一种用于创口愈合的复合细胞制剂
阅读说明：本技术 一种用于创口愈合的复合细胞制剂 (Composite cell preparation for wound healing ) 是由 魏伟 嵐山芮 袁嘉恩 许超 于 2020-12-30 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种用于创口愈合的细胞制剂,包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺10～50份、化壳聚糖季铵盐2～25份、槲皮素1～25份、富含血小板血浆1～20份。本发明提供的用于创口愈合的细胞制剂,含有脐带血来源的富含血小板血浆,具有丰富的纤维蛋白,比成人外周血更有效支持伤口愈合。通过富含血小板血浆与槲皮素的协同增效,加快伤口愈合,提高创面修复率,缩短创面修复时间,在涂抹本发明细胞制剂的第8天,创面修复率能打到60％以上,最快12天能完全愈合。(The invention provides a cell preparation for wound healing, which comprises the following components in parts by weight: 10-50 parts of polyacrylamide, 2-25 parts of chitosan quaternary ammonium salt, 1-25 parts of quercetin and 1-20 parts of platelet-rich plasma. The cell preparation for wound healing provided by the invention contains platelet-rich plasma derived from umbilical cord blood, has abundant fibrin, and more effectively supports wound healing than adult peripheral blood. By the synergistic effect of the platelet-rich plasma and the quercetin, the wound healing is accelerated, the wound repair rate is improved, the wound repair time is shortened, the wound repair rate can reach more than 60% on the 8 th day after the cell preparation is smeared, and the wound can be completely healed in 12 days at the fastest speed.)
技术领域
本发明属于细胞治疗领域，具体涉及一种用于创口愈合的复合细胞制剂。
背景技术
多年来，临床上最常用的伤口缝合方法是采用缝合线、铆钉等材料或器械缝合，这种方法保证了拉伸强度，但是会增加病人痛苦、创面愈合后留有疤痕而且操作麻烦。随着现代医学的快速发展，临床上对伤口粘合的要求越来越高，不仅要求最大限度地减少患者伤痛，缩短愈合时间，而且要求在恢复功能的同时，外观也能完美地恢复。
对于创伤性伤口，常用的方法是贴创可贴或者涂药水，如果伤口比较深或者长，则需要缝针，主要依靠皮肤的再生而愈合伤口。所有这些方法，在日常生活中，由于身处的环境，无可避免地存在伤口化脓或者进一步感染的风险。因此，加速伤口愈合，表皮生长，是有效降低伤口进一步感染的有效方式。
因此，寻求一种有效降低伤口进一步感染的有效方式是本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
为了解决上述技术问题本发明提供了一种用于创口愈合的细胞制剂，通过细胞制剂中的组分产生的协同效应加快伤口愈合，提高创面修复率。本发明采用的技术方案为：
一种用于创口愈合的细胞制剂，包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺10～50份、化壳聚糖季铵盐2～25份、槲皮素1～25份、富含血小板血浆1～20份。本发明用于创口愈合的细胞制剂通过聚丙烯酰胺、化壳聚糖季铵盐、槲皮素富含血小板血浆的复配，使得槲皮素与富含血小板血浆产生了协同效应，能加快伤口愈合，提高创面修复率。
优选地，所述用于创口愈合的细胞制剂，槲皮素与富含血小板血浆的体积比为1～9:1～9。发明人通过大量试验发现在二者在该比例范围内有较好伤口修复效果。
优选地，所述用于创口愈合的细胞制剂，槲皮素与富含血小板血浆的体积比为1:1。发明人通过大量试验发现在二者为该比例时，12天就能使得伤口完全愈合，加速创面修复，缩短创面修复时间。
优选地，所述用于创口愈合的细胞制剂，包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺20～40份、化壳聚糖季铵盐10～20份、槲皮素5～10份、富含血小板血浆10～15份。
优选地，所述用于创口愈合的细胞制剂，包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺30份、化壳聚糖季铵盐15份、槲皮素10份、富含血小板血浆10份。
本发明的有益效果为：本发明提供的用于创口愈合的细胞制剂，含有脐带血来源的富含血小板血浆，具有丰富的纤维蛋白，比成人外周血更有效支持伤口愈合。通过富含血小板血浆与槲皮素的协同增效，加快伤口愈合，提高创面修复率，缩短创面修复时间，在涂抹本发明细胞制剂的第8天，创面修复率能打到60％以上，最快12天能完全愈合。
具体实施方式
为了更加简洁明了的展示本发明的技术方案、目的和优点，下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1
本实施复合细胞制剂的组分包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺10份、碘化壳聚糖季铵盐2份、槲皮素1份、富含血小板血浆1份。
实施例2
本实施复合细胞制剂的组分包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺20份、碘化壳聚糖季铵盐10份、槲皮素15份、富含血小板血浆2份。
实施例3
本实施复合细胞制剂的组分包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺30份、碘化壳聚糖季铵盐15份、槲皮素10份、富含血小板血浆10份。
实施例4
本实施复合细胞制剂的组分包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺40份、碘化壳聚糖季铵盐20份、槲皮素5份、富含血小板血浆15份。
实施例5
本实施复合细胞制剂的组分包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺50份、碘化壳聚糖季铵盐25份、槲皮素25份、富含血小板血浆20份。
对比例1
本实施复合细胞制剂的组分包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺30份、碘化壳聚糖季铵盐15份、富含血小板血浆20份。
对比例2
本实施复合细胞制剂的组分包括以下重量份的组分：聚丙烯酰胺30份、碘化壳聚糖季铵盐15份、槲皮素20份。
试验例1
将上述实施例1～5和对比例1、2制备的复合细胞制剂进行动物实验检测其治疗伤口愈合的效果。动物实验具体如下：
将碘化壳聚糖季铵盐溶于水使其最终工作浓度为1mg/ml；
将槲皮素溶于乙醇溶液使其最终工作浓度为1μmol/ml；
动物模型实验I：
分组：C57BL/6雄性小鼠24只，重量25±2g，实验室温度23±1℃，湿度60±5％，自然照明，自由进食。24只小鼠分成四组，分别为①对照组(TMCI水溶液)，②PRP组(对比例1)，③槲皮素组(对比例2)，④PRP-槲皮素组(实施例1～5)，每组均加入浓度为1mg/ml的TMCI。
建模：在小鼠背部制作局部皮肤全层切除伤口模型，在手术区建立全层皮肤切除窗口，深至皮下，自然止血，不包扎，保持伤口干燥。Control组涂抹TMCI水溶液，其他组分别涂相对应的细胞制剂。分别在第2，第4，第6，第8进行创面面积测量，创面修复率＝(原始创面面积-测量面积)/原始创面面积×100％。实验结果如表1所示：
表1：实施例1～5和对比例1、2的细胞制剂修复伤口的结果
组别
2d(％)
4d(％)
6d(％)
8d(％)
10d(％)
12d(％)
对照组
5.9
7.3
10.9
15.4
23.7
35.8
对比例1
12.1
23.4
35.5
45.6
53.2
62.2
对比例2
13.8
21.1
32.2
41.1
60.5
68.8
实施例1
21.3
32.2
45.4
62.3
78.1
82.2
实施例2
23.1
36.4
48.5
69.6
80.2
90.1
实施例3
22.3
59.2
68.4
85.3
92.5
100
实施例4
20.8
38.5
56.8
62.8
78.8
96.2
实施例5
25.3
42.2
62.4
76.3
85.2
96.4
由表1可知，实施例1～5的细胞制剂的创面修复率明显高于对比例1、2，这是因为对比例中缺少槲皮素溶和富含血小板血浆中的其中一种，可见，在本发明的复合细胞制剂中由于槲皮素溶和富含血小板血浆的复配产生了协同增效效应，使得本发明的细胞制剂能够显著的提高创面修复率。因此，实施例1～5显示出了小鼠伤口在从8天开始创面修复率达到60％以上，而对比例仅为40％，可见，本发明的复合细胞制剂能提前修复创口，加速创面的愈合。同时，由实施例1～5可以看出，实施例3在第10天时的修复率要高于其他实施例，这说明实施例3可能是本发明的最佳方案。
实验例2
为了确定槲皮素与富含血小板血浆在本发明细胞制剂的最佳配比，发明人设计了以下动物实验：
动物模型实验II：
建模：在小鼠背部制作局部皮肤全层切除伤口模型，在手术区建立全层皮肤切除窗口，深至皮下，自然止血，不包扎，保持伤口干燥。Control组与其他成分组分别涂抹对应成分。在第2，第4，第6，第8，第10，第12天进行创面面积测量，创面修复率＝(原始创面面积-测量面积)/原始创面面积×100％。
分组：C57BL/6雄性小鼠36只，重量25±2g，实验室温度23±1℃，湿度60±5％，自然照明，自由进食。小鼠分成6组，分别以下组别：
①对照组(TMCI水溶液)；②PRP-槲皮素-a组(体积比1:9，实施例6)；③PRP-槲皮素-b组(体积比3:7，实施例7)；④PRP-槲皮素-c组(体积比1:1，实施例3)；⑤PRP-槲皮素-d组(体积比7:3，实施例8)；⑥PRP-槲皮素-e组(体积比9:1，实施例9)。实验结果如下表2：
表2：上述6组的细胞制剂修复伤口的结果
由表2可以看出，虽然槲皮素与富含血小板血浆能产生协同增效，提高创面的修复率，但是二者之间的配比会最终影响本发明细胞制剂的修复效果，例如实验a和b组中PRP与槲皮素的体积比为1:9和3:7时，12天后的修复率为80％，实验d和e组中PRP与槲皮素的体积比为7:3和1:9时，12天后的修复率为90％，而c组其修复率达到100％，创面完全愈合。由此，说明槲皮素与富含血小板血浆之间的配比影响着细胞制剂的修复效果，而经发明人大量试验最终获得槲皮素与富含血小板血浆的体积比为1:1时，完全修复伤口创面仅需12天，大大缩短了创口的愈合时间。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。