本发明提供了一种高纯度核糖-1-磷酸的制备方法,包括：将核苷和核苷磷酸化酶加入到纯化水中,调节反应体系的pH和温度,搅拌反应后将反应液过强酸性阳离子树脂,收集流出液即得。本发明采用价廉易得的核苷为原料,在核苷磷酸化酶的催化下,实现了一步酶法制备核糖-1-磷酸,其成本低,收率高；此外,通过将反应得到的反应液过强酸性阳离子树脂,即可得到高纯度的核糖-1-磷酸,实际应用前景好。