发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，而提供一种小鼠肠卷标本制备装置及方法，它解决了现有的小鼠肠道组织固定方法中，横切固定法不能完整的呈现肠道组织的全貌，纵切固定法操作难度大且容易造成肠道损伤的问题。

本发明的技术方案是：小鼠肠卷标本制备装置，包括卷绕器和蜡条；卷绕器包括手柄和固定连接在手柄一端的卡座，卡座远离手柄的端部设有插孔；蜡条一端插装在卡座的插孔中，另一端从卡座的插孔中伸出。

本发明进一步的技术方案是：卡座的插孔为正六棱柱形孔，插孔的孔口处设有倒角，相应的，蜡条呈正六棱柱形，并与插孔的尺寸相适应。

本发明再进一步的技术方案是：蜡条的横切面的最大内接圆的直径为10mm，卡座的插孔的深度为20mm。

本发明更进一步的技术方案是：手柄为正四棱柱形杆，蜡条的轴心线与手柄的轴心线重合。

本发明更进一步的技术方案是：定心回转机构包括插套、轴承、轴承座和端盖；轴承座内部设有用于安装轴承的内腔，内腔中设有环形台阶面；插套呈圆柱形，其中心处设有贯通其两侧端面的通孔A，通孔A与手柄的外形尺寸相适应；轴承套装在插套上，并安装在轴承座的内腔中，其一端通过轴承座内腔中的环形台阶面定位，其另一端通过端盖定位；端盖设在轴承座的一端，并与轴承座和插套固定连接，其中心处设有可供手柄通过的通孔B；定心回转装置通过插套上的通孔A与卷绕器的手柄插接。

本发明的技术方案是：小鼠肠卷标本制备方法，步骤如下：

S01，取样小鼠小肠：

a、将小鼠麻醉后固定于操作台，暴露胸壁，心脏穿刺放血，至小鼠失血性休克；

b、待小鼠死亡后，腹部消毒，剪开腹壁，暴露腹腔，游离并切断小肠上段的贲门部，结扎小肠上段开口，再游离并切断小肠下段的回盲部；

c、通过注射器向小肠内注射生理盐水，以冲洗小肠内腔，使小肠内腔中的内容物从肠道下段切口处排出；

d、结扎小肠下段开口，游离出全段小肠，使用注射器向游离出的小肠内注入2ml生理盐水，以避免小肠内腔塌陷而导致腔壁粘连；

本步骤中，采用的麻醉剂为异氟烷，剂量为致死量；

本步骤中，小肠上段结扎点距离小肠上段切口1～2cm；

本步骤中，注射器的注射点位于小肠上段结扎点的后端1～2cm；

S02，制作矩形肠皮：

将注入生理盐水的小肠放置于玻璃皿中，在小肠上段紧邻结扎口的位置剪开一个横向切口，再将剪刀刀刃从横向切口处伸入小肠内腔，沿小肠的纵向方向从上至下剪开小肠，将横向切口上段的小肠切除，并剪开小肠下段的接扎线，最终形成一条矩形肠皮；

S03，矩形肠皮硬化处理：

将矩形肠皮的绒毛面朝上，展开平铺于操作台面上，再将Bouins液撒在矩形肠皮上，对矩形肠皮进行5～10min的硬化处理，以固定矩形肠皮的形态，便于后续的肠卷制作；

S04，制作肠卷：

a、用镊子钳取矩形肠皮的一端放置在蜡条上，并保证矩形肠皮的绒毛面朝向蜡条表面，然后转动手柄，通过手柄带动蜡条转动，从而将矩形肠皮以蜡条为轴心，逐圈环绕蜡条形成圆柱形肠卷；

b、断开蜡条与卡座的连接后，将蜡条和肠卷一同置于Bouins液中浸泡，对肠卷进行硬化处理，以固定肠卷的形态，防止后续浸泡福尔马林溶液时肠卷散开或变形；

c、再将蜡条和肠卷从Bouins液中取出，转移到福尔马林溶液中浸泡6～10h，对小肠进行组织进一步固定，以终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，保持组织原有的形态，避免抗原失活或弥散；

d、用锋利的刀刃沿肠卷的径向面下刀，切除肠卷轴向两端的组织和超出肠卷轴向两端的蜡条部分，仅保留肠卷轴向2-3cm的宽度，最终得到符合包埋盒尺寸的圆柱形肠卷，将圆柱形肠卷置于包埋盒中；

S05，肠卷脱水：

a、将包埋盒置于流动水中冲洗10min，充分除去圆柱形肠卷上的福尔马林溶液；

b、将包埋盒置于装有75%酒精的脱水盒A中浸泡80min；

c、将包埋盒从脱水盒A中取出，置于装有85%酒精的脱水盒B中浸泡80min；

d、将包埋盒从脱水盒B中取出，置于装有95%酒精的脱水盒C中浸泡80min；

e、将包埋盒从脱水盒C中取出，置于装有纯酒精的脱水盒D中浸泡80min；

f、将包埋盒从脱水盒D中取出，置于装有纯酒精的脱水盒E中浸泡80min；

S06，肠卷浸蜡：

a、将包埋盒从脱水盒E中取出，置于装有二甲苯原液的溶液盒A中浸泡20min；

b、将包埋盒从浸蜡盒A中取出，置于装有二甲苯原液的溶液盒B中浸泡30min；

c、将装有软蜡的浸蜡盒A置于烘箱中烘烤，使软蜡融化，再将包埋盒从溶液盒B中取出，置于浸蜡盒A中浸泡液态软蜡60min；

d、将装有软蜡的浸蜡盒B置于烘箱中烘烤使其软化呈液态，再将包埋盒从浸蜡盒A中取出，置于浸蜡盒B中浸泡液态软蜡60min；

e、将装有硬蜡的浸蜡盒C置于烘箱中烘烤使其软化呈液态，再将包埋盒从浸蜡盒B中取出，置于浸蜡盒C中浸泡液态硬蜡120min；

本步骤中，浸泡软蜡的过程中，设置烘箱温度为58～66℃之间，使软蜡维持融化状态；

本步骤中，浸泡硬蜡的过程中，设置烘箱温度为58～66℃之间，使硬蜡维持融化状态；

S07，肠卷包埋：

a、将脱水浸蜡后的圆柱形肠卷取出，置于包埋模具凹槽底部中心位置；

b、将液态硬蜡注满整个包埋模具凹槽，盖上包埋模具的盖子；

c、将整个包埋模具置于-18～-22℃的冷藏柜中静置20分钟；

d、将包埋模具的盖子取下，再将包埋模具倒置，轻叩包埋模具，使包含肠卷的蜡块从包埋模具中完整的脱出。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

1、肠卷制作方法中使用了Bouins液对肠皮进行预硬化处理，可在一定程度上提升肠皮的硬度，有利于保持肠皮的平整性。可减少后续卷绕肠皮操作对肠皮的拉扯和按压，(拉扯和按压是为了将肠皮整理平整，但是拉扯和按压会破坏小肠绒毛，扩大小肠容纳间隙，破坏肠道形态结构的完整性)，一方面降低了卷绕肠皮时的操作难度，有利于缩短肠皮的制作时长，另一方面由于减少了对肠皮的拉扯和按压，进而保证了肠道形态结构的完整性。

2、小肠离体后随着时间的推移，会因内源性或外源性的酶反应而导致组织自溶，影响对标本中的蛋白组织的观察，所以，简化和优化肠卷制作步骤是提升肠卷组织样本质量的关键所在。上述的肠卷制作方法简单易上手，耗时较短，能及时阻断内源性或外源性的酶反应，有利于保证小肠组织中蛋白的稳定性。

3、基于圆柱形肠卷制成的切片能完整的呈现肠道组织的全貌，便于观察实验。

4、小鼠肠卷标本制备装置可使肠卷标本的制备过程更加方便快捷。其中，蜡条一方面可供肠道依附和卷绕，为形成肠卷必不可少的部件，另一方面肠卷中心处的蜡条无需在肠卷浸蜡步骤之前剔除，肠卷中心处的蜡条可与肠卷浸蜡步骤所用蜡完美融合为一体。卷绕器中的卡座用于固定蜡条，手柄用于带动蜡条转动。定心回转机构可带动手柄绕其轴心线转动，进而保证了蜡条仅能绕其轴心线转动，蜡条绕其轴心线转动时，可形成外形规整的圆柱形肠卷。

以下结合图和实施例对本发明作进一步描述。