阅读说明：本技术 一种双乙酰鸟嘌呤反应终点判断和成品质量控制的方法 (Method for judging reaction end point of diacetylguanine and controlling quality of finished product ) 是由 徐诚 李晓晖 杨明高 汪宏福 于 2020-07-27 设计创作，主要内容包括：本发明属于双乙酰鸟嘌呤生产过程中质量控制技术领域,尤其为一种高效便捷的双乙酰鸟嘌呤反应终点判断和成品质量控制的方法,以鸟嘌呤为起始原料,以醋酐和醋酸混合物为酰化试剂和溶剂,在催化剂作用,升温至120-140度,反应生成双乙酰鸟嘌呤,取双乙酰鸟嘌呤样品(反应液需进行前处理)适量,用非质子溶剂配制成紫外分光光度法合适的范围内吸光度澄清溶液,用紫外分光光度计检测两处的处吸光度值,计算两种波长下吸光度比值,通过与合格双乙酰鸟嘌呤比较,本法根据鸟嘌呤反应生成双乙酰鸟嘌呤过程中其反应液吸光度出现红移这一发现,采用紫外双波长吸光度比值检测法对比合格成品可快速准确的对反应终点和成品质量进行控制。(The invention belongs to the technical field of quality control in the production process of diacetyl guanine, in particular to a method for efficiently and conveniently judging reaction endpoint and controlling the quality of a finished product of diacetyl guanine, which takes guanine as an initial raw material, takes a mixture of acetic anhydride and acetic acid as an acylation reagent and a solvent, heats the mixture to 140 ℃ under the action of a catalyst, reacts to generate diacetyl guanine, takes a proper amount of diacetyl guanine sample (reaction liquid needs to be pretreated), prepares an absorbance clarified solution in a proper range of an ultraviolet spectrophotometry by using an aprotic solvent, detects absorbance values at two positions by using an ultraviolet spectrophotometer, calculates absorbance ratio under two wavelengths, compares the absorbance ratio with qualified diacetyl guanine, finds that the absorbance of the reaction liquid appears red shift in the process of generating diacetyl guanine according to the reaction of guanine, and compares the absorbance of the qualified finished product by using an ultraviolet dual-wavelength ratio detection method to control the reaction endpoint and the quality of the finished product rapidly and accurately And (5) preparing.)

一种双乙酰鸟嘌呤反应终点判断和成品质量控制的方法

技术领域

本发明属于双乙酰鸟嘌呤生产过程中质量控制技术领域，具体涉及一种双乙酰鸟嘌呤反应终点判断和成品质量控制的方法。

背景技术

双乙酰鸟嘌呤是阿昔洛韦、更昔洛韦、盐酸伐昔洛韦等众多核苷酸类似物原料药的重要中间体，以鸟嘌呤为起始原料的合成方法早已公布，但反应终点控制和成品质量控制一直无有效方法，因其性质极不稳定，在水、甲醇、乙醇等体系中迅速脱酰基生成单乙酰鸟嘌呤和鸟嘌呤，且其嘌呤环结构在大多数有机溶剂中难溶，其终点控制和成品质量难以通过液相等常规方法控制，往往需要进一步合成下一步产品才能评价其质量，给该产品生产和工艺优化造成巨大风险，也造成了下游产品质量的剧烈波动。

发明内容

为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种双乙酰鸟嘌呤反应终点判断和成品质量控制的方法，具有快速有效得特点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种双乙酰鸟嘌呤反应终点判断和成品质量控制的方法，包括以下操作步骤：

步骤(1)：以鸟嘌呤为起始原料，以醋酐和醋酸混合物为酰化试剂和溶剂，在催化剂作用，升温至120-140度，酰化反应生成双乙酰鸟嘌呤，需取少量反应液，降温至20-50度，过滤得到双乙酰鸟嘌呤滤饼，用少量醋酸或醋酐洗涤，滤干得双乙酰鸟嘌呤湿品。已干燥好的成品可直接进行下一步。

步骤(2)：用乙腈、DMSO、DMF三种溶剂或其中两种或三种混合溶剂配制成紫外分光光度法允许的0.2-0.7吸光度澄清溶液，用紫外分光光度计检测306nm 和270nm处吸光度值，或进行250-350波段扫描，计算两种波长(波峰和波谷) 下吸光度比值。

步骤(3)：同方法检测对照双乙酰鸟嘌呤两种波长下吸光度比值，与样品进行比较，如果样品值小于对照，则可判断反应不充分或样品质量不合格，如果样品值等于或超过对照，则可判断反应充分，成品质量合格。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、现有液相方法均使用反相色谱体系，需使用干成品，使用的水或甲醇等作为配样溶剂或流动相都会造成双乙酰鸟嘌呤迅速分解，无法得到真实结果，且重复性差。

2、可快速准确的对双乙酰鸟嘌呤质量进行把握，不会造成双乙酰鸟嘌呤分解，既可应用于生产过程中反应终点的控制，又可以应用于成品质量控制。

附图说明

图1为生产2005008批光谱峰值检测图

图2为生产2005009批光谱峰值检测图

图3为生产合格2005006对照批光谱峰值检测图

图4为100％双乙酰鸟嘌呤样品1溶液光谱峰值检测图；

图5为100％双乙酰鸟嘌呤样品2溶液光谱峰值检测图；

图6为99％双乙酰鸟嘌呤1％鸟嘌呤样品1溶液光谱峰值检测图；

图7为99％双乙酰鸟嘌呤1％鸟嘌呤样品2溶液光谱峰值检测图；

图8为鸟嘌呤0、1％、2％、3％、4％、5％的实验双乙酰鸟嘌呤样品溶液紫外检测306/273nm吸光度比值曲线图；

图9为含单乙酰鸟嘌呤0、1％、2％、3％、4％、5％的双乙酰鸟嘌呤样品溶液紫外检测306/273nm吸光度比值曲线图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅附图，本发明提供一种技术方案：

实施例一：

一种双乙酰鸟嘌呤反应终点判断和成品质量控制的方法，包括以下操作步骤：

步骤(1)：以鸟嘌呤为起始原料，以醋酐和醋酸混合物为酰化试剂和溶剂，在催化剂作用，升温至129度，酰化反应18h后，取少量反应液，降温至20-50 度，过滤得到双乙酰鸟嘌呤滤饼，用少量醋酸或醋酐洗涤，滤干得双乙酰鸟嘌呤湿品2005008、2005009批。

步骤(2)：用DMSO配制成紫外分光光度法允许的0.2-0.7吸光度澄清溶液，用紫外分光光度计检测307nm和270nm处吸光度值，或进行250-350波段扫描，计算两种波长(波峰和波谷)下吸光度比值

步骤(3)：同方法检测对照双乙酰鸟嘌呤2005006批两种波长下吸光度比值，与样品进行比较，如果样品值小于对照，则可判断反应不充分或样品质量不合格，如果样品值等于或超过对照，则可判断反应充分，成品质量合格。

其数据如下：

批次	波峰307nm	波谷273nm	307/273比值	反应判断
					2005008	0.6644	0.2404	2.76	已优于对照批次
2005009	0.6534	0.2440	2.68	已优于对照批次
					2005006对照批	0.6522	0.2495	2.61	-

实施例二：

步骤(1)：以鸟嘌呤为起始原料，以醋酐和醋酸混合物为酰化试剂和溶剂的合成路线下一批中等质量的双乙酰鸟嘌呤样品，另取一批鸟嘌呤对照(中检院)、自制单乙酰鸟嘌呤对照(纯度大于99％)。

步骤(2)：用DMSO配制成成以下浓度的实验溶液(双样)：

步骤(3)：用DMSO稀释上述溶液至溶液吸光度0.2-0.7之间，进行250-350nm 扫描，计算波峰306与波谷273nm比值，得到工作曲线见图8和图9：

可得：鸟嘌呤0、1％、2％、3％、4％、5％的实验双乙酰鸟嘌呤样品溶液紫外检测306/273nm吸光度比值(双样检测平衡性良好)。

含单乙酰鸟嘌呤0、1％、2％、3％、4％、5％的双乙酰鸟嘌呤样品溶液紫外检测306/273nm吸光度比值(双样检测平衡性良好)。

结果显示，1％的鸟嘌呤或单乙酰鸟嘌呤均会造成原双乙酰鸟嘌呤样品 306/273nm吸光度比值明显下降，方法灵敏度良好。

部分紫外250-350nm扫描图列举(图1～7)。

原理说明：双乙酰鸟嘌呤在306nm±5nm内有较大紫外吸收，鸟嘌呤或单乙酰鸟嘌呤在此波长下基本无吸收，在反应过程中，随着反应进程双乙酰鸟嘌呤比例逐渐升高，300-310nm波长下紫外吸收会不断升高(红移)。

方法灵敏度测试：由于无其他方法可以准确对比双乙酰鸟嘌呤的质量，所以采取自身对照，向同一批双乙酰鸟嘌呤样品不断参杂的方式进行研究。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。