含有单倍脑心浸出液肉汤的试管，作为阴性对照组样本。
3.6将试验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本放置于37℃培养箱中厌氧培养，至阳性对照组肉汤变混浊，即取各试管中肉汤培养液1ml至平皿中，浇注培养基于37℃培养箱中进行厌氧培养，24-48h后观察结果。
3.7试验中应同时对试验用菌悬液进行活菌培养计数，浓度应为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml。
4.结果判定
当阳性对照管有细菌生长(混浊)，阴性对照管无细菌生长(透明)，试验用菌悬液的作用浓度为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml时，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗(抑)菌液浓度为该样品对受试菌的MIC。
5.实验结果
表2
注：以上结果是将试验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本放置于37℃培养箱中培养，至阳性对照组肉汤变混浊，取各试管中肉汤培养液1ml至平皿中，浇注培养基于37℃培养箱中进行培养，24-48h后观察结果。粉防己提取液对痤疮丙酸杆菌的最小抑菌浓度(MIC)是0.016g/ml。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：包含幼苗人参发酵物的化妆料组合物及其制备方法