本发明属于工业微生物技术领域,具体涉及一种高纯度安丝菌素的制备方法。本发明的高纯度安丝菌素的制备方法,包括以下步骤:对安丝菌素发酵液进行预处理,之后加入助滤剂压滤得到菌丝渣;用极性溶剂对菌丝渣进行浸提,过滤,得到浸提液;浓缩除去浸提液中的溶剂,得浓缩液,然后加入不相溶于水的萃取剂进行萃取;将萃取出的有机相依次进行浓缩、降温结晶,得到安丝菌素粗品A;将粗品A用混合溶剂结晶得到粗品B,所述混合溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷中的任意一种与正己烷、正庚烷中的任意一种的组合;用极性混合溶剂对粗品B进行结晶,得到晶体C,干燥即得高纯度安丝菌素成品。本发明方法得到的安丝菌素纯度达到92%以上。