阅读说明：本技术 一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法 (Blueberry multiplication medium and multiplication culture method thereof ) 是由 杨姣 杨曙方 仪传冬 王�琦 赵荣芳 洪麒明 于 2020-08-04 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法,一种蓝莓增殖培养基包括初代培养基和继代培养基,所述初代培养基包括基本培养基、0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂,所述继代培养基包括基本培养基、0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂,一种蓝莓的增殖培养方法,包括a)培养基的制备；b)诱导侧芽萌发和c)增殖培养,所制备的培养基,制作成本低廉,在使用时,培苗成活率达到了100％,分化率为市售培养基的1.5倍,培养周期短,组培苗在培养50天后可达到8cm左右,茎段粗壮,不但增加了组培苗的利用率,也增加了后续移栽的成活率,利用组培培养的方法,可以在短期内大大提高增殖系数。(The invention discloses a blueberry multiplication culture medium and a multiplication culture method thereof, wherein the blueberry multiplication culture medium comprises a primary culture medium and a secondary culture medium, the primary culture medium comprises a basic culture medium, 0.8-1.2 mg/L ZT, 0.08-0.12 mg/L IBA, 25-35 mg/L sucrose and 5.5-7.5 mg/L agar, the secondary culture medium comprises a basic culture medium, 0.4-0.6 mg/L ZT, 0.04-0.06 mg/L IBA, 25-35 mg/L sucrose and 5.5-7.5 mg/L agar, and the multiplication culture method of blueberries comprises a) preparation of the culture medium; b) inducing lateral bud germination and c) enrichment culture, wherein the prepared culture medium is low in manufacturing cost, when the culture medium is used, the survival rate of the cultured seedlings reaches 100%, the differentiation rate is 1.5 times of that of a commercially available culture medium, the culture period is short, the tissue culture seedlings can reach about 8cm after being cultured for 50 days, the stem sections are thick and strong, the utilization rate of the tissue culture seedlings is increased, the survival rate of subsequent transplantation is increased, and the proliferation coefficient can be greatly increased in a short period by utilizing a tissue culture method.)

一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法

【技术领域】

本发明涉及蓝莓增殖的技术领域，特别是一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法的技术领域。

【背景技术】

蓝莓，属杜鹃花科，越橘属植物，起源于北美，是多年生灌木小浆果果树。由于蓝莓具有极高的经济价值和营养价值，因此备受人们的关注。蓝莓不仅含有果糖、纤维和维生素等营养元素，还富含抗氧化剂、叶酸和花色素苷等有助于清除人体内自由基，抑制及逆转人体衰老的化合物，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。

伴随着蓝莓国际需求量的不断提升，世界蓝莓的栽培面积不断上升，人们对蓝莓苗木的需求量也逐年增加。我国人工栽培蓝莓起步较晚，总体规模较小，无法满足消费者日益增长的需求，还存在蓝莓组培苗细弱，分化率低，培养周期长，利用率不高，后续移栽成活率低的问题。因此，如何快速获得足够的蓝莓苗木，扩大蓝莓栽培面积，成为亟需解决的重要问题。

【

发明内容

】

本发明的目的就是解决现有技术中的问题，提出一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法，解决了蓝莓组培苗细弱，分化率低，培养周期长，利用率不高，及后续移栽成活率低的问题。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：

一种蓝莓增殖培养基，包括初代培养基和继代培养基，所述初代培养基包括基本培养基、0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂，所述继代培养基包括基本培养基、0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂。

作为优选，所述基本培养基包括675～825mg/L的NH₄NO₃、445～545mg/L的K₂SO₄、570～690mg/L的KNO₃、280～340mg/L的MgSO₄·7H₂O、125～155mg/L的KH₂PO₄、250～310mg/L的Ca(NO₃)₂·4H₂O、175～215mg/L的Cacl₂·2H₂O、5～7mg/L的H₃BO₃、15～20mg/L的MnSO₄·H₂O、7.5～9.5mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.15～0.35mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.15～0.35mg/L的CuSO₄·5H₂O、35～40mg/L的Na₂·EDTA、25～30mg/L的FeSO₄·7H₂O、80～120mg/L的肌醇、0.4～0.6mg/L的维生素B₅、0.4～0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.8～1.2mg/L的盐酸硫胺素以及1.5～2.5mg/L的甘氨酸。

作为优选，所述初代培养基和继代培养基的PH均调节至5.0～5.3。

一种蓝莓的增殖培养方法，包括如下步骤：

a)培养基的制备：在基本培养基内加入0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基；

b)诱导侧芽萌发：将蓝莓外植体进行清洗和消毒后，接种到步骤a)中所制备的初代培养基中进行诱导分化，得到蓝莓初代组培苗；

c)增殖培养：将步骤b)中所制备的蓝莓初代组培苗进行修剪后，接种到步骤a)中所制备的继代培养基中进行继代培养，得到蓝莓继代组培苗。

作为优选，所述步骤b)中，蓝莓外植体的诱导分化条件为前6～8天暗培养，温度为20～24℃，随后更改为光培养，光照强度为2500～3000lx，每日光照时长为10～14h，温度为23～27℃，总培养时长为35～45天。

作为优选，所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗修剪至1.3～1.7cm。

作为优选，所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗的继代培养条件为光培养，光照强度为2800～3200lx，每日光照时长为14～18h，温度为23～27℃，培养时长为40～60天。

本发明的有益效果：本发明所制备的培养基，制作成本低廉，在使用时，培苗成活率达到了100％，分化率为市售培养基的1.5倍，培养周期短，组培苗在培养50天后可达到8cm左右，茎段粗壮，不但增加了组培苗的利用率，也增加了后续移栽的成活率，利用组培培养的方法，可以在短期内大大提高增殖系数，缩短繁殖时间，并且保持品种的优良特性。

【

具体实施方式

】

实施例一：

a)培养基的制备：

在基本培养基内加入0.8mg/L的ZT(玉米素)、0.08mg/L的IBA(吲哚丁酸)、25mg/L的蔗糖以及5.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.4mg/L的ZT、0.04mg/L的IBA、25mg/L的蔗糖以及5.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基。初代培养基和继代培养基均配置5L，灭菌备用。

其中，基本培养基包括675mg/L的NH₄NO₃、445mg/L的K₂SO₄、570mg/L的KNO₃、280mg/L的MgSO₄·7H₂O、125mg/L的KH₂PO₄、250mg/L的Ca(NO₃)₂·4H₂O、175mg/L的Cacl₂·2H₂O、5mg/L的H₃BO₃、15mg/L的MnSO₄·H₂O、7.5mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.15mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.15mg/L的CuSO₄·5H₂O、35mg/L的Na₂·EDTA、25mg/L的FeSO₄·7H₂O、80mg/L的肌醇、0.4mg/L的维生素B₅、0.4mg/L的盐酸吡哆醇、0.8mg/L的盐酸硫胺素以及1.5mg/L的甘氨酸。

初代培养基和继代培养基均采用母液配置方法，具体步骤如下：

①母液配置：

分别称取NH₄NO₃、K₂SO₄、KNO₃、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄、Ca(NO₃)₂·4H₂O和Cacl₂·2H₂O，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成20倍的母液1；分别称取H₃BO₃、MnSO₄·H₂O、ZnSO₄·7H₂O、Na₂MoO₄·2H₂O和CuSO₄·5H₂O，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成100倍的母液2；分别称取Na₂·EDTA和FeSO₄·7H₂O，先将FeSO₄·7H₂O溶解，再将Na₂·EDTA煮沸溶解，然后将二者混合加水定容，配置成100倍的母液3；分别称取肌醇、维生素B₅、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成100倍的母液4；称取ZT，用95％的酒精溶解，再加水定容，配置成100倍的母液5；称取IBA，再加水定容，配置成200倍的母液6。

②培养基配置：

先将2L的水烧热，倒入琼脂煮沸，根据初代培养基和继代培养基的配方分别倒入一定量的母液1、母液2、母液3、母液4、母液5和母液6，再加入蔗糖，定容至5L。随后，使用PH剂和0.1mol/L的NaOH，调节PH至5.2。最后，将灌装好的培养基在115～125℃，130～132KPa的条件下，灭菌15～25min，冷却备用。其中，优选灭菌温度为121℃，灭菌压力131KPa，灭菌时间20min。

b)诱导侧芽萌发：

选取5～7月份的生长健壮的无病虫害的蓝莓枝条，去除叶片，用自来水加2～5滴洗洁精，洗去表面的灰尘，再流水冲洗干净。转到超净工作台，用75％的酒精消毒20～40s后，用无菌水冲洗干净，再用Hgcl₂浸泡7～10min。在此过程中，轻轻摇晃瓶子，最后用无菌水冲洗干净备用。接着，在超净工作台中将清洗和消毒后的蓝莓外植体接种到步骤a)中所制备的初代培养基中进行诱导分化，每瓶种1颗单芽茎段，得到蓝莓初代组培苗。

蓝莓枝条选用浙江蓝美技术股份有限公司的蓝美1号。蓝美1号含有落叶性和常绿性多型物种基因，果早熟，可避梅雨，而花比“奥尼尔”晚开，有利于躲晩霜，自交结实性优，果形比野生蓝莓大，产量高，适宜在我国多种不同生态区域产业化栽种，抗灾害气候性优良。

蓝莓外植体的诱导分化条件为前7天暗培养，温度为22℃，随后更改为光培养，光照强度为2500～3000lx，每日光照时长为12h，温度为25℃，总培养时长为40天。

c)增殖培养：

将步骤b)中所制备的蓝莓初代组培苗进行修剪后，在超净工作台中接种到步骤a)中所制备的继代培养基中进行继代培养，每瓶种10颗，得到蓝莓继代组培苗。

蓝莓初代组培苗修剪至1.5cm，蓝莓初代组培苗的继代培养条件为光培养，光照强度为3000lx，每日光照时长为16h，温度为25℃，培养时长为50天。

实施例二：

在基本培养基内加入1mg/L的ZT、0.1mg/L的IBA、30mg/L的蔗糖以及6.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.5mg/L的ZT、0.05mg/L的IBA、30mg/L的蔗糖以及6.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基，初代培养基和继代培养基均配置5L，灭菌备用。

其中，基本培养基包括750mg/L的NH₄NO₃、495mg/L的K₂SO₄、633mg/L的KNO₃、308mg/L的MgSO₄·7H₂O、142mg/L的KH₂PO₄、278mg/L的Ca(NO₃)₂·4H₂O、195mg/L的Cacl₂·2H₂O、6.2mg/L的H₃BO₃、16.9mg/L的MnSO₄·H₂O、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.25mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.25mg/L的CuSO₄·5H₂O、37.3mg/L的Na₂·EDTA、27.8mg/L的FeSO₄·7H₂O、100mg/L的肌醇、0.5mg/L的维生素B₅、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、1mg/L的盐酸硫胺素以及2mg/L的甘氨酸。

其他同实施例一。

实施例三：

在基本培养基内加入1.2mg/L的ZT、0.12mg/L的IBA、35mg/L的蔗糖以及7.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.6mg/L的ZT、0.06mg/L的IBA、35mg/L的蔗糖以及7.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基，初代培养基和继代培养基均配置5L，灭菌备用。

其中，基本培养基包括825mg/L的NH₄NO₃、545mg/L的K₂SO₄、690mg/L的KNO₃、340mg/L的MgSO₄·7H₂O、155mg/L的KH₂PO₄、310mg/L的Ca(NO₃)₂·4H₂O、215mg/L的Cacl₂·2H₂O、7mg/L的H₃BO₃、20mg/L的MnSO₄·H₂O、9.5mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.35mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.35mg/L的CuSO₄·5H₂O、40mg/L的Na₂·EDTA、30mg/L的FeSO₄·7H₂O、120mg/L的肌醇、0.6mg/L的维生素B₅、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、1.2mg/L的盐酸硫胺素以及2.5mg/L的甘氨酸。

其他同实施例一。

实施例四、

将实施例二所制备的培养基与市售的培养基作为对比，分别进行蓝莓增殖试验，每组抽5瓶，每瓶种植标准为18株，结果如下表：

1、成活率＝成活颗数/种植颗数*100％

成活率(％)	1	2	3	4	5
						普通培养基	80	94	100	94	80
实施例二培养基	100	100	100	100	100

2、芽分化数：每瓶瓶苗里成活的株数

分化数(株)	1	2	3	4	5
						普通培养基	19	18	20	19	21
实施例二培养基	27	28	31	26	30

3、培养50天后苗高度对比

高度(cm)	1	2	3	4	5
						普通培养基	5	7	7	6	7
实施例二培养基	7	8	9	8	8

本发明所制备的培养基，制作成本低廉，在使用时，培苗成活率达到了100％，分化率为市售培养基的1.5倍，培养周期短，组培苗在培养50天后可达到8cm左右，茎段粗壮，不但增加了组培苗的利用率，也增加了后续移栽的成活率，利用组培培养的方法，可以在短期内大大提高增殖系数，缩短繁殖时间，并且保持品种的优良特性。

上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。