阅读说明：本技术 一种植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置及方法 (Quick separation device and method for plant cyst nematode cysts ) 是由 顾建锋 方亦午 刘乐乐 李星月 于 2020-07-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置,由外筒和内筒组成,内筒固定于外筒的内部,外筒和内筒均为上端开口、底部密封的圆筒形；所述内筒上部设置1个以上的过滤窗口,过滤窗口使内筒和外筒相通,所述过滤窗口上覆盖有18～25目的筛网,所述外筒内壁设置一圈紧贴环绕内壁的吸附滤纸。本发明还公开了利用所述装置进行植物孢囊线虫孢囊的快速分离的方法。本发明装置成本低,分离速度快,分离1份样品在10min以内,收集效率高,获得的待观察样品更干净。(The invention discloses a quick separation device for cyst nematodes of plants, which consists of an outer barrel and an inner barrel, wherein the inner barrel is fixed in the outer barrel, and the outer barrel and the inner barrel are both in a cylinder shape with an opening at the upper end and a sealed bottom; the upper part of the inner cylinder is provided with more than 1 filtering window, the filtering windows enable the inner cylinder to be communicated with the outer cylinder, the filtering windows are covered with 18-25 meshes of screen meshes, and the inner wall of the outer cylinder is provided with a circle of adsorption filter paper tightly attached to the surrounding inner wall. The invention also discloses a method for rapidly separating plant cyst nematode cysts by using the device. The device has the advantages of low cost, high separation speed, high collection efficiency and cleaner obtained sample to be observed, and 1 part of sample is separated within 10 min.)

一种植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置及方法

技术领域

本发明属于植物线虫分离和鉴定技术领域，具体为一种植物孢囊属或球孢囊属线虫孢囊的快速分离装置和利用该装置对孢囊进行快速分离的方法。

背景技术

植物线虫属于无脊椎动物中的线虫门，能寄生于植物根、茎、叶、果实、种子等部位，其种类繁多、危害严重。据不完全统计，全世界每年因植物线虫造成的农林作物经济损失在数千亿元以上。我国2007年公布的对外植物检疫性有害生物名录中，有20种(属)的线虫为检疫性线虫，其实际种数多达200种以上。

植物寄生线虫中，孢囊类线虫(包括孢囊属线虫和球孢囊属线虫等)是一类引起植物病害的重要病原物。马铃薯金线虫、马铃薯白线虫、大豆孢囊线虫等都对寄主植物的造成重大危害。无论是国内农林业生产，还是出入境植物检疫，都需要对线虫进行分离鉴定，以保护农林业生产安全。此类线虫以二龄幼虫入侵寄主，头部进入寄主根部后固着生长，逐渐发育膨大形成孢囊后脱落。对孢囊进行分离是对线虫进行鉴定和研究的重要环节。目前孢囊线虫的孢囊的分离方法主要有Fenwich漂浮器法、土壤悬浮过筛法、蔗糖液离心法等。以上方法各有优缺点，其主要问题是操作较为繁琐，且分离液中杂质较多，不利于对孢囊进行观察和计数。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置和使用方法，能快速从土壤样品中分离获得孢囊，用于孢囊线虫的种类鉴定、田间调查和药效评价等，该方法便捷、可操作性强、效果好。

本发明采用的技术方案是：

一种植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置，所述装置由外筒和内筒组成，内筒固定于外筒的内部，外筒和内筒均为上端开口、底部密封的圆筒形；所述内筒上部设置1个以上的过滤窗口，过滤窗口使内筒和外筒相通，所述过滤窗口上覆盖有18～25目的筛网，所述外筒内壁设置一圈紧贴环绕内壁的吸附滤纸。

所述植物孢囊线虫孢囊是指孢囊属线虫或球孢囊属线虫的孢囊。

进一步，所述筛网可以固定在过滤窗口上，也可以与过滤窗口进行可拆卸连接。筛网的尺寸应大于过滤窗口的尺寸，使筛网将过滤窗口完全覆盖。

所述可拆卸连接可以是卡扣式或卡槽式等各种方式，例如将筛网装入与过滤窗口相适配的筛网框，在内筒内壁或外壁的过滤窗口的边缘处设置卡槽，筛网框插入卡槽即实现卡槽式可拆卸连接。或者在筛网框的边框上打孔，在内筒外壁的过滤窗口的边缘处设置相应的凸块，将筛网框上的孔对准凸块按压装配，即可实现卡扣式可拆卸连接。这类可拆卸连接有多种实现方式，均可适用于本发明。

更优选的，将长方形的筛网卷成圆筒状，将筛网筒放入内筒中，利用筛网自身的弹性，使筛网筒紧贴内筒内壁，同样可实现筛网完全覆盖过滤窗口的装配。

所述筛网筒的高度应当大于过滤窗口顶端到内筒底部的高度。所述筛网筒的长度大于内筒内壁周长。

所述过滤窗口可以为各种形状，优选窗口的底端为平行于筒底的直线，更优选为长方形。

所述过滤窗口为2个以上时，过滤窗口的底端应该在内筒的同一高度上，不应当设置高度不同的过滤窗口。

所述过滤窗口的底端优选低于外筒的顶端。

所述外筒内壁的吸附滤纸可以用长方形的滤纸卷成滤纸筒，放入外筒内紧贴环绕外筒内壁构成。

滤纸材质可以为有纺布或无纺布，优选质地较硬的滤纸。

吸附滤纸的底端位置优选低于过滤窗口的底端高度。

吸附滤纸优选设置在外筒内壁的上部。

本发明中，内筒外径与外筒内径之比优选为0.5～0.8:1，更优选0.6～0.7:1。

所述内筒过滤窗口底端位置到内筒底部的高度与内筒的内径之比为1～5:1，优选1.5～3:1。

所述外筒的高度与外筒的内径比为1～5:1，优选1.2～3:1。

进一步，本发明还提供所述植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置的使用方法，利用所述装置进行植物孢囊线虫孢囊的快速分离，所述方法为：

(1)称取待测土样，放入内筒；外筒放入滤纸卷成的滤纸筒，使滤纸筒环绕紧贴外筒内壁形成吸附滤纸；

(2)向内筒加水，加至内筒过滤窗口底端以下的高度的2/3～3/4，用玻璃棒在内筒轻轻搅拌混合液5-10次；

(3)继续向内筒缓慢加水，使内筒水稍微超出过滤窗口底端，使表面漂浮物从过滤窗口的筛网溢出到外筒；

(4)继续用玻璃棒轻轻搅动内筒，并慢慢补充加水，待观察内筒水面基本无漂浮物后，停止加水；

(5)向外筒加水，使得外筒液面到达吸附滤纸底部以上的位置，由于水的表面张力，孢囊会被吸附到滤纸上；

(6)取下吸附滤纸，得到待测土样中分离出来的孢囊。

所述步骤(1)中，滤纸优选先用水淋湿再放入外筒，利于滤纸粘附贴紧外筒内壁。

所述滤纸的形状优选为长方形，长度略大于外筒内壁周长，高度小于外筒的高度，优选为6-8cm，便于后续在显微镜下观察。

所述吸附滤纸优选紧贴在外筒内壁的上部，吸附滤纸的底端位置优选低于内筒过滤窗口的底端高度。将吸附滤纸设置于外筒内壁的上部，有利于操作取放滤纸，也有利于观察水面上孢囊吸附的情况，而且内筒可能会有颗粒小的杂质溢流出来，其密度大于水会沉积在外筒底部，因此吸附滤纸不宜设置在靠近外筒内壁底部的位置，否则容易被杂质污染，不利于后续观察。

进一步，所述步骤(5)中，向外筒加水，使得外筒液面到达吸附滤纸底部以上的位置，优选加水使外筒液面到达吸附滤纸的高度中间的位置，这样孢囊正好吸附在滤纸中间，有利于取出后进行观察。

进一步，所述步骤(5)中，向外筒加水，可加入1-2滴的表面活性剂，增加水的表面张力，利于孢囊向水面外围吸附滤纸处扩散。

本发明的装置的工作原理在于：利用孢囊密度大多小于水的特性，将筛网设置在混合液的上端，筛网能阻挡大部分比孢囊大的杂质，使颗粒较小的漂浮的孢囊通过筛网进入外筒，再通过水的表面张力将孢囊附到滤纸上。

本发明提供了一种便捷、高效的植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置和植物孢囊线虫孢囊的快速分离方法，其有益效果在于：

1.分离速度快：分离1份样品在10min以内。

2.成本低：装置可采用金属、有机玻璃等材料制作，制造成本低，且可长期重复使用。

3.分离效果好：先利用筛网过滤大的漂浮颗粒，然后利用滤纸来吸附漂浮的孢囊，获得的待观察样品更干净，杂质更少。

附图说明

图1是植物孢囊线虫孢囊快速分离装置结构示意图。

具体实施方式

：

下面结合实施例来对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。

实施例1

如图1所示，植物孢囊线虫孢囊的快速分离装置由外筒1和内筒2组成，内筒2固定于外筒1的内部，外筒1和内筒2均为上端开口、底部密封的圆筒形；所述内筒2上部设置1个以上的过滤窗口3，过滤窗口3使内筒2和外筒1相通，所述过滤窗口3上覆盖有18～25目的筛网4，所述外筒内壁设置一圈紧贴环绕内壁的吸附滤纸5。

进一步，所述筛网4可以固定在过滤窗口3上，也可以与过滤窗口3可拆卸连接。筛网4的尺寸应大于过滤窗口3的尺寸，使筛网4将过滤窗口3完全覆盖。

所述筛网4与过滤窗口3的可拆卸连接可以是卡扣式或卡槽式，例如将筛网装入与过滤窗口相适配的筛网框，在内筒外壁的过滤窗口的边缘处设置卡槽，筛网框插入卡槽即实现卡槽式可拆卸连接。或者在筛网框的边框上打孔，在内筒外壁的过滤窗口的边缘处设置相应的凸块，将筛网框上的孔对准凸块按压装配，即可实现卡扣式可拆卸连接。这类可拆卸连接有多种实现方式，均可适用于本发明。

更优选的，将长方形的筛网卷成圆筒状，将筛网筒放入内筒中，利用筛网自身的弹性，使筛网筒紧贴内筒内壁，同样可实现筛网覆盖过滤窗口。

所述筛网筒的高度应当大于过滤窗口顶端到内筒底部的高度。所述筛网筒的长度大于内筒内壁周长。

所述过滤窗口3可以为各种形状，优选窗口的底端为平行于筒底的直线，更优选为长方形。

图1中即设置有2个长方形的过滤窗口，当述过滤窗口3为2个以上时，过滤窗口3的底端应该在内筒的同一高度上，不应当设置高度不同的过滤窗口。

所述过滤窗口3的底端优选低于外筒1的顶端。

所述外筒内壁的吸附滤纸5可以用长方形的滤纸卷成滤纸筒，放入外筒内紧贴环绕外筒内壁构成。

滤纸材质可以为有纺布或无纺布，优选质地较硬的滤纸。

吸附滤纸5的底端位置设置在过滤窗口3的底端高度以下。

吸附滤纸5优选设置在外筒1内壁的上部。

所述内筒过滤窗口底端位置到内筒底部的高度与内筒的内径之比为1～5:1，优选1.5～3:1。

所述外筒的高度与外筒的内径比优选为1～5:1，优选1.2～3:1。

实施例2

利用实施例2的装置进行植物孢囊线虫快速分离，步骤为：

1.称取待测土样，放入内筒；外筒放入滤纸卷成的滤纸筒，滤纸先用水淋湿，使滤纸筒环绕紧贴外筒内壁形成吸附滤纸；

2.向内筒加水，加至内筒过滤窗口底端以下的高度的2/3～3/4，用玻璃棒在内筒轻轻搅拌混合液5-10次；

3.继续向内筒缓慢加水，使内筒水稍微超出过滤窗口底端，使表面漂浮物从过滤窗口的筛网溢出到外筒；

4.继续用玻璃棒轻轻搅动内筒，并慢慢补充加水，待观察内筒水面基本无漂浮物后，停止加水；

5.向外筒加水，使得外筒液面到达吸附滤纸高度中间的位置，由于水的表面张力，孢囊会被吸附到滤纸上；

6.取下吸附滤纸，得到待测土样中分离出来的孢囊。

所述滤纸为长方形，长度略大于外筒内壁周长，高度小于外筒的高度，优选为6-8cm，便于后续在显微镜下观察。

所述吸附滤纸优选紧贴在外筒内壁的上部，吸附滤纸的底端位置优选低于内筒过滤窗口的底端高度。如图1所示，吸附滤纸5设置在外筒1内壁的上沿，其底端低于过滤窗口3的底端高度。

所述步骤(5)中，可加入1-2滴的表面活性剂，增加水的表面张力，利于孢囊向水面外围吸附滤纸处扩散。

实施例3

本实施例中，对装置的尺寸做具体限定，但本发明的保护范围不限于此。

内筒内径6.6cm，外径7cm，外筒内径10cm，内外筒同中轴线。内筒设有2个对开的长方形过滤窗口，过滤窗口的下端到筒底的高度为12cm，过滤窗口高度6cm，外筒的高度为18cm。

在外筒内壁上沿设置一圈紧密贴合环绕的滤纸筒，作为过滤滤纸。滤纸筒高度为8cm，长度为32cm。

此装置可分离50g的待测土样中的植物孢囊线虫孢囊。