具体实施方式

本文提供抑制蛋白分泌的化合物。本文所述的化合物可用于治疗或预防与过度的蛋白分泌相关的疾病，如炎症和癌症，改善患病个体的生活质量。

本文提供的化合物，或其药学上可接受的盐，具有式(I)的结构：

其中R¹为H、C_0-3亚烷基-CN或C_2-6炔基；

R²为异丁基、C_2-8烯基、C_1-8卤代烷基、C_1-8羟烷基、C_0-3亚烷基-C_3-8环烷基、C_0-3亚烷基-C_3-8环烯基、C_0-3亚烷基-C_3-6杂环烷基或C_0-3亚烷基-C_3-6杂环烯基；

R³为C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6卤代烷基、C_1-8羟烷基、C_0-3亚烷基-C_3-8环烷基或C_0-3亚烷基-C_3-8环烯基；

R⁴为C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_1-8卤代烷基、C_1-8羟烷基、C_0-3亚烷基-C_3-8环烷基、C_0-3亚烷基-C_3-8环烯基，或C_0-3亚烷基-C_3-6杂环烷基；

R⁵为C_3-8环烷基、C_3-8环烯基、卤基取代的芳基、苯并噻吩基、四氢苯并噻吩基、三唑基、喹啉基、喹啉酮基、喹诺酮基、四氢喹啉基、四氢喹啉酮基、四氢喹诺酮基或吲哚基，

其中吲哚基为N-取代的，并且喹诺酮基或四喹诺酮基任选地为N-取代的，并且所述N-取代基包含C_3-8炔基、C_0-2亚烷基-C_3-8环烷基、C_0-2亚烷基-C_3-8环烯基、C_0-2亚烷基-取代的芳基或C_0-2亚烷基-杂芳基，并且被取代的芳基被一个或多个选自卤基、烷基、卤代烷基、OH和烷氧基的基团取代；并且

苯并噻吩基被一个或多个选自卤基、卤代烷基、烷基、OH和烷氧基的基团取代；

R⁶为C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_1-8卤代烷基、C_1-8羟烷基、C_0-3亚烷基-C_3-8环烷基、C_0-3亚烷基-C_3-8环烯基、C_0-3亚烷基-C_3-6杂环烷基或C_0-3亚烷基-C_3-6杂环烯基；

R⁷为C_1-8烷基；并且

R^N2、R^N3、R^N4、R^N5、R^N6和R^N7各自独立地为H或C_1-3烷基。

在一些情况下，式(I)的化合物或盐具有式(IA)的结构：

在各种情况下，R¹为H。在一些情况下，R¹为CH₂CN。在一些情况下，R¹为(CH₂)_0-2C≡CH(例如CH₂C≡CH或CH₂CH₂C≡CH)。

在各种情况下，R²为C_1-8卤代烷基或异丁基。在各种情况下，R²为CH₂CF₃、CH₂CH₂CF₃、CH₂-1-环己烯基、CH₂-1-环戊烯基、CH₂-环丙基、CH₂-环戊基、CH₂-环己基或CH₂-4-四氢吡喃基。

在各种情况下，R³为C_1-8卤代烷基或CH(CH₃)₂。在各种情况下，R⁴为C_1-8卤代烷基或CH(CH₃)₂。在各种情况下，R³为C_0-3亚烷基-C_3-8环烷基，或C_0-3亚烷基-C_3-8环烯基。在一些情况下，R³为1-环戊烯基或1-环己烯基。在各种情况下，R⁴为CH(CH₃)₂、C(CH₃)₃、CH₃、CH₂CH₃、CF₃、CH₂CF₃、四氢吡喃基或环戊基。在各种情况下，R⁴为C_0-3亚烷基-C_3-8环烷基，或C_0-3亚烷基-C_3-8环烯基。在一些情况下，R⁴为1-环戊烯基或1-环己烯基。

在一些情况下，R³和R⁴相同。在一些情况下，R³和R⁴各自为CH(CH₃)₂。

在各种情况下，R⁵包含环己基、环戊基或环戊烯基。

在一些情况下，R⁵包含喹啉基、喹啉酮基、喹诺酮基、四氢喹啉基、四氢喹啉酮基、四氢喹诺酮基。在一些情况下，R⁵包含 并且R'为C_3-8炔基、C_0-2亚烷基-C_3-8环烷基、C_0-2亚烷基-C_3-8环烯基、C_0-2亚烷基-芳基，或C_0-2亚烷基-杂芳基，其中芳基或杂芳基可为未被取代的或进一步被选自卤基、烷基、卤代烷基、OH和烷氧基的一个或多个(例如1、2或3个)基团取代。喹啉基、喹啉酮基、喹诺酮基、四氢喹啉基、四氢喹啉酮基或四氢喹诺酮基可为未被取代的或进一步被选自卤基、烷基、卤代烷基、OH和烷氧基的一个或多个(例如1、2或3个)基团取代。

在R⁵包含吲哚基的情况下，R⁵的结构可为其中R'为C₄炔基、CH₂-氟吡啶基、CH₂-甲基吡啶基、CH₂-甲氧基苯基、CH₂-甲基苯基(CH₂-甲苯基)、CH₂-氟苯基、CH₂-氯苯基、CH₂-溴苯基、CH₂-二氟苯基、CH₂-氟甲氧基苯基或CH₂-甲基异恶唑基。在一些情况下，R'为对氟苯甲基或对溴苯甲基。

在的情况下，R⁵包含苯并噻吩基，苯并噻吩基可被氯、氟、溴、甲基和甲氧基中的一个或多个取代。在一些情况下，R⁵包含氯苯并噻吩基(例如5-氯苯并噻吩基)。

在一些情况下，R⁶为CH₃、CH₂CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)(CH₂)₃CH₃、CH₂CF₃或CH₂CH₂CF₃。在各种情况下，R⁶为C_1-8卤代烷基。在一些情况下，R⁶为CH₂CH(CH₃)₂。在各种情况下，R⁶为C_0-3亚烷基-C_3-8环烯基。在一些情况下，R⁶为CH₂-1-环戊烯基或CH₂-1-环己烯基。

在各种情况下，R⁷为甲基。在各种情况下，R^N2、R^N3、R^N4、R^N5、R^N6和R^N7中的至少一个为H。在一些情况下，R^N2、R^N3、R^N4、R^N5、R^N6和R^N7中的至少一个为CH₃。在一些情况下，R^N2为H，R^N3为CH₃，R^N4为H，R^N5为CH₃，R^N6为H，并且R^N7为CH₃。

术语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在本文提供的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱形式的化合物与合适的有机酸或无机酸单独反应并分离因此形成的盐来制备。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月硅酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基磺酸盐和氨基酸盐等。(参见，例如，Berge等人,(1977)“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,《药物科学期刊(J.Pharm.Sci)》66:1-19.)

在一些实施例中，本文提供的化合物可含有一种或多种酸性官能团并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐可同样地在化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或通过单独地使纯化的化合物以其游离酸形式与合适的碱(如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、与氨或与药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备。代表性碱或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。

不受任何特定理论的束缚，本文所描述的化合物通过结合并禁用转位子的组分(包括但不限于Sec61)来抑制蛋白分泌，并且在一些情况下，以序列特异性的方式破坏在翻译蛋白的新生信号发送序列与包括但不限于Sec61的转位子的组分之间的交互。

本文所描述的化合物可以IC₅₀为至多5μM，或至多3μM，或至多1μM抑制目标蛋白的分泌(例如TNFα、PD1、Her3、VCAM、Prl、IL7或FLT3)。在各种情况下，本文公开的化合物可以IC₅₀为至多5μM，或至多3μM，或至多1μM抑制TNFα的分泌。在各种情况下，本文公开的化合物可以IC₅₀为至多5μM，或至多3μM，或至多1μM抑制VCAM的分泌。在一些情况下，本文公开的化合物可以IC₅₀为至多5μM，或至多3μM，或至多1μM抑制Her3的分泌。在各种情况下，本文公开的化合物可以IC₅₀为至多5μM，或至多3μM，或至多1μM抑制Prl的分泌。在各种情况下，本文公开的化合物可以IC₅₀为至多5μM，或至多3μM，或至多1μM抑制IL7的分泌。在各种情况下，本文公开的化合物可以IC₅₀为至多5μM，或至多3μM，或至多1μM抑制FLT3的分泌。

在一些情况下，如本文中所公开的化合物为如下表A中所示的化合物或其药学上可接受的盐。在一些情况下，化合物或盐如表A所示，或为C-01，其具有以下结构：(C-01)。

表A

化学定义

如本文所使用的，术语“烷基”是指含有一到三十个碳原子(例如，一到二十个碳原子或一到十个碳原子)的直链和支链饱和烃基。术语C_n表示烷基具有“n”个碳原子。例如，C₄烷基是指具有4个碳原子的烷基。C_1-7烷基是指具有涵盖整个范围的碳原子数(即，1到7个碳原子)以及所有亚组(例如1-6、2-7、1-5、3-6、1、2、3、4、5、6和7个碳原子)的烷基。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基(2-甲基丙基)、叔丁基(1,1-二甲基乙基)、3,3-二甲基戊基和2-乙基己基。除非另有说明，否则烷基可为未被取代的烷基或被取代的烷基。“卤代烷基”指示其中烷基的一个或多个氢被卤素原子(例如，F、Br、Cl或I)置换的烷基。在一些情况下，烷基的所有氢原子均被卤素原子置换。“羟烷基”指示其中烷基的一个或多个氢原子被-OH部分置换的烷基。

如本文所使用，术语“亚烷基”是指二价饱和脂肪族自由基。术语C_n意指亚烷基具有“n个”碳原子。举例来说，C_1-6亚烷基是指具有涵盖整个范围以及所有亚组的碳原子数的亚烷基，如先前针对“烷基”基团所描述。

如本文所用，术语“烯基”与“烷基”相同地定义，除了含有至少一个碳-碳双键，并且具有两个至三十个碳原子，例如两个到二十个碳原子，或两个到十个碳原子。术语C_n意指烯基具有“n个”碳原子。举例来说，C₄烯基是指具有4个碳原子的烯基。C_2-7烯基是指具有涵盖整个范围的碳原子数(即，2到7个碳原子)以及所有亚组(例如2-6、2-5、3-6、2、3、4、5、6和7个碳原子)的烯基。具体考虑的烯基包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基和丁烯基。除非另外指示，否则烯基可为未被取代的烯基或被取代的烯基。

如本文所用，术语“炔基”与“烷基”相同地定义，除了含有至少一个碳-碳三键，并且具有两个到三十个碳原子，例如两个到二十个碳原子，或两个到十个碳原子。术语C_n意指炔基具有“n个”碳原子。举例来说，C₄炔基是指具有4个碳原子的炔基。C_2-6炔基是指具有涵盖整个范围的碳原子数(即，2到6个碳原子)以及所有亚组(例如3-5、2-5、3-6、2、3、4、5和6个碳原子)的炔基。具体考虑的炔基包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基和丁炔基。除非另外指示，否则炔基可为未被取代的炔基或被取代的炔基。

如本文所使用的，术语“环烷基”是指含有三到八个碳原子(例如，3、4、5、6、7或8个碳原子)的脂肪族环状烃基。术语C_n意指环烷基具有“n”个碳环原子。举例来说，C₅环烷基是指在环中具有5个碳原子的环烷基。C_5-8环烷基是指具有涵盖整个范围的碳原子数(即，5个至8个碳原子)以及所有亚组(例如5-6、6-8、7-8、5-7、5、6、7和8个碳原子)的环烷基。环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。除非另有说明，否则环烷基可为未被取代的环烷基或被取代的环烷基。

如本文所用，术语“环烯基”与“环烷基”类似定义，不同之处在于在环中含有至少一个碳-碳双键，但是不是芳香族。术语C_n意指环烯基具有“n个”碳原子。举例来说，C₅环烯基是指在环中具有5个碳原子的环烯基。在一某些情况下，环烯基为C_5-8环烯基。C_5-8环烯基是指具有涵盖整个范围的碳原子数(即，5到8个碳原子)以及所有亚组(例如5-6、6-8、7-8、5-7、5、6、7和8个碳原子)的环烯基。环烯基的非限制性实例包括环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。除非另外指示，否则环烯基可为未被取代的环烯基或被取代的环烯基。

如本文所用，术语“杂环烷基”与环烷基类似地定义，并且术语“杂环烯基”与环烯基类似地定义，不同在于环含有一到三个独立地选自氧、氮或硫的杂原子。术语C_n意指杂环烷基或杂环烯基具有“n”个环碳原子-其中其余部分(1-3)为杂原子。杂环烷基和杂环烯基环可为具有1-3个环杂原子的3-10元环。杂环烷基的非限制性实例包括哌啶、四氢呋喃、四氢吡喃、二氢呋喃、吗啉、oxazepaneyl等。环烷基、环烯基、杂环烷基和杂环烯基可任选地被例如独立地选自烷基、亚烷基OH、C(O)NH₂、NH₂、氧(＝O)、芳基、卤代烷基、卤基和OH的一到三个基团取代。具有环氮的杂环烷基和杂环烯基可进一步被N-取代，或氮环原子可以“NH”存在。在一些情况下，环氮原子被烷基取代。在一些情况下，环氮被C_3-8炔基、C_0-2亚烷基-C_3-8环烷基、C_0-2亚烷基-C_3-8环烯基、C_0-2亚烷基-芳基，或C_0-2亚烷基-杂芳基取代。

如本文所用，术语“芳基”是指单环或多环(例如，稠合双环和稠合三环)碳环芳族环系统。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、菲基、亚联苯基、茚满基、茚基、蒽基、芴基和萘满基。除非另外指示，否则芳基可为未被取代的芳基或被取代的芳基。芳基可被例如选自卤基、卤代烷基、烷基、OH和烷氧基的一个或多个(例如1、2或3个)取代基取代。在一些情况下，被取代的芳基被一个或多个选自卤基、烷基、卤代烷基、OH和烷氧基的基团取代。

如本文所用，术语“杂芳基”是指单环或多环(例如融合的双环和融合三环)芳香族环系统，其中一到四个环原子选自氧、氮或硫，并且其余环原子为碳，所述环系统通过任何可用的环原子连接到分子的其余部分。术语C_n意指杂芳基具有“n”个环碳原子，其中环原子的其余部分(1-4)为杂原子。杂芳基可为具有1-4个环杂原子的5-10元环。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、噻二唑基、恶二唑基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、异喹啉基、苯并恶唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、三嗪基、三唑基、嘌呤基、吡嗪基、嘌呤基、吲哚啉基、phthalzinyl、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、萘啶基、吡啶并吡啶基、吲哚基、3H-吲哚基、喋啶基和喹喏啉基除非另有说明，否则杂芳基可为未被取代的杂芳基或被取代的杂芳基。杂芳基可被例如选自卤基、卤代烷基、烷基、OH和烷氧基的一个或多个(例如1、2或3个)取代基取代。在一些情况下，被取代的杂芳基被选自卤基、烷基、卤代烷基、OH和烷氧基的一个或多个基团取代。

如本文所用，术语“烷氧基(alkoxy)”或“烷氧基(alkoxyl)”是指“-O-烷基”基团。

如本文所用，术语“卤基”被定义为氟、氯、溴和碘。

“被取代的”官能团(例如，被取代的烷基、亚烷基、环烷基、芳基或杂芳基)为具有至少一个被非氢基(即，取代基)取代的氢基的官能团。非氢基(或取代基)的实例包括但不限于烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、醚、芳基、杂芳基、杂环烷基、羟基、氧基(或氧)、烷氧基、酯、硫酯、酰基、羧基、氰基、硝基、氨基、硫氢基和卤基。当被取代的烷基包括多于一个非氢基时，取代基可键合到同一个碳或两个或更多个不同的碳原子。

药物配制物和施用

进一步公开了药物组合物的制造和使用(替代地通称为配制物)，其包括一种或多种本文提供的化合物。还包括药物组合物本身。药物组合物通常包括药学上可接受的载剂。因此，本文提供药物配制物，其包括如本文中先前所描述的本文所描述的化合物(例如式(I)的化合物、在表A或B中列出的化合物，或前述的药学上可接受的盐)，和一种或多种药学上可接受的载剂。

短语“药学上可接受的”在本文中用以指在合理医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而无过量毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理效益/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用，短语“药学上可接受的载剂”意指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。如本文所使用，措辞“药学上可接受的载剂”包括与药物施用相容的缓冲液、用于注射的无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。每种载剂在与配制物的其它成分相容且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉、马铃薯淀粉和被取代或未被取代的β-环糊精；(3)纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可油和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二元醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸缓冲溶液；和(21)在药物配制物中采用的其它无毒相容的物质。在某些实施例中，本文所提供的药物组合物为非热原性的，即，当向患者施用时不诱导明显温度升高。

术语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在本文提供的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱形式的化合物与合适的有机酸或无机酸单独反应并分离因此形成的盐来制备。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月硅酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基磺酸盐和氨基酸盐等。(参见，例如，Berge等人,(1977)“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,《药物科学期刊(J.Pharm.Sci)》66:1-19.)

在一些实施例中，本文提供的化合物可含有一种或多种酸性官能团并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐可同样地在化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或通过单独地使纯化的化合物以其游离酸形式与合适的碱(如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、与氨或与药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备。代表性碱或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(参见例如Berge等人，同上)。

润湿剂、乳化剂和润滑剂，如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁、以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和香味剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。

如所属领域所公知的，如本文所描述制备的组合物可根据待治疗的病症和患者的年龄、状况和体重以各种形式施用。举例来说，在组合物口服施用的情况下，它们可被配制成片剂、胶囊、细粒、粉末或糖浆；或对于肠胃外施用，它们可被配制成注射剂(静脉内、肌内或皮下)、滴注制剂或栓剂。为了通过眼粘膜途径施用，它们可被配制成滴眼剂或眼药膏。这些配制物可通过常规方式结合本文所描述的方法制备，并且如果需要，可将活性成分与任何常规的添加剂或赋形剂混合，如粘结剂、崩解剂、润滑剂、矫正药、增溶剂、助悬剂、乳化剂或包衣剂。

可改变在本文提供的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平，以便获得“治疗有效量”，其为有效地实现针对特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的活性成分的量。

在药学上可接受的混合物中的本文提供的化合物的浓度将根据几个因素变化，包括待施用的化合物的剂量、采用的(一种或多种)化合物的药代动力学特性和施用途径。在一些实施例中，本文所提供的组合物可以含有约0.1％-10％w/v的本文公开的化合物以及其它物质的水溶液提供，用于肠胃外施用。典型的剂量范围可包括每天约0.01到约50mg/kg体重，以1-4个分开的剂量给予。每个分开的剂量可含有相同或不同的化合物。剂量将为根据几个因素的治疗有效量，包括患者的整体健康状况以及所选择的(一种或多种)化合物的配制物和施用途径。

可制备含有在0.005％到100％范围内的如本文所描述化合物的剂型或组合物，其中其余部分由无毒载剂组成。这些组合物的制备方法是所属领域技术人员已知的。预期的组合物可含有0.001％-100％活性成分，在一个实施例中，0.1％-95％，在另一个实施例中，75％-85％。尽管剂量将根据患者的症状、年龄和体重、待治疗或预防的病症的性质和严重程度、施用途径和药物形式而变化，一般来说，建议成年患者的日剂量为0.01到2000mg的化合物，并且这可以单次剂量或份开的剂量施用。可与载剂材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将通常是化合物产生治疗效果的量。

在禁止对人体实践的方法申请专利的司法管辖区中，将组合物“施用于”人类受试者的含义应限于规定一种人类受试者可以通过任何技术(例如，口服、吸入、局部施用、注射、插入等)自行施用的受控物质。旨在与定义专利主题的法律或法规相一致的最广泛的合理解释。在不禁止授予对人体实践的方法专利权的权限中，“给予”组合物包括对人体实践的方法以及前述活动两种。

使用方法

本文公开的化合物可抑制目标蛋白的蛋白分泌。本文公开的化合物可干扰细胞的Sec61蛋白分泌机制。在一些情况下，如本文中所公开的化合物抑制TNFα、PD1、Her3、VCAM、Prl、IL7和FLT3中的一种或多种，或TNFα、PD1、Her3、VCAM、Prl、IL7和FLT3中的每种的分泌。蛋白分泌活性可以如在下文实施例部分中描述的方式评估。

如本文所用，术语“抑制剂”意指描述阻断或降低药理学目标的活性的化合物(例如抑制Sec61在蛋白分泌途径中的功能的化合物)。抑制剂可发挥竞争性、无竞争性或非竞争性抑制。抑制剂可以可逆或不可逆地结合，并且因此，所述术语包括蛋白或酶的自杀底物的化合物。抑制剂可修饰蛋白活性位点上或附近的一个或多个位点，或可引起在酶上其它地方的构象变化。术语抑制剂在本文中比科学文献更广泛地使用，以便还涵盖其它种类的药学上或治疗上有用的试剂，如促进剂、拮抗剂、刺激剂、辅因子等。

因此，本文提供抑制在细胞中蛋白分泌的方法。在这些方法中，使细胞与以有效抑制目标蛋白分泌的量的本文所描述的化合物或其药物配制物接触。在一些实施例中，细胞在体外接触。在各种实施例中，细胞在体内接触。在各种实施例中，接触包括向受试者施用化合物或药物配制物。

Sec61抑制的生物学后果很多。举例来说，已经提出Sec61抑制用于治疗或预防受试者的炎症和/或癌症。因此，用于Sec61特异性化合物的药物配制物提供受试者施用药物和治疗这些病况的手段。如本文所用，术语“治疗(treat/treating/treatment)”等是指消除、减轻或改善疾病或病况和/或与其相关的症状。尽管不排除，但治疗疾病或病状不需要完全消除与其相关的疾病、病状或症状。如本文所用，术语“治疗(treat/treating/treatment)”等可包括“预防性治疗”，其是指在未患有但有风险或易于重新罹患疾病或病况或疾病或病况的复发的个体中，降低重新罹患疾病或病况的可能性，或降低先前控制的疾病或病况的复发的可能性。术语“治疗”和同义词设想了向需要此类治疗的个体施用治疗有效量的本方面的化合物。在本发明的含义内，“治疗”包括复发预防或阶段性预防以及急性或慢性体征、症状和/或功能障碍的治疗。可以对症治疗例如以抑制症状。它可在短时段内实现，在中期内定向，或者可为长期治疗，例如在维持疗法的背景下。如本文所使用，术语“患者”和“受试者”可互换使用，并且意指动物(如狗、猫、牛、马和绵羊(即，非人类动物))和人类。特定患者为哺乳动物(例如，人类)。术语患者包括男性和女性。

Sec61介导的炎性蛋白(例如TNFα)的分泌的抑制可破坏炎症信号。因此，本文提供通过向受试者施用治疗有效量的本文所描述的化合物治疗受试者的炎症的方法。在一些情况下，本文公开的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗关节炎。

另外，癌症细胞的生存力依赖于进入ER中用于存活的增加的蛋白分泌。因此，Sec61介导的蛋白分泌的非选择性或部分选择性抑制可抑制肿瘤生长。替代地，在免疫肿瘤学背景下，已知分泌的免疫检查点蛋白(例如，PD-1、TIM-3、LAG3等)的选择性分泌抑制剂可导致免疫系统活化以抵抗各种癌症。

因此，本文还提供通过向受试者施用治疗有效量的本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐治疗受试者的癌症的方法。可使用本文所描述的化合物和组合物治疗的特别预期的癌症包括但不限于黑素瘤、多发性骨髓瘤、前列腺癌、肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、鳞状细胞癌、白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、NPM/ALK转化的间变性大细胞淋巴瘤、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、小细胞癌、腺癌、胃癌瘤、肝细胞癌、胰腺癌、甲状腺癌、间变性大细胞淋巴瘤、血管瘤、头颈癌、膀胱癌和结肠直肠癌。在一些情况下，癌症为多发性骨髓瘤、前列腺癌、肺癌、膀胱癌或结肠直肠癌。在一些情况下，癌症为乳腺癌或黑素瘤。

还预期本文所描述的化合物用于预防和/或治疗多种疾病，包括但不限于增殖性疾病、神经毒性/变性疾病、缺血性病况、自身免疫和自身炎性病症、炎症、免疫相关疾病、HIV、癌症、器官移植排斥、败血性休克、病毒和寄生虫感染、与酸中毒相关的病况、黄斑变性、肺部病况、肌肉萎缩性疾病、纤维化疾病、骨和头发生长疾病。

增殖性疾病或病况的实例包括糖尿病性视网膜病、黄斑变性、糖尿病性肾病、肾小球硬化症、IgA肾病、肝硬化、胆道闭锁、充血性心力衰竭、硬皮病、放射线诱发的纤维化和肺纤维化(特发性肺纤维化、胶原血管疾病、结节病、间质性肺疾病和外在性肺病症)。

炎性疾病包括急性(例如，支气管炎、结膜炎、心肌炎、胰腺炎)和慢性疾病(例如，慢性胆囊炎、支气管扩张、主动脉瓣狭窄、再狭窄、牛皮癣和关节炎)，以及与炎症相关的疾病，如纤维化、感染和局部缺血。

当免疫系统的一部分无法正常工作或不存在时，就会发生免疫缺陷病症。它们可影响B淋巴细胞、T淋巴细胞或吞噬细胞，并且可遗传(例如IgA缺乏症、重症综合性免疫缺陷(SCID)、胸腺发育不良和慢性肉芽肿)或获得性的(例如获得性免疫缺陷综合症(AIDS)、人类免疫缺陷病毒(HIV)和药物引起的免疫缺陷)。免疫相关病况包括过敏病症，如过敏、哮喘和特应性皮炎，如湿疹。这类免疫相关病况的其它实例包括狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、强直性脊柱炎、皮肌炎、牛皮癣、多发性硬化症和炎性肠病(如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)。

当免疫系统错误地攻击被引入宿主体内的细胞时，会发生组织/器官移植排斥。当来自供体组织的T细胞继续进攻并攻击宿主的组织时，发生异体移植导致的移植物抗宿主疾病(GVHD)。在所有三种情况下，自身免疫性疾病、移植排斥和GVHD，通过用本公开内容的化合物或组合物治疗受试者来调节免疫系统可能是有益的。

本文还提供治疗患者的自体免疫疾病的方法，其包含施用治疗有效量的本文所描述的化合物。如本文所使用的“自身免疫性疾病”是从个体的自身组织产生并且针对个体的自身组织的疾病或病症。自身免疫性疾病的实例包括但不限于炎性反应，如包括牛皮癣和皮炎(例如，特应性皮炎)的炎性皮肤疾病；全身性硬皮病和硬化症；与炎性肠疾病(如克罗恩病和溃疡性结肠炎)相关的反应；呼吸窘迫综合征(包括成人呼吸窘迫综合征(ARDS))；皮炎；脑膜炎；脑炎；葡萄膜炎；结肠炎；肾小球肾炎；如湿疹和哮喘等过敏性病状以及涉及T细胞浸润和慢性炎性反应的其它病状；动脉粥样硬化；白细胞粘附不足；类风湿性关节炎；全身性红斑狼疮(SLE)；糖尿病(例如，I型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病)；多发性硬化症；雷诺氏(Raynaud's)综合症；自身免疫性甲状腺炎；过敏性脑脊髓炎；舍格伦氏(Sjogren's)综合症；青少年发病型糖尿病；以及由通常在结核病、结节病、多发性肌炎、肉芽肿病和血管炎中发现的细胞因子和T淋巴细胞介导的与急性和迟发型超敏反应相关的免疫反应；恶性贫血(阿迪森氏病)；涉及白细胞渗出的疾病；中枢神经系统(CNS)炎性病症；多器官损伤综合征；溶血性贫血(包括但不限于冷球蛋白血症或库姆氏阳性贫血)；重症肌无力；抗原-抗体复合物介导的疾病；抗肾小球基底膜疾病；抗磷脂综合征；过敏性神经炎；格雷夫氏(Graves')病；兰伯特-伊顿肌无力综合征；天疱疮性大疱；天疱疮；自身免疫性多内分泌腺病；瑞特氏病(Reiter's disease)；僵人综合征；贝赛特氏疾病；巨细胞动脉炎；免疫复合物性肾炎；IgA肾病；IgM多发性神经病；免疫性血小板减少性紫癜(ITP)或自身免疫性血小板减少症。本文提供的化合物可适用于治疗与炎症相关的病况，包括但不限于COPD、牛皮癣、哮喘、支气管炎、肺气肿和囊性纤维化。

本文还提供使用如本文中所公开的化合物治疗神经退行性疾病。神经退行性疾病和病况包括但不限于中风、对神经系统的缺血性损伤、神经外伤(例如，撞击性脑损伤、脊髓损伤和对神经系统的外伤性损伤)、多发性硬化症和其它免疫介导的神经病(例如，格林-巴利综合症及其变种、急性运动性轴索神经病、急性炎性脱髓鞘性多发性神经病和Fisher综合症)、HIV/AIDS痴呆症、轴索病、糖尿病性神经病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、多发性硬化、细菌、寄生虫、真菌和病毒性脑膜炎、脑炎、血管性痴呆、多发性梗塞性痴呆、路易体性痴呆、额叶痴呆(例如皮克病)、皮层下痴呆(例如亨廷顿氏或进行性核上性麻痹)、局灶性皮质萎缩综合征(如原发性失语症)、代谢毒性痴呆(如慢性甲状腺功能低下或B12缺乏症)和感染引起的痴呆(如梅毒或慢性脑膜炎)。

在下文的实施例部分中可找到使用本文所描述的化合物和组合物或其药学上可接受的盐抑制蛋白质分泌的进一步指导。

本文公开的化合物的合成

如本文中所公开的化合物可经由各种合成手段制备。鉴于下文一般性讨论以及在实例部分中提供的具体程序，为合成有机化学工作者提供了指导。

举例来说，可以根据以下方案制备具有合适的R⁵取代基的氨基酸：

可以购买或根据下文实例部分制备具有R1-R7中的任何一个的期望侧链的其它构建块氨基酸。氨基酸可平行地反应在一起以提供小肽，或在例如用于肽合成的树脂上顺序地反应。可根据期望的反应和肽偶联的顺序选择合适的保护基。

然后可使肽大环化以形成本公开的化合物。大环化可经由肽键形成条件发生。

实例

化合物的合成：

实例1：

在0℃下向2-乙酰胺基丙二酸二乙酯(5g，0.023mol)于DMF(25mL)的溶液中添加t-BuOK(2.84g，0.025mol)。将混合物在室温下搅拌1h。添加3-(溴甲基)-5-氯苯并[b]噻吩(6.0g，0.023mol)，并且将反应混合物搅拌过夜。添加水(60mL)，并且通过过滤收集所得沉淀，并且干燥以得到2-乙酰胺基-2-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)丙二酸二乙酯。

向2-乙酰胺基-2-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)丙二酸二乙酯(20g，50mmol)于EtOH(100mL)的溶液中添加4NNaOH水溶液(44mL)。将反应混合物在回流下加热3h。用6N HCl水溶液将混合物调节到pH＝3～5，并且然后回流过夜。在减压下去除溶剂到体积的一半。通过过滤收集所得沉淀，并且干燥以得到化合物2-乙酰胺基-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸。

将2-乙酰胺基-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸(15g，51mmol)悬浮在蒸馏水(450mL)中，并且用2N LiOH水溶液将混合物调节到pH＝8～9。添加L-酰化酶(1.5g)，并且将混合物在35℃～40℃下加热36h。添加活性碳(1.5g)，并且将所得混合物在60℃下加热1h。过滤出活性碳，并且将滤液调节到pH＝1。用乙酸乙酯(500mL×2)洗涤水溶液，并且然后浓缩以得到化合物(S)-2-氨基-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸。

向化合物(S)-2-氨基-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸(13g，51mmol)于水(80mL)中的溶液中添加Boc₂O(16.5g，76mmol)于丙酮(30mL)的溶液。用NaOH混合物调节到pH＝13，并且然后搅拌过夜。用HCl将混合物调节到pH＝1～2，并且用乙酸乙酯(200mL)萃取。经无水硫酸钠干燥有机层并且浓缩。用己烷洗涤残余物以得到化合物(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸。

在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸(2.20g，6.18mmol)于THF(6.5mL)中分批添加氢化钠(544mg，13.6mmol，于矿物油中60％分散液)，同时维持温度<10℃。在30min之后，添加碘甲烷(1.93g，13.6mmol)。将混合物搅拌6h然后冷却到0℃，并且添加额外部分的NaH(544mg，13.6mmol)随后添加MeI(1.93g，13.6mmol)将反应混合物升温到室温，并且再搅拌16h。用水(约50mL)稀释反应，并且碱性水溶液用二乙醚(2×25mL)萃取。用柠檬酸(10％，水溶液)使水溶液达到～pH＝3，并且用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机物经MgSO₄干燥并且在真空中浓缩以提供(S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸。

烧瓶装入(S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酸(2.00g，5.60mmol)、Leu-OMe(1.18g，6.50mmol)和HATU(2.58g，6.78mmol)。将混合物在氩气下溶解在DMF(15mL)中并且冷却到0℃，然后添加DIPEA(2.95mL，17.0mmol)，并且将混合物搅拌2h，用EtOAc(20mL)稀释并且用水(4×10mL)洗涤。合并的水相再用EtOAc(10mL)萃取，并且合并的有机物用盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na₂SO₄)，过滤并且浓缩以得到黄色固体(3.03g)，其无需进一步纯化进行下一个反应。

在0℃下向粗二肽酯(3.00g，6.21mmol)于THF(10mL)和水(4mL)的溶液中添加LiOH(7.5mL的于水中的1M溶液，7.45mmol)，并且将反应混合物搅拌1h，用1M HCl逐滴淬灭，并且用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机物用盐水(5mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并且浓缩以得到((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酰基)-L-亮氨酸。

向((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酰基)-L-亮氨酸(2.83g，5.86mmol)于二恶烷(5mL)中的溶液中添加HCl(5mL的于二恶烷中的4M溶液)。在搅拌1h之后，LCMS指示仅发生～50％去保护，并且添加另一等分试样的HCl(5mL，于二恶烷中的4M溶液)。在再2h之后，去保护完成，并且浓缩反应混合物并且与甲苯共蒸发3次然后与二恶烷共蒸发一次。将残余物溶解在二恶烷(37mL)和水(37mL)中并且添加Na₂CO₃(1.43g，13.48mmol)，随后FmocOSu(2.57g，7.62mmol)，并且将反应混合物搅拌过夜。通过在减压下去除二恶烷，并且用柠檬酸(10％水溶液)将反应混合物淬灭到pH～3，并且用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机级分用水(5mL)，然后盐水(5mL)洗涤，然后Na₂SO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩。将粗材料进行急骤色谱(二氧化硅，梯度洗脱，0到5％，v/v，MeOH/DCM)，得到((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-3-(5-氯苯并[b]噻吩-3-基)丙酰基)-L-亮氨酸。LCMS(ESI)：[M-H]^-，603.2。

使用来自实例1的程序由相应的芳基/杂芳基溴化物或市售/已知氨基酸制备以下化合物：

实例2

向在相思子碱(2.00g，9.16mmol)于水(17mL)和二恶烷(17mL)中的悬浮液中添加K₂CO₃(3.60g，26.12mmol)，并且然后逐滴添加Boc₂O(2.40g，11.00mmol)于二恶烷(10mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌12h然后浓缩以去除二恶烷。将反应混合物用己烷(2×20mL)洗涤，然后用柠檬酸(10％水溶液)酸化到pH～3，并且用EtOAc(2×20mL)萃取。合并的有机相用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，然后用(Na₂SO₄)干燥，过滤并且在减压下浓缩以得到N^α-(叔丁氧基羰基)-N^α-甲基-L-色氨酸。

在室温下在氩气下向搅拌的新鲜粉末状氢氧化钾(4.32g，75.38mmol)于二甲亚砜(无水，37mL)中的溶液添加N^α-(叔丁氧基羰基)-N^α-甲基-L-色氨酸(6.00g，18.85mmol)，并且将混合物搅拌1h。然后添加4-溴苯甲基溴(5.18g，20.73mmol)，并且将混合物在氩气下搅拌16h。溶液用水(10mL)稀释，用二乙醚(2×5mL)洗涤，并且然后用柠檬酸(10％水溶液)酸化直到pH～3。混合物用EtOAc(3×20mL)萃取，并且合并的级分用水(10mL)然后盐水(10mL)洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)并且在减压下浓缩以得到1-(4-溴苯甲基)-N^α-(叔丁氧基羰基)-N^α-甲基-L-色氨酸。

向1-(4-溴苯甲基)-N^α-(叔丁氧基羰基)-N^α-甲基-L-色氨酸(2.50g，5.13mmol)于二恶烷(1mL)中的溶液中添加HCl(5mL的于二恶烷中的4M溶液)。将混合物在室温下搅拌2h，然后在减压下浓缩，与二恶烷共蒸发若干次，然后再溶解在二恶烷(12mL)和水(12mL)的混合物中。向此混合物添加Na₂CO₃(1.25g，11.80mmol)，随后FmocOSu(2.25g，6.67mmol)，并且将混合物剧烈搅拌过夜。浓缩混合物以去除二恶烷，柠檬酸(10mL的10％水溶液)酸化并且用EtOAc(3×10mL)萃取，合并的有机级分用水然后盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并且在减压下浓缩。残余物进行急骤色谱(二氧化硅，梯度洗脱，0-5％MeOH/DCM)，以得到N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸(2.83g，91％)。¹H-NMR(400MHz；CDCl₃,旋转异构体):δ7.80-7.73(m,3H),7.67-7.60(m,1H),7.54(t,J＝6.8Hz,1H),7.49-7.39(m,5H),7.36-7.31(m,2H),7.22-7.12(m,4H),6.97(s,1H),6.91-6.86(m,2H),5.18-5.15(m,2H),5.05-5.01(m,0.5H),4.87-4.82(m,0.5),4.51-4.35(m,2H),4.26-4.17(m,1.5H),4.05-4.01(m,0.5),3.56-3.50(m,1H),3.41-3.34(m,1H),2.86(s,3H)。LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1218.2。

使用来自实例2的程序由相应的溴化物制备以下化合物：

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1197.6。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(3-甲氧基苯甲基)-N^α甲基-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1120.0。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-((6-氟吡啶-3-基)甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1097.8。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-((6-氟吡啶-3-基)甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1097.2。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N^α-甲基-1-((6到甲基吡啶-2-基)甲基)-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1089.3。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(3,4-二氟苯甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1131.3。

S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-3-(苯并[b]噻吩-3-基)丙酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，913.1。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-甲氧基苯甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1119.7。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(2-甲氧基苯甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1120.0。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N^α-甲基-1-((3-甲基异恶唑-5-基)甲基)-L-色氨酸

LCMS(ESI)[2M-H]^-，1070.0。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-氟苯甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1095.9。

实例3

20mL闪烁瓶装入N^α-(叔丁氧基羰基)-N^α-甲基-L-色氨酸(500mg，1.57mmol)、碘苯(352mg，1.72mmol)、碘化铜(30mg，0.16mmol)、反式-N,N′-二甲基环己烷-1,2-二胺(50μL，0.31mmol)、磷酸钾(733mg，3.45mmol)和二恶烷(5mL)。将混合物通过鼓泡氮气通过混合物而脱气10min，然后将反应混合物加热到110℃维持16h。浓缩反应混合物并且用柠檬酸(2mL的10％水溶液)处理，并且用EtOAc(3×5mL)萃取，并且合并的有机物用盐水(5mL)洗涤，过滤，在减压下浓缩并且进行色谱法(二氧化硅，0到10％，v/v MeOH/DCM)，以得到N^α-(叔丁氧基羰基)-N^α-甲基-1-苯基-L-色氨酸。¹H-NMR(400MHz；CDCl₃,旋转异构体):δ7.70-7.68(m,1H),7.58(d,J＝7.8Hz,1H),7.55-7.48(m,4H),7.40-7.34(m,1H),7.26-7.16(m,3H),4.98-4.85(m,1H),3.58-3.39(m,1.5H),3.29-3.22(m,0.5H),2.89(s,1.5H),2.78(s,1.5H),1.45(s,4.5H),1.22(s,4.5H)。LCMS(ESI)：[2M-H]^-，789.6。

使用实例2的方法从N^α-(叔丁氧基羰基)-N^α-甲基-1-苯基-L-色氨酸获得N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N^α-甲基-1-苯基-L-色氨酸。

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1033.5。

实例4

向L-亮氨酸(2.50g，19.06mmol)于烯丙醇(25mL)中的溶液中添加p-TsOH一水合物，并且将混合物在90℃(油浴)下搅拌16h。第二天，将溶液在减压下浓缩成固体残余物，将其溶解在DCM(25mL)中，并且用NaHCO₃(10mL的饱和水溶液)洗涤。水溶液级分用DCM(2×10mL)萃取，并且干燥(Na₂SO₄)合并的有机物，并且直接过滤到HCl(4当量，～19mL的于二恶烷中的4M溶液)中。将溶液在减压下浓缩，然后用Et₂O沉淀。将混合物简单超声处理，静置几分钟，然后使用移液管将溶液从固体倾析。将产物真空干燥过夜，得到L-亮氨酸烯丙酯的HCl盐。¹H-NMR(400MHz；DMSO-d₆):δ8.61(t,J＝0.4Hz,3H),5.94(ddt,J＝17.2,10.6,5.4Hz,1H),5.39(dq,J＝17.3,1.6Hz,1H),5.29(dq,J＝10.5,1.3Hz,1H),4.70(d,J＝5.4Hz,2H),4.01-3.98(m,1H),1.81-1.73(m,1H),1.67(t,J＝7.3Hz,2H),0.91(dd,J＝6.5,1.2Hz,6H)。

(S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸烯丙酯盐酸盐

使用上文所描述的程序；¹H-NMR(400MHz；CDCl₃):δ6.00-5.89(m,1H),5.39-5.29(m,2H),4.66(dd,J＝5.9,1.1Hz,1H),4.20-3.97(m,1H),3.51(dd,J＝8.6,5.1Hz,1H),2.38-2.21(m,1H),2.05(ddt,J＝13.7,10.8,5.4Hz,1H),1.83-1.74(m,1H),1.57-1.53(m,1H)。

实例5：

100mL圆底烧瓶装入N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)-N^α-甲基-L-色氨酸(6.50g，10.66mmol)、Leu-OAllyl(2.54g，12.26mmol)和HATU(4.87g，12.87mmol)。将混合物在氩气下溶解在DMF(50mL)中并且冷却到0℃，然后添加DIPEA(5.57mL，32.00mmol)，并且将混合物搅拌2h，用EtOAc(50mL)稀释并且用水(4×20mL)洗涤。合并的水相再用EtOAc(10mL)萃取，并且合并的有机物用盐水(10mL)洗涤并且干燥(Na₂SO₄)，过滤并且浓缩以得到N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)-N^α-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸烯丙酯。¹H-NMR(400MHz；CDCl₃,旋转异构体):δ7.80-7.79(m,2H),7.73-7.63(m,2H),7.55-7.34(m,5H),7.18(d,J＝0.1Hz,3H),7.00(s,1H),6.90-6.88(m,2H),6.45-6.43(m,1H),6.04-5.86(m,1H),5.38-5.07(m,4H),4.68-4.60(m,3H),4.44-4.35(m,1H),4.23-4.14(m,1H),3.93-3.80(m,1H),3.52-3.43(m,1H),3.28-3.22(m,1H),2.94-2.90(m,3H),1.69-1.51(m,4H),0.99-0.88(m,6H)。LCMS(ESI)：[M+H]⁺，764.6。

使用如在实例5中所描述程序制备以下化合物。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，788.8。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，803.25。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，652.6。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)-N^α-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸叔丁酯

¹H-NMR(400MHz；CDCl₃,旋转异构体):δ7.80-7.77(m,1H),7.73-7.65(m,2H),7.54-7.51(m,1H),7.45-7.38(m,3H),7.35-7.33(m,2H),7.24-7.14(m,3H),7.02-6.99(m,1H),6.95-6.84(m,2H),6.43-6.40(m,1H),5.21-5.08(m,2H),4.51-4.47(m,1H),4.37-4.33(m,0.5H),4.22-4.18(m,0.5H),3.87-3.78(m,1H),3.57-3.42(m,1H),3.28-3.22(m,1H),2.93(s,3H),1.64-1.61(m,1H),1.45(s,9H),1.00-0.86(m,6H)。LCMS(ESI)：[M+H]⁺，780.2。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N^α-甲基-1-(4-(三氟甲基)苯甲基)-L-色胺酰基-L-亮氨酸叔丁酯

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，770.2。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(3-甲氧基苯甲基)-N^α-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸叔丁酯

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，732.4。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-((6-氟吡啶-3-基)甲基)-N^α-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸叔丁酯

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，719.3。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-N^α-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸叔丁酯

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，719.2。

N^α-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N^α-甲基-1-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-L-色胺酰基-L-亮氨酸叔丁酯

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，716.2。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，627.1。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，608.5。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，736.0.

LCMS(ESI)：[M+Na]⁺，593.9。

LCMS(ESI)：[M+Na]⁺，739.4。

实例6：

在室温下在氩气下向Nα-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)-Nα-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸烯丙酯(8.29g，10.87mmol)于DCM(75mL)的溶液中添加PhSiH₃(2.62mL，21.74mmol)随后Pd(PPh₃)₄(628mg，0.54mmol)。将混合物搅拌2h然后浓缩到二氧化硅上，并且色谱分离(二氧化硅，0-5％，MeOH/DCM)，以得到Nα-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)-Na-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸。¹H-NMR(400MHz；CDCl₃,旋转异构体):δ7.79(dd,J＝7.2,0.6Hz,2H),7.66(d,J＝1.4Hz,3H),7.50-7.39(m,6H),7.18-7.15(m,3H),6.97(d,J＝0.3Hz,1H),6.87-6.85(m,2H),5.18-5.06(m,3H),4.60-4.54(m,1H),4.39-4.31(m,1H),4.21-4.14(m,1H),3.54-3.40(m,2H),3.25-3.18(m,1H),2.94-2.84(m,3H),1.72-1.50(m,3H),0.94-0.87(m,6H)。LCMS(ESI)：[M+H]⁺，722.6。

使用实例6的程序制备以下化合物：

LCMS(ESI)：[2M+H]⁺，1222.5

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1526.3。

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1496.6。

实例7：

向Nα-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)-Nα-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸叔丁酯(98mg，0.13mmol)于DCM(1mL)的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在室温下搅拌5h，然后在减压下浓缩。粗残余物进行色谱分离(二氧化硅，0-5％，MeOH/DCM)，以得到Nα-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-溴苯甲基)Nα-甲基-L-色胺酰基-L-亮氨酸。

使用实例7的程序制备以下化合物：

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1424.8。

无需进一步分析进行下一步骤。

无需进一步分析进行下一步骤。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，657.0。

LCMS(ESI)：[2M-H]^-，1140.3。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，679.9。

实例8：

向Boc-D-Gln-OH(30.0g，122mmol)于吡啶(150mL)中的10℃溶液逐滴添加DCC(25.9g，125mmol)于吡啶(75mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌3.5小时随后增加固体DCC(1g)。在30min之后，过滤反应混合物，并且将吡啶冲洗的固体收集到滤液。在真空中浓缩滤液，再悬浮在EtOAc(500ml)中，用5％柠檬酸水溶液(3×300mL)、盐水(3×300mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩以产生(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-氰基丁酸。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝12.69(br s,1H),7.17(d,J＝8.2Hz,1H),3.98-3.86(m,1H),2.58-2.51(m,2H),2.07-1.96(m,1H),1.83(m,1H),1.39(s,9H)。

向(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-氰基丁酸中间体(23.2g，91.5mmol)添加水(300mL)，并且将混合物加热到95℃维持15min。将悬浮液热过滤，并且在真空中浓缩滤液以获得(R)-2-氨基-4-氰基丁酸。

在搅拌下向(R)-2-氨基-4-氰基丁酸2(11g，86mmol)于水:AcOH，4:1(860mL)的0℃溶液添加NaNO₂水溶液(2M，86mL)。将反应搅拌过夜，并且在真空中将溶剂体积减少到150mL。浓HCl使溶液达到pH 1-2，并且水层用EtOAc萃取。浓缩有机层，并且用醚研制以产生(R)-4-氰基-2-羟基丁酸。将上清液浓缩到残余物。将残余物溶解在500ml的4:1水:AcOH中，并且在0℃下与108mmol的NaNO₂于50ml的H₂O中反应过夜，并且使其升温到环境温度过夜。如前所述处理反应以产生更多的产物。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ＝4.36(dd,J＝4.3,8.3Hz,1H),2.66-2.59(m,2H),2.20(m,1H),2.09-1.96(m,1H)。

实例9：

树脂负载：Cl-2-Cl-三苯甲基树脂(2.5g，1.6毫当量/g，4.07mmol)用DCM(20mL，无水)溶胀1h然后过滤。向树脂添加(2R)-4-氰基-2-羟基丁酸(789mg，6.11mmol，1.5当量)并且添加DIPEA(2.11mL，12.23mmol，3当量)于DCM(20mL，无水)中的溶液，并且将混合物搅动16h。然后过滤树脂，用DCM(2×20mL×1min)然后用甲苯(无水，2×20mL×1min轻轻摇动)洗涤。向过滤的树脂添加Fmoc-N-Me-Ala-OH(3.58g，11.0mmol，2.0当量)、DIC(1.72mL，11.0mmol，2当量)和N-甲基咪唑(0.88mL，11.0mmol，2当量)语甲苯(20mL，无水)中的溶液，并且将混合物搅动1h。过滤树脂，并且再次重复偶联程序。然后使用在实例10中描述的树脂‘洗涤方法A’洗涤树脂。然后将树脂在高真空下干燥过夜，得到负载的干燥树脂。

实例10：

在树脂上进行肽延伸的一般程序

树脂洗涤方法A：向树脂添加DMF(10mL/g树脂)，并且通过轻轻摇动1min来搅动树脂。过滤树脂并且用i-PrOH(1×10mL/g树脂)，然后DMF(1×10mL/g树脂)，然后i-PrOH(1×10mL)，然后DMF(1×10mL/g树脂)，然后DCM(3×10mL/g树脂)重复所述程序。

树脂洗涤方法B：向树脂添加DMF(10mL/g树脂)，并且通过轻轻摇动1min来搅动树脂。过滤树脂并且用i-PrOH(1×10mL/g树脂)，然后DMF(1×10mL/g树脂)，然后i-PrOH(1×10mL)，，然后DMF(3×10mL/g树脂)重复所述程序。

树脂洗涤方法C：向树脂添加DMF(10mL/g树脂)，并且通过轻轻摇动1min来搅动树脂。过滤树脂并且用i-PrOH(1×10mL/g树脂)，然后DMF(1×10mL/g树脂)，然后i-PrOH(1×10mL)，然后DMF(1×10mL/g树脂)，然后甲苯(3×10mL/g树脂)重复所述程序。

Fmoc去除：将4-甲基哌啶于DMF(20％，10mL/g树脂)的溶液添加到DMF(或DCM)溶胀的树脂中并且将混合物搅动5min。在抽吸下过滤树脂并且将所述程序再重复两次。过滤树脂并且使用‘树脂洗涤方法B’洗涤。

树脂偶联方法A：向Fmoc-AA-OH(2当量)和HATU(2当量)于DMF(0.1M)中的溶液中添加DIPEA(4当量)。溶液混合到均质性并且添加到树脂。将混合物在室温下搅动1h，然后过滤使用‘树脂洗涤方法B’洗涤。

树脂偶联方法B：向Fmoc-AA-OH(2当量)和EEDQ(2当量)于甲苯(0.35M)中的悬浮液中添加2体积的DMF。溶液快速混合到均质性并且添加到甲苯洗涤的树脂。将混合物在室温下搅动2h，然后过滤使用‘树脂洗涤方法B’洗涤。

合成线性肽：将2-Cl-三苯甲基-(R)-2-((N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N-甲基-L-丙胺酰基)氧基)-4-氰基丁酸酯树脂(3.00g，2.46mmol)用DCM(25mL)溶胀1h。然后过滤树脂，并且使用‘Fmoc去除’程序去除Fmoc基团。然后使用‘树脂洗涤方法C’洗涤树脂，然后使用‘树脂偶联方法B’使其与Fmoc-N-Me-Trp(4-BrBn)-Leu-OH联接，并且用‘树脂洗涤方法B’洗涤，然后使用‘Fmoc去除’程序去除Fmoc，并且用‘树脂洗涤方法B’洗涤树脂。使用以下以类似方式将肽拉长：

1)使用‘树脂偶联方法B’的Fmoc-Gly(CH₂CF₃)-OH

2)使用‘树脂偶联方法A’的Fmoc-N-Leu-OH

3)使用‘树脂偶联方法B’的Fmoc-Gly(CH₂CF₃)-OH

在去除最后一个N端Fmoc基团之后，使用‘洗涤方法A’洗涤树脂。

树脂裂解：向假定的2.46mmol负载的树脂添加HFIP(15mL的于DCM中的20％溶液)，并且将混合物搅动15min。过滤溶液并且收集到含有HCl(0.25M于EtOAc中的溶液，40mL～4当量)250mL圆底烧瓶中。再次重复裂解程序，并且在HCl的同一烧瓶中收集溶液。将其余树脂用DCM(2×10mL)冲洗到HCl溶液中，并且将合并的溶液在减压下浓缩。将残余物溶解在最小体积的EtOAc中，然后用Et₂O沉淀。倾析，将混合物超声处理～10秒，并且使沉淀沉降几分钟，然后使用移液管仔细去除液体。残余固体用Et₂O研制，并且在高真空下干燥，以得到(3R,6S,9S,12S,15S,18S,21S)-12-((1-(4-溴苯甲基)-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-羧基-1-氰基-23,23，23-三氟-9,18-二异丁基-6,7,13,19-四甲基-5,8,11,14,17,20-六氧-15-(2,2,2-三氟乙基)-4-氧杂-7,10,13,16,19-五氮杂二十三烷-21-氯化铵。HRMS(ESI)：[M-H]^-C₅₃H₈₇N₈O₉，计算值，1101.3878；实测值，1101.3868。

使用实例9和10的程序制备以下化合物：

LCMS(ESI)：[M-H]^-，841.0。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，1116.3。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，963.8。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，937.4。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺,984.1。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，1114.1。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，1098.9。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，958.4。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，986.5。

LCMS：(ESI)：[M-H]^-，988.0。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，802.1。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，949.2。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，961.2。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，1037.6。

LCMS：[M+H]⁺，1040.6。

LCMS：(ESI)：[M-H]^-，1000.2。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，1000.2。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，1000.1。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，1049.6。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，974.6。

LCMS：(ESI)：[M-H]^-，1005.5。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，884.5。

线性肽进行大环化未进行光谱分析。

线性肽进行大环化未进行光谱分析。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，1047.4。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，1064.6。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，1050.6。

LCMS(ESI)：[M+H]⁺，1076.7。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，969.6。

LCMS(ESI)：[M-H]^-，879.3。

实例11 C-58：

将(3R,6S,9S,12S,15S,18S,21S)-12-((1-(4-溴苯甲基)-1H-吲哚-3-基)甲基)-3-羧基-1-氰基-23,23,23-三氟-9,18-二异丁基-6,7,13,19-四甲基-5,8,11,14,17,20-六氧-15-(2,2,2-三氟乙基)-4-氧杂-7,10,13,16,19-五氮杂二十三烷-21-氯化铵(930mg，0.816mmol)和DIPEA(427μL，2.45mmol，3当量)于DCM(313mL)中的溶液经由滴液漏斗(以～1滴/秒的速率)添加到快速搅拌的HATU(316mg，0.858mmol)、DMF(6mL)和DCM(1.31L)的溶液。在完成添加后，将漏斗DCM(～10mL)冲洗到反应混合物中，并且将反应搅拌18h。添加额外部分的HATU(158mg，429mmol)，并且将反应再搅拌2h。将反应混合物用HCl(500mL的0.2M水溶液)，然后用NaHCO₃(500mL的33％饱和水溶液)洗涤。然后将DCM层干燥(MgSO₄)，过滤并且在减压下浓缩。残余物通过急骤色谱(二氧化硅，阶段梯度洗脱，5％-50％丙酮:己烷)纯化。浓缩适当的级分提供3-((2R,5S,8S,11S,14S,17S,20S)-14-((1-(4-溴苯甲基)-1H-吲哚-3-基)甲基)-8,17-二异丁基-7,13,19,20-四甲基-3,6,9,12,15,18,21-七氧-5,11-双(2,2,2-三氟乙基)-1-氧杂-4,7,10,13,16,19-六氮杂环二十一烷-2-基)丙腈。¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.45(d,J＝10.1Hz,1H),8.25(d,J＝9.6Hz,1H),8.01(d,J＝7.0Hz,1H),7.71(dd,J＝7.1,0.9Hz,1H),7.50-7.47(m,2H),7.41(t,J＝5.9Hz,1H),7.36(s,1H),7.18-7.09(m,4H),5.45-5.34(m,2H),5.26-5.06(m,3H),4.76-4.71(m,1H),4.37(dd,J＝10.9,3.6Hz,1H),3.99-3.94(m,1H),3.38-3.32(m,1H),3.29(s,3H),3.17-3.09(m,1H),2.94(s,3H),2.58(s,3H),2.52-2.48(m,2H),2.37-2.18(m,4H),2.07(dt,J＝4.4,2.2Hz,2H),1.96-1.82(m,2H),1.57-1.45(m,8H),1.04-0.94(m,10H),0.90-0.85(m,2H),0.49-0.42(m,1H)。LCMS(ESI)：C₄₉H₆₂BrF₆N₈O₈[M+H]⁺，计算值，1083.4；实测值，1083.2

使用实例11的程序制备以下化合物：

C-37 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.73(d,J＝10.0Hz,1H),7.99(d,J＝9.6Hz,1H),7.73(d,J＝6.7Hz,1H),7.36-7.33(m,2H),7.31-7.25(m,3H),5.10-4.97(m,3H),4.88(dt,J＝9.5,7.1Hz,1H),4.52(ddd,J＝11.7,7.0,3.6Hz,1H),4.43(dd,J＝10.9,4.2Hz,1H),3.92(q,J＝6.8Hz,1H),3.20(s,3H),3.12-3.09(m,2H),2.87(s,3H),2.60(t,J＝3.7Hz,2H),2.54(s,3H),2.31-2.25(m,1H),2.08-1.97(m,1H),1.81(dtd,J＝13.9,12.5,5.4Hz,2H),1.70-1.38(m,13H),1.08(d,J＝6.4Hz,3H),1.01-0.90(m,16H),0.71-0.66(m,6H),-0.18(ddd,J＝14.1,10.7,3.4Hz,1H)。LCMS(ESI)：C₄₄H₇₀N₇O₈[M+H]⁺，计算值，824.5；实测值，824.6

C-48 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.88(d,J＝9.9Hz,1H),8.18(d,J＝9.4Hz,1H),7.75(t,J＝8.4Hz,2H),7.49-7.43(m,3H),7.29(s,1H),7.23-7.18(m,2H),7.16-7.09(m,2H),5.39(s,2H),5.23-5.12(m,2H),5.06(dt,J＝10.2,3.7Hz,2H),4.45-4.39(m,1H),4.30(dd,J＝11.1,4.1Hz,1H),4.01(q,J＝6.8Hz,1H),3.30(s,4H),3.25-3.10(m,2H),2.94(s,3H),2.57(s,3H),2.56-2.52(m,2H),2.35-2.18(m,3H),2.16-2.15(m,1H),2.01-1.93(m,2H),1.87-1.80(m,1H),1.75-1.61(m,2H),1.58-1.46(m,4H),1.38-1.26(m,2H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H),0.99-0.95(m,3H),0.87-0.84(m,1H),0.37-0.27(m,3H),0.01(t,J＝6.0Hz,3H),-0.55(s,1H)。LCMS(ESI)：C₅₀H₆₄BrF₆N₈O₈[M+H]⁺，计算值，1097.4；实测值，1097.2

C-49 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.92(d,J＝10.0Hz,1H),8.20(d,J＝9.5Hz,1H),8.02(dd,J＝16.7,7.9Hz,2H),7.79-7.78(m,1H),7.51-7.40(m,3H),5.18(ddd,J＝16.4,9.6,4.6Hz,2H),5.09(td,J＝11.3,3.7Hz,2H),4.39-4.31(m,1H),4.28(t,J＝5.5Hz,1H),4.04(qd,J＝9.1,5.3Hz,1H),3.47(dd,J＝15.0,10.8Hz,2H),3.33(s,3H),3.19-3.11(m,1H),2.96(s,3H),2.57(s,4H),2.34-2.20(m,3H),2.19-2.01(m,4H),1.98-1.88(m,1H),1.87-1.80(m,1H),1.74-1.64(m,2H),1.49(d,J＝6.8Hz,4H),1.37(d,J＝10.1Hz,2H),1.22(s,1H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.95(d,J＝6.6Hz,3H),0.49-0.48(m,3H),-0.08(d,J＝6.6Hz,2H),-0.41--0.48(m,1H)。LCMS(ESI)：C₄₃H₅₈F₆N₇O₈S[M+H]⁺，计算值，947.4；实测值，947.3

C-50 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.96(d,J＝10.0Hz,1H),8.05-7.95(m,3H),7.70(d,J＝6.7Hz,1H),7.52-7.40(m,3H),5.17-5.04(m,2H),4.88-4.82(m,1H),4.36(ddd,J＝17.9,9.5,4.1Hz,2H),4.01(五重峰,J＝7.0Hz,1H),3.47-3.36(m,2H),3.31(s,3H),2.96(s,3H),2.52(s,4H),2.27-2.21(m,3H),1.94-1.73(m,4H),1.66-1.45(m,8H),1.39-1.33(m,2H),1.05(d,J＝6.4Hz,3H),0.96(d,J＝6.5Hz,3H),0.92-0.88(m,5H),0.83(dd,J＝9.6,6.4Hz,1H),0.50(d,J＝6.5Hz,3H),-0.07(d,J＝6.6Hz,3H),-0.42(ddd,J＝14.3,11.1,3.4Hz,1H).LCMS(ESI)：C₄₅H₆₅F₃N₇O₈S[M+H]⁺，计算值，920.5；实测值，920.9

C-51 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.70(d,J＝10.1Hz,1H),8.28(d,J＝9.5Hz,1H),7.84(dd,J＝7.0,1.3Hz,1H),7.71(d,J＝6.9Hz,1H),7.64-7.53(m,5H),7.42-7.38(m,1H),7.36(d,J＝11.9Hz,1H),7.28-7.20(m,2H),5.22(dt,J＝9.4,6.2Hz,1H),5.13-5.06(m,3H),4.41(ddd,J＝11.5,7.4,3.7Hz,1H),4.31(dd,J＝10.9,4.3Hz,1H),3.97(q,J＝6.8Hz,1H),3.37-3.31(m,5H),3.16(ddd,J＝14.9,11.2,6.3Hz,1H),2.95(s,3H),2.59(s,3H),2.52(t,J＝6.2Hz,2H),2.32(ddd,J＝15.1,11.0,5.8Hz,1H),2.23-2.16(m,1H),1.97(dtd,J＝9.8,7.5,5.4Hz,1H),1.83(ddd,J＝14.1,10.8,3.4Hz,1H),1.68-1.34(m,12H),1.03-0.94(m,13H),0.41(d,J＝6.5Hz,3H),-0.06(d,J＝6.6Hz,3H),-0.38(td,J＝9.6,4.1Hz,1H)。LCMS(ESI)：C₅₀H₆₈F₃N₈O₈[M+H]⁺，计算值，965.5；实测值，966.0

C-57 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.31(dd,J＝9.8,5.1Hz,2H),7.91(d,J＝7.0Hz,1H),7.80-7.77(m,1H),7.49-7.44(m,3H),7.34(d,J＝2.9Hz,1H),7.19-7.16(m,4H),5.35(d,J＝4.0Hz,1H),5.23(dd,J＝10.5,4.8Hz,1H),5.13(td,J＝9.9,3.9Hz,2H),4.36(dd,J＝11.0,4.3Hz,1H),4.13-4.09(m,1H),4.00(q,J＝6.8Hz,1H),3.34(s,3H),3.23-3.15(m,2H),2.89(s,3H),2.66(ddd,J＝11.7,7.9,4.9Hz,2H),2.59(s,3H),2.36-2.25(m,2H),2.16-2.13(m,1H),1.82-1.77(m,2H),1.68(td,J＝11.5,4.3Hz,1H),1.53-1.47(m,9H),1.03(d,J＝6.5Hz,3H),0.99-0.93(m,9H),0.86(dd,J＝9.6,6.6Hz,2H),0.06-0.05(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₀H₆₄BrF₆N₈O₈[M+H]⁺，计算值，1097.4；实测值，1097.0。

C-78 1:4差向异构体混合物；¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆,主要差向异构体):δ8.97(d,J＝10.1Hz,1H),8.15(d,J＝9.6Hz,1H),7.80-7.77(m,2H),7.49-7.43(m,3H),7.30(d,J＝9.7Hz,1H),7.23-7.09(m,5H),5.51(td,J＝9.8,4.3Hz,1H),5.39-5.35(m,2H),5.25(dd,J＝6.2,3.3Hz,1H),5.16-5.05(m,2H),4.44-4.35(m,2H),4.05-3.99(m,1H),3.31(s,3H),3.23-3.07(m,3H),2.90(s,4H),2.58(s,6H),2.41-2.33(m,1H),2.27-2.21(m,1H),1.98-1.82(m,2H),1.68-1.51(m,3H),1.52-1.46(m,4H),1.37-1.28(m,4H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H),0.98-0.91(m,4H),0.90-0.84(m,3H),0.33(d,J＝6.4Hz,3H),-0.03(d,J＝6.6Hz,3H),-0.55--0.62(m,1H)。LCMS(ESI)：C₄₉H₆₂BrF₆N₈O₈[M+H]⁺，计算值，1083.4；实测值，1083.2。

C-67 ¹H-NMR(400MHz；d6-丙酮):δ8.76(d,J＝

10.1Hz,1H),8.30(d,J＝9.4Hz,1H),8.16(d,J＝1.9Hz,1H),8.01(d,J＝8.6Hz,1H),7.77(d,J＝6.7Hz,1H),7.47(s,1H),7.43(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),5.18(dt,J＝9.4,6.2Hz,1H),5.12-5.02(m,3H),4.38-4.25(m,2H),3.98(q,J＝6.8Hz,1H),3.45(dd,J＝15.1,11.1Hz,1H),3.34-3.30(m,3H),3.27(d,J＝3.7Hz,1H),3.20-3.08(m,2H),2.91(s,3H),2.59-2.56(m,5H),1.99-1.93(m,1H),1.82(ddd,J＝14.1,10.9,3.4Hz,1H),1.67-1.61(m,2H),1.59-1.29(m,12H),1.01-0.91(m,15H),0.46(d,J＝6.5Hz,3H),-0.04(d,J＝6.6Hz,3H),-0.55(ddd,J＝13.9,10.7,3.2Hz,1H)。HRMS(ESI)：C₄₄H₆₀ClF₃N₇O₈S[M-H]^-，计算值，938.3870；实测值，938.3849。

C-29 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.78(d,J＝10.1Hz,1H),8.06-7.99(m,3H),7.69-7.67(m,1H),7.52-7.41(m,2H),7.38(s,1H),5.04(t,J＝5.0Hz,3H),4.89-4.83(m,1H),4.40-4.37(m,1H),4.33-4.28(m,1H),3.96(q,J＝6.8Hz,1H),3.48-3.39(m,3H),3.33(s,3H),2.93(s,3H),2.54(d,J＝2.3Hz,5H),2.23-2.18(m,1H),1.98-1.89(m,1H),1.83-1.76(m,2H),1.64-1.57(m,2H),1.53-1.43(m,9H),1.41-1.31(m,3H),1.05(d,J＝6.4Hz,3H),0.98-0.89(m,17H),0.84(dd,J＝12.5,5.6Hz,1H),0.51(d,J＝6.4Hz,3H),-0.07(d,J＝6.5Hz,3H),-0.37--0.45(m,1H)。LCMS(ESI)：C₄₆H₇₀N₇O₈S[M+H]⁺，计算值，880.5；实测值，880.4

使用组合的在实例9-11内的程序制备以下化合物：

C-68 LC-MS(ESI)：m/z 887.5[M+H]⁺

C-66 LC-MS(ESI)：m/z 874.5[M+H]⁺

C-64 LC-MS(ESI)：m/z 872.6[M+H]⁺

C-63 LC-MS(ESI)：m/z 886.6[M+H]⁺

C-62 LC-MS(ESI)：m/z 872.6[M+H]⁺

C-61 LC-MS(ESI)：m/z 872.6[M+H]⁺

C-60 LC-MS(ESI)：m/z 886.6[M+H]⁺

C-56 LC-MS(ESI)：m/z 910.6[M+H]⁺

C-55 LC-MS(ESI)：m/z 896.6[M+H]⁺

C-54 LC-MS(ESI)：m/z 898.6[M+H]⁺

C-53 LC-MS(ESI)：m/z 872.6[M+H]⁺

C-52 LC-MS(ESI)：m/z 886.6[M+H]⁺

C-47 LC-MS(ESI)：m/z 898.6[M+H]⁺

C-45 LC-MS(ESI)：m/z 912.6[M+H]⁺

C-44 LC-MS(ESI)：m/z 900.6[M+H]⁺

C-43 LCMS(ESI)：m/z 886.6[M+H]⁺

C-26 LCMS(ESI)：m/z 892.5[M+H]⁺

C-25 LC-MS(ESI)：m/z 838.5[M+H]⁺

C-24 LC-MS(ESI)：m/z 927.6[M+H]⁺

C-23 LC-MS(ESI)：m/z 898.6[M+H]⁺

C-22 LC-MS(ESI)：m/z 900.6[M+H]⁺

C-21 LC-MS(ESI)：m/z 872.6[M+H]⁺

C-20 LC-MS(ESI)：m/z 858.6[M+H]⁺

C-19 LC-MS(ESI)：m/z 858.6[M+H]⁺

C-18 LC-MS(ESI)：m/z 914.7[M+H]⁺

C-17 LC-MS(ESI)：m/z 927.6[M+H]⁺

C-10 LC-MS(ESI)：m/z 892.5[M+H]⁺

C-09 LC-MS(ESI)：m/z 892.5[M+H]⁺

C-08 LC-MS(ESI)：m/z 827.6[M+H]⁺

C-07 LC-MS(ESI)：m/z 813.5[M+H]⁺

C-06 LC-MS(ESI)：m/z 799.5[M+H]⁺

C-05 LC-MS(ESI)：m/z 841.6[M+H]⁺

C-04 LC-MS(ESI)：m/z 855.6[M+H]⁺

C-03 LC-MS(ESI)：m/z 853.5[M+H]⁺

实例12 C12：

同时，在室温下在氩气下以1mL/h的速率经由注射泵将HATU(20mg，0.052mmol)和HOAt(5.4mg，0.040mmol)于DMF(2.5mL)和线性缩酚肽(44mg，0.040mmol)两者的溶液添加到DIPEA(21μL，0.12mmol)于DCM(35mL)的溶液中。在完成增加之后，将反应搅拌16h，然后在减压下浓缩。粗材料通过反相HPLC纯化。¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.73(d,J＝9.9Hz,1H),8.03(d,J＝9.6Hz,1H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(d,J＝6.7Hz,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.32(td,J＝6.0,2.7Hz,2H),7.27(s,1H),7.18-7.05(m,4H),5.43-5.37(m,3H),5.09-5.01(m,3H),4.89-4.83(m,1H),4.41-4.32(m,2H),3.94(d,J＝6.8Hz,2H),3.31(s,3H),3.28-3.24(m,1H),2.91(s,3H),2.54(s,3H),2.50(t,J＝6.3Hz,2H),2.22-2.16(m,1H),1.97-1.93(m,1H),1.84-1.75(m,2H),1.64-1.56(m,3H),1.56-1.44(m，9H)，1.38-1.26(m，3H)，1.05(d，J＝6.3Hz，3H)，0.98-0.89(m，18H)，0.36(d,J＝6.5Hz,3H),-0.01(d,J＝6.6Hz,3H),-0.52--0.58(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₃H₇₆FN₈O₈[M+H]⁺，计算值，971.6；实测值，971.9

使用实例12的程序制备以下化合物：

C-34 ¹H-NMR(400MHz；DMSO-d₆):δ8.77(d,J＝9.9Hz,1H),8.36-8.34(m,1H),7.69-7.67(m,1H),7.30(t,J＝7.1Hz,2H),7.25-7.20(m,3H),4.84-4.77(m,3H),4.68-4.66(m,1H),4.33-4.28(m,1H),4.19-4.14(m,1H),3.92-3.87(m,2H),3.19-3.14(m,1H),2.94(s,3H),2.74(s,3H),2.41(s,3H),1.71-1.63(m,3H),1.51-1.43(m,5H),1.34-1.23(m,10H),1.20(d,J＝7.0Hz,4H),0.98(dd,J＝8.8,5.2Hz,6H),0.89-0.82(m,15H),0.69-0.67(m,3H),0.58-0.57(m,3H)。LCMS(ESI)：C₄₂H₆₉N₆O₈[M+H]⁺，计算值，785.5；实测值，784.5。

C-11 1H-NMR(400MHz；丙酮-d6):δ8.85-8.83(m,1H),7.80-7.77(m,1H),7.59-7.54(m,2H),7.46(d,J＝8.3Hz,1H),7.23-7.12(m,4H),7.07-7.03(m,1H),6.89-6.86(m,2H),5.32-5.31(m,2H),5.01-4.84(m,3H),4.46-4.42(m,1H),4.38-4.33(m,1H),3.77(s,4H),3.46-3.39(m,1H),3.21-3.15(m,1H),3.07(s,3H),2.90(s,3H),2.53(s,3H),1.82-1.74(m,3H),1.62(dd,J＝8.9,0.2Hz,3H),1.54-1.42(m,11H),1.33-1.30(m,4H),1.23(d,J＝7.1Hz,3H),1.06(d,J＝6.4Hz,3H),0.99-0.89(m,17H),0.50(d,J＝6.5Hz,3H),0.11(d,J＝6.5Hz,3H),0.01--0.07(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₂H₇₈N₇O₉[M+H]⁺，计算值，944.6；实测值，945.2。

C-30 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.90-8.86(m,1H),7.83-7.79(m,1H),7.60-7.55(m,2H),7.47-7.45(m,1H),7.33-7.29(m,2H),7.29-7.24(m,1H),7.17-7.13(m,1H),7.11-7.04(m,3H),5.43-5.39(m,2H),5.04-4.83(m,4H),4.45-4.41(m,1H),4.35-4.32(m,1H),3.84-3.79(m,2H),3.14(m,5H),2.90(s,3H),2.53(s,2H),1.81-1.72(m,2H),1.63-1.56(m,3H),1.54-1.42(m,7H),1.31-1.20(m,6H),1.06(d,J＝6.3Hz,3H),0.99-0.88(m,18H),0.45-0.43(m,3H),0.07-0.06(m,3H),-0.15--0.21(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₁H₇₅FN₇O₈[M+H]⁺，计算值，932.6；实测值，933.1。

C-42 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.75-8.72(m,1H),8.04-8.02(m,1H),7.77-7.75(m,1H),7.71-7.60(m,3H),7.47-7.43(m,2H),7.40-7.32(m,2H),7.19-7.10(m,2H),5.54(s,2H),5.10-5.02(m,3H),4.90-4.83(m,1H),4.42-4.35(m,1H),3.97-3.92(m,1H),3.31(s,2H),3.27-3.01(m,4H),2.92(s,2H),2.54-2.53(m,2H),2.50(d,J＝6.2Hz,1H),2.23-2.16(m,1H),2.00-1.92(m,1H),1.80-1.75(m,2H),1.64-1.57(m,3H),1.56-1.45(m,9H),1.39-1.28(m,4H),1.06-0.85(m,12H),0.55-0.51(m,1H),0.37-0.36(m,2H),0.02-0.00(m,2H),-0.45--0.53(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₄H₇₆F₃N₈O₈[M+H]⁺，计算值，1021.6；实测值，1021.9

C-46 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.75-8.72(m,1H),8.05-8.01(m,1H),7.77-7.75(m,1H),7.67-7.60(m,2H),7.47-7.43(m,2H),7.32(s,1H),7.18-7.10(m,2H),5.54(s,2H),5.11-5.02(m,2H),4.81-4.74(m,1H),4.41-4.33(m,2H),3.97-3.92(m,1H),3.31(s,2H),3.27-3.22(m,2H),2.92(s,2H),2.55-2.53(m,2H),2.51-2.50(m,1H),2.23-2.16(m,1H),2.01-1.90(m,1H),1.82-1.74(m,1H),1.66-1.57(m,2H),1.57-1.47(m,5H),1.40-1.22(m,5H),1.04-0.87(m,10H),0.37-0.35(m,3H),0.01(dd,J＝6.2,2.6Hz,3H),-0.45--0.53(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₄H₇₆F₃N₈O₈[M+H]⁺，计算值，1021.6；实测值，1022.4。

C-31 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.65-8.63(m,1H),8.05-8.03(m,1H),7.91-7.89(m,1H),7.62-7.59(m,2H),7.32-7.30(m,1H),7.16-7.12(m,2H),7.07-7.05(m,2H),6.87-6.84(m,2H),5.64(s,1H),5.15-5.04(m,4H),4.90-4.86(m,2H),4.44-4.40(m,1H),4.34-4.28(m,2H),3.77(s,5H),3.32(s,3H),3.30-3.26(m,2H),2.94(s,3H),2.58-2.56(m,3H),2.54(s,2H),2.23-2.17(m,2H),2.00-1.94(m,2H),1.81-1.73(m,4H),1.64-1.54(m,6H),1.54-1.42(m,10H),1.36-1.29(m,8H),1.06(d,J＝6.4Hz,2H),1.01-0.85(m,18H),0.52-0.51(m,3H),-0.03--0.05(m,3H),-0.29--0.36(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₄H₇₉N₈O₉[M+H]⁺，计算值，983.6；实测值，984.2

C-32 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.74-8.71(m,1H),8.04-8.01(m,1H),7.73-7.71(m,1H),7.59-7.57(m,1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),7.29-7.21(m,2H),7.17-7.06(m,2H),7.04-7.01(m,2H),6.84(td,J＝7.5,0.9Hz,1H),5.37-5.26(m,2H),5.10-5.01(m,3H),4.89-4.83(m,2H),4.40-4.33(m,2H),3.93(s,5H),3.30(d,J＝6.7Hz,3H),3.26-3.23(m,2H),2.92(s,2H),2.54(s,3H),2.49(t,J＝6.2Hz,2H),2.22-2.15(m,2H),1.97-1.89(m,2H),1.83-1.75(m,3H),1.63-1.57(m,4H),1.52-1.39(m,9H),1.39-1.19(m,7H),1.05(d,J＝6.3Hz,4H),1.00-0.88(m,18H),0.28(d,J＝6.5Hz,3H),-0.08(d,J＝6.6Hz,3H),-0.54--0.61(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₄H₇₉N₈O₉[M+H]⁺，计算值，983.6；实测值，984.1

C-13 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.71-8.68(m,1H),8.03-8.00(m,1H),7.74-7.72(m,1H),7.63-7.61(m,1H),7.48-7.46(m,1H),7.27-7.20(m,2H),7.18-7.08(m,2H),6.88-6.82(m,2H),5.36-5.35(m,2H),5.07-5.00(m,3H),4.90-4.83(m,1H),4.42-4.32(m,2H),3.92(t,J＝6.8Hz,2H),3.77(s,4H),3.28(m,5H),2.91(s,3H),2.54(s,3H),2.48-2.45(m,2H),2.23-2.14(m,2H),1.98-1.90(m,2H),1.84-1.73(m,3H),1.67-1.59(m,4H),1.52-1.47(m,8H),1.38-1.30(m,5H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H),1.00-0.89(m,19H),0.41(d,J＝6.4Hz,2H),0.01(d,J＝6.6Hz,2H),-0.38--0.46(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₄H₇₉N₈O₉[M+H]⁺，计算值，983.6；实测值，983.9

C-14 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.73(d,J＝10.0Hz,1H),8.02(d,J＝9.7Hz,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(d,J＝6.9Hz,1H),7.50-7.47(m,2H),7.44(d,J＝8.1Hz,1H),7.27(s,1H),7.20(t,J＝9.7Hz,2H),7.18-7.09(m,2H),5.39(s,2H),5.11-5.01(m,3H),4.89-4.83(m,1H),4.41-4.33(m,2H),3.30-3.21(m,5H),2.91(s,3H),2.54(s,3H),2.50(t,J＝6.3Hz,2H),2.22-2.15(m,1H),1.98-1.90(m,1H),1.83-1.71(m,3H),1.64-1.44(m,12H),1.39-1.29(m,3H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H),0.94(dt,J＝21.9,7.8Hz,19H),0.36(d,J＝6.4Hz,3H),0.00(d,J＝6.6Hz,3H),-0.48--0.55(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₃H₇₆BrN₈O₈[M+H]⁺，计算值，1031.5；实测值，1031.2

C-15 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.71-8.69(m,1H),8.03-8.00(m,1H),7.74-7.72(m,1H),7.62(ddt,J＝6.3,1.3,0.4Hz,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,1H),7.24(s,1H),7.22-7.18(m,1H),7.14-7.11(m,1H),5.96(d,J＝0.3Hz,1H),5.39(d,J＝1.8Hz,2H),5.07-5.01(m,2H),4.89-4.85(m,1H),4.42-4.32(m,2H),3.97-3.91(m,1H),3.29(s,4H),3.27-3.25(m,2H),2.91(s,3H),2.54(s,2H),2.47(dd,J＝6.4,6.2Hz,2H),2.34(d,J＝2.9Hz,3H),2.23-2.14(m,2H),1.96-1.90(m,2H),1.81-1.74(m,2H),1.74-1.66(m,2H),1.64-1.56(m,3H),1.52-1.47(m,7H),1.39-1.30(m,6H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H),0.98-0.89(m,18H),0.43(d,J＝6.4Hz,2H),0.23-0.18(m,1H),0.01(d,J＝6.6Hz,2H),-0.41--0.49(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₁H₇₆N₉O₉[M+H]⁺，计算值，958.6；实测值，958.9

C-28 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.75-8.73(m,1H),8.03(dd,J＝9.6,0.2Hz,1H),7.76-7.74(m,1H),7.65-7.63(m,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.31-7.22(m,3H),7.19-7.10(m,2H),5.45-5.39(m,2H),5.10-5.01(m,3H),4.89-4.83(m,1H),4.41-4.32(m,2H),3.97-3.92(m,1H),3.32(s,3H),3.25-3.24(m,2H),2.91(s,3H),2.54(s,3H),2.52(t,J＝6.3Hz,2H),2.23-2.16(m,2H),2.00-1.90(m,1H),1.83-1.76(m,3H),1.64-1.40(m,12H),1.40-1.26(m,4H),1.06-1.00(m,3H),1.03-0.87(m,17H),0.83-0.77(m,1H),0.34(d,J＝6.5Hz,3H),-0.03(d,J＝6.6Hz,3H),-0.54--0.61(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₃H₇₅F₂N₈O₈[M+H]⁺，计算值，989.6；实测值，989.5

C-33 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.74-8.71(m,1H),8.04-8.01(m,1H),7.74(dt,J＝7.7,0.4Hz,1H),7.62-7.57(m,2H),7.47-7.45(m,1H),7.31(s,1H),7.18-7.11(m,3H),6.81-6.79(m,1H),5.47-5.42(m,2H),5.10-5.01(m,3H),4.90-4.83(m,1H),4.42-4.32(m,2H),3.97-3.92(m,1H),3.31(s,3H),3.26(t,J＝0.3Hz,2H),2.92(s,3H),2.55(s,3H),2.50(t,J＝6.3Hz,2H),2.23-2.14(m,2H),1.97-1.90(m,2H),1.83-1.75(m,2H),1.65-1.45(m,11H),1.39-1.27(m,4H),1.05(d,J＝6.3Hz,2H),0.99-0.84(m,16H),0.84-0.76(m,1H),0.41-0.39(m,2H),0.01--0.01(m,2H),-0.45--0.52(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₃H₇₈N₉O₈[M+H]⁺，计算值，968.6；实测值，968.5

C-36 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.75(d,J＝10.0Hz,1H),8.25-8.24(m,1H),8.03(d,J＝9.7Hz,1H),7.87(td,J＝8.1,2.5Hz,1H),7.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.64-7.62(m,1H),7.53(d,J＝8.1Hz,1H),7.34(d,J＝2.9Hz,1H),7.20-7.10(m,2H),7.02(dd,J＝8.4,2.9Hz,1H),5.48(s,2H),5.07-5.01(m,2H),4.89-4.83(m,2H),4.40-4.31(m,2H),3.95(q,J＝6.8Hz,1H),3.32(s,3H),3.25-3.20(m,2H),2.91(s,3H),2.54-2.51(m,3H),2.50(s,1H),2.23-2.15(m,1H),1.99-1.89(m,1H),1.83-1.75(m,2H),1.64-1.55(m,3H),1.55-1.44(m,8H),1.37-1.21(m,3H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H),0.98-0.89(m,18H),0.29(d,J＝6.5Hz,3H),-0.04(d,J＝6.6Hz,3H),-0.62--0.69(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₂H₇₅FN₉O₈[M+H]⁺，计算值，972.6；实测值，973.6

C-35 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.74(d,J＝10.0Hz,1H),8.48-8.44(m,2H),8.04(d,J＝9.7Hz,1H),7.77-7.75(m,1H),7.66-7.64(m,1H),7.52(d,J＝8.3Hz,2H),7.36(s,2H),7.21-7.11(m,2H),5.55(s,2H),5.11-5.01(m,3H),4.89-4.83(m,1H),4.41-4.33(m,2H),3.95(q,J＝6.8Hz,1H),3.38-3.33(s,3H),3.32-3.25(m,2H),2.92(s,3H),2.54(s,3H),2.51(d,J＝6.2Hz,2H),2.23-2.15(m,1H),1.99-1.90(m,1H),1.84-1.74(m,2H),1.71-1.56(m,3H),1.56-1.44(m,8H),1.38-1.26(m,3H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H),1.01-0.87(m,18H),0.31(d,J＝6.4Hz,3H),-0.03(d,J＝6.5Hz,2H),-0.55--0.61(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₂H₇₅FN₉O₈[M+H]⁺，计算值，972.6；实测值，973.6

C-38 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.74-8.71(m,1H),8.06-8.02(m,1H),7.76-7.73(m,1H),7.64-7.61(m,1H),7.50-7.43(m,3H),7.28(d,J＝2.6Hz,1H),7.24-7.21(m,1H),7.21-7.09(m,3H),5.43-5.38(m,2H),5.10-5.02(m,2H),4.95-4.89(m,2H),4.40-4.36(m,2H),3.96-3.91(m,2H),3.30(s,3H),3.24-3.20(m,3H),2.91(s,3H),2.55(s,3H),2.51-2.48(m,2H),2.22-2.15(m,2H),2.02-1.97(m,1H),1.62-1.54(m,4H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H),1.39-1.28(m,3H),1.06(d,J＝6.2Hz,2H),0.99-0.94(m,8H),0.74-0.70(m,1H),0.37-0.34(m,3H),0.19-0.14(m,1H),0.14-0.05(m,2H),0.01--0.00(m,2H),-0.49--0.56(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₃H₇₄BrN₈O₈[M+H]⁺，计算值，1029.5；实测值，1029.4

C-39 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.69-8.66(m,1H),8.08-8.05(m,1H),7.77-7.73(m,1H),7.61-7.59(m,1H),7.50-7.43(m,3H),7.27(dd,J＝1.3,0.4Hz,1H),7.24-7.20(m,1H),7.17-7.09(m,2H),5.40-5.38(m,2H),5.08-4.99(m,2H),4.89-4.84(m,1H),4.47-4.39(m,2H),4.37-4.34(m,1H),3.97-3.92(m,1H),3.46-3.43(m,2H),3.29(s,3H),2.91(s,3H),2.53(s,3H),2.49(td,J＝6.2,0.5Hz,1H),2.42-2.37(m,3H),2.23-2.16(m,2H),1.98-1.88(m,2H),1.82-1.76(m,2H),1.67-1.63(m,3H),1.56-1.51(m,2H),1.51-1.45(m,3H),1.41-1.28(m,4H),1.09-1.07(m,2H),1.02-0.85(m,12H),0.37-0.35(m,3H),0.01--0.01(m,3H),-0.48--0.52(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₄H₇₈BrN₈O₈[M+H]⁺，计算值，1045.5；实测值，1046.3

C-40 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.73(dd,J＝9.9,0.2Hz,1H),8.03(d,J＝9.8Hz,1H),7.74(dd,J＝7.6,0.3Hz,1H),7.62-7.61(m,1H),7.50-7.47(m,2H),7.45-7.43(m,1H),7.27(s,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,2H),7.16-7.11(m,2H),5.39(s,2H),5.09-5.02(m,3H),4.80-4.74(m,1H),4.38-4.32(m,3H),3.96-3.91(m,2H),3.30-3.21(m,5H),3.01(d,J＝10.4Hz,1H),2.91(s,3H),2.54(s,3H),2.50(t,J＝6.2Hz,2H),2.21-2.15(m,1H),1.96-1.87(m,2H),1.82-1.75(m,1H),1.61(t,J＝10.9Hz,2H),1.53-1.47(m,7H),1.36-1.26(m,7H),1.03(d,J＝6.4Hz,3H),0.98-0.87(m,12H),0.81-0.79(m,1H),0.36(d,J＝6.4Hz,3H),0.00(d,J＝6.6Hz,3H)。LCMS(ESI)：C₅₃H₇₆BrN₈O₈[M+H]⁺，计算值，1031.5；实测值，1031.6

C-41 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.70(d,J＝10.0Hz,1H),8.27(d,J＝9.5Hz,1H),7.75(dt,J＝7.9,0.9Hz,1H),7.71-7.69(m,1H),7.49-7.43(m,3H),7.27(s,1H),7.23-7.18(m,2H),7.16-7.09(m,2H),5.39(d,J＝3.1Hz,2H),5.24-5.19(m,1H),5.11-5.03(m,3H),4.41-4.35(m,1H),4.30(dd,J＝10.9,4.3Hz,1H),3.99-3.94(m,1H),3.32-3.28(m,3H),3.27-3.22(m,1H),3.21-3.11(m,2H),2.91(s,3H),2.59(s,3H),2.52(dd,J＝7.0,5.6Hz,2H),2.35-2.28(m,1H),2.27-2.16(m,1H),2.00-1.92(m,1H),1.86-1.79(m,1H),1.67-1.44(m,8H),1.38-1.28(m,3H),1.03-0.93(m,13H),0.89-0.85(m,3H),0.54(dd,J＝9.5,6.5Hz,1H),0.34(d,J＝6.5Hz,3H),-0.01(d,J＝6.6Hz,3H),-0.52--0.58(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₁H₆₉BrF₃N₈O₈[M+H]⁺，计算值，1057.4；实测值，1057.0

C-16 ¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.72(dd,J＝10.4,0.6Hz,1H),8.03-8.01(m,1H),7.73(dd,J＝7.7,0.2Hz,1H),7.63-7.61(m,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.31-7.25(m,6H),7.13(tdd,J＝14.8,6.9,1.1Hz,2H),5.48-5.41(m,2H),5.40(d,J＝1.7Hz,2H),5.12-5.01(m,3H),4.89-4.83(m,1H),4.41-4.33(m,2H),3.93(q,J＝6.8Hz,1H),3.29(s,3H),3.02(t,J＝7.4Hz,1H),2.91(s,3H),2.54(s,3H),2.23-2.14(m,2H),1.96-1.89(m,1H),1.81-1.75(m,2H),1.65-1.64(m,3H),1.52-1.47(m,7H),1.41-1.30(m,3H),1.05(d,J＝6.4Hz,2H),0.99-0.89(m,15H),0.40(d,J＝6.4Hz,3H),0.02(d,J＝6.6Hz,3H),-0.41--0.48(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₃H₇₇N₈O₈[M+H]⁺，计算值，953.6；实测值，953.5.

C-71 ¹H-NMR(400MHz；acetone-d₆):δ10.19-10.19(m,1H),8.69-8.67(m,1H),8.03-8.01(m,1H),7.71(d,J＝7.7Hz,1H),7.59-7.58(m,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.15-7.06(m,3H),5.09-5.02(m,3H),4.90-4.84(m,1H),4.42-4.38(m,1H),4.35-4.30(m,1H),3.94(q,J＝6.8Hz,1H),3.30(s,3H),3.30-3.22(m,3H),2.91(s,3H),2.53-2.51(m,4H),2.22-2.16(m,1H),2.01-1.91(m,1H),1.80-1.74(m,3H),1.65-1.56(m,3H),1.55-1.44(m,8H),1.39-1.30(m,3H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H),0.99-0.89(m,17H),0.50(d,J＝6.4Hz,3H),0.02(d,J＝6.6Hz,3H),-0.39--0.47(m,1H)。LCMS(ESI)：C₄₆H₇₀N₈O₈[M-H]^-，计算值，862.5；实测值，861.4。

在氩气下，4mL英钱小瓶装入吲哚(6.6mg，0.076mmol)，添加DMF(0.5mL，无水)，添加氢化钠(600μL的100mg/mL于DMF中的细悬浮液)。在搅拌30min之后，添加4-(溴甲基)-2-氟-1-甲氧基苯(120μL的于DMF中的7mM溶液，8.4μM)，并且将溶液搅拌过夜。反应混合物用乙腈:水：TFA(0.5mL，94.9：5:0.1)的溶液淬灭，并且将溶液传递通过PTFE过滤器，并且直接进行HPLC纯化，以得到苯甲基吲哚C-27。¹H-NMR(400MHz；丙酮-d₆):δ8.75-8.71(m,1H),8.04-8.01(m,1H),7.75-7.73(m,1H),7.64-7.62(m,1H),7.52(dd,J＝8.1,0.4Hz,1H),7.30(s,1H),7.21-7.14(m,2H),7.12-7.01(m,2H),6.88-6.84(m,1H),5.34(d,J＝3.0Hz,2H),5.10-5.01(m,3H),4.89-4.83(m,1H),4.40-4.36(m,1H),4.32-4.27(m,1H),3.97-3.89(m,1H),3.88-3.83(s,3H),3.32(s,3H),2.92(s,3H),2.54(s,4H),2.23-2.15(m,2H),1.99-1.90(m,2H),1.82-1.69(m,4H),1.52(s,5H),1.52-1.47(m,6H),1.26-1.16(m,2H),1.09-1.02(m,3H),0.98-0.85(m,18H),0.27-0.25(m,3H),-0.10(d,J＝6.5Hz,3H),-0.64--0.71(m,1H)。LCMS(ESI)：C₅₄H₇₈FN₈O₉[M+H]⁺，计算值，1001.6；实测值，1001.5

实例13-C-80-C-99

化合物C-80到C-99中类似于上文在实例1-12中描述的方式制备。测量LCMS(ESI)m/z[M+H]，并且在下表中示出。

测定

组成型活性VCAM-ss-Gluc测定

Flp-In 293 T-REx^TM细胞用pcDNA^TM5/FRT质粒转染，所述质粒插入有编码与编码VCAM信号序列的cDNA的3'端融合的高斯荧光素酶加10个氨基酸的cDNA(N-MPGKMVVILGASNILWIMFAASQAFKIETTPESR-C)(SEQ ID NO:1)。选择转染的细胞以抵抗选择标记潮霉素和杀稻瘟菌素，以产生组成型表达的VCAMss+10aa/高斯荧光素酶融合蛋白的稳定细胞系。测定前一天，用胰蛋白酶消化细胞并将其铺在384孔组织培养板中。第二天，从孔中取出培养基，并用新鲜培养基替换。将化合物在DMSO/培养基中的稀释液添加到孔，并且在37℃，5％CO₂下孵育。24小时后，将腔肠素底物添加到每个孔中，并且使用Tecan Infinite M1000 Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下文示出选择本文提供的化合物结果。

Dox诱导的VCAM-ss-Gluc测定

Flp-In 293 T-REx^TM细胞用pcDNA^TM5/FRT/TO质粒转染，所述质粒插入有编码与编码VCAM信号序列的cDNA的3'端融合的高斯荧光素酶加10个氨基酸的cDNA(N-MPGKMVVILGASNILWIMFAASQAFKIETTPESR-C)(SEQ ID NO:2)。选择转染的细胞以抵抗选择标记潮霉素和杀稻瘟菌素，以产生含有VCAMss+10aa/高斯荧光素酶cDNA插入片段的稳定细胞系，所述cDNA插入片段的表达在T-REx^TM系统下调节。测定前一天，用胰蛋白酶消化细胞并将其铺在384孔组织培养板中。第二天，将化合物在DMSO/含有多西环素的培养基中的稀释液添加到孔，并且在37℃，5％CO₂下孵育。24小时后，将腔肠素底物添加到每个孔中，并且使用TecanInfinite M1000 Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下文示出选择本文提供的化合物结果。

Dox诱导的TNFα-FL-Gluc测定

Flp-In 293 T-REx^TM细胞用pcDNA^TM5/FRT/TO质粒转染，所述质粒插入有编码与编码全长TNFα(氨基酸1-233)的cDNA的3'端融合的高斯荧光素酶的cDNA。选择转染的细胞以抵抗选择标记潮霉素和杀稻瘟菌素，以产生含有TNFα-FL/高斯荧光素酶cDNA插入片段的稳定细胞系，所述cDNA插入片段的表达在T-REx^TM系统下调节。测定前一天，用胰蛋白酶消化细胞并将其铺在384孔组织培养板中。第二天，将化合物在DMSO/含有多西环素的培养基中的稀释液添加到孔，并且在37℃，5％CO₂下孵育。24小时后，将腔肠素底物添加到每个孔中，并且使用Tecan Infinite M1000 Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下文示出选择本文提供的化合物结果。

Dox诱导的PD1-ss-Gluc测定

Flp-In 293 T-REx^TM细胞用pcDNA^TM5/FRT/TO质粒转染，所述质粒插入有编码与编码PD1信号序列的cDNA的3'端融合的高斯荧光素酶加10个氨基酸的cDNA(N-MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDR-C)(SEQ ID NO:3)。选择转染的细胞以抵抗选择标记潮霉素和杀稻瘟菌素，以产生含有PD1-ss+10aa/高斯荧光素酶cDNA插入片段的稳定细胞系，所述cDNA插入片段的表达在T-REx^TM系统下调节性。测定前一天，用胰蛋白酶消化细胞并将其铺在384孔组织培养板中。第二天，将化合物在DMSO/含有多西环素的培养基中的稀释液添加到孔，并且在37℃，5％CO₂下孵育。24小时后，将腔肠素底物添加到每个孔中，并且使用Tecan Infinite M1000 Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下文示出选择本文提供的化合物结果。

组成型活性Prl-ss-Gluc测定

Flp-In 293 T-REx^TM细胞用pcDNA^TM5/FRT质粒转染，所述质粒插入有编码与编码Prl信号序列的cDNA的3'端融合的高斯荧光素酶加10个氨基酸的cDNA(N-MNIKGSPWKGSLLLLLVSNLLLCQSVAPLPICPGGAAR-C)(SEQ ID NO:4)。选择转染的细胞以抵抗选择标记潮霉素和杀稻瘟菌素，以产生组成型表达的Prlss+10aa/高斯荧光素酶融合蛋白的稳定细胞系。测定前一天，用胰蛋白酶消化细胞并将其铺在384孔组织培养板中。第二天，从孔中取出培养基，并用新鲜培养基替换。将化合物在DMSO/培养基中的稀释液添加到孔，并且在37℃，5％CO₂下孵育。24小时后，将腔肠素底物添加到每个孔中，并且使用Tecan Infinite M1000 Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下文示出选择本文提供的化合物结果。

24hr Dox诱导型Prl-ss-Gluc测定

Flp-In 293 T-REx^TM细胞用pcDNA^TM5/FRT/TO质粒转染，所述质粒插入有编码与编码Prl信号序列的cDNA的3'端融合的高斯荧光素酶加10个氨基酸的cDNA(N-MNIKGSPWKGSLLLLLVSNLLLCQSVAPLPICPGGAAR-C)(SEQ ID NO:5)。选择转染的细胞以抵抗选择标记潮霉素和杀稻瘟菌素，以产生含有-ss+10aa/高斯荧光素酶cDNA插入片段的稳定细胞系，所述cDNA插入片段的表达在T-REx^TM系统下调节性。测定前一天，用胰蛋白酶消化细胞并将其铺在384孔组织培养板中。第二天，将化合物在DMSO/含有多西环素的培养基中的稀释液添加到孔，并且在37℃，5％CO₂下孵育。24小时后，将腔肠素底物添加到每个孔中，并且使用TecanInfinite M1000 Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下表示出选择本文提供的化合物结果。

IL7Rss测定

从高斯princeps(GLuc)分泌的荧光素酶的成熟域被克隆到pcDNA5/FRT/TO中。来自IL7R(MTILGTTFGMVFSLLQVVSGESGY)(SEQ ID NO:6)的成熟域的信号序列加四个氨基酸在GLuc成熟域上游克隆并且在瞬时转染实验中使用。在5％CO₂下在具有10％FBS的杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基中培养HEK-293T T-rex细胞。将细胞在6孔板中每孔铺1×10e6个细胞，并且孵育6h。使用Lipofectamine 2000(英杰(Invitrogen))，用IL7Rss-Gluc瞬时转染细胞。在过夜孵育后，将转染的细胞以每孔20,000个细胞的密度重新铺在透明底黑色96孔板中。铺板六小时后，将细胞用多西环素(1μg/ml)处理，并且用增加浓度的指示化合物处理24h。使用BioLux高斯荧光素酶测定试剂盒(美国马萨诸塞州伊普威治的新英格兰生物实验室(New England Biolabs,Ipswich,MA,USA))和SpectraMax M5酶标仪(分子仪器公司(Molecular Devices))通过发光对条件培养基中分泌的荧光素酶进行定量。

C-01显示IC50为23nM，并且C-16显示IC50为10nM。

FLT3ss测定

从高斯princeps(GLuc)分泌的荧光素酶的成熟域被克隆到pcDNA5/FRT/TO中。来自FLT3(MPALARDGGQLPLLVVFSAMIFGTITNQDL)(SEQ ID NO:7)的成熟域的信号序列加四个氨基酸在GLuc成熟域上游克隆并且在瞬时转染实验中使用。在5％CO₂下在具有10％FBS的杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基中培养HEK-293T T-rex细胞。将细胞在6孔板中每孔铺1×10e6个细胞，并且孵育6h。使用Lipofectamine 2000(英杰(Invitrogen))，用FLT3ss-Gluc瞬时转染细胞。在过夜孵育后，将转染的细胞以每孔20,000个细胞的密度重新铺在透明底黑色96孔板中。铺板六小时后，将细胞用多西环素(1μg/ml)处理，并且用增加浓度的指示化合物处理24h。使用BioLux高斯荧光素酶测定试剂盒(美国马萨诸塞州伊普威治的新英格兰生物实验室)和SpectraMax M5酶标仪(分子仪器公司)通过发光对条件培养基中分泌的荧光素酶进行定量。

C-01显示IC50为52nM，并且C-16显示IC50为32nM。

HER3ss测定

从高斯princeps(GLuc)分泌的荧光素酶的成熟域被克隆到pcDNA5/FRT/TO中。来自HER3(MRANDALQVLGLLFSLARGSEVG)(SEQ ID NO:8)的成熟域的信号序列加四个氨基酸在GLuc成熟域上游克隆并且在瞬时转染实验中使用。在5％CO₂下在具有10％FBS的杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基中培养HEK-293T T-rex细胞。将细胞在6孔板中每孔铺1×10e6个细胞，并且孵育6h。使用Lipofectamine 2000(英杰)，用HER3ss-Gluc瞬时转染细胞。在过夜孵育后，将转染的细胞以每孔20,000个细胞的密度重新铺在透明底黑色96孔板中。铺板六小时后，将细胞用多西环素(1μg/ml)处理，并且用增加浓度的指示化合物处理24h。使用BioLux高斯荧光素酶测定试剂盒(美国马萨诸塞州伊普威治的新英格兰生物实验室)和SpectraMax M5酶标仪(分子仪器公司)通过发光对条件培养基中分泌的荧光素酶进行定量。

下表示出选择本文提供的化合物结果。

BT474或JJN-3测定

BT474为人乳腺肿瘤细胞系。JJN3为人浆细胞白血病细胞系。细胞系(BT474或JJN3细胞)从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得，并且在补充有10％胎牛血清、青霉素、链霉素和L-谷氨酰胺的RPMI-1640培养基中在5％CO₂下在37℃下培养。细胞以100,000个细胞/mL接种。将5000个细胞(50个μL)的等分试样添加到黑色的透明底部96孔板的每个孔中。将化合物或对照(50uL于细胞培养基中的1％DMSO)添加到细胞到指示的最终浓度，并且将细胞孵育72h(除非另有说明)。在温育完成后，将Alamar蓝(10uL的1mg/ml溶液)添加到每个孔中，并且将板温育5h。然后测量荧光(激发545nm，发射590nm)，并且报告为归一化成DMSO对照的相对发光单位(RLU)。

下表示出选择本文提供的化合物结果。

U266测定

人多发性骨髓瘤细胞系U266B1在补充有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和1×青霉素/链霉素的RPMI 1640培养基中培养。将细胞铺在384孔组织培养板中，并且用在DMSO/培养基中的化合物稀释液处理。将板在37℃，5％CO₂下孵育48小时。48小时后，将(普洛麦格(Promega))添加到每个孔中，并且使用Tecan Infinite M1000Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下表示出选择本文提供的化合物结果。

H929测定

人多发性骨髓瘤细胞系NCI-H929在补充有6％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和1×青霉素/链霉素的Advanced RPMI 1640培养基中培养。在测定当天，将细胞再悬在补充有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和1×青霉素/链霉素的RPMI 1640培养基中，并且铺在384孔组织培养板中，并且用在DMSO/培养基中的化合物稀释液处理。将板在37℃，5％CO₂下孵育48小时。48小时后，将(普洛麦格)添加到每个孔中，并且使用TecanInfinite M1000 Pro定量荧光素酶信号以进行效价确定。

下表示出选择本文提供的化合物结果。

表

I.A.指示IC50＞25μM。