一种防治白色念珠菌病的组合物及含有该组合物的药物和饲料添加剂
阅读说明：本技术 一种防治白色念珠菌病的组合物及含有该组合物的药物和饲料添加剂 (Composition for preventing and treating candida albicans disease and medicine and feed additive containing same ) 是由 王占新 胡文锋 郭罕星 祁姣姣 鲁俊鹏 覃健萍 胡学生 房向杰 元波 于 2020-04-01 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种防治白色念珠菌病的组合物及含有该组合物的药物和饲料添加剂。所述防治白色念珠菌病的组合物包含植物精油,所述植物精油由柑橘油、百里香油、大蒜油和肉桂醛组成；所述防治白色念珠菌病的组合物还包含植物提取物,所述植物提取物为女贞子提取物、金樱子提取物、莱菔子提取物、肉豆蒄提取物、博落回提取物中的一种或多种。本发明提供的防治白色念珠菌病的组合物克服了制霉菌素、两性霉素B等抗真菌的抗生素在使用中导致的耐药性和安全性问题,能有效替代抗生素在鸽白色念珠菌病防治作用,用于制备天然药物、饲料添加剂、饮水给药,是一种安全的可替代抗生素的产品,在乳鸽健康养殖中具有极大的应用价值。(The invention provides a composition for preventing and treating candida albicans, and a medicament and a feed additive containing the composition. The composition for controlling candida albicans comprises plant essential oil, wherein the plant essential oil consists of citrus oil, thyme oil, garlic oil and cinnamaldehyde; the composition for preventing and treating the candida albicans disease further comprises a plant extract, wherein the plant extract is one or more of a glossy privet fruit extract, a cherokee rose fruit extract, a radish seed extract, a coronene of phaseolus vulgaris and a macleaya cordata extract. The composition for preventing and treating the candida albicans overcomes the problems of drug resistance and safety caused by antifungal antibiotics such as nystatin, amphotericin B and the like in use, can effectively replace the antibiotics in the prevention and treatment effects of the pigeon candidiasis, is used for preparing natural medicines, feed additives and drinking water for administration, is a safe product capable of replacing the antibiotics, and has great application value in the healthy breeding of young pigeons.)
技术领域
本发明涉及医药
技术领域
，更具体地，涉及一种防治白色念珠菌病的组合物及含有该组合物的药物、饲料添加剂。技术背景
白色念珠菌是一种常见的机会病原真菌，可以引起人和动物的深部或浅部真菌感染。造成白色念珠菌毒力的机制包括粘附/入侵分子、水解酶、生物膜形成和酵母菌到菌丝的转化等。白色念珠菌可在口腔、胃肠道和阴道内生长，从而导致全球数以百万计人严重感染发病。目前，治疗白色念珠菌病主要靠使用制霉菌素、两性霉素B等抗真菌的抗生素。然而，大量使用抗生素会造成人和动物身上白色念珠菌的耐药性问题，且抗生素剩余残留对人和动物本身以及周边环境会造成二次危害。所以寻找有效替代抗生素治疗白色念珠菌感染是非常必要的。
鉴于中草药毒副作用小，不会产生耐药性等，被用来治疗白色念珠菌病。如公开号为CN105456112A的中国发明专利申请，公开了一种具有抗白色念珠菌功能的口腔洗护用品，该口腔洗护用品含有以下重量配比的活性成分：藜蒿叶提取物2～15％、薰衣草提取物、黄芩提取物、莪术提取物中的一种或多种1～20％。该发明对白色念珠菌有很好的抑制效果，可用于预防或缓解由白色念珠菌引起的口腔念珠菌疾病。
此外，植物精油可以作为一种抑菌产物广泛得到公众和研究者的认可。许多研究者研究其对致病菌的抑菌性能，希望植物精油能作为良好的抑菌剂。经过大量长期的研究工作，证明了植物精油的抑菌性能并且可以作为有效的抑菌剂，可抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌。
植物精油也被尝试用于防治白色念珠菌病。如公开号为CN1810947A的中国发明专利公开了大蒜精油制得的乳剂和固体脂质纳米粒剂可直接静脉给药，各项指标经实验后均合格，其具有抗深部真菌和细菌感染，防治急慢性菌痢和肠炎、百日咳、肺部和消化道的真菌感染、白色念珠菌菌血症、隐球菌性脑膜炎、肺结核等。
鸽白色念珠菌病感染部位主要是消化道、皮肤等，病鸽是主要的传染源，鸽子通过食入被污染的饲料或饮水感染该病。幼鸽感染率较高，成年鸽也可以被感染。鸽白色念珠菌病往往是散发性的，一旦暴发，死亡率极高，可造成较大损失。人念珠菌病感染部位为人的口腔、消化道和生殖器官，但是死亡率极低。如果白色念珠菌散播到血液中导致念珠菌败血症和散播性念珠菌病，这样才会造成极高死亡率。
植物精油和植物提取物虽可防治人源白色念珠菌，然而对于动物源白色念珠菌，尤其是鸽源白色念珠菌的防治却没有报道。白色念珠菌对乳鸽的感染和致病很常见，并造成严重的损失，是乳鸽养殖行业面临的共性问题。目前乳鸽养殖行业是通过酸化剂和抗生素来进行白色念珠菌感染的防治，从而会导致食品安全的问题。因此，如何有效解决鸽白色念珠菌病的问题，需开发非抗生素类产品防治白色念珠菌感染，从而降低乳鸽养殖行业经济损失。
发明内容
本发明针对上述问题，提供一种防治白色念珠菌病的组合物，能有效防治白色念珠菌病，尤其是鸽源白色念珠菌病，可将其制备成替代抗生素的药物、饲料添加剂等应用于白色念珠菌病的防治。
本发明通过以下方案获得上述技术目的：
本发明提供了一种防治白色念珠菌病的组合物，包含所述植物精油组合物，所述植物精油组合物由柑橘油、百里香油、大蒜油、肉桂醛组成。
优选地，按质量百分比计，所述植物精油组合物由如下组分组成：
柑橘油15％～20％、百里香油20％～30％、大蒜油15％～20％、肉桂醛35％～40％。
更优选地，柑橘油、百里香油、大蒜油、肉桂醛的质量比为1:1-1.5:1:2。
所述防治白色念珠菌病的组合物还包含植物提取物，所述植物提取物为女贞子提取物、金樱子提取物、莱菔子提取物、肉豆蒄提取物、博落回提取物中的一种或多种。
所述植物提取物由下述质量百分比的下述组分组成：女贞子提取物10％～15％、金樱子提取物20％～25％、莱菔子提取物20％～25％、肉豆蔻提取物25％～30％、博落回提取物10％～15％
所述植物精油组合物与植物提取物的质量百分比为：1：1。
所述白色念珠菌为鸽源白色念珠菌。
一种防治白色念珠菌病的药物，包含上述防治白色念珠菌病的组合物。
优选地，所述防治白色念珠菌病的组合物在药物中的质量百分浓度为0.5-2％。
一种饲料添加剂，包含上述防治白色念珠菌病的组合物。
优选地，所述饲料添加剂为酸化剂。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
本发明提供了一种防治白色念珠菌病的组合物，其包含的植物精油组合物由柑橘油、百里香油、大蒜油和肉桂醛组成，还可以含有女贞子提取物、金樱子提取物、莱菔子提取物、肉豆蒄提取物、博落回提取物中的一种或多种。本发明提供的防治白色念珠菌病的组合物克服了制霉菌素、两性霉素B等抗真菌的抗生素在使用中导致的耐药性和安全性问题，能有效替代抗生素在白色念珠菌病防治作用，可应用于制备药物、饲料添加剂，是一种极其安全的可替代抗生素的产品。可通过饲喂、饮水等途径给药，在鸽养殖领域具有极大的应用前景。
附图说明
图1为鸽分离白色念珠菌攻毒7天后患病鸽嗉囊解剖病变。其中，图A、B、C分别为第1、2、3天嗉囊解剖病变图。
图2为治疗后患病鸽嗉囊解剖病变情况。其中，图A用实施例1防治白色念珠菌病的组合物治疗，图B用实施例2防治白色念珠菌病的组合物治疗，图C、F用实施例3防治白色念珠菌病的组合物治疗，图D、E为对照组。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。
本发明中使用的白色念珠菌为申请人自行分从鸽中分离得到的，经过生理生化鉴定和分子生物学鉴定，确定为A、B、C型白色念珠菌菌株。
实施例1
将柑橘油、百里香油、大蒜油、肉桂醛按照质量比为1：1：1：2混合成植物精油组合物，作为本发明防治白色念珠菌病的组合物，再加入含有0.5％(v/v)吐温-80的无菌蒸馏水，将其配置成0.5％(v/v)浓度的药物，使用涡旋振荡仪振荡均匀。以含有0.5％(v/v)吐温-80的无菌蒸馏水作为对照。测试菌株为白色念珠菌A、B、C型菌株。将活菌计数得到的2×107CFU/ml菌液50ul加入到无菌平皿里。再将60℃左右的高压后YPD培养基倒入无菌平皿中平摇混匀。每个平板平均分为4区，待培养基凝固后，用无菌镊子取规格大小一致的无菌牛津杯放置在每区的琼脂平板表面上，然后用移液枪在牛津杯中加入对应浓度的植物精油组合物100ul，并且做好标识。每个平板在4区交汇点设置一个除精油外的溶剂作为空白对照。正放在37℃培养箱过夜培养。用游标卡尺测量抑菌圈大小并拍照记录结果。实验重复三次，计算平均值。
实施例2
将柑橘油、百里香油、大蒜油、肉桂醛按照质量比为2：3：2：4：混合成植物精油组合物，作为本发明防治白色念珠菌病的组合物，再加入含有0.5％(v/v)吐温-80的无菌蒸馏水，将其配置成0.5％(v/v)浓度的药物，使用涡旋振荡仪振荡均匀。以含有0.5％(v/v)吐温-80的无菌蒸馏水作为对照。测试菌株为白色念珠菌A、B、C型菌株。将活菌计数得到的2×107CFU/ml菌液50ul加入到无菌平皿里。再将60℃左右的高压后YPD培养基倒入无菌平皿中平摇混匀。每个平板平均分为4区，待培养基凝固后，用无菌镊子取规格大小一致的无菌牛津杯放置在每区的琼脂平板表面上，然后用移液枪在牛津杯中加入对应浓度的植物精油组合物100ul，并且做好标识。每个平板在4区交汇点设置一个除精油外的溶剂作为空白对照。正放在37℃培养箱过夜培养。用游标卡尺测量抑菌圈大小并拍照记录结果。实验重复三次，计算平均值。
实施例3
将柑橘油、百里香油、大蒜油、肉桂醛按照质量比为1：1：1：2混合成植物精油组合物，将女贞子、金樱子、莱菔子、肉豆蒄、博落回提取物按照质量比为1：2：2：2.5：1混合成植物提取物组合，植物精油组合物和植物提取物组合物按质量百分比为1：1配置成本发明防治白色念珠菌病的组合物。再加入含有0.5％(v/v)吐温-80的无菌蒸馏水，将本发明防治白色念珠菌病的组合物配置成0.5％(v/v)浓度的药物，使用涡旋振荡仪振荡均匀。实验方法与实施例1和实施例2相同。表1为实施例1、实施例2和实施例3对指示菌抑菌圈测定结果，表1中采用了单独的植物精油、单独的植物提取物和制霉菌素进行对比试验。
表1、植物精油、植物提取物及实施例1、2、3对指示菌抑菌圈测定结果
由表1可知，表1中各植物精油、植物提取物对不同鸽白色念珠菌分离菌株具有一定程度的抑制作用，实施例1、实施例2和实施例3的防治白色念珠菌病的组合物，对不同鸽白色念珠菌分离菌株的抑菌能力相比于单个植物精油、植物提取物组分显著提升，而且实施例1、实施例2和实施例3与制霉菌素相比，对不同鸽白色念珠菌分离菌株的抑菌效果存在明显差别，实施例1、实施例2和实施例3均抑菌效果均优于制霉菌素。
实施例4
本实施例采用微量肉汤稀释法考察植物精油、植物提取物、实施例1和实施例2以及实施例3制备的植物精油组合物对白色念珠菌A、B、C型三种菌株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，缩写为MIC)。
在96孔板每个井中加入100ul的无菌水，在每一列初始井中加入浓度为2％(v/v)各种待测植物精油、植物提取物、实施例1、2、3制备的防治白色念珠菌病的组合物以及制霉菌素，用移液枪吹打混匀后吸取100ul，然后加入每一列的第二井中，同样方法依次稀释至最后一井中，将最后一井多余的100ul吸出舍弃。再在每个井中加入90ul 2×YPD液体培养基和10ul活菌计数得到的2×107CFU/ml菌液。一种待测样品三个重复，每三列为一种待测样品。第10列为阳性生长对照，第11列为与初始植物精油浓度相同的吐温-80助溶剂对照，以观察助溶剂吐温-80对白色念珠菌生长是否产生影响。在37℃下静置培养12h后，观察96孔板每一井中是否浑浊，来判断是否有白色念珠菌生长。由于某些精油存在颜色，导致无法准确判断是否有白色念珠菌生长。则分别吸取某一列每井100ul涂布至YPD固体培养基上，37℃培养12h，观察结果。凡是无菌生长的YPD固体板上的最高稀释浓度为这种植物精油、植物提取物及实施例1、2、3制备的防治白色念珠菌病的组合物对白色念珠菌A、B、C型三种菌株的MIC。
表2、最小抑菌浓度MIC结果表
由表2可知，实施例1、实施例2和实施例3制备的防治白色念珠菌病的组合物相对于单一植物精油组分和植物提取物提高了抑制鸽分离白色念珠菌菌株的效果。单一的植物精油和植物提取物的效果均不如实施例1、实施例2和实施例3制备的防治白色念珠菌病的组合物的抑菌剂效果，实施例1、实施例2和实施例3的配方具有更好的抑菌性能。同时，实施例1、2和实施例3的配方在抑制鸽分离白色念珠菌菌株的效果优于制霉菌素，防治白色念珠菌病的所需使用剂量得到减少，相比制霉菌素更具有安全性，并能产生更好的诱食性。
实施例5
本实施例考察本发明防治白色念珠菌病的组合物对肉鸽的治疗效果。取35日龄健康肉鸽20只，随机分成2组，试验组15只，对照组5只。攻毒菌株为鸽分离白色念珠菌A型菌株；用接种环挑取鸽分离菌株的YPD平板上单个菌落接种到YPD液体培养基中，37℃培养18h；用无菌接种环沾取鸽分离菌株液体培养悬浊液，显微镜镜检细胞形态，确定菌体形态为酵母态；按照2％的接种量重新接种后37℃培养18h，采用平板计数法，将培养好的白色念珠菌进行计数，每个稀释度三个重复，计数后取平均值。
接种量为2％，于37℃培养18h，经平板计数后，用灭菌YPD培养基将培养物稀释成浓度为2×107CFU/ml菌液，灌喂试验鸽，每只鸽子攻毒剂量为200ul。对照组鸽用无菌水等量灌喂。
接种后各组鸽分笼隔离常规饲养，养殖环境与条件一致；每天记录鸽子精神状态，采食和饮水；连续攻毒7天，7天后剖杀鸽子观察嗉囊患病情况，并拍照记录；连续剖杀观察3天。以验证动物攻毒模型的有效性。
按照实施例1、实施例2和实施例3配制治疗试剂，将攻毒组鸽子12只分成两组，每组各6只。试验组每只灌喂200ul治疗试剂。另一组作为对照组不灌喂治疗试剂。总共治疗两次，中间间隔一天，最后一次治疗后间隔一天剖杀试验鸽子，观察鸽子嗉囊患病情况并进行拍照记录。
攻毒试验结果发现，对照组未见临床症状，生长正常；而试验组在攻毒后精神沉郁，消化不良，嗉囊积食等临床症状。患病鸽剖杀和微生物分离、鉴定以后得到为患白色念珠菌病。图1中A、B、C三图中红色箭头所指为白色伪膜，经过分离鉴定发现为白色念珠菌，所以鸽子攻毒试验成功。
经过治疗发现，对照组可见白色念珠菌临床症状，仍存在白色伪膜；而试验组在一个疗程后，肉鸽精神良好，采食和饮水恢复正常。间隔一天剖杀是为了验证白色念珠菌伪膜是否恢复。剖杀嗉囊结果发现，嗉囊洁净，无白色伪膜，经过微生物分离、鉴定得到几乎无白色念珠菌生长。图2中红色箭头所指为明显区别的特征。所以经过初步治疗试验，鸽嗉囊恢复正常，对鸽子生长提供保障。
以上所述实施例仅表达了本发明的诸多实施方式中的少数，虽然其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
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