一种吴茱萸碱类似物及其在防治植物病原真菌中的用途
阅读说明：本技术 一种吴茱萸碱类似物及其在防治植物病原真菌中的用途 (Evodiamine analog and application thereof in preventing and treating plant pathogenic fungi ) 是由 刘映前 杨程杰 吴天琳 王璟汝 李海昕 罗雄飞 贺颖慧 杜莎莎 于 2020-12-03 设计创作，主要内容包括：本发明涉及药物化学领域,公开了一种吴茱萸碱类似物WZY01～WZY25及其在抗植物病原菌中的用途。生物活性测试发现,本发明所述化合物对立枯丝核菌,油菜菌核病菌,小麦赤霉病菌,番茄灰霉病菌,棉花枯萎病菌和稻瘟病菌等6种农业病害表现出潜在的抑制活性,尤其是化合物WZY-01对于立枯丝核菌和油菜菌核病菌的活性表现出显著的抑制作用。本化合物制备简单,原料廉价易得,有望开发为新型抑菌剂。(The invention relates to the field of medicinal chemistry, and discloses an evodiamine analog WZY 01-WZY 25 and application thereof in resisting phytopathogen. Biological activity tests show that the compound of the invention has potential inhibition activity on 6 agricultural diseases such as rhizoctonia solani, sclerotinia sclerotiorum, fusarium graminearum, botrytis cinerea, fusarium oxysporum and pyricularia oryzae, and particularly the compound WZY-01 has obvious inhibition effect on the activity of rhizoctonia solani and sclerotinia sclerotiorum. The compound is simple to prepare, the raw materials are cheap and easy to obtain, and the compound is expected to be developed into a novel bacteriostatic agent.)
技术领域
本发明属于药物化学领域，公开了一种吴茱萸碱类似物WZY-01～WZY25及其在防治立枯丝核菌，油菜菌核病菌，小麦赤霉病菌，番茄灰霉病菌，棉花枯萎病菌，稻瘟病菌中的用途。
背景技术
植物病原真菌对农业的健康发展造成了严重威胁，所导致的植物病害约占全部植物病害的70％～80％，对农业带来了巨大的经济损失的同时，也严重影响了农作物的产量和品质。目前化学防治仍然是防治植物病原真菌性病害的主要手段，但是化学农药长期单一地使用，不仅造成了植物病原菌耐药性的增强，还会导致化学残留，土壤污染，严重威胁环境安全和人类健康。因此，开发高效、低毒、低残留的新型农药，是目前农药创制的重要目标。植物源农药因其具有低毒、无残留、选择性高、易分解、不易产生抗药性等优点，逐渐成为农药研究与开发的研究热点。以天然产物为灵感，从中寻找和筛选潜在的抗菌活性成分和活性先导，通过结构优化设计从而得到具有高效低毒的新型杀菌剂，已成为新型农业创制开发的重要途径。
吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth是一种传统中药，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻的功效，常用于厥阳头痛、寒病腹痛、呕吐吞酸、五更泄泻、高血压等症。吴茱萸碱是吴茱萸的主要生物碱成分，具有抗肿瘤，抗炎镇痛，降血压，保护心血管以及提高免疫等作用。因其多种多样的药理活性以及独特的化学结构，吴茱萸碱成为了众多科研人员研究的热点。如张万年等人通过对吴茱萸碱的结构修饰和改造，显著的提高吴茱萸碱的抗肿瘤活性((1)J.Med.Chem.2010,53,7521–7531；(2)J.Med.Chem.2012,55,7593–7613)；同时，吴茱萸碱被报道具有良好的神经保护作用(Europ.J.Med.Chem.2014,81,15-21)。因此，本课题组以吴茱萸碱为先导结构，通过骨架跃迁和生物电子等排等多种结构改造策略，设计合成了多种吴茱萸碱类似物，发现其部分化合物能有很好的抑制多种植物病原真菌的生长，可作为一种新型的杀菌剂来开发。
发明内容
本发明提供了如下技术方法：一种抗立枯丝核菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、棉花枯萎病菌以及稻瘟病菌的药物，其中含有治疗有效量的吴茱萸碱类似物WZY-01～WZY25中任一化合物，其结构如化学式1所示。
化学式1
本发明所述的吴茱萸碱类似物WZY-01～WZY25的合成方法见实施例，经多次硅胶柱层析等常规方法分离获得纯品，经质谱和核磁共振等波谱技术，确定了化合物WZY-01～WZY25的结构，其结构式如化学式1所示。经活性筛选结果表明，本发明所述的化合物对立枯丝核菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、棉花枯萎病菌和稻瘟病菌表现出一定程度的抑制作用,尤其是化合物WZY-01对于立枯丝核菌和油菜菌核病菌的活性表现出显著的抑制作用。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，以下通过具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明。但不应将此理解为对本发明的限制。下列实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1:化合物WZY-01的合成
本发明所述化合物WZY-01的合成方法按如下反应式进行：
将色胺(10mmol)溶于甲醇/乙酸(1:5)的溶剂中，然后加入多聚甲醛(12mmol)，在100℃加热下加热回流6小时。反应完毕后旋干除去甲醇，加入大量蒸馏水，并用NaOH溶液调节PH至碱性，有大量固体析出，过滤，滤饼干燥后得1,2,3,4-四氢-9H-吡啶[3,4-B]并吲哚中间体产物备用。再将中间体1,2,3,4-四氢-9H-吡啶[3,4-B]并吲哚(5mmol)溶于DMF溶液中，加入2-氟硝基苯(2mmol)，然后在130℃条件下加热回流12小时。反应完毕后，旋干除去DMF，用水和二氯甲烷萃取，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化，得到目标化合物WZY-01。
产率：64％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.84(s,1H),7.68(d,J＝7.9Hz,1H),7.54(d,J＝7.5Hz,1H),7.35(d,J＝7.9Hz,1H),7.25(t,J＝7.5Hz,1H),7.18(m,2H),7.13-6.99(m,2H),4.40(t,J＝7.3Hz,2H),3.37(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:144.82,142.30,137.24,133.86,125.03,124.06,122.72,121.83,121.37,118.94,118.21,118.03,112.58,111.68,108.12,40.91,19.68.MS-ESI m/z:C17H13N3:258.1[M-H]-。
实施例2:化合物WZY-02的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-氯-2-氟硝基苯代替2-氟硝基苯。产率：43％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:11.95(s,1H),7.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.55(d,J＝7.9Hz,1H),7.30-7.21(m,2H),7.19-7.17(m,2H),7.09(t,J＝7.4Hz,1H),4.38(t,J＝7.3Hz,2H),3.38(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:145.64,142.82,137.20,132.44,127.05,124.90,123.40,123.22,122.34,119.35,118.25,117.74,113.28,111.50,108.80,41.08,19.58.MS-ESI m/z:C17H12ClN3:292.1[M-H]-。
实施例3:化合物WZY-03的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以2-硝基-4-三氟甲基氟苯代替2-氟硝基苯。产率：40％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.22(s,1H),7.93(s,1H),7.57(d,J＝7.8Hz,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.22-7.12(m,2H),7.09(m,1H),4.44(t,J＝7.3Hz,2H),3.40(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:146.50,141.95,137.29,135.89,124.90,123.85(d,J＝32.3Hz),123.50,123.21,122.39,119.42,118.83(d,J＝3.6Hz),118.35,115.60(d,J＝4.3Hz),113.69,111.48,108.35,41.14,19.59.MS-ESI m/z:C18H12F3N3:326.1[M-H]-。
实施例4:化合物WZY-04的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以4-氟-3-硝基苯甲腈代替2-氟硝基苯。产率：41％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:10.56(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.41(d,J＝8.3Hz,1H),7.38-7.32(m,2H),7.22-7.17(m,1H),7.13(d,J＝7.5Hz,1H),4.51(t,J＝7.3Hz,2H),3.49(t,J＝7.2Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:145.64,142.82,138.28,126.83,125.35,123.29,122.14,120.93,119.82,119.63,117.97,112.44,110.95,110.12,44.10,42.21,20.48.MS-ESI m/z:C18H12N4:283.1[M-H]-。
实施例5:化合物WZY-05的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-氯色胺代替色胺，4-氯-2-氟硝基苯代替2-氟硝基苯。产率：36％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:11.56(s,1H),8.27(s,0H),7.63(d,J＝8.7Hz,1H),7.59(s,1H),7.44(s,1H),7.37-7.29(m,3H),4.47(t,J＝7.4Hz,2H),3.43(t,J＝7.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:145.64,142.82,137.20,132.44,127.05,124.90,123.40,123.22,122.34,119.35,118.25,117.74,113.28,111.50,108.80,41.08,19.58.MS-ESI m/z:C17H11Cl2N3:326.0[M-H]-。
实施例6:化合物WZY-06的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以4-氟-3-硝基甲苯代替2-氟硝基苯。产率：51％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.64(s,1H),7.61(d,J＝7.7Hz,1H),7.55(s,1H),7.30(d,J＝8.1Hz,2H),7.21-7.07(m,3H),4.44(t,J＝7.3Hz,2H),3.43(t,J＝7.3Hz,2H),2.45(s,3H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:145.59,143.27,138.19,132.90,132.23,126.05,125.01,124.35,123.72,120.00,119.03,113.45,112.73,108.65,41.98,21.58,20.70.MS-ESI m/z:C18H15N3:272.1[M-H]-。
实施例7:化合物WZY-07的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以4-氟-3-硝基苯甲醚代替2-氟硝基苯。产率：36％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.99(s,1H),7.62(d,J＝7.7Hz,1H),7.32(m,2H),7.25(s,1H),7.21-7.09(m,2H),6.98(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),4.45(t,J＝7.3Hz,2H),3.76(s,3H),3.44(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:155.38,144.92,142.85,137.15,128.41,125.07,124.13,122.58,118.99,118.02,112.04,111.95,111.77,108.50,100.49,54.82,41.08,19.68.MS-ESI m/z:C18H15N3O:288.1[M-H]-。
实施例8:化合物WZY-08的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以4-氯-2-氟硝基苯代替2-氟硝基苯。产率：48％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:11.34(s,1H),7.57(dd,J＝8.3,5.2Hz,2H),7.35(d,J＝2.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.2Hz,1H),7.19(m,2H),7.10(t,J＝7.5Hz,1H),4.38(t,J＝7.3Hz,2H),3.39(t,J＝7.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:144.85,139.76,137.17,134.18,128.02,124.85,123.64,122.63,122.40,119.51,118.43,118.34,113.64,111.51,108.53,41.10,19.52.MS-ESI m/z:C17H12ClN3:292.1[M-H]-。
实施例9:化合物WZY-09的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以3-氟-4-硝基苯甲醚代替2-氟硝基苯。产率：43％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.01(s,1H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.58-7.53(m,1H),7.46(d,J＝7.4Hz,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,2H),7.23-7.15(m,2H),4.41(t,J＝7.3Hz,2H),3.91(s,3H),3.72(t,J＝5.7Hz,1H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:156.99,138.05,128.70,126.05,123.84,122.03,120.11,119.71,119.39,119.01,117.91,113.22,112.53,111.39,111.00,93.32,55.94,41.92,20.60.MS-ESI m/z:C18H15N3O:288.1[M-H]-。
实施例10:化合物WZY-10的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以3-氟-4-硝基甲苯代替2-氟硝基苯。产率：34％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.73(s,1H),7.62(t,J＝8.1Hz,2H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.20-7.05(m,3H),4.45(t,J＝7.2Hz,2H),3.43(t,J＝7.3Hz,2H),2.54(s,3H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:145.33,141.16,138.19,135.06,133.00,126.08,125.10,123.97,123.69,119.96,118.99,118.69,113.33,112.68,109.24,41.86,21.90,20.71.MS-ESI m/z:C18H15N3:272.1[M-H]-。
实施例11:化合物WZY-11的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-甲氧基色胺代替色胺。产率：31％；黄色固体；1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.25(s,1H),7.74(d,J＝7.9Hz,1H),7.42(d,J＝7.9Hz,1H),7.33(t,J＝7.5Hz,1H),7.28(m,1H),7.20(d,J＝8.9Hz,1H),7.02(d,J＝2.4Hz,1H),6.87(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),4.48(t,J＝7.2Hz,2H),3.87(s,3H),3.42(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:154.48,145.56,142.75,134.70,133.53,126.27,125.13,122.99,122.60,118.95,114.83,113.47,113.43,109.19,100.22,55.82,41.98,20.71.MS-ESI m/z:C18H15N3O:288.1[M-H]-。
实施例12:化合物WZY-12的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-甲氧基色胺代替色胺，2-硝基-4-三氟甲基氟苯代替2-氟硝基苯。产率：32％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:11.49(s,1H),7.99(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.23(d,J＝8.9Hz,1H),7.02(d,J＝2.4Hz,1H),6.93(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),4.51(t,J＝7.3Hz,2H),3.88(s,3H),3.45(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:154.75,147.17,142.37,136.69,133.57,126.18,126.06,124.23,119.98,116.33,115.71,114.50,113.32,109.42,100.35,55.81,42.20,20.60.MS-ESI m/z:C19H14F3N3O:356.1[M-H]-。
实施例13:化合物WZY-13的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-氯色胺代替色胺。产率：41％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.66(s,1H),7.72(d,J＝7.9Hz,1H),7.59(d,J＝2.0Hz,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.42-7.33(m,1H),7.33-7.29(m,1H),7.22(s,1H),7.14(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),4.51(t,J＝7.3Hz,2H),3.42(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:144.96,142.30,136.56,134.57,126.99,125.95,125.76,124.40,123.44,122.95,118.90,118.59,113.70,113.34,109.43,41.92,20.53.MS-ESI m/z:C17H12ClN3:292.1[M-H]-。
实施例14:化合物WZY-14的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-氯色胺代替色胺，2-硝基-4-三氟甲基氟苯代替2-氟硝基苯。产率：36％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:11.66(s,1H),7.98(s,1H),7.60(dd,J＝6.8,1.8Hz,2H),7.50(d,J＝8.6Hz,1H),7.24(s,1H),7.20(dd,J＝8.7,1.9Hz,1H),4.53(t,J＝7.3Hz,2H),3.44(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:146.06,142.39,136.66,136.49,126.90,126.41,125.48,125.14,125.06,120.32,120.29,118.89,116.54,114.23,113.45,109.64,42.12,20.44.MS-ESI m/z:C18H11ClF3N3:360.01[M-H]-。
实施例15:化合物WZY-15的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-氯色胺代替色胺，4-氟-3-硝基苯甲醚代替2-氟硝基苯。产率：28％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.51(s,1H),7.58(s,1H),7.42(s,1H),7.31(d,J＝8.7Hz,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,2H),7.04-6.94(m,1H),4.45(t,J＝7.4Hz,2H),3.79(s,3H),3.39(t,J＝7.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:161.99,156.68,136.42,134.64,129.24,125.91,124.07,122.28,118.55,117.60,113.65,113.39,111.93,109.78,101.28,55.88,42.04,20.52.MS-ESI m/z:C18H14ClN3O:322.1[M-H]-。
实施例16:化合物WZY-16的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-氯色胺代替色胺，4-氟-3-硝基甲苯代替2-氟硝基苯。产率：45％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.35(s,1H),7.58(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(s,1H),7.31(d,J＝8.2Hz,1H),7.23(d,J＝8.7Hz,1H),7.20-7.12(m,2H),4.45(t,J＝7.3Hz,2H),3.39(t,J＝7.3Hz,2H),2.46(s,3H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:145.64,143.37,138.51,136.38,132.46,127.12,126.38,125.84,124.65,124.02,119.04,118.49,113.57,112.75,108.81,41.90,21.60,20.56.MS-ESI m/z:C18H14ClN3:306.1[M-H]-。
实施例17:化合物WZY-17的合成
实验步骤与实施例1相同，仅以5-氯色胺代替色胺，3-氟-4-硝基苯甲醚代替2-氟硝基苯。产率：32％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.04(s,1H),7.57-7.46(m,2H),7.08(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),6.86(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.82(d,J＝2.3Hz,1H),4.37(t,J＝7.3Hz,2H),3.85(s,3H),3.33(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:156.40,142.87,135.43,134.56,134.05,125.89,125.02,124.21,123.46,118.00,117.50,112.61,112.00,111.15,92.43,54.94,40.92,28.69,19.40.MS-ESI m/z:C18H14ClN3O:322.1[M-H]-。
实施例18:化合物WZY-18的合成
本发明所述化合物WZY-18的合成方法按如下反应式进行：
将吴茱萸次碱(6mmol)溶于1,4-二氧六环中，加入DDQ(12mmol),反应在100℃条件下回流6小时。反应完毕后，旋干除去1,4-二氧六环，用水和二氯甲烷萃取，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化，得到目标化合物WZY-19。
产率：60％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.69(s,1H),8.62(d,J＝7.5Hz,1H),8.46-8.30(m,1H),8.16(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(d,J＝7.51H),7.83(dd,J＝10.0,7.8Hz,2H),7.70(d,J＝8.3Hz,1H),7.56-7.43(m,2H),7.29(t,J＝7.5Hz,1H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:159.07,148.07,140.59,140.42,135.28,129.85,127.54,127.12,126.67,124.98,122.29,121.35,120.98,120.37,118.18,116.45,113.25,108.50.MS-ESI m/z:C18H11N3O:286.1[M+H]+。
实施例19:化合物WZY-19的合成
本发明所述化合物WZY-19的合成方法按如下反应式进行：
将吴茱萸次碱(6mmol)溶于甲苯中，加入劳森试剂(7.2mmol),反应在110℃条件下回流6小时。反应完毕后，旋干除去甲苯，用水和二氯甲烷萃取，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化，得到目标化合物WZY-20。
产率：60％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:9.25(s,1H),8.81(dd,J＝8.3,1.4Hz,1H),7.70(d,J＝7.5Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,2H),7.47-7.40(m,1H),7.36-7.29(m,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),5.20(t,J＝6.9Hz,2H),3.28(t,J＝6.9Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:188.72,144.00,142.47,138.55,134.55,131.97,128.91,127.49,127.28,127.20,125.85,125.44,120.78,120.25,118.45,112.10,49.14,19.90.MS-ESI m/z:C18H13N3S:304.1[M+H]+。
实施例20:化合物WZY-20的合成
实验步骤与实施例19相同，仅以吴茱萸碱代替吴茱萸次碱。
产率：45％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:8.56(d,J＝8.1Hz,1H),8.30(s,1H),7.63(d,J＝7.8Hz,1H),7.42-7.49(m,2H),7.29(d,J＝7.5Hz,1H),7.16-7.23(m,2H),7.10(d,J＝8.1Hz,1H),5.75(s,1H),5.56-5.62(m,1H),3.81-3.90(m,1H),3.03-3.09(m,2H),2.45(s,3H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:190.71,145.52,136.64,132.85,132.41,127.81,126.40,122.51,121.76,120.05,119.44,118.31,115.45,112.51,111.32,69.71,47.55,35.31,19.62.MS-ESI m/z:C19H17N3S:320.1[M+H]+。
实施例21:化合物WZY-21的合成
本发明所述化合物WZY-21的合成方法按如下反应式进行：
将4,9-二氢-3H-吡啶并(3,4-B)吲哚(6mmol)和硫代水杨酸(6mmol)溶于二氯甲烷中，加入适量EDCI(12mmol),反应在常温条件下搅拌6小时。反应完毕后，用水和二氯甲烷萃取，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化，得到目标化合物WZY-22。
产率：81％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:8.22(d,J＝8.0Hz,1H),8.10(s,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.44-7.34(m,2H),7.34(m,2H),7.28-7.26(m,1H),7.19-7.17(m,1H),6.35(s,1H),4.85-4.82(m,1H),3.49-3.47(m,1H),3.04(s,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:164.83,137.25,136.07,132.58,131.12,129.42,128.25,127.57,126.86,126.04,122.70,119.59,118.96,112.11,110.57,56.82,40.43,20.58.MS-ESI m/z:C18H14N2OS:307.1[M+H]+。
实施例22:化合物WZY-22的合成
实验步骤与实施例21相同，仅以水杨酸代替硫代水杨酸。
产率：81％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(d,J＝4.0Hz,1H),7.51-7.43(m,2H),7.25(t,J＝8.0Hz,1H),7.18-7.12(m,2H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.47(s,1H),4.90-4.87(m,1H),3.31-3.26(m,1H),3.06-2.94(m,2H)；13CNMR(100MHz,Chloroform-d)δ:167.51,160.90,141.28,138.30,132.39,130.80,129.55,127.12,126.84,123.58,122.96,122.27,120.31,116.68,115.64,85.21,43.26,24.06.MS-ESI m/z:C18H14N2OS:307.1[M+H]+。
实施例23:化合物WZY-23的合成
实验步骤与实施例18相同，仅以吴茱萸碱代替吴茱萸次碱。
产率：61％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:12.61(s,1H),8.57(d,J＝7.5Hz,1H),8.36-8.21(m,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.88(d,J＝7.51H),7.12(dd,J＝10.0,7.8Hz,2H),7.61(d,J＝8.3Hz,1H),7.46-7.33(m,2H),7.28(t,J＝7.5Hz,1H),5.77(s,1H),2.51(s,3H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:159.01,147.07,140.36,140.32,135.15,129.75,127.24,127.08,126.59,124.93,122.21,121.33,120.95,120.32,118.14,116.41,113.22,108.34,19.91.MS-ESI m/z:C19H15N3O:3020.1[M+H]+。
实施例24:化合物WZY-24的合成
本发明所述化合物WZY-24的合成方法按如下反应式进行：
将吴茱萸次碱(6mmol)溶于适量的乙酸中,然后再向反应中加入过量的锌粉(30mmol)和6N的盐酸(10mL)溶液，反应在60℃条件下搅拌6小时。反应完毕后，旋干除去乙酸，用水和二氯甲烷萃取，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化，得到目标化合物WZY-25。
产率：52％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(d,J＝8.4,1H),7.24-7.22(m,2H),7.18(t,J＝7.6Hz,1H),7.11(t,J＝7.6Hz,1H),7.04(t,J＝7.6Hz,1H),6.98(d,J＝6.8Hz,1H),4.59(s,2H),4.57(t,J＝6.8Hz,2H),3.15(t,J＝6.8Hz,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:137.81,128.72,125.51,125.43,124.85,123.10,120.01,119.57,116.42,112.31,50.51,49.95,20.22.MS-ESI m/z:C18H15N3:274.1[M+H]+。
实施例25:化合物WZY-25的合成
实验步骤与实施例24相同，仅以吴茱萸碱代替吴茱萸次碱。
产率：58％；黄色固体；1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ:8.24(s,1H),7.55(d,J＝7.5Hz,1H),7.36(d,J＝7.8Hz,1H),7.10-7.23(m,3H),6.99-7.07(m,2H),6.95(d,J＝7.2Hz,1H),4.82(s,1H),4.07(d,J＝14.1Hz,1H),3.86(d,J＝13.1Hz,1H),3.34(m,1H),3.05(m,1H),2.81(m,2H),2.66(s,3H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ:148.01,136.03,130.42,126.78,126.45,121.84,121.55,119.12,118.12,111.41,110.75,73.61,55.72,50.14,39.12,20.61.MS-ESI m/z:C19H19N3:290.1[M+H]+。
实施例27:吴茱萸碱类似物WZY-01～WZY-25的抗真菌活性的试验方法及结果
1)供试药剂吴茱萸碱类似物WZY-01～WZY-25。
2)供试菌种：立枯丝核菌，油菜菌核病菌，小麦赤霉病菌，番茄灰霉病菌，棉花枯萎病菌，稻瘟病菌。
3)抗菌活性测试：
测试方法：抗菌活性测定采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)进行。其制备方法如下：先将马铃薯洗净去皮，称取200g切成小块，加水煮烂(煮沸20-30分钟，马铃薯块能被玻璃棒戳破即可)，用八层纱布过滤，加热，再加15g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装锥形瓶，加塞、包扎，115℃灭菌2h，备用。将化合物WZY-01～WZY-25分别用DMSO溶解，加入培养基中，混合均匀，使培养基中的化合物浓度分别为100μg/mL或50μg/mL，以等浓度的DMSO作为空白对照，以上市药物嘧菌酯为阳性对照。倒平板，冷却后分别接菌，置于23摄氏度培养箱中培养，以空白对照菌丝长满培养皿为限，测定各化合物的抑菌率。所有试验设三个平行组或重复三次。抑菌率的计算按下述计算公式进行：
抑菌率＝(空白对照菌丝生长直径-菌丝生长直径)/(空白对照菌丝生长直径-菌饼直径)×100％
吴茱萸碱类似物WZY-01～WZY-25对6种植物病原真菌的活性测试结果见表1。
表1吴茱萸碱类似物WZY-01～WZY-25对病原真菌的抑制率(％)
由表1可知，该类化合物对6种植物真菌病害均有一定的抑制作用，其中化合物WZY-01和WZY-09具有良好的抗菌活性及广谱性，在50ppm浓度下对于多种植物病原真菌的抑制率均大于50％，因此对化合物WZY-01和WZY-09进行了进一步的活性测试，测试结果见表2。
表2化合物WZY-01和WZY-09对6种植物病原真菌的活性测试结果
由表2可知，化合物WZY-01和WZY-09对6种植物真菌均有较好的抑制作用，尤其是化合物WZY-01对于立枯丝核菌和油菜菌核病菌的EC50分别为2.179μg/mL和2.869μg/mL，表现出良好的抗真菌活性。该类化合物合成方法简单，且原料廉价易得，有望开发成一种新型植物病原真菌的抗菌剂。
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